Name: mechanisms underlying gut hormone secretion using the isolated perfused rat small intestine
Uploaded: 2019-02-26T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine at JoVE.com

Dit werk werd ondersteund door een onbeperkte subsidie aan Prof. Jens Juul Holst van de Novo Nordisk centrum voor metabole basisonderzoek (Novo Nordisk Foundation, Denemarken), een aparte subsidie van de Novo Nordisk Foundation for doet knaagdier perfusie studies (verlenen neen. NNF15OC0016574), een subsidie aan Prof. Holst van de European Research Council (Grant no.695069) en de Europese Unie is zevendekaderprogramma voor onderzoek, technologische ontwikkeling en demonstratie (Grant No. 266408) evenals een postdoc verlenen aan Rune E. Kuhre vanaf de Stichting van Lundbeck (R264-2017-3492). Wij danken Jenna E. Hunt en Carolyn F. Deacon voor zorgvuldig proeflezen.

Alle studies werden uitgevoerd met toestemming van de Deense dier experimenten inspectie (2013-15-2934-00833) en de lokale ethisch comité, overeenkomstig de richtsnoeren van de Deense wetgeving inzake dierproeven (1987) en de nationale Instituten voor gezondheid (publicatienummer 85-23).
1. proefdieren
<ol><li>Verkrijgen van mannelijke Wistar ratten (250 g), huis 2 per kooi, met ad libitum toegang tot standaard chow en water, en onderhouden in een 12:12 h licht-donker cyclus. Onze dieren f...

