Name: mechanisms underlying gut hormone secretion using the isolated perfused rat small intestine
Uploaded: 2019-02-26T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine at JoVE.com

هذا العمل وأيده على منحة غير مقيد إلى البروفيسور ينس يول هولست من مركز نوفو نورديسك "البحوث الأساسية الأيضية" (نوفو نورديسك مؤسسة، الدانمرك)، منحة منفصلة من مؤسسة نوفو نورديسك للقيام بدراسات نضح القوارض (منحة لا. NNF15OC0016574)، منحة إلى الأستاذ هولست من مجلس البحوث الأوروبي (منحة no.695069) والاتحاد theEuropean في "البرنامج الإطاري السابع" للبحوث، تيتشنولوجيكالديفيلوبمينت، وأنشطة البيان العملي (المنحة رقم 266408)، فضلا عن مأزق منحة لكوري أ رون من مؤسسة Lundbeck (R264-2017-3492). ونحن نشكر جينا هاء هانت وكارولين ف. الشماس لتصحيح التجارب المطبعية حذراً.

وأجريت جميع الدراسات بإذن من "مفتشية التجارب الحيوانية الدانمركية" (2013-15-2934-00833) واللجنة الأخلاقية المحلية، وفقا للمبادئ التوجيهية للتشريع الدانمركي تنظم التجارب الحيوانية (1987) والوطنية المعاهد الصحية (المنشور رقم 85-23).
1-التجريبية الحيوانات
<ol><li>الحصول على ذكور الفئران ويس...

