Name: mechanisms underlying gut hormone secretion using the isolated perfused rat small intestine
Uploaded: 2019-02-26T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine at JoVE.com

Эта работа была поддержана неограниченный Грант Профессор Йенс Юуль холста от Ново Нордиск центра фундаментальных исследований метаболизма (Ново Нордиск фонд, Дания), отдельный грант от Ново Нордиск фонда для этого грызуна перфузионные исследования (Грант нет. NNF15OC0016574), Грант Профессор холста из Европейского исследовательского совета (Grant no.695069) и Европейского союза в седьмой рамочной программы научных исследований, TechnologicalDevelopment и демонстрационной деятельности (Грант № 266408), а также постдока Грант в Руне Kuhre E. Lundbeck фонда (R264-2017-3492). Мы благодарим Дженна E. Хант и Каролин F. склизки для тщательного корректуры.

Все исследования были проведены с разрешения датского инспекции экспериментов животных (2013-15-2934-00833) и местные этического Комитета, в соответствии с руководящими принципами датского законодательства, регулирующего экспериментов на животных (1987) и национальном Институты здравоохранен...

<ol>
	<li>Rindi, G., Leiter, A. B., Kopin, A. S., Bordi, C., Solcia, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+&amp;#34;normal&amp;#34;+endocrine+cell+of+the+gut:+changing+concepts+and+new+evidences.">The &amp;#34;normal&amp;#34; endocrine cell of the gut: changing concepts and new evidences.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1014, 1-12 (2004).</li><li>Brighton, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Acids+Trigger+GLP-1+Release+Predominantly+by+Accessing+Basolaterally+Located+G+Protein-Coupled+Bile+Acid+Receptors.">Bile Acids Trigger GLP-1 Release Predominantly by Accessing Basolaterally Located G Protein-Coupled Bile Acid Receptors.</a> Endocrinology. 156, 3961-3970 (2015).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+acids+are+important+direct+and+indirect+regulators+of+the+secretion+of+appetite-+and+metabolism-regulating+hormones+from+the+gut+and+pancreas.">Bile acids are important direct and indirect regulators of the secretion of appetite- and metabolism-regulating hormones from the gut and pancreas.</a> Molecular Metabolism. , (2018).</li><li>Roberge, J. N., Brubacker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Secretion+of+Proglucagon-Derived+Peptides+in+Response+to+Intestinal+Luminal+Nutrients.">Secretion of Proglucagon-Derived Peptides in Response to Intestinal Luminal Nutrients.</a> Endocrinology. 128, 3169-3174 (1991).</li><li>Brubaker, P. L., Schloos, J., Drucker, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+glucagon-like+peptide-1+synthesis+and+secretion+in+the+GLUTag+enteroendocrine+cell+line.">Regulation of glucagon-like peptide-1 synthesis and secretion in the GLUTag enteroendocrine cell line.</a> Endocrinology. 139, 4108-4114 (1998).</li><li>Jacobsen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+Gastrointestinal+Hormone+Responses,+Insulin+Sensitivity,+and+Beta-Cell+Function+Within+2+Weeks+After+Gastric+Bypass+in+Non-diabetic+Subjects.">Changes in Gastrointestinal Hormone Responses, Insulin Sensitivity, and Beta-Cell Function Within 2 Weeks After Gastric Bypass in Non-diabetic Subjects.</a> Obesity Surgery. 22, 1084-1096 (2012).</li><li>Kuhre, R. E., Frost, C. R., Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+glucose-stimulated+GLP-1+secretion+from+perfused+rat+small+intestine.">Molecular mechanisms of glucose-stimulated GLP-1 secretion from perfused rat small intestine.</a> Diabetes. 64, 370 (2014).</li><li>Svendsen, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+gut+hormone+secretion.+Studies+using+isolated+perfused+intestines.">Regulation of gut hormone secretion. Studies using isolated perfused intestines.</a> Peptides. 77, 47-53 (2016).