Name: digital analysis of immunostaining of zw10 interacting protein in human lung tissues
Uploaded: 2019-05-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Digital Analysis of Immunostaining of ZW10 Interacting Protein in Human Lung Tissues at JoVE.com

פרויקט זה היה נתמך על ידי הקרן הלאומית הטבעית של סין (No. 81500151, 81400121, 81270607, 81541027, ו 81501352) ואת היסוד הטבעי של מחוז חוביי (סין) (No 2017CFB631). המחברים מבטאים את הערכתם לגואיי קין, צ'אנג מין, לי הוי, ועמיתיו בחברת ווהאן Google ביולוגית טכנולוגיה ושות, בע מ עבור התמיכה הטכנית שלהם. המחברים גם מודים למוחמד ג'מאל על עריכת השפה.

כל השיטות המתוארות כאן אושרו על ידי הוועדה האתית של בית החולים Zhongnan של ווהאן והחולים רנמין באוניברסיטת ווהאן.
1. הכנת שקופיות IHC
<ol><li>לתקן את דגימת רקמת הריאה על ידי האישר רסיס רקמת הריאה האנושית (כ 3 x 3 ס מ) ב 4% פאראפורמלדהיד באגירה פוספט מתכלה (PBS) עבור 24 h בטמפרטורת החדר (RT).</li>
	...