<ol>
	<li>Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&amp;#34;normal&amp;#34;+endocrine+cell+of+the+gut:+changing+concepts+and+new+evidences.">The &amp;#34;normal&amp;#34; endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).</li><li>Brighton, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Acids+Trigger+GLP-1+Release+Predominantly+by+Accessing+Basolaterally+Located+G+Protein-Coupled+Bile+Acid+Receptors.">Bile Acids Trigger GLP-1 Release Predominantly by Accessing Basolaterally Located G Protein-Coupled Bile Acid Receptors.</a> Endocrinology. 156, 3961-3970 (2015).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+acids+are+important+direct+and+indirect+regulators+of+the+secretion+of+appetite-+and+metabolism-regulating+hormones+from+the+gut+and+pancreas.">Bile acids are important direct and indirect regulators of the secretion of appetite- and metabolism-regulating hormones from the gut and pancreas.</a> Molecular Metabolism. , (2018).</li><li>Roberge, J. N., Brubacker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretion+of+Proglucagon-Derived+Peptides+in+Response+to+Intestinal+Luminal+Nutrients.">Secretion of Proglucagon-Derived Peptides in Response to Intestinal Luminal Nutrients.</a> Endocrinology. 128, 3169-3174 (1991).</li><li>Brubaker, P. L., Schloos, J., Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+glucagon-like+peptide-1+synthesis+and+secretion+in+the+GLUTag+enteroendocrine+cell+line.">Regulation of glucagon-like peptide-1 synthesis and secretion in the GLUTag enteroendocrine cell line.</a> Endocrinology. 139, 4108-4114 (1998).</li><li>Jacobsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+Gastrointestinal+Hormone+Responses,+Insulin+Sensitivity,+and+Beta-Cell+Function+Within+2+Weeks+After+Gastric+Bypass+in+Non-diabetic+Subjects.">Changes in Gastrointestinal Hormone Responses, Insulin Sensitivity, and Beta-Cell Function Within 2 Weeks After Gastric Bypass in Non-diabetic Subjects.</a> Obesity Surgery. 22, 1084-1096 (2012).</li><li>Kuhre, R. E., Frost, C. R., Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+glucose-stimulated+GLP-1+secretion+from+perfused+rat+small+intestine.">Molecular mechanisms of glucose-stimulated GLP-1 secretion from perfused rat small intestine.</a> Diabetes. 64, 370 (2014).</li><li>Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+gut+hormone+secretion.+Studies+using+isolated+perfused+intestines.">Regulation of gut hormone secretion. Studies using isolated perfused intestines.</a> Peptides. 77, 47-53 (2016).</li><li>Ratner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Peripheral+Neurotensin+on+Appetite+Regulation+and+Its+Role+in+Gastric+Bypass+Surgery.">Effects of Peripheral Neurotensin on Appetite Regulation and Its Role in Gastric Bypass Surgery.</a> Endocrinology. 157, 3482-3492 (2016).</li><li>Wewer Albrechtsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+glucagon+secretion+in+mice+and+rats+revealed+using+a+validated+sandwich+ELISA+for+small+sample+volumes.">Dynamics of glucagon secretion in mice and rats revealed using a validated sandwich ELISA for small sample volumes.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 311, E302-E309 (2016).</li><li>Vilsboll, T., Agerso, H., Krarup, T., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+elimination+rates+of+glucagon-like+peptide-1+in+obese+type+2+diabetic+patients+and+healthy+subjects.">Similar elimination rates of glucagon-like peptide-1 in obese type 2 diabetic patients and healthy subjects.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 88, 220-224 (2003).</li><li>Windelov, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+is+it+so+difficult+to+measure+glucagon-like+peptide-1+in+a+mouse?.">Why is it so difficult to measure glucagon-like peptide-1 in a mouse?.</a> Diabetologia. 60, 2066-2075 (2017).</li><li>Gorboulev, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Na+-d-glucose+Cotransporter+SGLT1+is+Pivotal+for+Intestinal+Glucose+Absorption+and+Glucose-Dependent+Incretin+Secretion.">Na+-d-glucose Cotransporter SGLT1 is Pivotal for Intestinal Glucose Absorption and Glucose-Dependent Incretin Secretion.</a> Diabetes. 61, 187-196 (2012).</li><li>Kuhre, R. E., Bechmann, L. E., Wewer Albrechtsen, N. J., Hartmann, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+stimulates+neurotensin+secretion+from+the+rat+small+intestine+by+mechanisms+involving+SGLT1+and+GLUT2,+leading+to+cell+depolarization+and+calcium+influx.">Glucose stimulates neurotensin secretion from the rat small intestine by mechanisms involving SGLT1 and GLUT2, leading to cell depolarization and calcium influx.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 308, E1123-E1130 (2015).</li><li>Kuhre, R. E., Christiansen, C. B., Saltiel, M. Y., Wewer Albrechtsen, N. J., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+relationship+between+glucose+absorption+and+glucose-stimulated+secretion+of+GLP-1,+neurotensin,+and+PYY+from+different+intestinal+segments+in+the+rat.">On the relationship between glucose absorption and glucose-stimulated secretion of GLP-1, neurotensin, and PYY from different intestinal segments in the rat.</a> Physiological Reports. 5, (2017).</li><li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+cosecretion+and+coexpression+of+gut+hormones+from+male+rat+proximal+and+distal+small+intestine.">An analysis of cosecretion and coexpression of gut hormones from male rat proximal and distal small intestine.</a> Endocrinology. 156, 847-857 (2015).</li><li>Goldspink, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+insights+into+the+detection+of+free+fatty+and+bile+acids+by+ileal+glucagon-like+peptide-1+secreting+cells.">Mechanistic insights into the detection of free fatty and bile acids by ileal glucagon-like peptide-1 secreting cells.</a> Molecular Metabolism. 7, 90-101 (2018).</li><li>Sun, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+Controlling+Glucose-Induced+Glp-1+Secretion+in+Human+Small+Intestine.">Mechanisms Controlling Glucose-Induced Glp-1 Secretion in Human Small Intestine.</a> Diabetes. , (2017).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+production+and+secretion+in+GLUTag,+NCI-H716+and+STC-1+cells:+a+comparison+to+native+L-cells.">Peptide production and secretion in GLUTag, NCI-H716 and STC-1 cells: a comparison to native L-cells.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 56, 11 (2016).</li><li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+sensing+in+L+cells:+a+primary+cell+study.">Glucose sensing in L cells: a primary cell study.</a> Cell Metabolism. 8, 532-539 (2008).</li><li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+role+of+voltage+gated+cation+conductances+in+the+glucagon-like+peptide-1+secreting+GLUTag+cell+line.">Characterization and functional role of voltage gated cation conductances in the glucagon-like peptide-1 secreting GLUTag cell line.</a> The Journal of Physiology. 563, 161-175 (2005).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fructose+stimulates+GLP-1+but+not+GIP+secretion+in+mice,+rats+and+humans.">Fructose stimulates GLP-1 but not GIP secretion in mice, rats and humans.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 306, G622-G630 (2014).</li><li>Reimann, F., Tolhurst, G., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G-Protein-Coupled+Receptors+in+Intestinal+Chemosensation.">G-Protein-Coupled Receptors in Intestinal Chemosensation.</a> Cell Metabolism. 15, 421-431 (2012).</li><li>Parker, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+underlying+bile+acid-stimulated+glucagon-like+peptide-1+secretion.">Molecular mechanisms underlying bile acid-stimulated glucagon-like peptide-1 secretion.</a> British Journal of Pharmacology. 165, 414-423 (2012).</li><li>Petersen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+L+cells+in+mouse+and+human+small+intestine+organoids.">Generation of L cells in mouse and human small intestine organoids.</a> Diabetes. 63, 410-420 (2014).</li><li>Parker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+role+of+active+versus+facilitative+glucose+transport+for+glucagon-like+peptide-1+secretion.">Predominant role of active versus facilitative glucose transport for glucagon-like peptide-1 secretion.</a> Diabetologia. 55, 2445-2455 (2012).</li><li>Roberts, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Human+and+Murine+Enteroendocrine+Cells+by+Transcriptomic+and+Peptidomic+Profiling.">Comparison of Human and Murine Enteroendocrine Cells by Transcriptomic and Peptidomic Profiling.</a> Diabetes. , (2019).</li><li>Reimann, F., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-Sensing+in+Glucagon-Like+Peptide-1-Secreting+Cells.">Glucose-Sensing in Glucagon-Like Peptide-1-Secreting Cells.</a> Diabetes. 51, 2757-2763 (2002).</li><li>Drucker, D. J., Jin, T., Asa, S. L., Young, T. A., Brubaker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+proglucagon+gene+transcription+by+protein+kinase-A+in+a+novel+mouse+enteroendocrine+cell+line.">Activation of proglucagon gene transcription by protein kinase-A in a novel mouse enteroendocrine cell line.</a> Molecular Endocrinology. 8, 1646-1655 (1994).</li><li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLP1-+and+GIP-producing+cells+rarely+overlap+and+differ+by+bombesin+receptor-2+expression+and+responsiveness.">GLP1- and GIP-producing cells rarely overlap and differ by bombesin receptor-2 expression and responsiveness.</a> The Journal of Endocrinology. 228, 39-48 (2016).</li><li>Bak, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+commercially+available+assays+for+glucagon-like+peptide-1+(GLP-1):+implications+for+GLP-1+measurements+in+clinical+studies.">Specificity and sensitivity of commercially available assays for glucagon-like peptide-1 (GLP-1): implications for GLP-1 measurements in clinical studies.</a> Diabetes, Obesity &amp; Metabolism. 16, 1155-1164 (2014).</li><li>Jacobsen, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gastric+bypass+surgery+on+glucose+absorption+and+metabolism+during+a+mixed+meal+in+glucose-tolerant+individuals.">Effects of gastric bypass surgery on glucose absorption and metabolism during a mixed meal in glucose-tolerant individuals.</a> Diabetologia. 56, 2250-2254 (2013).</li></ol>

