Name: methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery
Uploaded: 2019-08-06T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery at JoVE.com

Bu araştırma Çin Ulusal anahtar araştırma ve geliştirme programı (No. 2016YFC0905900), Çin Ulusal Doğal Bilim Vakfı (NOS. 81801827, 81872365), Jiangsu Eyaleti temel araştırma programı (doğal Bilim Vakfı, hayır tarafından desteklenmektedir. BK20181086), ve Jiangsu Kanser Hastanesi bilimsel araştırma fonu (No. ZK201605).

1. BNHEMA polimer sentezi (PBNHEMA)
<ol><li>Polimerizasyon şişesinde 1 mL distile suyunda 1,87 g , n-bis(2-hidroksiil) METAKRILAMID (bnhema) çözülür. Not: polimerizasyon şişesi, kauçuk stoper ve manyetik karıştırıcı ile yuvarlak alt Flask olduğunu.</li>
	<li>4-cyanopentanoik asit dithiobenzoat (CTP) ve 0,02 g 4, 4 '-azobis (4-cyanovalericacid) (ACVA) 0,03 g, 5 mL 'Lik bir Beaker 'da 1, 4-dioxane, 0,5 mL çözülür. Ardından, CTP ve ACVA çözeltisi adım 1,1 polimerizasyon şişesi...