<ol>
	<li>Endo, H., Ikeda, K., Urano, T., Horie-Inoue, K., Inoue, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terf/TRIM17+stimulates+degradation+of+kinetochore+protein+ZWINT+and+regulates+cell+proliferation.">Terf/TRIM17 stimulates degradation of kinetochore protein ZWINT and regulates cell proliferation.</a> The Journal of Biochemistry. 151 (2), 139-144 (2012).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Zwint-1+specifies+localization+of+Zeste+White+10+to+kinetochores+and+is+essential+for+mitotic+checkpoint+signaling.">Human Zwint-1 specifies localization of Zeste White 10 to kinetochores and is essential for mitotic checkpoint signaling.</a> Journal of Biological Chemistry. 279 (52), 54590-54598 (2004).</li><li>Lin, Y. T., Chen, Y., Wu, G., Lee, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hec1+sequentially+recruits+Zwint-1+and+ZW10+to+kinetochores+for+faithful+chromosome+segregation+and+spindle+checkpoint+control.">Hec1 sequentially recruits Zwint-1 and ZW10 to kinetochores for faithful chromosome segregation and spindle checkpoint control.</a> Oncogene. 25 (52), 6901-6914 (2006).</li><li>Ying, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+Zwint+predicts+poor+prognosis+and+promotes+the+proliferation+of+hepatocellular+carcinoma+by+regulating+cell-cycle-related+proteins.">Overexpression of Zwint predicts poor prognosis and promotes the proliferation of hepatocellular carcinoma by regulating cell-cycle-related proteins.</a> OncoTargets and Therapy. 11, 689-702 (2018).</li><li>Yuan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinformatic+analysis+of+prognostic+value+of+ZW10+interacting+protein+in+lung+cancer.">Bioinformatic analysis of prognostic value of ZW10 interacting protein in lung cancer.</a> OncoTargets and Therapy. 11, 1683-1695 (2018).</li><li>Higgins, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+and+challenges+of+digital+pathology+and+whole+slide+imaging.">Applications and challenges of digital pathology and whole slide imaging.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry. 90 (5), 341-347 (2015).</li><li>Webster, J. D., Dunstan, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-slide+imaging+and+automated+image+analysis:+considerations+and+opportunities+in+the+practice+of+pathology.">Whole-slide imaging and automated image analysis: considerations and opportunities in the practice of pathology.</a> Veterinary Pathology. 51 (1), 211-223 (2014).</li><li>Al-Janabi, S., Huisman, A., van Diest, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+pathology:+current+status+and+future+perspectives.">Digital pathology: current status and future perspectives.</a> Histopathology. 61 (1), 1-9 (2012).</li><li>Bonomi, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictive+biomarkers+for+response+to+EGFR-directed+monoclonal+antibodies+for+advanced+squamous+cell+lung+cancer.">Predictive biomarkers for response to EGFR-directed monoclonal antibodies for advanced squamous cell lung cancer.</a> Annals of Oncology. 29 (8), 1701-1709 (2018).</li><li>Villalobos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERCC1+assessment+in+upfront+treatment+with+and+without+cisplatin-based+chemotherapy+in+stage+IIIB/IV+non-squamous+non-small+cell.">ERCC1 assessment in upfront treatment with and without cisplatin-based chemotherapy in stage IIIB/IV non-squamous non-small cell.</a> Medical Oncology. 35 (7), 106 (2018).</li><li>Griffin, J., Treanor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+pathology+in+clinical+use:+where+are+we+now+and+what+is+holding+us+back?.">Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back?.</a> Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).</li><li>Huisman, A., Looijen, A., van den Brink, S. M., van Diest, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+of+a+fully+digital+pathology+slide+archive+by+high-volume+tissue+slide+scanning.">Creation of a fully digital pathology slide archive by high-volume tissue slide scanning.</a> Human Pathology. 41 (5), 751-775 (2010).</li><li>Gray, A., Wright, A., Jackson, P., Hale, M., Treanor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+histochemical+stains+using+whole+slide+imaging:+development+of+a+method+and+demonstration+of+its+usefulness+in+laboratory+quality+control.">Quantification of histochemical stains using whole slide imaging: development of a method and demonstration of its usefulness in laboratory quality control.</a> Journal of Clinical Pathology. 68 (3), 192-199 (2015).</li><li>Hofman, F. M., Taylor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemistry.">Immunohistochemistry.</a> Current Protocols in Immunology. 103, (2013).</li><li>Ramos-Vara, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+Methods+of+Immunohistochemistry.">Principles and Methods of Immunohistochemistry.</a> Methods in Molecular Biology. 1641, 115-128 (2017).</li><li>Otali, D., Fredenburgh, J., Oelschlager, D. K., Grizzle, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+standard+tissue+as+a+control+for+histochemical+and+immunohistochemical+staining.">A standard tissue as a control for histochemical and immunohistochemical staining.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry. 91 (5), 309-326 (2016).</li><li>Clarke, E. L., Treanor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colour+in+digital+pathology:+a+review.">Colour in digital pathology: a review.</a> Histopathology. 70 (2), 153-163 (2017).</li><li>Potts, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+pathology+in+drug+discovery+and+development:+multisite+integration.">Digital pathology in drug discovery and development: multisite integration.</a> Drug Discovery Today. 14 (19-20), 935-941 (2009).</li><li>Tabata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-slide+imaging+at+primary+pathological+diagnosis:+Validation+of+whole-slide+imaging-based+primary+pathological+diagnosis+at+twelve+Japanese+academic+institutes.">Whole-slide imaging at primary pathological diagnosis: Validation of whole-slide imaging-based primary pathological diagnosis at twelve Japanese academic institutes.</a> Pathology International. 67 (11), 547-554 (2017).</li><li>Saco, A., Bombi, J. A., Garcia, A., Ram&#237;rez, J., Ordi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Status+of+Whole-Slide+Imaging+in+Education.">Current Status of Whole-Slide Imaging in Education.</a> Pathobiology. 83 (2-3), 79-88 (2016).</li><li>Griffin, J., Treanor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+pathology+in+clinical+use:+where+are+we+now+and+what+is+holding+us+back?.">Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back?.</a> Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).</li></ol>

סריקת שקופית שלמה הופכת לנושא חם עבור סריקה והפקה איתנה של תמונות באיכות גבוהה למטרות קליניות ומחקר11,12,13. ניתן לייצר תמונות על ידי מיקרוסקופים סריקה שקופיות בתוך דקות11,12,13. על-ידי החלת מת...