De geïsoleerde geperfundeerd rat dunne darm is een krachtige onderzoeksinstrument waarmee de dynamiek en de moleculaire mechanismen ten grondslag liggen aan de darm hormoon afscheiding tot in detail worden bestudeerd. De meest kritische stap voor de succesvolle productie van gegevens met dit model is de chirurgische ingreep. Behandeling van de darm zal onvermijdelijk wat schade aan de darm veroorzaken en moet daarom worden beperkt tot een absoluut minimum. De snelheid van werking is zelfs nog belangrijker, sleutel, met ...

De darm is het grootste endocriene orgaan van het lichaam, het produceren van meer dan 15 verschillende peptide hormonen die regelen nutriënten-absorptie en nutriënten dispositie, intestinale groei en moduleren eetlust1. Gut hormonen zijn, dus betrokken bij vele fundamentele fysiologische processen, en het begrip van deze patronen van secretie en de moleculaire details waarmee de secretie van de respectieve hormonen is dus van belang voor onze basic fysiologische begrip en voor het aanpakken van translationeel aspecten van gut hormoon acties; maar hoe kan men het bestuderen van de moleculaire sensing mechanismen ten grondslag liggen aan de darm hormoon afscheiding? In het algemeen, de secretie van het hormoon kan worden bestudeerd in intact organismen (mens of proefdieren), uit geïsoleerde gut preparaten of darm hormoon-afscheidende primaire celculturen of vereeuwigd cel culturen2,3, 4 , 5 , 6. onze voorkeur model is de geïsoleerde geperfundeerd rat dunne darm, die een fysiologisch relevante model waarmee de afscheiding van hormonen van de darm is tot in detail met optimale tijd resolutie (secretie tarieven kunnen worden bepaald met elk gewenst moment worden bestudeerd basis tot de tweede), en de resultaten zijn waarschijnlijk overdraagbaar naar een in vivo situatie7. Hier bieden we een gedetailleerd protocol over het uitvoeren van deze procedure, maar eerst zullen we andere methoden voor het bestuderen van de darm hormoon afscheiding, met inbegrip van de voordelen en beperkingen van deze modellen ten opzichte van de geïsoleerde geperfundeerd rat dunne darm.
Als men wenst vast te stellen of een specifieke stof de afscheiding van bepaalde hormonen gut regelt, zijn studies bij de mens het uiteindelijke doel. Dus, als een samengestelde grote gevolgen voor de secretie van één of meerdere gut hormonen in knaagdieren (in vivo of perfusions geeft) of van hormoon afscheidende cellen (cellijnen of primaire cellen), dit effect is alleen relevant voor geneeskunde en menselijke fysiologie als het kan worden bevestigd bij de mens. Echter, er zijn duidelijke grenzen voor het type van studies die bij de mens kunnen worden uitgevoerd, en in vivo onderzoek op proefdieren zijn, daarom vaak de tweede beste optie voor dergelijke studies. Muizen en ratten zijn de meest gebruikte proefdieren vermoedelijk vanwege hun handige formaat, lage kosten en de mogelijkheid om het genetisch veranderen de genen die verdacht worden van betrokkenheid bij de specifieke studie vragen (bijvoorbeeld kloppen uit een bepaalde vervoerder of receptor). In het algemeen, in vivo modellen profiteren van die fysiologisch intact, maar hebben ook verschillende beperkingen. Belangrijker, de geringe omvang van knaagdieren, met name muizen, is een beperkende factor, aangezien de meeste testen voor gut hormoon kwantificering ten minste 20 µL vereist van plasma (en vaak nog veel meer), wat betekent dat ten minste 100 µL bloed moet worden ingetrokken om een duplicaat kwantificering. Daarom is het alleen mogelijk te krijgen zeer weinig monsters overeenkomt met basislijn monsters en één of twee na stimulatie monsters (het volume van de totale bloed in een muis van 20 g is ~1.4 mL). Bijgevolg, potentiële secretoire Reacties (bijvoorbeeld, snel of laat voorkomende reacties) kan daarom worden gemist.
In het model van de perfusie, dit probleem wordt overwonnen, als grote steekproef volumes worden verkregen (debiet: 7,5 mL/min) en de intervallen van de collectie kunnen worden aangepast om ervoor te zorgen dat de snelle en korte durende reacties zijn niet gemist (wij voorbeelden verzamelen om min)7 . Een ander probleem met in vivo onderzoeken bij knaagdieren is dat de meeste gut hormonen zelfs meer zijn snel geëlimineerd of gemetaboliseerd dan in mensen8,9,10, die de latere biochemische analyse kunnen bemoeilijken. Bijvoorbeeld, we toonden dat GLP-1 wordt gemetaboliseerd in muizen in een nog sneller tempo dan bij de mens (1-2 min11is waar T1/2 ) en, nog belangrijker, waarbij het splijten van GLP-1 bij muizen, naast N-terminale decolleté door dipeptidyl-dipeptidylpeptidase-4 (DPP4) (dat is het grote GLP-1 vernederende enzym bij de mens), verder splijten door het enzym neutrale endopeptidase 24.1112. Bijgevolg, huidige commerciële testen voor de kwantificering van GLP-1, die ofwel zijn gebaseerd op de intacte isovorm van GLP-1 (7-36amide) of de DPP-4 gekloofd isovorm (9-39amide), enorm onderschatten van GLP-1 secretie in muizen en leiden tot misleidende resultaten 12. in de dunne darm van geïsoleerde geperfundeerd rat, allermeest naar de stofwisseling van secreted hormonen is uitgeschakeld of aanzienlijk verlaagd, aangezien plasma-gemedieerde afbraak wordt vermeden, en extractie/aantasting van de lever/nier/longen wordt geblokkeerd omdat ( perfusaat wordt verzameld als het verlaat de darm).