<ol>
	<li>Flotte, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+and+Cell+Therapy+in+2018:+A+Look+Ahead.">Gene and Cell Therapy in 2018: A Look Ahead.</a> Human Gene Therapy. 29, 1-1 (2018).</li><li>Huang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomedicine-based+combination+anticancer+therapy+between+nucleic+acids+and+small-molecular+drugs.">Nanomedicine-based combination anticancer therapy between nucleic acids and small-molecular drugs.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 115, 82-97 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversing+of+multidrug+resistance+breast+cancer+by+co-delivery+of+P-gp+siRNA+and+doxorubicin+via+folic+acid-modified+core-shell+nanomicelles.">Reversing of multidrug resistance breast cancer by co-delivery of P-gp siRNA and doxorubicin via folic acid-modified core-shell nanomicelles.</a> Colloids &amp; Surfaces B Biointerfaces. 138, 60-69 (2016).</li><li>Quader, S., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanomaterial-Enabled+Cancer+Therapy.">Nanomaterial-Enabled Cancer Therapy.</a> Molecular Therapy. 25, 1501-1513 (2017).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multivalent+methionine-functionalized+biocompatible+block+copolymers+for+targeted+siRNA+delivery+and+subsequent+reversal+effect+on+adriamycin+resistance+in+human+breast+cancer+cell+line+MCF-7/ADR.">Multivalent methionine-functionalized biocompatible block copolymers for targeted siRNA delivery and subsequent reversal effect on adriamycin resistance in human breast cancer cell line MCF-7/ADR.</a> Journal of Gene Medicine. 19, e2969 (2017).</li><li>Szwarc, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=‘Living’+Polymers.">‘Living’ Polymers.</a> Nature. 178, 168-169 (1956).</li><li>Szwarc, M., Rembaum, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerization+of+methyl+methacrylate+initiated+by+an+electron+transfer+to+the+monomer.">Polymerization of methyl methacrylate initiated by an electron transfer to the monomer.</a> Journal of Polymer Science. 22 (100), 189-191 (1956).</li><li>Mukhopadhyay, R. D., Ajayaghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Living+supramolecular+polymerization.">Living supramolecular polymerization.</a> Science. 349, 241 (2015).</li><li>Ozkose, U. U., Altinkok, C., Yilmaz, O., Alpturk, O., Tasdelen, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In-situ+preparation+of+poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay+nanocomposites+via+living+cationic+ring-opening+polymerization.">In-situ preparation of poly(2-ethyl-2-oxazoline)/clay nanocomposites via living cationic ring-opening polymerization.</a> European Polymer Journal. 88, 586-593 (2017).</li><li>Wu, W., Wang, W., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Star+polymers:+Advances+in+biomedical+applications.">Star polymers: Advances in biomedical applications.</a> Progress in Polymer Science. 46, 55-85 (2015).</li><li>Boyer, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper-Mediated+Living+Radical+Polymerization+(Atom+Transfer+Radical+Polymerization+and+Copper(0)+Mediated+Polymerization):+From+Fundamentals+to+Bioapplications.">Copper-Mediated Living Radical Polymerization (Atom Transfer Radical Polymerization and Copper(0) Mediated Polymerization): From Fundamentals to Bioapplications.</a> Chemical Reviews. 116, 1803-1949 (2016).</li><li>Keddie, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+guide+to+the+synthesis+of+block+copolymers+using+reversible-addition+fragmentation+chain+transfer+(RAFT)+polymerization.">A guide to the synthesis of block copolymers using reversible-addition fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization.</a> Chemical Society Reviews. 43, 496-505 (2014).</li><li>Wu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guanidinylated+3-gluconamidopropyl+methacrylamide-s-3-aminopropyl+methacrylamide+copolymer+as+siRNA+carriers+for+inhibiting+human+telomerase+reverse+transcriptase+expression.">Guanidinylated 3-gluconamidopropyl methacrylamide-s-3-aminopropyl methacrylamide copolymer as siRNA carriers for inhibiting human telomerase reverse transcriptase expression.</a> Drug Delivery. 20, 296-305 (2013).</li><li>Qin, Z., Liu, W., Guo, L., Li, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+Guanidinated+N-3-Aminopropyl+Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl+Methacrylamide+Co-polymers+as+Gene+Delivery+Carrier.">Studies on Guanidinated N-3-Aminopropyl Methacrylamide-N-2-Hydroxypropyl Methacrylamide Co-polymers as Gene Delivery Carrier.</a> Journal of Biomaterials Science, Polymer Edition. 23, 1-4 (2012).</li><li>Friedman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+the+Ninhydrin+Reaction+for+Analysis+of+Amino+Acids,+Peptides,+and+Proteins+to+Agricultural+and+Biomedical+Sciences.">Applications of the Ninhydrin Reaction for Analysis of Amino Acids, Peptides, and Proteins to Agricultural and Biomedical Sciences.</a> Journal of Agricultural and Food Chemistry. 52, 385-406 (2004).</li><li>Habuchi, S., Yamamoto, T., Tezuka, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Cyclic+Polymers+and+Characterization+of+Their+Diffusive+Motion+in+the+Melt+State+at+the+Single+Molecule+Level.">Synthesis of Cyclic Polymers and Characterization of Their Diffusive Motion in the Melt State at the Single Molecule Level.</a> Journal of Visualized Experiments. (115), 1-9 (2016).</li><li>Rao, D. A., Nguyen, D. X., Mishra, G. P., Doddapaneni, B. S., Alani, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+Characterization+of+Individual+and+Multi-drug+Loaded+Physically+Entrapped+Polymeric+Micelles.">Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles.</a> Journal of Visualized Experiments. 102, 1-5 (2015).</li></ol>

Bu çalışmada bir dizi BNHEMA-b-APMA blok polimer cationıc gen taşıyıcıları tanıtıldı. Bu blok polimerleri, geri dönüşümlü toplama-parçalanma zinciri transferi (RAFT) yöntemi ile sentezlenmiş. Hidrofilik segment BNHEMA çözünürlüğünü artırmak için tanıtıldı. Metionin ve guanidin grupları hedef yeteneği ve transfeksiyon verimliliğini artırmak için değiştirilmiş5. APMA zincir içeriği arttı ve mBG kopolimer guanidinylation mBG/pDNA polyplexes parçacık boyut...