ZW10 (zwint) הוא מרכיב הכרחי של מתחם קינטוכורה אשר מעורב במחסום mitotic צירים1,2,3. זה דווח כי דלדול של zwint מוביל הפרדה חריגה כרומוזום מוקדם מוקדמת1,2,3. מחקרים שנעשו לאחרונה הראו כי zwint מעורב בפתוגנזה של גידולים מרובים על ידי קידום התפשטות של תאים סרטניים4,5. בעבר דיווחו על ביטוי יתר של ZWINT בסרטן הריאות5. זה התקבל באופן נרחב כי ניתוח של שקופיות על ידי פתולוגים באמצעות clm היא גוזלת זמן ולא כמותית6,7,8. יתרה מזאת, ההידרדרות של שקופיות הזכוכית המאוחסנות עלולה לגרום לנסיגה של שקופיות שנוצרו בעבר. השיטה המתהווה של הדמיה מבוססת-מחשב, שקופית שלמה דיגיטלית (wsi) עלולה להתגבר על מגבלות אלה6,7,8.
לשם כך, אנו מתארים מתודולוגיה של התרופה החיסונית של ZWINT ברקמות סרטן ריאות האדם, בשילוב עם שקופית שלמה סריקה דיגיטלית וניתוח תמונה מבוסס תוכנה. היתרון העיקרי של מתודולוגיה זו הוא הפקת תוצאות concordant עם CLM. טכנולוגיה זו ניתן להשתמש באופן נרחב באזורים של הבקיע פתולוגי של המטאוקסילין-אאוזין כתמים (H & E) ו-IHC, הזריחה ב היברידיזציה באתרו (דג), מיקרו מערכי רקמות (tma), וגילוי סמים ופיתוח.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Pannoramic MIDI</td>
			<td>3D HISTECH</td>
			<td>Cat: PMIDI-040709</td>
			<td>An automated digital slide scanner with a remarkable feature set :12-slide capacity, fluorescence scanning, and many more.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantCenter</td>
			<td>3D HISTECH</td>
			<td>Downloaded from the official website of the company</td>
			<td>The framework for 3DHISTCH&#39;s image analysis applications.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA RM2235</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Cat: 14050038604</td>
			<td>The enhanced precision of the new accessories will add convenience to block to knife approach as well as specimen orientation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-human Anti-ZWINT antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Cat: ab197794</td>
			<td>Immunohistochemical analysis of ZWINT in human lung tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit secondary antibody</td>
			<td>Wuhan Goodbio Technology</td>
			<td>Cat:GB23303-1</td>
			<td>Secondary antibody for IHC staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Wuhan Goodbio Technology</td>
			<td>Cat:G0002</td>
			<td>A solution containing a phosphate buffer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OLYMPUS CX23</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>Cat:6M87620</td>
			<td>Microscope for detection of H&#38;E or IHC slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylbenzene</td>
			<td>Shanghai Lingfeng Chemical Reagent</td>
			<td>Cat:1330-20-7</td>
			<td>A colorless, flammable fluid used as a solvent and clarifying agent in the preparation of tissue sections for microscopic study.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Staining Solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio technology</td>
			<td>Cat:G1039</td>
			<td>It is commonly used for histologic studies, oftern colors the nuclei of cells blue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Baitg</td>
			<td>Cat:2005-64-5</td>
			<td>It is a polysorbate-type nonionic surfactant formed by the ethoxylation of sorbitan before the addition of lauric acid. It is used as a deterent and emulsifier in pharmacological applications.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid repair liquid</td>
			<td>Wuhan Servicebio technology</td>
			<td>Cat:G1202</td>
			<td>Is is used to repair antigen after fixation during IHC procedure.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA ASP200s</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Cat: 14048043626</td>
			<td>It was designed for routine and research histopathology of up to 200 cassettes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA Arcadia H</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Cat: 14039354103</td>
			<td>It is a heated paraffin embedding station and allows for simple operation and precise control, resulting in improved quality, a smooth workflow and reliability.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA Arcadia C</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Cat: 14039354102</td>
			<td>It is a cold plate holding more than 60/65 cassettes on its large working surface. It was designed with an environment adaptive control module to make sure the operating temperature is always stabilized at -6&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaseViewer Software</td>
			<td>3DHISTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

digital analysis of immunostaining of zw10 interacting protein in human lung tissues