<ol>
	<li>Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&amp;#34;normal&amp;#34;+endocrine+cell+of+the+gut:+changing+concepts+and+new+evidences.">The &amp;#34;normal&amp;#34; endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).</li><li>Brighton, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Acids+Trigger+GLP-1+Release+Predominantly+by+Accessing+Basolaterally+Located+G+Protein-Coupled+Bile+Acid+Receptors.">Bile Acids Trigger GLP-1 Release Predominantly by Accessing Basolaterally Located G Protein-Coupled Bile Acid Receptors.</a> Endocrinology. 156, 3961-3970 (2015).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+acids+are+important+direct+and+indirect+regulators+of+the+secretion+of+appetite-+and+metabolism-regulating+hormones+from+the+gut+and+pancreas.">Bile acids are important direct and indirect regulators of the secretion of appetite- and metabolism-regulating hormones from the gut and pancreas.</a> Molecular Metabolism. , (2018).</li><li>Roberge, J. N., Brubacker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretion+of+Proglucagon-Derived+Peptides+in+Response+to+Intestinal+Luminal+Nutrients.">Secretion of Proglucagon-Derived Peptides in Response to Intestinal Luminal Nutrients.</a> Endocrinology. 128, 3169-3174 (1991).</li><li>Brubaker, P. L., Schloos, J., Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+glucagon-like+peptide-1+synthesis+and+secretion+in+the+GLUTag+enteroendocrine+cell+line.">Regulation of glucagon-like peptide-1 synthesis and secretion in the GLUTag enteroendocrine cell line.</a> Endocrinology. 139, 4108-4114 (1998).</li><li>Jacobsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+Gastrointestinal+Hormone+Responses,+Insulin+Sensitivity,+and+Beta-Cell+Function+Within+2+Weeks+After+Gastric+Bypass+in+Non-diabetic+Subjects.">Changes in Gastrointestinal Hormone Responses, Insulin Sensitivity, and Beta-Cell Function Within 2 Weeks After Gastric Bypass in Non-diabetic Subjects.</a> Obesity Surgery. 22, 1084-1096 (2012).</li><li>Kuhre, R. E., Frost, C. R., Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+glucose-stimulated+GLP-1+secretion+from+perfused+rat+small+intestine.">Molecular mechanisms of glucose-stimulated GLP-1 secretion from perfused rat small intestine.</a> Diabetes. 64, 370 (2014).</li><li>Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+gut+hormone+secretion.+Studies+using+isolated+perfused+intestines.">Regulation of gut hormone secretion. Studies using isolated perfused intestines.</a> Peptides. 77, 47-53 (2016).</li><li>Ratner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Peripheral+Neurotensin+on+Appetite+Regulation+and+Its+Role+in+Gastric+Bypass+Surgery.">Effects of Peripheral Neurotensin on Appetite Regulation and Its Role in Gastric Bypass Surgery.</a> Endocrinology. 157, 3482-3492 (2016).</li><li>Wewer Albrechtsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+glucagon+secretion+in+mice+and+rats+revealed+using+a+validated+sandwich+ELISA+for+small+sample+volumes.">Dynamics of glucagon secretion in mice and rats revealed using a validated sandwich ELISA for small sample volumes.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 311, E302-E309 (2016).</li><li>Vilsboll, T., Agerso, H., Krarup, T., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+elimination+rates+of+glucagon-like+peptide-1+in+obese+type+2+diabetic+patients+and+healthy+subjects.">Similar elimination rates of glucagon-like peptide-1 in obese type 2 diabetic patients and healthy subjects.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 88, 220-224 (2003).</li><li>Windelov, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+is+it+so+difficult+to+measure+glucagon-like+peptide-1+in+a+mouse?.">Why is it so difficult to measure glucagon-like peptide-1 in a mouse?.</a> Diabetologia. 60, 2066-2075 (2017).</li><li>Gorboulev, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Na+-d-glucose+Cotransporter+SGLT1+is+Pivotal+for+Intestinal+Glucose+Absorption+and+Glucose-Dependent+Incretin+Secretion.">Na+-d-glucose Cotransporter SGLT1 is Pivotal for Intestinal Glucose Absorption and Glucose-Dependent Incretin Secretion.</a> Diabetes. 61, 187-196 (2012).</li><li>Kuhre, R. E., Bechmann, L. E., Wewer Albrechtsen, N. J., Hartmann, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+stimulates+neurotensin+secretion+from+the+rat+small+intestine+by+mechanisms+involving+SGLT1+and+GLUT2,+leading+to+cell+depolarization+and+calcium+influx.">Glucose stimulates neurotensin secretion from the rat small intestine by mechanisms involving SGLT1 and GLUT2, leading to cell depolarization and calcium influx.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 308, E1123-E1130 (2015).</li><li>Kuhre, R. E., Christiansen, C. B., Saltiel, M. Y., Wewer Albrechtsen, N. J., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+relationship+between+glucose+absorption+and+glucose-stimulated+secretion+of+GLP-1,+neurotensin,+and+PYY+from+different+intestinal+segments+in+the+rat.">On the relationship between glucose absorption and glucose-stimulated secretion of GLP-1, neurotensin, and PYY from different intestinal segments in the rat.</a> Physiological Reports. 5, (2017).</li><li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+cosecretion+and+coexpression+of+gut+hormones+from+male+rat+proximal+and+distal+small+intestine.">An analysis of cosecretion and coexpression of gut hormones from male rat proximal and distal small intestine.</a> Endocrinology. 156, 847-857 (2015).</li><li>Goldspink, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+insights+into+the+detection+of+free+fatty+and+bile+acids+by+ileal+glucagon-like+peptide-1+secreting+cells.">Mechanistic insights into the detection of free fatty and bile acids by ileal glucagon-like peptide-1 secreting cells.</a> Molecular Metabolism. 7, 90-101 (2018).</li><li>Sun, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+Controlling+Glucose-Induced+Glp-1+Secretion+in+Human+Small+Intestine.">Mechanisms Controlling Glucose-Induced Glp-1 Secretion in Human Small Intestine.</a> Diabetes. , (2017).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+production+and+secretion+in+GLUTag,+NCI-H716+and+STC-1+cells:+a+comparison+to+native+L-cells.">Peptide production and secretion in GLUTag, NCI-H716 and STC-1 cells: a comparison to native L-cells.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 56, 11 (2016).</li><li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+sensing+in+L+cells:+a+primary+cell+study.">Glucose sensing in L cells: a primary cell study.</a> Cell Metabolism. 8, 532-539 (2008).</li><li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+role+of+voltage+gated+cation+conductances+in+the+glucagon-like+peptide-1+secreting+GLUTag+cell+line.">Characterization and functional role of voltage gated cation conductances in the glucagon-like peptide-1 secreting GLUTag cell line.</a> The Journal of Physiology. 563, 161-175 (2005).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fructose+stimulates+GLP-1+but+not+GIP+secretion+in+mice,+rats+and+humans.">Fructose stimulates GLP-1 but not GIP secretion in mice, rats and humans.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 306, G622-G630 (2014).</li><li>Reimann, F., Tolhurst, G., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G-Protein-Coupled+Receptors+in+Intestinal+Chemosensation.">G-Protein-Coupled Receptors in Intestinal Chemosensation.</a> Cell Metabolism. 15, 421-431 (2012).</li><li>Parker, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+underlying+bile+acid-stimulated+glucagon-like+peptide-1+secretion.">Molecular mechanisms underlying bile acid-stimulated glucagon-like peptide-1 secretion.</a> British Journal of Pharmacology. 165, 414-423 (2012).</li><li>Petersen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+L+cells+in+mouse+and+human+small+intestine+organoids.">Generation of L cells in mouse and human small intestine organoids.</a> Diabetes. 63, 410-420 (2014).</li><li>Parker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+role+of+active+versus+facilitative+glucose+transport+for+glucagon-like+peptide-1+secretion.">Predominant role of active versus facilitative glucose transport for glucagon-like peptide-1 secretion.</a> Diabetologia. 55, 2445-2455 (2012).</li><li>Roberts, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Human+and+Murine+Enteroendocrine+Cells+by+Transcriptomic+and+Peptidomic+Profiling.">Comparison of Human and Murine Enteroendocrine Cells by Transcriptomic and Peptidomic Profiling.</a> Diabetes. , (2019).</li><li>Reimann, F., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-Sensing+in+Glucagon-Like+Peptide-1-Secreting+Cells.">Glucose-Sensing in Glucagon-Like Peptide-1-Secreting Cells.</a> Diabetes. 51, 2757-2763 (2002).</li><li>Drucker, D. J., Jin, T., Asa, S. L., Young, T. A., Brubaker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+proglucagon+gene+transcription+by+protein+kinase-A+in+a+novel+mouse+enteroendocrine+cell+line.">Activation of proglucagon gene transcription by protein kinase-A in a novel mouse enteroendocrine cell line.</a> Molecular Endocrinology. 8, 1646-1655 (1994).</li><li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLP1-+and+GIP-producing+cells+rarely+overlap+and+differ+by+bombesin+receptor-2+expression+and+responsiveness.">GLP1- and GIP-producing cells rarely overlap and differ by bombesin receptor-2 expression and responsiveness.</a> The Journal of Endocrinology. 228, 39-48 (2016).</li><li>Bak, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+commercially+available+assays+for+glucagon-like+peptide-1+(GLP-1):+implications+for+GLP-1+measurements+in+clinical+studies.">Specificity and sensitivity of commercially available assays for glucagon-like peptide-1 (GLP-1): implications for GLP-1 measurements in clinical studies.</a> Diabetes, Obesity &amp; Metabolism. 16, 1155-1164 (2014).</li><li>Jacobsen, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gastric+bypass+surgery+on+glucose+absorption+and+metabolism+during+a+mixed+meal+in+glucose-tolerant+individuals.">Effects of gastric bypass surgery on glucose absorption and metabolism during a mixed meal in glucose-tolerant individuals.</a> Diabetologia. 56, 2250-2254 (2013).</li></ol>