Son yıllarda, her türlü hastalıkları tedavi etmek için ilaç olarak nüklütik asitlerin terapötik teslim edilmesi için gen terapisi ortaya çıkmıştır1. Plasmid DNA (pDNA) ve küçük müdahale RNA (siRNA) dahil gen ilaçların geliştirilmesi, ilaç teslim sistemi (DDS)2' nin stabilitesi ve verimliliğine dayanır. Tüm DDS arasında, cationıc polimer taşıyıcılar iyi stabilite avantajları vardır, düşük immünogenisite, ve facile hazırlama ve modifikasyon, hangi katort polimer taşıyıcılar geniş uygulama umutları vermek3,4. Biyolojik olarak pratik uygulamalar için, araştırmacılar yüksek verimlilik, düşük toksisite ve iyi hedefleme yeteneği5ile bir katyonik polimer taşıyıcı bulmak zorundadır. Tüm polimer taşıyıcılar arasında blok kopolimerler en yaygın olarak kullanılan ilaç teslim sistemlerinden biridir. Blok kopolimerler yoğun kendi kendi kendine montaj özelliği ve yetenekleri micelles, microspheres ve ilaç teslim5nanopartiküller oluşturmak için incelenmiştir. Blok kopolimerler yaşam polimerizasyonu veya tıklama Kimya yöntemleri ile sentezlenmiş olabilir.
1956 yılında, Szwarc ve al. canlı polimerizasyon konusunu kaldırdı, zincir kırma reaksiyonları olmadan bir reaksiyon olarak tanımlayarak6,7. O zamandan beri, bu yöntemi kullanarak polimerleri sentezlemek için birden fazla teknik geliştirilmiştir; Böylece, yaşayan polimerizasyon Polimer bilim bir kilometre taşı olarak görülebilir8. Yaşayan polimerizasyon yaşam anyonik polimerizasyon, yaşam katyonik polimerizasyon ve geri dönüşümlü deaktivasyon radikal polimerizasyon (RDRP)9sınıflandırılabilir. Yaşayan anyonik/katyonik polimerizasyon, sıkı reaksiyon koşulları nedeniyle sınırlı bir uygulama kapsamına sahiptir10. Kontrollü/yaşayan radikal polimerizasyon (CRP) hafif reaksiyon koşulları, uygun eğilim ve iyi verim ve böylece son yıllarda büyük bir araştırma odağı olmuştur11. CRP 'de, aktif yayılma zincirleri, serbest radikallerin konsantrasyonunu azaltmak ve zincir radikallerinin yayılmasının bimoleküler reaksiyonu önlemek için uyuyan olanlara geri döndürülebilir. Ek polimerizasyon, yalnızca aktif olmayan uyuyan yayılma zincirleri ters şekilde zincir radikallerine animasyonsa devam edebilir. Radikal polimerizasyon yaşayan en umut verici formlardan biri olarak, geri dönüşümlü ek-parçalanma zinciri transferi (RAFT) polimerizasyon kontrollü molekül ağırlığı ve yapısı ile blok polimerleri verim için uygulanabilir bir yöntemdir, dar moleküler ağırlık Dağıtım ve fonksiyonel gruplar12taşıma. Başarılı RAFT polimerizasyonu için anahtar zincir transfer ajanları etkisi, genellikle çok yüksek zincir transfer sabiti sahip dithioesters.
Bu yazıda, bir sal polimerizasyon yöntemi, bir başlatıcı ajan olarak 4, 4 '-azobis (4-cyanovaleric acid) (ACVA) ve zincir transfer ajanı olarak 4-cyanopentanoik asit dithiobenzoat (CTP) alarak BNHEMA-b-apma blok polimer hazırlamak için tasarlanmıştır. Raft polimerizasyon iki kez bnhema 'ya katyonik polimer taşıyıcıları tanıtmak için kullanıldı. Daha sonra, APMA zincirindeki Amin grupları metiyonin ve guanidinilasyon reaktifinin 1-amidinopyrazol hidroklorür ile değiştirildi. Guanidinilasyon reakajının ve metakrilamid polimer iskelet yapısının pozitif ücretlerinin kullanımı, elde edilen blok polimer taşıyıcıların hücresel Alım verimliliği iyileştirildi.