Natuurlijk belangrijk inzicht kan worden gegenereerd door het gebruik van genetisch gemodificeerde dieren, bijvoorbeeld, sodium-glucose transporter-1 knock-out muizen13, maar een gedetailleerde beoordeling van de moleculaire sensoren die betrokken zijn bij de secretie vaak vereist behandeling van meerdere moleculaire sites, variërend van moleculaire vervoerders tot ionenkanalen en van verschillende G-proteïne-gekoppelde receptoren aan intracellulaire eiwitten. Bijvoorbeeld, we gericht de activiteit van negen verschillende moleculaire sites bij het ontrafelen van de moleculaire sensoren verantwoordelijk voor glucose-gestimuleerd GLP-1 secretie7. Een soortgelijk onderzoek zou niet mogelijk in vivo als sommige van de stoffen gebruikt aspecifieke hebben of schadelijke/letale effecten. Bijvoorbeeld, wanneer u de perfused darm, was het mogelijk om het beoordelen van de rol van intra-cellulaire glucose metabolisme voor de secretie van GLP-1 en neurotensin door het blokkeren van ATP vorming met 2-4-dinitrofenol7,14 , evenals de rol van spanning-gated calcium kanalen voor gal zuur gestimuleerd GLP-1, NT en PYY secretie3. Inderdaad, de zeer giftig natrium kanaal blocker tetrodotoxine kan met succes worden toegepast in de perfusie-studies. Ten slotte, in de perfusie-model het kan worden rechtstreeks beoordeeld waar in de darm een bepaalde stof stimuleert de secretie van een bepaald hormoon, zoals de onderzoeker kan eenvoudig kiezen en bereiden van het gewenste gebied te perfuse, en op hetzelfde moment kunnen worden onderzocht of een stimulus veroorzaakt secretie door activering van moleculaire sensoren van de luminal of vasculaire kant van de darm3,15,16.
De secretoire mechanismen onderliggende gut hormoon afscheiding kan ook worden bestudeerd door gebruik van gut weefsel stukken (inclusief menselijk weefsel), intestinale culturen van de primaire (meestal van de muizen), vereeuwigd hormoon afscheidende cellijnen (voor muis of menselijke oorsprong) door de darm weefsel in Ussing chambers of door organoids (beide meestal uit muizen)2,3,4,5,6,17,18gemonteerd. Vergeleken met intestinale perfusions, studies over de menselijke darm stukken, primaire celculturen en cellijnen zijn technisch eenvoudiger uit te voeren en een snellere en goedkopere manier van het genereren van gegevens, maar natuurlijk de studie van gut stukken vereist toegang tot vers menselijke darm exemplaren. Echter, in deze modellen de normale cel polarisatie van de darm is inherent verloren, wat betekent dat deze modellen niet worden gebruikt voor het beoordelen van de normale activering van moleculaire sensoren, en absorptie processen ook kunnen niet worden bestudeerd. Bovendien dergelijke studies meestal statische incubations dienst (voor tot verschillende h) die is zeer niet-fysiologische en heeft niets te maken met de cellen normaal secretoire dynamiek, omdat het secreted product wordt niet verwijderd en dus kan feedback invloed op de afscheiding van hormonen. In tegenstelling, in de perfused darm, worden secreted en geabsorbeerd moleculen efficiënt verwijderd door de mucosal microcirculatie zoals ze in vivo zijn, ervoor te zorgen dat de transmucosal verlopen worden gehandhaafd zodat absorptie en secretie tegen een normale prijs optreden kunnen. Bovendien, celculturen kunnen hebben dedifferentiated hun inheemse enteroendocrine cel afkomstig zijn, wat betekent dat ze zijn niet langer de vertegenwoordiger van de oorspronkelijke cellen peptide inhoudelijk en expressie van moleculaire sensoren, hoewel ze nog steeds het desbetreffende hormoon afscheiden. Dit is bijvoorbeeld het geval voor de GLP-1 dat cel lijnen19.
Het is daarom onze mening dat primaire celculturen of mobiele lijn studies zijn meest geschikt voor screeningonderzoek en voor het uitvoeren van typen experimenten die niet kunnen uitgevoerd in vivo worden of in de geïsoleerde perfused darm. Bijvoorbeeld, een ware kracht van de primaire celculturen en lijn celculturen is dat intra-cellulaire secundaire boodschappers (bv Ca2 +, kamp, NAD(P)H) in real-time kan worden gecontroleerd, en elektrische signalering van het hormoon afscheidende cellen kunnen 20,21,22onderzocht. Bovendien, kan siRNA knockdown gebeuren, dat is met name handig als specifieke remmers niet beschikbaar20,21,22,23,24. Weefsel van de darm van muizen die zijn gemonteerd in Ussing kamers onlangs is gebruikt voor het bestuderen van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de gal-zuur gestimuleerd GLP-1 secretie, terwijl intestinale organoids (van muizen) en menselijke darm stukken zijn ook gebruikt voor het bestuderen van de moleculaire details van gut hormoon afscheiding17,25. Overwegende dat de vroegere uitkeringen worden gepolariseerd2 al deze modellen gekenmerkt door statische incubations. Studies over de menselijke darm stukken, echter profiteren van het gebruik van weefsel van menselijke, in plaats van knaagdieren, die belangrijk is aangezien soorten verschil in weefsel expressie van 7TM-receptoren en moleculaire vervoerders kunnen resulteren in verschillende moleculaire sensing routes tussen soorten. In feite, de meeste gegevens in dit veld is gegenereerd door studies over varkens, muizen of ratten, en het blijft ongrijpbaar of deze bevindingen kunnen worden overgedragen op de mens. Het is echter gerust te stellen dat de moleculaire sensing mechanismen die ten grondslag liggen aan de glucose-gestimuleerd GLP-1 secretie lijken vergelijkbaar tussen muis, rat, man, en transcriptomic en peptidomic profilering van muis en mens L-cellen bleek sterk global overeenkomsten tussen de twee soorten7,18,26,27.