الأمعاء الدقيقة الفئران المعزولة perfused هو أداة قوية لبحث يسمح لديناميات والآليات الجزيئية الكامنة وراء إفراز هرمون القناة الهضمية دراستها بالتفصيل. أن الخطوة الأكثر أهمية للنجاح في إنتاج البيانات بهذا النموذج هو العملية الجراحية. التعامل مع القناة الهضمية حتما سوف يسبب بعض الضرر للامعا?...

القناة الهضمية هو أكبر جهاز الغدد الصماء في الجسم، وإنتاج الهرمونات الببتيد مختلفة أكثر من 15 التي تنظم امتصاص العناصر الغذائية والتصرف في المواد الغذائية، ونمو الأمعاء وتعدل الشهية1. هرمونات القناة الهضمية، لذلك، تشارك في العديد من العمليات الفسيولوجية الأساسية، وفهم هذه الأنماط من إفراز والتفاصيل الجزيئية التي تتحكم في إفراز الهرمونات كل منهما مهم وبالتالي لدينا الأساسية الفسيولوجية فهم ومعالجة الجوانب المتعدية للقناة الهضمية هرمون الإجراءات؛ ولكن كيف يمكن أحد دراسة آليات الاستشعار الجزيئية الكامنة وراء إفراز هرمون القناة الهضمية؟ وبصفة عامة، يمكن دراستها في الكائنات الحية سليمة (البشر أو الحيوانات التجريبية)، من الأعمال التحضيرية الأمعاء المعزولة أو من القناة الهضمية الثقافات الخلية الابتدائية إفراز هرمون إفراز هرمون أو خلد خلية الثقافات2،3، 4 , 5 , 6-لدينا النموذج المفضل هو الأمعاء الدقيقة الفئران المعزولة perfused، التي تعد نموذجا ذات صلة فسيولوجيا يسمح إفراز هرمونات القناة الهضمية دراستها بالتفصيل مع الوقت الأمثل القرار (إفراز معدلات يمكن أن يتحدد بأي وقت قاعدة وصولاً إلى الثانية)، ومن المرجح النتائج التحويل حالة المجراة في7. هنا، نحن نقدم بروتوكول مفصلة حول كيفية تنفيذ هذا الإجراء، ولكن أولاً سوف نناقش أساليب أخرى لدراسة إفراز هرمون القناة الهضمية، بما في ذلك الفوائد والقيود المفروضة على هذه النماذج مقارنة بالفئران المعزولة perfused الأمعاء.
إذا كان أحد يرغب في تحديد ما إذا كان مركب معين ينظم إفراز بعض هرمونات القناة الهضمية، دراسات في البشر هي الهدف النهائي. وهكذا، إذا كان مركب يبين آثار كبيرة على إفراز هرمونات القناة الهضمية واحد أو عدة في القوارض (في فيفو أو بيرفوسيونس) أو من هرمون إفراز الخلايا (خطوط الخلية أو الخلايا الأولية)، هذا التأثير فقط ذات الصلة بالطب وعلم وظائف الأعضاء البشرية إذا أنه يمكن تأكيد في البشر. ومع ذلك، هناك حدود واضحة لنوع الدراسات التي يمكن أن يؤديها في البشر، والدراسات المجراة في الحيوانات التجريبية كثيرا، ولذلك، ثاني أفضل خيار لمثل هذه الدراسات. الفئران والجرذان هي الحيوانات التجريبية الأكثر استخداماً يفترض بسبب حجمها مريحة ومنخفضة التكلفة وخيار وراثيا يغير الجينات المشتبه في تورطهم في أسئلة الدراسة محددة (مثلاً، ضرب من أصل نقل بعض أو مستقبلات). وبصفة عامة، في النماذج الحية تستفيد من كونها سليمة من الناحية الفسيولوجية، ولكن لها أيضا العديد من القيود. والأهم الحجم الصغير للقوارض، خاصة من الفئران، عاملاً مقيداً، كما تتطلب معظم فحوصات للقناة الهضمية الهرمون الكمي على الأقل 20 ميليلتر البلازما (وغالباً أكثر بكثير)، مما يعني أن مالا يقل عن 100 ميليلتر من الدم قد سحب لجعل نسخة مكررة القياس الكمي. ولذلك، من الممكن فقط للحصول على عينات قليلة جداً المقابلة لخط الأساس العينات وعينات التحفيز بعد واحد أو اثنين (وحجم الدم الإجمالي في ماوس غ 20 مل ~1.4). ونتيجة لذلك، الاستجابات المحتملة الافرازية (مثلاً، وسرعة أو تأخر حدوث استجابات) قد غاب عن ذلك.
في طراز التروية، هو التغلب على هذه المشكلة، كعينة كبيرة ويتم الحصول على وحدات التخزين (معدل التدفق: 7.5 مل/دقيقة) وفترات جمع يمكن تعديلها حسب الحاجة لضمان عدم ضياع الردود السريعة وقصيرة الأمد (ونحن جمع عينات كل دقيقة)7 . هناك مسألة أخرى مع في الدراسات فيفو في القوارض هو أن معظم هرمونات القناة الهضمية أكثر سرعة القضاء أو استقلاب من البشر8،،من910، مما قد يؤدي إلى تعقيد التحليل الكيميائية الحيوية اللاحقة. على سبيل المثال، أظهرنا أن يتم استقلاب GLP-1 في الفئران معدل أسرع حتى من البشر (حيث هو T1/2 1-2 دقيقة11)، والأهم من ذلك، ينطوي الانقسام ومن GLP-1 في الفئران، بالإضافة إلى الانقسام الطرفي ن ب ديبيبتيديل-بيبتيداسي-4 (DPP4) (وهو إنزيم المهينة GLP-1 الرئيسية في البشر)، المزيد من الانقسام ومحايدة endopeptidase 24.11 إنزيم12. ونتيجة لذلك، إلى حد كبير فحوصات التجارية الحالية للتحديد الكمي ل GLP-1، التي تقوم أما على isoform سليمة GLP-1 (7-36amide) أو إيسوفورم الحزب الديمقراطي التقدمي-4 المشقوق (9-39amide)، يقلل من إفراز GLP-1 في الفئران، ويؤدي إلى نتائج مضللة 12-في الأمعاء الدقيقة الفئران المعزولة perfused، معظم التمثيل الغذائي للهرمونات يفرزها هو إلغاء أو تخفيض ملحوظ، حيث يتم تجنب تدهور بوساطة البلازما، ويمنع استخراج/تدهور الكبد/الكلي/الرئة (بسبب بيرفوساتي هو جمع كما أنه يترك القناة الهضمية).