<table>
<tbody>
<tr>
<td>1-hydroxybenzotriazole</td>
<td>Macklin Biochemical Co., Ltd,China</td>
<td>H810970</td>
<td>&ge;97.0%</td>
</tr>
<tr>
<td>1,4-dioxane</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10008918</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>1-amidinopyrazole Hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A107935</td>
<td>98%</td>
</tr>
<tr>
<td>1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E106172</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>4,4&#x2019;-azobis(4-cyanovaleric acid)</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A106307</td>
<td>Analytical reagent (AR)</td>
</tr>
<tr>
<td>4-cyano-4-(phenylcarbonothioylthio)pentanoic Acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>C132316</td>
<td>&#x003E;97%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetate</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>81014818</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Acetone</td>
<td>Sinopharm chemical reagent Co., Ltd, China</td>
<td>10000418</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Agarose</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A118881</td>
<td>High resolution</td>
</tr>
<tr>
<td>Ascorbic acid</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>A103533</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>DMSO</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>D103272</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Ethylene glycol</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>E103319</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>N-(3-aminopropyl)methacrylamide hydrochloride</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N129096</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>N,N-bis(2-hydroxyethyl)methacrylamide</td>
<td>ZaiQi Bio-Tech Co.,Ltd, China</td>
<td>CF259748</td>
<td>&ge;98.0%(HPLC)</td>
</tr>
<tr>
<td>Ninhydrin</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>N105629</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>PBS buffer</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>P196986</td>
<td>pH 7.4</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
<td>pDNA-EGFP</td>
</tr>
<tr>
<td>Plasmid DNA</td>
<td>BIOGOT Co., Ltd, China</td>
<td>Pdna</td>
<td>pDNA</td>
</tr>
<tr>
<td>Sodium carbonate decahydrate</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>S112589</td>
<td>AR</td>
</tr>
<tr>
<td>Trimethylamine</td>
<td>Aladdin Co., Ltd., China</td>
<td>T103285</td>
<td>AR</td>
</tr>
</tbody>
</table>

methionine functionalized biocompatible block copolymers for targeted plasmid dna delivery

Ters dönüşümlü ek-parçalanma zinciri transferi (RAFT) polimerizasyon radikal polimerizasyon ve yaşam polimerizasyonu avantajlarını birleştirir. Bu çalışma RAFT polimerizasyonu ile metionin functionalized biyouyumlu blok kopolimerler hazırlanması sunar. Öncelikle, n, n-bis(2-hidroksiilil) metakrilamid-b-n-(3-AMINOPROTRANSL) metakrilamid (BNHEMA-b-apma, ba), 4, 4 '-AZOBIS (4-SIYANOVALERIK asit) (Acva) kullanarak Raft polimerizasyonu ile sentezlenmiş Aracı ve 4-cyanopentanoik asit dithiobenzoate (CTP) zincir transfer ajanı olarak başlatılıyor. Daha sonra, n, n-bis(2-hidroksiil) metakrilamid-b-n-(3-guanidinoprog) methacrylamid (metiyonin gredyle bnhema-b-gpma, MBG), apma 'daki Amin gruplarını metiyonin ve guanidin ile değiştirerek hazırlanmıştır. Grup. Üç çeşit blok polimerleri, mBG1, mBG2 ve mBG3 karşılaştırılması için sentezlenmiş. APMA içeriğini ölçmek için bir ninhidrin reaksiyonu kullanıldı; mBG1, mBG2 ve mBG3 sırasıyla APMA% 21, 37% ve 52% vardı. Jel geçirgenlik Kromatografi (GPC) sonuçları, BA kopolimerlerin 16.200 molekül ağırlıklarına (BA1), 20900 (BA2) ve 27200 (BA3) g/mol 'e sahip olduğunu göstermiştir. Elde edilen blok kopolimer gen taşıyıcıların Plasmid DNA (pDNA) karmaşıklığı da incelenmiştir. PDNA sırasıyla mBG1, mBG2, mBG3 ile tamamen karmaşıkken şarj oranları (N/P) 8, 16 ve 4 idi. MBG/pDNA polyplexes N/P oranı 1 ' den yüksek olduğunda, mBG Zeta potansiyeli pozitif oldu. 16 ile 32 arasında bir N/P oranı, mBG/pDNA polyplexes ortalama parçacık boyutu 100-200 Nm arasındadır. Genel olarak, bu çalışma blok kopolimer taşıyıcı sentezi için basit ve kullanışlı bir protokol göstermektedir.