De geïsoleerde geperfundeerd rat dunne darm, maar heeft ook enkele beperkingen die u moeten overwegen. Bovenal is het onmogelijk om te bepalen of een bepaalde secretoire reactie voortvloeit uit directe activering door de teststof voor de gerichte hormoon-producerende cellen of liever gezegd wordt veroorzaakt door een indirect mechanisme. Bijvoorbeeld, KCl verhoogt direct GLP-1 secretie van de perfused darm7, maar het blijft onbekend of dit een gevolg van directe depolarisatie van de L-cel of van depolarisatie van neuronen dicht bij de L-cellen of de gevolgen van resultaten tegelijkertijd uitgebracht paracrine stimulatoren/remmers. Gegevens als gevolg van studies met behulp van de perfused darm die gericht zijn op het ophelderen van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de afscheiding moet daarom altijd worden in context geplaatst met gegevens die zijn verkregen van andere meer specifieke modellen tot het verhogen van de mogelijkheid om vast te stellen causaliteit. Glucose-gestimuleerd GLP-1 secretie van de GLP-1 dat cellijn GLUTag28,29 en van de primaire muisknop L-cellen is bijvoorbeeld afhankelijk van de activiteit van de vervoerders van de glucose (SGLT1 en GLUT2). Deze vervoerders in de geperfundeerd rat dunne darm blokkeren ook verzwakt secretie20, wat betekent dat het is waarschijnlijk dat glucose-gestimuleerd GLP-1 secretie is grotendeels gemedieerd door directe acties van glucose op de L-cel. Een andere belangrijke beperking van de geïsoleerde perfused darm is dat sommige van de lipiden zijn moeilijk om te studeren als gevolg van hun hydrophobicity. Hoewel het mogelijk is te onderzoeken van de eindproducten van lipide spijsvertering (vetzuren, diacyl glycerols, lysophosphatidylglycerols, enz.) en hoewel de voorbereiding mogelijk opnieuw esterify pak de lipiden tijdens cellularly en misschien ze in chylomicrons, het vervoer van de chylomicrons uit de cellen en hun latere opname door de lacteals van de villi is verstoord, omdat de stroom van lymfe in de geïsoleerde darm kan niet worden beveiligd. Meest waarschijnlijk, daarom, lipide absorptie is stopgezet zodra de geabsorbeerde producten begint te ophopen in de cellen. De cel in vitro-systemen zijn zelfs minder geschikt voor lipide studies wegens hun gebrek aan polarisatie. Uiteraard is deze beperking is alleen relevant voor lipiden die worden geabsorbeerd en vervoerd via de lacteals, overwegende dat die geabsorbeerd via de intestinale bloedvaten dreigen te worden normaal verwerkt.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals for perfusion buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.12018.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2 x 2 H2O)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran 70</td>
			<td>Pharmacosmos</td>
			<td>40014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fumaric acid disodium salt (C4H2Na2O4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (C6H12O6)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate hepatahydrate (MgSO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium chloride (KCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvic acid sodium salt (C3H3NaO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium L-glutamate monohydrate (C5H8NNaO4 x H2O)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion equitment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universial perfusion system</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>732316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BASIC UNIT UNIPER UP-100, TYPE 834</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller Pump, with four channels</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>730100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Windkessel</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>732068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic Circulator,Bath Volume 3L, 230V/50Hz</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>730125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating table, heated on tripod stand, type 873</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>733776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula with basked, OD= 2.0mm, ID= 1.0mm</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>733313</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanisms underlying gut hormone secretion using the isolated perfused rat small intestine