وبطبيعة الحال، فكرة هامة يمكن إنشاؤها بواسطة استخدام الحيوانات المحورة وراثيا، مثل، الصوديوم-الجلوكوز الناقل-1 خروج المغلوب الفئران13، لكن يتطلب إجراء تقييم مفصل لأجهزة الاستشعار الجزيئية المشاركة في إفراز غالباً النظر في العديد من مواقع الجزيئية، تتراوح بين الناقلين الجزيئية للقنوات الأيونية ومن مستقبلات مختلفة إلى جانب البروتين ز للبروتينات داخل الخلايا. على سبيل المثال، نحن تستهدف نشاط تسعة مواقع الجزيئية مختلفة عندما كشف أجهزة الاستشعار الجزيئية المسؤولة عن تحفيز الجلوكوز إفراز GLP-17. لن يكون إجراء تحقيق مماثل ممكن المجراة في بعض المركبات المستخدمة يكون غير محدد أو الآثار الضارة/القاتلة. على سبيل المثال، عند استخدام القناة الهضمية بيرفوسيد، كان من الممكن لتقييم دور استقلاب الجلوكوز داخل الخلايا لإفراز GLP-1 ونيوروتينسين بعرقلة تشكيل ATP مع14 من 2-4-دينيتروفينول7،، فضلا عن دور قنوات الكالسيوم الجهد عن طريق بوابة للأحماض الصفراوية تحفز إفراز GLP-1 و NT وبيي3. في الواقع، يمكن تطبيق تيدرودوتاكسين مانع قناة الصوديوم شديدة السمية بنجاح في الدراسات التروية. وأخيراً، في نموذج التروية يمكن مباشرة تقييم فيها في الأمعاء يحفز مركب معينة إفراز هرمون معينة، كما المحقق ببساطة اختيار وإعداد المنطقة المطلوب نتخلل، وفي الوقت نفسه فإنه يمكن أن يحقق ما إذا كانت الأسباب حافزا إفراز بتنشيط أجهزة الاستشعار الجزيئية من جانب لومينال أو الأوعية الدموية الأمعاء3،،من1516.
استخدام آليات الافرازية الأساسية إفراز هرمون القناة الهضمية قد أيضا أن تدرس قطع أنسجة القناة الهضمية (بما في ذلك الأنسجة البشرية)، ثقافات المعوية الأولية (عادة من الفئران)، خلد هرمون إفراز خطوط الخلايا (للماوس أو الأصل البشري)، بالقناة الهضمية الأنسجة المركبة في الدوائر أوسينج أو أورجانويدس (سواء في أغلب الأحيان من الفئران)2،3،4،،من56،،من1718. مقارنة بيرفوسيونس المعوية، دراسات بشأن قطع القناة الهضمية البشرية والثقافات الخلية الأولية وخطوط الخلية هي أسهل من الناحية الفنية لأداء وهي أسرع وأرخص وسيلة لتوليد البيانات، ولكن بطبيعة الحال يتطلب دراسة قطع القناة الهضمية الوصول إلى القناة الهضمية البشرية الطازجة العينات. ومع ذلك، في هذه النماذج استقطاب الخلية العادية للقناة الهضمية المفقودة أصلاً، بمعنى أنه لا يمكن استخدام هذه النماذج لتقييم التنشيط العادي من أجهزة الاستشعار الجزيئية، وعمليات الاستيعاب أيضا لا يمكن أن تدرس. وعلاوة على ذلك، تستخدم هذه الدراسات عادة إينكوباتيونس ثابتة (لتصل إلى ح عدة) الذي هو الغاية غير الفسيولوجية ولا علاقة له مع ديناميات الخلايا الافرازية العادي، لأنه لا يتم إزالة المنتج يفرزها ومما قد يؤثر على ردود الفعل إفراز الهرمونات. وفي المقابل، في الأمعاء بيرفوسيد، جزيئات يفرزها واستيعابها كفاءة إزالة بدوران الأوعية الدقيقة المخاطية كما الحية، ضمان الإبقاء على التدرجات ترانسموكوسال حيث يمكن أن يحدث امتصاص وإفراز بمعدل طبيعي. وعلاوة على ذلك، قد يكون ديديفيرينتياتيد الثقافات الخلية من أصلهم خلية انتيروندوكريني الأصلي، بمعنى أنها لم تعد الممثل للخلايا الأصلية من حيث المحتوى الببتيد والتعبير عن أجهزة الاستشعار الجزيئية، على الرغم من أنها قد لا تزال إفراز الهرمون في السؤال. على سبيل المثال، هذا هو الحال بالنسبة للخلية المبيضي GLP-1 خطوط19.
أنها، لذلك، رأينا أن الثقافات الخلية الأولية أو الخلية خط الدراسات الأكثر ملاءمة لأغراض الفرز وأداء أنواع التجارب التي لا يمكن أن يؤديها في فيفو أو في القناة الهضمية perfused معزولة. على سبيل المثال، هو قوة حقيقية الخلية الابتدائية الثقافات والثقافات خط الخلية الثانوية داخل الخلوية أن الرسل (مثل Ca2 +، مخيم، NAD(P)H) يمكن رصدها في الوقت الحقيقي، والإشارات الكهربائية من هرمون إفراز الخلايا يمكن أن تكون التحقيق في20،،من2122. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن يتم siRNA ضربة قاضية، وهي مفيدة بشكل خاص إذا كانت مثبطات محددة غير متاح20،،من2122،،من2324. واستخدمت أنسجة القناة الهضمية من الفئران التي شنت في الدوائر أوسينج مؤخرا لدراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء حفز إفراز GLP-1 حامض الصفراء، بينما أورجانويدس المعوية (من الفئران) وقطع القناة الهضمية البشرية قد استخدمت أيضا لدراسة تفاصيل الجزيئية للقناة الهضمية إفراز هرمون17،25. في حين أن الفوائد السابقة من أن الاستقطاب2 جميع هذه النماذج تنطوي إينكوبيشنز ثابتة. دراسات بشأن قطع القناة الهضمية البشرية، إلا أن تستفيد من استخدام الأنسجة البشرية، بدلاً من القوارض، هو أمر مهم منذ اختلاف الأنواع في التعبير الأنسجة مستقبلات 7TM والناقلين الجزيئية قد يسفر عن مسارات الاستشعار الجزيئية مختلفة بين الأنواع. وفي الحقيقة، معظم البيانات في هذا الحقل تم إنشاؤها بواسطة الدراسات على الخنازير، الفئران أو الجرذان، وأنه لا يزال بعيد المنال، ما إذا كان يمكن نقل هذه النتائج إلى البشر. بيد أنه من المطمئن أنه يبدو أن آليات الاستشعار الجزيئية التي تكمن وراء حفز الجلوكوز إفراز GLP-1 مماثلة بين الماوس وفار، والرجل، وكشف ترانسكريبتوميك والتنميط بيبتيدوميك الماوس ولالخلايا البشرية قوي عالمية أوجه التشابه بين هذين النوعين7،18،،من2627.