BNHEMA, Tablo 1' de gösterilen polimerizasyon derecesine göre beslendi; mBG sentezi prosedürü Şekil 1' de gösterilir. Öncelikle, BNHEMA homopomer, su-dioxane sistemindeki geri dönüşümlü ek parçalanma zinciri transferi (RAFT) yöntemi ile, bir zincir transfer ajanı olarak 4-cyanopentanoik asit dithiobenzoat kullanılarak hazırlanmıştır. İkincisi, PBNHEMA BNHEMA-b-apma blok polimer hazırlamak için bir zincir transfer ajanı olarak kullanılmışt?...

Watch this Scientific Journal Video about Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery at JoVE.com

Methionine Functionalized Biocompatible Block Copolymers for Targeted Plasmid DNA Delivery

Bu çalışma, geri dönüşümlü ek-parçalanma zinciri transferi (RAFT) yöntemi ile metiyonin functionalized biyouyumlu blok kopolimerler (mBG) hazırlanması sunar. Elde edilen mBG 'nin plazmid DNA 'Sı karmaşıklığı ve transfeksiyon verimliliği de incelenmiştir. Raft yöntemi, özel fonksiyonel gruplar içeren polimerleştirici monomerlerin için çok yararlıdır.

Hedeflenen Plasmid DNA teslim için metiyonin functionalized biyouyumlu blok kopolimerler

Reversible addition-fragmentation chain transfer (RAFT) polymerization integrates the advantages of radical polymerization and living polymerization. This ...