De darm is het grootste endocriene orgaan van het lichaam, het produceren van meer dan 15 verschillende peptide-hormonen die de eetlust en voedsel inname, spijsvertering, nutriënten-absorptie en distributie en postprandiale glucose excursies regelen. Inzicht in de moleculaire mechanismen die gut hormoon afscheiding regelen is fundamenteel voor het inzicht en het vertalen van gut hormoon fysiologie. Traditioneel, de mechanismen die ten grondslag liggen aan de darm hormoon afscheiding zijn ofwel studeerde in vivo (in proefdieren of mens) of met behulp van gut hormoon-afscheidende primaire mucosal cel culturen of cellijnen. Hier introduceren we een geïsoleerde geperfundeerd rat dunne darm als een alternatieve methode voor het bestuderen van de darm hormoon afscheiding. De deugden van dit model zijn dat het afhankelijk van de darm intact is, wat betekent dat het grootste deel van de verantwoordelijk voor de afscheiding in in vivo onderzoek, met inbegrip van mucosal polarisatie, paracrine relaties en routes van fysiologisch belangrijke parameters recapituleert perfusie/stimulans blootstelling. Bovendien, en in tegenstelling tot in vivo onderzoek, voorziet de geïsoleerde geperfundeerd rat dunne darm bijna volledige experimentele controle en directe beoordeling van secretie. In tegenstelling tot het in vitro onderzoek is het mogelijk om te studeren zowel de omvang en de dynamiek van secretie en om belangrijke vragen te stellen, zoals wat prikkels veroorzaken de secretie van verschillende hormonen, van welke kant van de darm (luminal of vasculaire) afscheiding is gestimuleerd, en om te analyseren in detail moleculaire sensoren ten grondslag liggen aan de secretoire reactie. Bovendien, is de voorbereiding een krachtig model voor de studie van intestinale absorptie en details met betrekking tot de dynamiek van intestinale absorptie met inbegrip van de verantwoordelijke transporteurs.