מטרת מחקר זה היא להחדיר מתודולוגיה של הרקמה החיסונית של רקמות הריאה האנושית, ואחריו שקופית שלמה סריקה דיגיטלית ניתוח תמונה. סריקה דיגיטלית היא דרך מהירה לסריקת ערימת שקופיות ולהפקת תמונות דיגיטליות באיכות גבוהה. זה יכול לייצר תוצאות concordant עם מיקרוסקופ אור קונבנציונאלי (CLM) על ידי פתולוגים. יתר על כן, הזמינות של תמונות דיגיטליות מאפשרת כי אותה שקופית ניתן לציין בו על ידי אנשים מרובים. יתר על כן, תמונות דיגיטליות של שקופיות ניתן לאחסן במסד נתונים, מה שאומר את הידרדרות ארוכת טווח של שקופיות זכוכית נמנעת. המגבלות של טכניקה זו הן כדלקמן. ראשית, הוא זקוק לרקמה באיכות גבוהה המוכן ואת השקופיות המקורי אימונוהיסטוכימיה (IHC) ללא כל נזק או שאריות איטום עודף. שנית, הגידול או שטחים שאינם סרטניים צריך להיות מצוין על ידי פתולוגים מנוסים לפני ניתוח באמצעות תוכנה, כדי למנוע בלבול על הגידול או אזורים שאינם סרטניים במהלך הבקיע. שלישית, המפעיל צריך לשלוט על שכפול הצבע לאורך כל תהליך הדיגיטציה בהדמיה שקופית שלמה.

מדדנו את רמות הביטוי של ZWINT ב 28 זוגות של שאינם קטנים-תאים סרטן הריאות (NSCLC) דגימות (הגידול הסמוך רקמות שאינם סרטניים), כולל 14 תאים קשקשיים קרצינומה (SCCs) ו 14 אדנוקרצינומות (ADCs), על ידי IHC. הסריקה הדיגיטלית השלמה של השקופיות המסופקות תמונות דיגיטליות באיכות גבוהה (איו...

Watch this Scientific Journal Video about Digital Analysis of Immunostaining of ZW10 Interacting Protein in Human Lung Tissues at JoVE.com

Digital Analysis of Immunostaining of ZW10 Interacting Protein in Human Lung Tissues

ניתוח דיגיטלי של מעטפת חיסונית של חלבון ZW10 אינטראקציה רקמות ריאות האדם

ZW10 (ZWINT) משתתפת במחסום הציר הmitotic ובפתוגנזה של קרצינומה. כאן, אנו מציגים מתודולוגיה של כתמים חיסוני של ZWINT ברקמות סרטן ריאות האדם, ואחריו סריקה דיגיטלית של שקופיות שלמות וניתוח תמונה. מתודולוגיה זו יכולה לספק תמונות דיגיטליות באיכות גבוהה ותוצאות אמינות.