</li><li>Ratner, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Peripheral+Neurotensin+on+Appetite+Regulation+and+Its+Role+in+Gastric+Bypass+Surgery.">Effects of Peripheral Neurotensin on Appetite Regulation and Its Role in Gastric Bypass Surgery.</a> Endocrinology. 157, 3482-3492 (2016).</li><li>Wewer Albrechtsen, N. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+glucagon+secretion+in+mice+and+rats+revealed+using+a+validated+sandwich+ELISA+for+small+sample+volumes.">Dynamics of glucagon secretion in mice and rats revealed using a validated sandwich ELISA for small sample volumes.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 311, E302-E309 (2016).</li><li>Vilsboll, T., Agerso, H., Krarup, T., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Similar+elimination+rates+of+glucagon-like+peptide-1+in+obese+type+2+diabetic+patients+and+healthy+subjects.">Similar elimination rates of glucagon-like peptide-1 in obese type 2 diabetic patients and healthy subjects.</a> The Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism. 88, 220-224 (2003).</li><li>Windelov, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+is+it+so+difficult+to+measure+glucagon-like+peptide-1+in+a+mouse?.">Why is it so difficult to measure glucagon-like peptide-1 in a mouse?.</a> Diabetologia. 60, 2066-2075 (2017).</li><li>Gorboulev, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Na+-d-glucose+Cotransporter+SGLT1+is+Pivotal+for+Intestinal+Glucose+Absorption+and+Glucose-Dependent+Incretin+Secretion.">Na+-d-glucose Cotransporter SGLT1 is Pivotal for Intestinal Glucose Absorption and Glucose-Dependent Incretin Secretion.</a> Diabetes. 61, 187-196 (2012).</li><li>Kuhre, R. E., Bechmann, L. E., Wewer Albrechtsen, N. J., Hartmann, B., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+stimulates+neurotensin+secretion+from+the+rat+small+intestine+by+mechanisms+involving+SGLT1+and+GLUT2,+leading+to+cell+depolarization+and+calcium+influx.">Glucose stimulates neurotensin secretion from the rat small intestine by mechanisms involving SGLT1 and GLUT2, leading to cell depolarization and calcium influx.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 308, E1123-E1130 (2015).</li><li>Kuhre, R. E., Christiansen, C. B., Saltiel, M. Y., Wewer Albrechtsen, N. J., Holst, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+relationship+between+glucose+absorption+and+glucose-stimulated+secretion+of+GLP-1,+neurotensin,+and+PYY+from+different+intestinal+segments+in+the+rat.">On the relationship between glucose absorption and glucose-stimulated secretion of GLP-1, neurotensin, and PYY from different intestinal segments in the rat.</a> Physiological Reports. 5, (2017).</li><li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+cosecretion+and+coexpression+of+gut+hormones+from+male+rat+proximal+and+distal+small+intestine.">An analysis of cosecretion and coexpression of gut hormones from male rat proximal and distal small intestine.</a> Endocrinology. 156, 847-857 (2015).</li><li>Goldspink, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanistic+insights+into+the+detection+of+free+fatty+and+bile+acids+by+ileal+glucagon-like+peptide-1+secreting+cells.">Mechanistic insights into the detection of free fatty and bile acids by ileal glucagon-like peptide-1 secreting cells.</a> Molecular Metabolism. 7, 90-101 (2018).</li><li>Sun, E. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+Controlling+Glucose-Induced+Glp-1+Secretion+in+Human+Small+Intestine.">Mechanisms Controlling Glucose-Induced Glp-1 Secretion in Human Small Intestine.</a> Diabetes. , (2017).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peptide+production+and+secretion+in+GLUTag,+NCI-H716+and+STC-1+cells:+a+comparison+to+native+L-cells.">Peptide production and secretion in GLUTag, NCI-H716 and STC-1 cells: a comparison to native L-cells.</a> Journal of Molecular Endocrinology. 56, 11 (2016).