Katyonik polimer ilaç taşıyıcıları iyi stabilite, düşük immünojenite ve kolay hazırlık ve modifikasyon avantajlarına sahiptir. Burada, sentezi için hızlı ve basit bir yöntem sunuyoruz. Geri dönüşümlü ek parçalama zinciri transfer polimerizasyon yöntemi kontrollü moleküler ağırlık ve yapı ve fonksiyonel gruplar taşıyan blok polimerler verim için geçerli bir yöntemdir.Bu ilaç taşıyıcıları aynı anda kanser, inflamasyon ve diğer hastalıkların işbirliği tedavi elde etmek için farklı ilaçlar taşıyabilir. IFT polimerizasyonu klasik bir yöntemdir ve bu protokol gen terapisinde uygulanmasına bir örnek vermektedir. Bu polimerin sentezinde başarının anahtarı reaksiyon sıcaklığını tam olarak kontrol etmektir.Bir su banyosu daha bir yağ banyosu kullanmak için daha tavsiye edilir. Bu prosedüre başlamak için, polimerizasyon şişesi olarak kullanılmak üzere bir kauçuk durdurucu ve manyetik karıştırıcı ile yuvarlak alt şişe elde edin. Polimerizasyon şişesinde bir mililitre distile suda 1,87 gram bis-hidroksi HEMA çözün.Beş mililitrelik bir kabın içinde, 0.03 gram CTP ve 0.02 gram ACVA'yı 0,5 mililitre 1, 4-dioksan olarak çözün. Polimerizasyon şişesine bu karışımı ekleyin. Daha sonra, polimerizasyon şişesinde çözelti dondurmak için bir yoğuşma tuzağı kullanın.Şişeyi demir desteğine sabitleyin ve vakumlamak ve reaksiyon karışımına azot enjekte etmek için iğneyle tökezleyen bir kanal kullanın. Daha sonra polimerizasyon şişesini kapatın ve çözeltiyi oda sıcaklığında 30 dakika eritin. Bu donma pompası çözülme döngüsünü üç kez tekrarlayın.Bundan sonra, 70 santigrat derece bir yağ banyosu içine şişe yerleştirin ve çözelti azot atmosferi altında 24 saat boyunca tepki sağlar. Ertesi gün, polimerizasyon şişesini sıfır santigrat derecede soğutun ve polimerizasyon reaksiyonunu sonlandırmak için kauçuk durdurucuyu açın. Daha sonra, iki saat boyunca negatif 20 santigrat derecede bir buzdolabında precool aseton, ve 50'ye bir oranında polimerizasyon şişesinde reaksiyon çözeltisi ile karıştırın.Santrifüj bu karışımı 8, 200 kez g 10 dakika asetonu kaldırmak ve çökelti toplamak için. Sentezlenen poli bis-hidroksi HEMA'yı arındırmak için toplanan çökeltiyi iki mililitre saf suda çözün. Daha sonra, 1-50 oranında önceden soğutulmuş aseton 100 mililitre ile karıştırın.Çökelti toplamak için 10 dakika boyunca 8, 200 kez g çözeltisantrik. Çökeltme işlemini üç kez eritme, karıştırma ve santrifüj işlemini tekrarlayın. İlk olarak, 10 mililitrelik bir kabın içinde beş mililitre distile suda 0,96 gram APMA ve 0,93 gram saflaştırılmış poli bis-hidroksi HEMA'yı çözün.0,01 gram ACVA'yı 0,5 mililitre 1, 4-dioksan olarak çözün ve bunu APMA ve poli bis-hidroksi HEMA çözeltisine ekleyin. Bu karışımı bir polimerizasyon şişesine aktarın ve kuru nitrojenle bir saat havalandırın. Sonra polimerizasyon şişesini 70 santigrat derecede bir yağ banyosuna koyun ve azot atmosferinin altında 24 saat boyunca tepki göstermesine izin verin.Ertesi gün, polimerizasyon şişesini sıfır santigrat derecede soğutun ve polimerizasyon prosesi çözümemesini sonlandırmak için kauçuk durdurucuyu açın. Başlamak için, tohum MCF-7 hücreleri iyi başına 20, 000 hücre yoğunluğunda altı iyi plaka kuyularına. 37 derecede nemlendirilmiş bir kuluçka makinesindeki hücreleri 12 saat boyunca %5 karbondioksitle kültüre sittirin.Bundan sonra kültür ortamını, azot-fosfor oranlarının farklı oranda katyonik polimer ve pDNA polipleksler içeren taze kültür ortamı ile değiştirin. Kültür hücreleri altı saat, ve sonra taze RPMI 1640 orta iki mililitre ile orta değiştirin. 48 saat boyunca kültür emzme devam edin.Sonra, hücreleri toplamak ve yeşil floresan algılamak için bir akış sitometre kullanın. Bu çalışmada metiyonin fonksiyonelleştirilmiş biyouyumlu blok kopolimerler geri dönüşümlü ek parçalama zinciri transferi yöntemi ile hazırlanır ve elde edilen mBG'nin plazmid DNA karmaşıklaştırma yeteneği ve transfeksiyon etkinliği araştırılmıştır. MBG/pDNA polikseksilerinin ortalama partikül büyüklüğü ve zeta potansiyeli 16 N-p oranında sırasıyla 124 nanometre ve artı 15.7 milivoltdur.Elektroforetik gerilik, N-p oranı sıfır olan pDNA'nın agarose jelde dizginleme olmadan hareket edebildiği ve jel görüntüleyicide bir şerit olarak gözlendiğini ortaya koymaktadır. PDNA mBG ile karmaşıklandığında, pDNA hareketi gerizekalı ve daha sonra bandın parlaklığı azalır. Bu, N'den P'ye dörtten yüksek olduğunda mBG'nin pDNA'yı tamamen karmaşıklatadığını gösterir.MBG/pDNA polikseksilerinin sitotoksisitesi standart MTT testi kullanılarak ölçülür Bu sonuçlar mBG/pDNA polikseslerinin dört, sekiz, 16 ve 32'lik N--P oranlarında PEI/pDNA polikseksilerden daha sitotoksite olduğunu göstermektedir. Görüldüğü gibi mBG/pDNA polikseksilerin sitotoksisitesi artmış N-p oranı ile artar. Bu artmış sitotoksisite pozitif yüklü GPMA bileşeninin bir sonucudur.PDNA transfeksiyon deneyinde kullanılan N-P oranı sitotoksisite sonuçlarına göre seçilir. MBG1, mBG2 ve mBG3 transfeksiyon yetenekleri GFP floresan yoğunluğu ölçülerek karşılaştırılır ve sonuçlar mBG3'ün optimal gen taşıyıcısı olduğunu göstermiştir. Silt yuvarlak alt şişeden havayı tüketmek ve reaksiyon sıcaklığını korumak önemlidir.Elde edilen polimer ilaç taşıyıcıları sinerjik ilaç dirençli kanser tedavisinde kemoterapi ilaçları ve gen ilaçların ın ortak teslim uygulanabilir. Gen ilaçları ve kemoterapötik ilaçların kombinasyonunun moleküler mekanizması ilaca dirençli tümörlerin tedavisinde daha fazla araştırılabilir. Aseton akut toksisitesi için düşük toksik olarak derecelendirilmiştir.Anahtarlar, teneffüs veya göz veya deri ile temas kaçınılmalıdır. Isıtma işlemi sırasında haşlanma riskine karşı kaçının.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Microwave-assisted Intramolecular Dehydrogenative Diels-Alder Reactions for the Synthesis of Functionalized Naphthalenes/Solvatochromic Dyes