ومع ذلك، قد الفئران المعزولة perfused الأمعاء الدقيقة، أيضا بعض القيود التي يجب أن تعتبر. الأهم من ذلك، من المستحيل تحديد ما إذا كانت استجابة افرازية معينة ناتجة عن التنشيط المباشر بمضمون اختبار الخلايا المنتجة لهرمون المستهدفة أو بالأحرى بسبب إليه غير مباشرة. على سبيل المثال، بوكل يزيد على الفور إفراز GLP-1 من الأمعاء بيرفوسيد7، ولكن لا يزال غير معروف ما إذا كان هذا هو نتيجة ل depolarization المباشرة للأم-الخلية أو ناتجة عن ديبولاريزيشن من الخلايا العصبية القريبة من L-الخلايا أو آثار في الوقت نفسه أطلق سراح paracrine المنبهات/مثبطات. البيانات الناشئة عن الدراسات باستخدام الأمعاء بيرفوسيد التي تهدف إلى توضيح الآليات الجزيئية الكامنة وراء إفراز ينبغي، ولذلك دائماً أن توضع في سياق مع البيانات التي تم الحصول عليها من نماذج أخرى أكثر تحديداً لزيادة القدرة على إنشاء العلاقة السببية. على سبيل المثال، حفزت الجلوكوز إفراز GLP-1 من خط خلية المبيضي GLP-1 جلوتاج28،29 ومن الماوس الأساسي لالخلايا تعتمد على نشاط الناقلين الجلوكوز (SGLT1 و GLUT2). حجب هذه الناقلين في الأمعاء perfused الفئران كما يخفف إفراز20، بمعنى أنه من المرجح أن تحفز الجلوكوز إفراز GLP-1 هو إلى حد كبير بوساطة من الإجراءات المباشرة الجلوكوز في الخلية-L. قيد هام آخر من الأمعاء perfused معزولة بعض من الدهون صعوبة في الدراسة بسبب ما هيدروفوبيسيتي. على الرغم من أنه من الممكن للتحقيق في المنتجات النهائية لهضم الدهون (الأحماض الدهنية، جليسيرولس دياسيل، ليسوفوسفاتيديلجليسيرولس، إلخ) وعلى الرغم من أن الإعداد قد تكون قادراً على إعادة استيريفي الدهون داخل سيلولارلي وربما حزمة لهم في هو تعطل chylomicrons، والنقل ل chylomicrons خارج الخلايا وعلى امتصاص لاكتيلس الزوائد اللاحقة، إذ لا يمكن تأمين تدفق الليمفاوية في الأمعاء المعزولة. على الأرجح، ولذلك امتصاص الدهن توقف بمجرد بدء استيعاب المنتجات التي تتراكم في الخلايا. نظم الخلايا في المختبر حتى أقل ملاءمة للدراسات الدهن بسبب افتقارها إلى الاستقطاب. ومن الواضح أن هذا القيد هو فقط ذات الصلة للدهون التي يتم استيعابها وتنقل عبر لاكتيلس، بينما تلك التي استوعبت عبر الأوعية الدموية المعوية من المرجح أن تعامل عادة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals for perfusion buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.12018.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2 x 2 H2O)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran 70</td>
			<td>Pharmacosmos</td>
			<td>40014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fumaric acid disodium salt (C4H2Na2O4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (C6H12O6)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate hepatahydrate (MgSO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium chloride (KCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvic acid sodium salt (C3H3NaO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium L-glutamate monohydrate (C5H8NNaO4 x H2O)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion equitment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universial perfusion system</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>732316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BASIC UNIT UNIPER UP-100, TYPE 834</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller Pump, with four channels</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>730100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Windkessel</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>732068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic Circulator,Bath Volume 3L, 230V/50Hz</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>730125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating table, heated on tripod stand, type 873</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>733776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula with basked, OD= 2.0mm, ID= 1.0mm</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>733313</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanisms underlying gut hormone secretion using the isolated perfused rat small intestine