</li><li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose+sensing+in+L+cells:+a+primary+cell+study.">Glucose sensing in L cells: a primary cell study.</a> Cell Metabolism. 8, 532-539 (2008).</li><li>Reimann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+functional+role+of+voltage+gated+cation+conductances+in+the+glucagon-like+peptide-1+secreting+GLUTag+cell+line.">Characterization and functional role of voltage gated cation conductances in the glucagon-like peptide-1 secreting GLUTag cell line.</a> The Journal of Physiology. 563, 161-175 (2005).</li><li>Kuhre, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fructose+stimulates+GLP-1+but+not+GIP+secretion+in+mice,+rats+and+humans.">Fructose stimulates GLP-1 but not GIP secretion in mice, rats and humans.</a> American journal of physiology. Gastrointestinal and Liver Physiology. 306, G622-G630 (2014).</li><li>Reimann, F., Tolhurst, G., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=G-Protein-Coupled+Receptors+in+Intestinal+Chemosensation.">G-Protein-Coupled Receptors in Intestinal Chemosensation.</a> Cell Metabolism. 15, 421-431 (2012).</li><li>Parker, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+underlying+bile+acid-stimulated+glucagon-like+peptide-1+secretion.">Molecular mechanisms underlying bile acid-stimulated glucagon-like peptide-1 secretion.</a> British Journal of Pharmacology. 165, 414-423 (2012).</li><li>Petersen, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+L+cells+in+mouse+and+human+small+intestine+organoids.">Generation of L cells in mouse and human small intestine organoids.</a> Diabetes. 63, 410-420 (2014).</li><li>Parker, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predominant+role+of+active+versus+facilitative+glucose+transport+for+glucagon-like+peptide-1+secretion.">Predominant role of active versus facilitative glucose transport for glucagon-like peptide-1 secretion.</a> Diabetologia. 55, 2445-2455 (2012).</li><li>Roberts, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+Human+and+Murine+Enteroendocrine+Cells+by+Transcriptomic+and+Peptidomic+Profiling.">Comparison of Human and Murine Enteroendocrine Cells by Transcriptomic and Peptidomic Profiling.</a> Diabetes. , (2019).</li><li>Reimann, F., Gribble, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glucose-Sensing+in+Glucagon-Like+Peptide-1-Secreting+Cells.">Glucose-Sensing in Glucagon-Like Peptide-1-Secreting Cells.</a> Diabetes. 51, 2757-2763 (2002).</li><li>Drucker, D. J., Jin, T., Asa, S. L., Young, T. A., Brubaker, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+proglucagon+gene+transcription+by+protein+kinase-A+in+a+novel+mouse+enteroendocrine+cell+line.">Activation of proglucagon gene transcription by protein kinase-A in a novel mouse enteroendocrine cell line.</a> Molecular Endocrinology. 8, 1646-1655 (1994).</li><li>Svendsen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GLP1-+and+GIP-producing+cells+rarely+overlap+and+differ+by+bombesin+receptor-2+expression+and+responsiveness.">GLP1- and GIP-producing cells rarely overlap and differ by bombesin receptor-2 expression and responsiveness.</a> The Journal of Endocrinology. 228, 39-48 (2016).</li><li>Bak, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specificity+and+sensitivity+of+commercially+available+assays+for+glucagon-like+peptide-1+(GLP-1):+implications+for+GLP-1+measurements+in+clinical+studies.">Specificity and sensitivity of commercially available assays for glucagon-like peptide-1 (GLP-1): implications for GLP-1 measurements in clinical studies.</a> Diabetes, Obesity &amp; Metabolism. 16, 1155-1164 (2014).</li><li>Jacobsen, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+gastric+bypass+surgery+on+glucose+absorption+and+metabolism+during+a+mixed+meal+in+glucose-tolerant+individuals.">Effects of gastric bypass surgery on glucose absorption and metabolism during a mixed meal in glucose-tolerant individuals.</a> Diabetologia. 56, 2250-2254 (2013).</li></ol>