Fonksiyonlu naftalenlerin / Solvatochromic Boyaların Sentez için Mikrodalga-destekli Moleküliçi Dehydrogenative Diels-Alder Reaksiyonları

Functionalized naphthalenes have applications in a variety of research fields ranging from the synthesis of natural or biologically active molecules to ...

Synthesis and Characterization of Functionalized Metal-organic Frameworks

Fonksiyonlu Sentezi ve Karakterizasyonu Metal-organik Altyapıları

Metal-organic frameworks have attracted extraordinary amounts of research attention, as they are attractive candidates for numerous industrial and ...

Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Preparation and Characterization of SDF-1ÃƒÅ½Ã‚Â±-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

SDF-1α-Kitosan-Dekstran Sülfat nano partiküllerin hazırlanması ve Karakterizasyonu

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

Functionalization of Single-walled Carbon Nanotubes with Thermo-reversible Block Copolymers and Characterization by Small-angle Neutron Scattering

Küçük açılı Nötron Saçılma tarafından Thermo-geri dönüşümlü Blok Kopolimer ve Karakterizasyonu Tek duvarlı Karbon Nanotüpler işlevselleştirilmesi

We demonstrate a protocol for single-walled carbon nanotube functionalization using thermo-sensitive PEO-PPO-PEO triblock copolymers in an aqueous ...

Self-assembling Morphologies Obtained from Helical Polycarbodiimide Copolymers and Their Triazole Derivatives

Sarmal polikarbodiimidden Kopolimer ve Bunların Triazole Türevleri elde edilen kendinden montaj morfolojileri

A facile method for the preparation of polycarbodiimide-based secondary structures (e.g., nano-rings, &#34;craters,&#34; fibers, looped fibers, fibrous ...

Synthesis of a Thiol Building Block for the Crystallization of a Semiconducting Gyroidal Metal-sulfur Framework

Bir yarıiletken Gyroidal Metal-kükürt çerçeve kristalleşme için Thiol yapı taşı sentezi

We present a method for preparing thioester molecules as the masked form of the thiol linkers and their utilization for accessing a semiconducting and ...

Preparation of Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Preparation of Polypentafluorophenyl acrylate Functionalized SiO2 Beads for Protein Purification

Poly(pentafluorophenyl acrylate) Functionalized SiO2 boncuk hazırlanması için Protein Saflaştırma

We demonstrate a simple method to prepare poly(pentafluorophenyl acrylate) (poly(PFPA)) grafted silica beads for antibody immobilization and subsequent ...

Synthesis of Monodisperse Cylindrical Nanoparticles via Crystallization-driven Self-assembly of Biodegradable Block Copolymers

Biodegradable blok kopolimerlerin kristalizasyon Driven kendinden montajı ile Monodisperse silindirik Nanopartiküllerin sentezini

The production of monodisperse cylindrical micelles is a significant challenge in polymer chemistry. Most cylindrical constructs formed from diblock ...

Efficient Synthesis of All-Carbon Quaternary Centers via the Conjugate Addition of Functionalized Monoorganozinc Bromides

Fonksiyonel Monoorganozinc Bromides Conjugate Ilavesi ile tüm karbon Dörernary merkezlerinin verimli sentezi

The conjugate addition of organometallic reagents to &#945;,&#946;-unsaturated carbonyls represents an important method to generate C&#8211;C bonds in the ...