القناة الهضمية هو أكبر جهاز الغدد الصماء في الجسم، وإنتاج الهرمونات الببتيد مختلفة أكثر من 15 التي تنظم المدخول الشهية والطعام والهضم وامتصاص العناصر الغذائية والتوزيع والرحلات الجلوكوز بعد prandial. فهم الآليات الجزيئية التي تنظم إفراز هرمون الأمعاء أمر أساسي لفهم وترجمة القناة الهضمية هرمون فسيولوجيا. تقليديا، الآليات الكامنة وراء إفراز هرمون القناة الهضمية هي أما الدراسة المجراة في (في البشر أو الحيوانات التجريبية) أو استخدام القناة الهضمية إفراز هرمون الابتدائية المخاطية خلية الثقافات أو خطوط الخلية. هنا، نحن نقدم الأمعاء معزولة الفئران perfused كأسلوب بديل لدراسة إفراز هرمون القناة الهضمية. فضائل هذا النموذج أنها تعتمد على القناة الهضمية سليمة، بمعنى أنه يجمل معظم المعلمات الناحية الفسيولوجية الهامة المسؤولة عن إفراز في الدراسات المجراة في، بما في ذلك استقطاب الغشاء المخاطي والعلاقات باراكريني وطرق التعرض التروية/التحفيز. وبالإضافة إلى ذلك، وخلافا للدراسات المجراة في الأمعاء المعزولة الفئران perfused يسمح للسيطرة الكاملة تقريبا على التجريبية والتقييم المباشر لإفراز. وعلى النقيض من الدراسات في المختبر، فمن الممكن لدراسة الحجم وديناميكية لإفراز، وإلى معالجة المسائل الهامة، مثل ما هي المحفزات يتسبب في إفراز هرمونات القناة الهضمية المختلفة، من أي جانب من القناة الهضمية (لومينال أو الأوعية الدموية) إفراز وحفز، وتحليل بالتفصيل المجسات الجزيئية الكامنة وراء الاستجابة الافرازية. وبالإضافة إلى ذلك، الإعداد نموذج قوية لدراسة الامتصاص المعوي، والتفاصيل المتعلقة بالقوى المحركة لامتصاص الأمعاء بما في ذلك الناقلون مسؤولة.