Тонкая кишка изолированной перфузии крыса является мощный исследовательский инструмент, который позволяет динамика и молекулярные механизмы лежащие в основе кишки гормонов необходимо изучить в деталях. Наиболее важным шагом для успешного производства данных с этой моделью является...

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chemicals for perfusion buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin (BSA)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>1.12018.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride dihydrate (CaCl2 x 2 H2O)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>102382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran 70</td>
			<td>Pharmacosmos</td>
			<td>40014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fumaric acid disodium salt (C4H2Na2O4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose (C6H12O6)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>108342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium sulfate hepatahydrate (MgSO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>105886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potasium chloride (KCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>104873</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyruvic acid sodium salt (C3H3NaO4)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106619</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3)</td>
			<td>Merck</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium L-glutamate monohydrate (C5H8NNaO4 x H2O)</td>
			<td>Merck</td>
			<td>106445</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Perfusion equitment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Universial perfusion system</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>732316</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BASIC UNIT UNIPER UP-100, TYPE 834</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller Pump, with four channels</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>730100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Windkessel</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>732068</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermostatic Circulator,Bath Volume 3L, 230V/50Hz</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>730125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating table, heated on tripod stand, type 873</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>733776</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cannula with basked, OD= 2.0mm, ID= 1.0mm</td>
			<td>Harvard Bioscience, Inc.</td>
			<td>733313</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanisms underlying gut hormone secretion using the isolated perfused rat small intestine

Кишечник является крупнейшим эндокринных органов тела, производит более 15 различных пептидные гормоны, которые регулируют аппетит и приема пищи, пищеварения, всасывания питательных веществ и распределения и глюкозы натощак после экскурсии. Понимание молекулярных механизмов, которые регулируют секрецию гормона кишки имеет основополагающее значение для понимания и перевода гормон физиологии кишечника. Традиционно лежащие в основе кишки гормона либо изучаются in vivo (в экспериментальных животных или человека) или механизмы с использованием слизистой оболочки кишки секреции гормона начальных клеточные культуры или мобильных линий. Здесь мы представляем кишечник изолированной перфузии крыса как альтернативный метод для обучения гут гормона. Достоинства данной модели являются, что он опирается на нетронутыми кишечник, означает, что он резюмирует наиболее физиологически важных параметров, ответственных за секрецию в в-vivo исследований, включая слизистой поляризации, паракринными отношения и маршруты Перфузионный/стимул экспозиции. Кроме того и в отличие от в-vivo исследований изолированной перфузии крыса тонкой кишки позволяет почти полный контроль экспериментальных и прямой оценки секреции. В отличие от исследования in vitro он позволяет изучить масштабы и динамику секреции и на важные вопросы, например какие раздражители вызывают секрецию гормонов различных кишечник, с какой стороны кишечника (люминал или сосудистая) является секреции стимулирует и для анализа в деталях молекулярных сенсоров, лежащие в основе секреторная реакция. Кроме того подготовка является мощная модель для изучения кишечного поглощения и деталей относительно динамики кишечного поглощения, включая ответственность перевозчиков.

Возможность определить ли заданный стимул вызывает секрецию гормона кишки интерес опирается на стабильный базовый секрецию. Кроме того если наблюдается не ответ на раздражитель, надежные секреторной ответ положительный контроль должен быть очевидным, чтобы исключи...

Watch this Scientific Journal Video about Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine at JoVE.com

Mechanisms Underlying Gut Hormone Secretion Using the Isolated Perfused Rat Small Intestine

Лежащие в основе кишки гормона с помощью изолированных механизмов увлажненную крыса тонкой кишки

Здесь мы представляем мощный и физиологические модель для изучения молекулярных механизмов лежащие в основе гормона кишки и кишечной абсорбции — изолированной перфузии крыса тонкой кишки.

The gut is the largest endocrine organ of the body, producing more than 15 different peptide hormones that regulate appetite and food intake, digestion, ...