De mogelijkheid om te bepalen of een bepaalde stimulus secretie van het hormoon van de darm van belang veroorzaakt, is afhankelijk van een constante basislijn-secretie. Bovendien, indien geen reactie is op de prikkel wordt waargenomen, een robuuste secretoire reactie op de positieve controle moet duidelijk zijn om uit te sluiten dat het gebrek aan respons op de test prikkel niet met een algemeen gebrek aan respons overeenkomt. Figuur 2A en 2B...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine at JoVE.com

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

Mechanismen die ten grondslag liggen aan de Gut hormoon afscheiding met behulp van de geïsoleerde geperfundeerd Rat dunne darm

Hier presenteren we een krachtige en fysiologische model voor het bestuderen van de moleculaire mechanismen die ten grondslag liggen aan de darm hormoon afscheiding en intestinale absorptie — de geïsoleerde geperfundeerd rat dunne darm.

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

De methode die we hier hebben ontwikkeld is zeer nuttig gebleken in ons werk, in een poging om de moleculaire mechanismen van afscheiding van hormonen uit de darm, maar ook de absorptie van voedingsstoffen, en de koppeling tussen de twee te achterhalen. Het belangrijkste voordeel van deze zeer fysiologische techniek is dat de darm in situ wordt gelaten, terwijl gedetailleerde studies worden toegestaan die gewoonlijk alleen worden uitgevoerd binnen In Vitro-modellen. Plaats de rat eerst op een verwarmde operatietafel, bevestig een gebrek aan respons op teensnuifje en maak een huid- en buikvliesexcisie om de buikholte bloot te leggen.Verplaats de dunne darm naar de zijkant om het terminale gebied van de dikke darm bloot te leggen. En ligate de leverende vasculatuur aan de dikke darm. Geleidelijk extraheren van de dikke darm, vanaf de terminale regio, en bewegen naar de dunne darm, hydrateren van het weefsel met isotone zoutoplossing, en met behulp van wattenstaafjes om het bindweefsel te verwijderen als dat nodig is.Wanneer alle van de dikke darm is verwijderd, steek een 15 centimeter stuk plastic buizen in het proximale uiteinde van de kleine darmlumen, en zet de slang met hechtingen. Gebruik vervolgens een spuit van 10 milliliter en een spuitpomp om de dunne darm zorgvuldig te spoelen met ruimtetemperatuur isotone zoutoplossing met een stroomsnelheid van 25 milliliter per minuut. Wanneer het weefsel is geleegd van chyme, pas de weefsels zo aan dat de bovenste mesenterische slagader toegankelijk is en verwijder het bindweefsel en het vetweefsel om de slagader bloot te leggen.Gebruik fijne punt tangen om twee hechtingen onder de mesenterische slagader en twee hechtingen onder de poort ader. Vul een plastic 22-gauge katheter bevestigd aan een rollende pomp met perfusie buffer en gebruik een paar chirurgische schaar om een klein gaatje in de mesenterische slagader te snijden, onmiddellijk het inbrengen van de katheter in de incisie. Steek de katheter binnen twee minuten na het snijden van een gat in de slagader, anders zal de darm waarschijnlijk last hebben van ischemische schade.Zodra de katheter is bevestigd met een hechting, start de rolpomp om perfusie te starten met een stroomsnelheid van 7,5 milliliter per minuut. Wanneer de bloedvaten in de darm en portaal ader bleek worden, snijd een gat in de poortader. Steek een metalen katheter, en zet de metalen katheter met een andere hechting.Let op bij het inbrengen van de katheter in de poortader, omdat de ader dun ommuurd is. Echter, als de bewaker wordt nu geperfundeerd, snelle invoeging is niet cruciaal. Na het verzamelen van de perfusie-output gedurende een minuut, meet het volume en klik op uitvoeren experiment in de druk opname programma om de perfusie druk acquisitie opnames te starten.Bedek vervolgens de darm met een bevochtigd labweefsel om te voorkomen dat het uitdroogt, en bevestig dat het distale uiteinde van de darm niet wordt geblokkeerd en een luminale haploïde kan uitstappen. Om de gedeeltelijke druk van zuurstof en kooldioxide te meten, verzamelt u de perfusiebuffer via een drieweg stop-cockklep vlak voordat het het orgaan binnenkomt, na ongeveer drie minuten perfusie en vanaf de katheter die in de poortader wordt ingebracht. Plaats de monsters op ijs, en gebruik een geautomatiseerde bloedgas analyzer om de monsters kort na het verzamelen te meten.Gebruik een fractieverzamelaar om de eerste basislijnmonsters te verkrijgen. Na 10 tot 15 minuten van baseline collectie, gebruik maken van een spuit pomp om de eerste intraarteriale test stimulerend middel beheren door middel van een drie-weg stop-haan op een 35 milliliter per minuut stroomsnelheid. Voer luminale stimulaties uit door een initiële stimulatie boa's injectie geleverd met een 2,5 milliliter per minuut stroomsnelheid over de eerste vijf minuten van de stimulatie, gevolgd door toediening van de testoplossing met 5 milliliter per minuut debiet.Zodra een luminale stimulatieperiode voorbij is, spoelt u het lumen door met isotone zoutoplossing met een stroomsnelheid van 2,5 milliliter per minuut gedurende vijf minuten. Verzamel vervolgens basislijnmonsters met 5 milliliter per minuut gedurende 15 tot 30 minuten voordat de volgende teststof wordt toegediend. Aan het einde van het experiment, beheren van een geschikte, positieve controle om te testen op de responsiviteit van het preparaat gedurende vijf tot 10 minuten, verzamelen en extra 10 tot 15 minuten van baseline monsters aan het einde van de positieve controle stimulatie periode.Hier wordt een voorbeeld getoond van gegevens van goede kwaliteit, die Glucagon-achtig peptide-1 of GLP-1 aantonen, afscheiding van een geïsoleerde doorgesnede rat dunne darm verzameld met een minuut intervallen. Onder basale omstandigheden was de afscheiding stabiel, terwijl zowel voor als na toediening van de testprikkel en de positieve controle een robuuste secretoire respons zichtbaar was. Deze GLP-1 afscheidingsgegevens verkregen uit een geïsoleerde geperfundeerde rat dunne darm zijn van slechte kwaliteit met een onstabiele afscheiding gemeten onder basale omstandigheden die naar boven dreef tijdens het testen op een manier die leek te zijn los van de teststof administraties of de positieve controle.Het is daarom onmogelijk om te concluderen of de verhoogde GLP-1 secretie waargenomen aan het einde van de vasculaire fructose stimulatie was een fructose gemedieerde reactie. Terwijl het proberen deze procedure om de zorg om de katheters goed te beveiligen en om de perfusieapparatuur grondig schoon te maken aangezien de perfusiebuffer een uitstekend middel voor bacteriële groei verstrekt. Na deze procedure kunnen andere methoden zoals In Vitro-studies over hormoonafscheidende cellijnen van primaire darmcelculturen worden uitgevoerd om de intracellulaire productie van cyclisch AMP of intracellulair calcium direct te onderzoeken.We hebben de methode nu al gebruikt voor opheldering van een aantal processen achter de opname van voedingsstoffen en het mechanisme van afscheiding van de hormonen en het is uiterst nuttig gebleken. Vergeet niet dat het werken met blokkers of activators van moleculaire sites zeer gevaarlijk kan zijn en voorzorgsmaatregelen zoals het gebruik van een labjas, handschoenen en veiligheidsbril, een rookkap moet altijd worden genomen tijdens het uitvoeren van deze procedure.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Isoleren en het gebruik van de afdelingen van Bovine mesenterica en Vein als Bioassay om te testen voor vasoactiviteit in de dunne darm