القدرة على تحديد ما إذا كان حافز معين يسبب إفراز هرمون القناة الهضمية للفائدة يعتمد على إفراز خط ثابت. وعلاوة على ذلك، إذا لوحظ أي استجابة للحافز، يجب أن تكون استجابة افرازية قوية لمراقبة إيجابية واضحة لاستبعاد أن عدم استجابة لحافز الاختبار لا يعبر عن نقص عام في القدرة ع?...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine at JoVE.com

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

الآليات الأساسية لإفراز هرمون الأمعاء التي تستخدم عزل Perfused الفئران الأمعاء

هنا، فإننا نقدم نموذجا قوية والفسيولوجية دراسة الآليات الجزيئية الكامنة وراء إفراز هرمون القناة الهضمية والامتصاص المعوي – الأمعاء الدقيقة الفئران المعزولة perfused.

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

الطريقة التي طورناها هنا قد تبين أنها مفيدة للغاية في عملنا ، في محاولة لمعرفة الآليات الجزيئية لإفراز الهرمونات من الأمعاء ، ولكن أيضًا امتصاص العناصر الغذائية ، والاقتران بين الاثنين. الميزة الرئيسية لهذه التقنية الفسيولوجية العالية هي أن الأمعاء تترك في الموقع ، مع السماح بإجراء دراسات مفصلة عادةً فقط داخل نماذج In Vitro. المقام الأول الفئران على طاولة عمليات ساخنة، تأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع قدم، وجعل استئصال الجلد والصواني لفضح تجويف البطن.نقل الأمعاء الدقيقة إلى الجانب لفضح منطقة المحطة الطرفية من القولون. وligate الأوعية الدموية توريد إلى القولون. استخراج القولون تدريجيا، بدءا من منطقة المحطة الطرفية، والتحرك نحو الأمعاء الدقيقة، ترطيب الأنسجة مع المالحة متساوي التوتر، واستخدام مسحات القطن لإزالة النسيج الضام حسب الضرورة.عندما تم إزالة كل من القولون، إدراج قطعة 15 سم من الأنابيب البلاستيكية في نهاية قريبة من تجويف الأمعاء الصغيرة، وتأمين الأنابيب مع الغرز. ثم استخدام حقنة 10 ملليلتر ومضخة حقنة لطرد بعناية الأمعاء الدقيقة مع درجة حرارة الغرفة المالحة متساوي التوتر بمعدل تدفق 25 ملليلتر في الدقيقة الواحدة. عندما يتم إفراغ الأنسجة من chyme، وضبط الأنسجة بحيث يمكن الوصول إلى الشريان الأوسط العلوي وإزالة النسيج الضام والأنسجة الدهنية لفضح الشريان.استخدام ملقط نقطة غرامة لوضع اثنين من الغرز تحت الشريان المساريق واثنين من الغرز تحت الوريد المدخل. املأ قسطرة بلاستيكية من عيار 22 متصلة بمضخة متدحرجة مع عازلة للضخ واستخدم زوجًا من المقص الجراحي لقطع ثقب صغير في الشريان الميرينتاري ، وإدخال القسطرة على الفور في الشق. أدخل القسطرة في غضون دقيقتين من قطع ثقب في الشريان ، وإلا فإن القناة الهضمية ستعاني على الأرجح من تلف الإقفاري.بمجرد أن يتم تأمين القسطرة مع خياطة، بدء مضخة المتداول لبدء ضخ بمعدل تدفق 7.5 ملليلتر في الدقيقة الواحدة. عندما تتحول الأوعية الدموية في الوريد المعوي والداخلي، تقطع ثقبًا في الوريد المدخلي. أدخل قسطرة معدنية، واضمن القسطرة المعدنية مع خياطة أخرى.يجب الحرص عند إدخال القسطرة في الوريد المدخل، حيث أن الوريد رفيع الجدران. ومع ذلك ، كما يجري الآن حارس perfused ، إدراج سريع ليست حاسمة. بعد جمع الإخراج perfusion لمدة دقيقة واحدة، وقياس حجم وانقر فوق تنفيذ التجربة في برنامج تسجيل الضغط لبدء تسجيل اكتساب ضغط perfusion.ثم تغطية القناة الهضمية مع أنسجة مختبر مبللة لمنعها من الجفاف، والتأكد من أن نهاية القاصي من الأمعاء ليست مسدودة، ويمكن الخروج من الهابلويد اللمبّر. لقياس الضغط الجزئي للأوكسجين وثاني أكسيد الكربون، وجمع عازلة الضخ من خلال صمام وقف الديك ثلاثية الاتجاه مباشرة قبل أن يدخل الجهاز، بعد ما يقرب من ثلاث دقائق من التسريب، ومن القسطرة إدراجها في الوريد المدخل. ضع العينات على الجليد، واستخدم محلل غاز الدم الآلي لقياس العينات بعد وقت قصير من جمعها.استخدم جامع الكسر للحصول على عينات الأساس الأولى. بعد 10 إلى 15 دقيقة من جمع خط الأساس، استخدم مضخة حقنة لإدارة أول منبه اختبار داخل المفاصل من خلال وقف الديك ثلاثية في 35 ملليلتر في الدقيقة معدل التدفق. تنفيذ التحفيز اللمعان عن طريق حقن بواس التحفيز الأولي تسليمها بمعدل تدفق 2.5 ملليلتر في الدقيقة خلال الدقائق الخمس الأولى من التحفيز، تليها إدارة محلول الاختبار بمعدل تدفق 5 ملليلتر في الدقيقة.بمجرد أن تنتهى فترة التحفيز اللمبينية، قم بتدفق التجويف بالملوحة ال isotonic بمعدل تدفق 2.5 ملليلتر في الدقيقة لمدة خمس دقائق. ثم جمع عينات خط الأساس في 5 ملليلتر في الدقيقة لمدة 15 إلى 30 دقيقة قبل أن تدار مادة الاختبار المقبل. في نهاية التجربة، وإدارة مناسبة، ومراقبة إيجابية لاختبار لمدى استجابة للتحضير لمدة خمس إلى عشر دقائق، وجمع إضافية 10 إلى 15 دقيقة من عينات خط الأساس في نهاية فترة التحفيز التحكم إيجابية.هنا هو مبين مثالا على بيانات ذات نوعية جيدة، مما يدل على جلوكاغون مثل الببتيد-1 أو GLP-1، إفراز من الأمعاء الدقيقة الفئران perfused معزولة التي تم جمعها على فترات دقيقة واحدة. في ظل الظروف القاعدية ، كان إفراز ثابت في حين قبل وبعد إدارة التحفيز الاختباري والتحكم الإيجابي ، كان هناك استجابة سرية قوية واضحة. هذه البيانات إفراز GLP-1 التي تم الحصول عليها من الأمعاء الدقيقة الفئران المُعَدَّدة المعزولة ذات نوعية رديئة مع إفراز غير مُتَرَسَّس يُقاس في الظروف القاعدية التي انجرفت صعودًا طوال الاختبار بطريقة بدت غير ذات صلة بإدارات مواد الاختبار أو بالتحكم الإيجابي.ولذلك فمن المستحيل أن نستنتج ما إذا كان زيادة إفراز GLP-1 لوحظ في نهاية تحفيز الفركتوز الوعائي كان استجابة بوساطة الفركتوز. أثناء محاولة هذا الإجراء لرعاية لتأمين القسطرة بشكل صحيح وتنظيف شامل لمعدات الضخ كما يوفر عازلة الضخ وسيلة ممتازة لنمو البكتيريا. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل دراسات في المختبر على خطوط الخلايا التي تفرز الهرمونات لثقافات الخلايا المعوية الأولية، للتحقيق مباشرة في إنتاج AMP دوري أو الكالسيوم داخل الخلايا داخل الخلايا.لذلك لقد استخدمنا بالفعل الطريقة الآن لتوضيح عدد من العمليات وراء امتصاص المواد الغذائية وآلية إفراز الهرمونات واتضح أنها مفيدة للغاية. لا ننسى أن العمل مع حاصرات أو المنشطات من المواقع الجزيئية يمكن أن تكون خطرة للغاية والاحتياطات مثل استخدام معطف المختبر، والقفازات، ونظارات السلامة، وغطاء الدخان ينبغي دائما أن تؤخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