Метод, который мы разработали здесь, оказался чрезвычайно полезным в нашей работе, пытаясь выяснить молекулярные механизмы секреции гормонов из кишечника, но и поглощение питательных веществ, и связь между ними. Основным преимуществом этой высоко физиологической техники является то, что кишечник остается на месте, позволяя при этом подробные исследования, которые обычно выполняются только в моделях In Vitro. Первое место крысы на подогревом операционного стола, подтвердить отсутствие реакции на щипать, и сделать кожу и перитонеальной иссечения подвергать брюшной полости.Перемести тонкий кишечник в сторону, чтобы разоблачить терминальной области толстой кишки. И ligate поставки сосудов в толстой кишке. Постепенно извлекайте толстую кишку, начиная с терминальной области, и двигаясь к тонкой кишке, увлажняя ткань изотоническим солевым раствором, и используя ватные тампоны для удаления соединительной ткани по мере необходимости.Когда все толстой кишки были удалены, вставьте 15-сантиметровый кусок пластиковой трубки в проксимальный конец небольшой кишечный люмен, и обеспечить трубки с швами. Затем используйте 10-миллилитровый шприц и шприц-насос, чтобы тщательно промыть тонкий кишечник с изотоническим солевым раствором комнатной температуры на 25-миллилитр в минуту скорости потока. Когда ткань была очищена от чима, настроить ткани так, что верхняя мезентерная артерия доступна и удалить соединительной ткани и жировой ткани подвергать артерии.Используйте тонкие точечные миппы, чтобы поместить два шва под мезентерную артерию и два шва под вену портала. Заполните пластиковый 22-калибровочный катетер, прикрепленный к подвижному насосу с перфузией буфера и использовать пару хирургических ножниц, чтобы сократить небольшое отверстие в мезентерической артерии, сразу же вставив катетер в разрез. Вставьте катетер в течение двух минут после резки отверстие в артерии, в противном случае кишечник, скорее всего, страдают от ишемической повреждения.Как только катетер был закреплен швом, запустите подвижной насос, чтобы инициировать перфузию на 7,5 миллилитров в минуту скорости потока. Когда кровеносные сосуды в кишечнике и портвейной вене бледнеют, вырежьте отверстие в вене портала. Вставьте металлический катетер, и обеспечить металлический катетер с другой шов.Позаботьтесь при вставке катетера в портвейную вену, так как вена тонкая стенка. Однако, как охранник в настоящее время perfused, быстрая вставка не имеет решающего значение. После сбора вывода перфузии в течение одной минуты, измерить громкость и нажмите выполнить эксперимент в программе записи давления, чтобы инициировать перфузии давления приобретения записей.Затем накройте кишечник увлажненной лабораторной тканью, чтобы он не высыхал, и подтвердите, что дистальный конец кишечника не блокируется, и светимая гаплоида может выйти. Для измерения частичного давления кислорода и двуокиси углерода, собирать перфузии буфера через трехмерный стоп-кран клапан непосредственно перед его входит в орган, примерно через три минуты перфузии, и от катетера вставляется в портальный вены. Поместите образцы на лед, и использовать автоматизированный анализатор газа крови для измерения образцов вскоре после сбора.Используйте сборщик фракций для получения первых базовых образцов. После 10 до 15 минут базового сбора, использовать шприц насос для администрирования первого внутрисупертиального тест стимулятора через три пути стоп-кран на 35 миллилитров в минуту скорость потока. Выполните светимую стимуляцию путем первоначальной инъекции удавов стимуляции, доставленной на 2,5 миллилитра в минуту скорости потока в течение первых пяти минут стимуляции, а затем введение тестового раствора на 5 миллилитров в минуту скорости потока.Как только период светимой стимуляции закончится, промыть люмен с изотоническим солевым раствором на 2,5 миллилитра в минуту скорость потока в течение пяти минут. Затем собирайте базовые образцы по 5 миллилитров в минуту в течение 15-30 минут до введения следующего испытательного вещества. В конце эксперимента, управлять подходящим, положительный контроль для проверки на отзывчивость препарата в течение пяти-десяти минут, сбор и дополнительные от 10 до 15 минут базовых образцов в конце периода положительного контроля стимуляции.Здесь показан пример данных хорошего качества, демонстрирующих глюкагон-как пептид-1 или GLP-1, секрецию из изолированного пролитого тонкого кишечника крысы, собранную с интервалом в одну минуту. В базальных условиях, секреция была устойчивой в то время как до и после введения стимула теста и положительный контроль, надежный секреторный ответ был очевиден. Эти данные секреции GLP-1, полученные из изолированной пронизанной крысиной тонкой кишки, имеют низкое качество с неустойчивой секрецией, измеряемой в базальных условиях, которые дрейфовали вверх на протяжении всего испытания таким образом, что, как представляется, не связаны с администрациями испытательных веществ или с положительным контролем.Поэтому невозможно сделать вывод о том, была ли повышенная секреция GLP-1, наблюдаемая в конце стимуляции сосудистой фруктозы, опосредовавой реакцией. При попытке этой процедуры, чтобы заботиться, чтобы обеспечить катетеры должным образом и тщательно очистить перфузионное оборудование, как перфузии буфер обеспечивает отличную среду для роста бактерий. Следуя этой процедуре, другие методы, такие как In Vitro исследования гормон-секретирования клеточных линий первичных культур кишечных клеток, могут быть выполнены непосредственно исследовать внутриклеточное производство циклического АМП или внутриклеточного кальция.Таким образом, мы уже использовали метод для выяснения ряда процессов, связанных с поглощением питательных веществ и механизмом секреции гормонов, и он оказался чрезвычайно полезным. Не забывайте, что работа с блокаторами или активаторами молекулярных сайтов может быть чрезвычайно опасным и меры предосторожности, такие как использование лабораторного пальто, перчаток и защитных очков, дым капот всегда должны быть приняты при выполнении этой процедуры.