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Glutamate and Hypoxia as a Stress Model for the Isolated Perfused Vertebrate Retina

Glutamaat en hypoxie als Stress Model voor de geïsoleerde perfusie gewervelde Retina

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

WERKWIJZE Geïsoleerde<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Longperfusie in een Rat Model: Lessen uit het ontwikkelen van een Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

Een<em&gt; Ex vivo</em&gt; Model naar Hormoon Actie studie in de menselijke borst

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Inductie en beoordeling van ischemie-reperfusie schade in Langendorff-geperfuseerde Rat Hearts

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

The Inverted Heart Model for Interstitial Transudate Collection from the Isolated Rat Heart

Het omgekeerde hartmodel voor de interstitiële transudate-collectie van het Geïsoleerde Rat Hart

The present protocol describes a unique approach that enables the collection of cardiac transudate (CT) from the isolated, saline-perfused rat heart. ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

Evaluatie van vasculaire controlemechanismen met behulp van videomicroscopie van geïsoleerde resistentie slagaders van ratten

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Een efficiënte zeven methode te isoleren Intact Glomeruli van de nier van volwassen ratten

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Robot-assisted Total Mesorectal Excision and Lateral Pelvic Lymph Node Dissection for Locally Advanced Middle-low Rectal Cancer

Robot-geassisteerde totale mesorectale excisie en laterale bekkenlymfeklierdissectie voor lokaal gevorderde midden-lage rectale kanker

Since their approval for clinical use, da Vinci surgical robots have shown great advantages in gastrointestinal surgical operations, especially in complex ...

A Model of Long-Term Ventricular Fibrillation in Isolated Rat Hearts

Een model van langdurige ventriculaire fibrillatie in geïsoleerde rattenharten

Ventricular fibrillation (VF) is a fatal arrhythmia with a high incidence in cardiac patients, but VF arrest under perfusion is a neglected method of ...