عزل وعن طريق أقسام الأبقار الشريان والوريد المساريقي باعتباره الأحيائي لاختبار لVasoactivity في الأمعاء الدقيقة

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Glutamate and Hypoxia as a Stress Model for the Isolated Perfused Vertebrate Retina

الغلوتامات ونقص الأكسجة نموذجا الإجهاد لمعزولة perfused لالفقارية الشبكية

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

طريقة معزولة<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; الإرواء الرئة في الفئران نموذج: الدروس المستفادة من تطوير برنامج EVLP الجرذ

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

ل<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; نموذج لدراسة هرمون العمل في الثدي البشري

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

الاستقراء وتقييم الإصابة الإسكيمية-ضخه في Langendorff perfused لالجرذ القلوب

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

The Inverted Heart Model for Interstitial Transudate Collection from the Isolated Rat Heart

نموذج قلب مقلوب لجمع الخلالي الخلالي من القلب المعزول الجرذ

The present protocol describes a unique approach that enables the collection of cardiac transudate (CT) from the isolated, saline-perfused rat heart. ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

تقييم آليات مراقبة الأوعية الدموية استخدام الفحص المجهري الفيديو الشرايين المقاومة المعزولة من الفئران

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

طريقة سيفينج فعالة لعزل Glomeruli سليمة من الفئران الكبار الكلي

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Robot-assisted Total Mesorectal Excision and Lateral Pelvic Lymph Node Dissection for Locally Advanced Middle-low Rectal Cancer

استئصال إجمالي متوسطي بمساعدة الروبوت وتشريح العقدة الليمفاوية الحوضية الجانبية لسرطان المستقيم المتوسط المنخفض المتقدم محليا

Since their approval for clinical use, da Vinci surgical robots have shown great advantages in gastrointestinal surgical operations, especially in complex ...

A Model of Long-Term Ventricular Fibrillation in Isolated Rat Hearts

نموذج للرجفان البطيني طويل الأمد في قلوب الفئران المعزولة

Ventricular fibrillation (VF) is a fatal arrhythmia with a high incidence in cardiac patients, but VF arrest under perfusion is a neglected method of ...