Research

JoVE Journal

Medicine

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Изоляция и Использование разделов крупного рогатого брыжеечной артерии и вены, как биологических испытаний для тестирования для вазоактивности в тонком кишечнике

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Glutamate and Hypoxia as a Stress Model for the Isolated Perfused Vertebrate Retina

Глутамат и гипоксии как стресс модель для изолированных перфузируемые сетчатки позвоночных

Neuroprotection has been a strong field of investigation in ophthalmological research in the past decades and affects diseases such as glaucoma, retinal ...

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Метод Изолированные<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Легких перфузии в крысиной модели: уроки, извлеченные из Разработка EVLP программы Rat

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

An Ex vivo Model to Study Hormone Action in the Human Breast

<em&gt; Экс естественных</em&gt; Модель для изучения действия гормонов в груди человека

The study of hormone action in the human breast has been hampered by lack of adequate model systems. Upon in vitro culture, primary mammary epithelial ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Индукция и оценка ишемии-реперфузии в Лангендорфа-перфузии сердца крыс

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

The Inverted Heart Model for Interstitial Transudate Collection from the Isolated Rat Heart

Модель инвертированного сердца для междоузлийной коллекции трансмутаций из изолированного сердца крысы

The present protocol describes a unique approach that enables the collection of cardiac transudate (CT) from the isolated, saline-perfused rat heart. ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

Оценка механизмов сосудистой контроля использования видео микроскопии изолированных сопротивления артериях крыс

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

An Efficient Sieving Method to Isolate Intact Glomeruli from Adult Rat Kidney

Эффективный метод просеивания изолировать нетронутыми клубочков из почек взрослых крыс

Preservation of glomerular structure and function is pivotal in the prevention of glomerulonephritis, a category of kidney disease characterized by ...

Robot-assisted Total Mesorectal Excision and Lateral Pelvic Lymph Node Dissection for Locally Advanced Middle-low Rectal Cancer

Роботизированное тотальное мезоректальное иссечение и диссекция боковых тазовых лимфатических узлов при местно-распространенном раке прямой кишки средней и низкой

Since their approval for clinical use, da Vinci surgical robots have shown great advantages in gastrointestinal surgical operations, especially in complex ...

A Model of Long-Term Ventricular Fibrillation in Isolated Rat Hearts

Модель длительной фибрилляции желудочков в изолированных сердцах крыс

Ventricular fibrillation (VF) is a fatal arrhythmia with a high incidence in cardiac patients, but VF arrest under perfusion is a neglected method of ...