The purpose of this study is to introduce a methodology of the immunostaining of human lung tissues, followed by whole-slide digital scanning and image ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בפתולוגית ואת האימונוהיסטוכימיה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי מהר מספיק וזה מייצר מדיה דיגיטלית באיכות גבוהה. התחילו בתיקון דגימת רקמת קונג ב-3 על 3 ס"מ ב-4% פרפורמלדהיד למשך 24 שעות בטמפרטורת החדר.למחרת, לייבש את הרקמה טבילות אתנול עולה בטמפרטורת החדר, ואחריו שלושה טבילות ב 100% קסילן במשך 20 דקות לכל טיפול. לאחר טבילת הקסילן האחרונה, מניחים את הרקמה בפרפין צלזיוס של 63 מעלות למשך 30 דקות, ולאחר מכן טבילה שנייה של 45 דקות בפרפין טרי של 63 מעלות צלזיוס, ואז משנים את הפרפין פעם נוספת עבור דגירה של שעה אחת אחרונה. כאשר הפרפין התקרר, השתמש במיקרוטום סיבובי כדי לרכוש חמישה חלקים בעובי מיקרומטר של דגימת הרקמה המוטמעת בפרפין, ולוכד את החלקים על 20 שקופיות מצופות מיקרוגרם למיליליטר.עבור dewaxing, למקם את המגלשות בתנור 65 מעלות צלזיוס במשך שעתיים, ואחריו טבילה ב dimethylbenzene במשך 15 דקות השרייה 100% קסילן במשך 15 דקות, ולאחר מכן rehydrating את המגלשות בסדרה טבילה אתנול יורד. לתיקון אנטיגן, מניחים את השקופיות בתיבה לתיקון אנטיגן ומוסיפים 300 מיליליטר של נוזל תיקון חומצת לימון לקופסה. מחממים את התיבה במיקרוגל בה הספק גבוה במשך שתי דקות, ואחריו חימום בה הספק נמוך כדי לקיים רותחים במשך שש דקות.כאשר השקופיות התקררו לטמפרטורת החדר, לשטוף את דגימות הרקמה עם שלוש חמש דקות 0.01 PBS טוחן שוטף בשייקר סיבובי בטמפרטורת החדר. כדי לחסל את peroxidase אנדוגני, דגירה את המגלשות עם 3% מי חמצן במים מזוקקים כפול במשך 30 דקות בתיבה רטובה בטמפרטורת החדר. בסוף הדגירה, לשטוף את השקופיות כפי שהוכח ולחבר כל כריכה לא ספציפית על כל קטע עם 100 microliters של 10% סרום עזים במשך 39 דקות ב 37 מעלות צלזיוס.לאחר מכן, סמן את הרקמות עם 100 מיקרוליטרים של נוגדן אנטי ZWINT לכל שקופית בארבע מעלות צלזיוס בן לילה, ואחריו שלוש שטיפות ב- PBS טוחן 0.01. לאחר הכביסה האחרונה, הדגירה את המגלשות עם נוגדן משני מתאים במשך 30 דקות ב 37 מעלות צלזיוס, ואחריו שלוש 0.01 שטיפות PBS טוחן. לאחר הכביסה האחרונה, מוסיפים את המגלשות ל-300 מיקרוליטרים של DAB טרי למשך 10 דקות, ולאחר מכן שטיפה של 10 שניות עם מי ברז בטמפרטורת החדר.דלפקים מכתימים את הרקמות בתתווית הכתמת המטוקסילין במשך שתי דקות בטמפרטורת החדר, ולאחר מכן שוטפים במי ברז במשך 15 דקות, ואז מייבשים שוב את הרקמה בטבילות אתנול עולות, ואחריהן שני טבילות של 15 דקות בקסילן בטמפרטורת החדר. לאחר טבילת האתנול האחרונה של 100%, הר את החלקים עם 15 מיקרוליטרים של 5% קסילן בתסנת חניכיים נייטרלית וכסה כל דגימת רקמה בזכוכית כיסוי. לסריקה אוטומטית של כל השקופיות של המקטעים, תחילה אפשר לשקופיות להתייבש בטמפרטורת החדר למשך 12 שעות כדי לייבש את דגימות הרקמה.לאחר מכן, בסורק השקופיות כולו האוטומטי, בחר ברייטפילד באופן ידני והזן את ממשק הסריקה הידני. תקן את שם השקופיות ובחר נתיב אחסון עבור התמונות. קבעו את אזור הסריקה ובחרו בדוגמאות הסריקה בעזרת האפשרות 'הגדרת סף על-ידי המשתמש'.הסף הוא כ-50 עם ערך הרחבה של 200 מיקרומטרים באזור הסריקה. קבעו את ערך מוקד הסריקה ובחרו 'מיקוד אוטומטי' ו'שכבה אחת', ולאחר מכן טען את השקופיות בתחנת העבודה והתחל את הסריקה האוטומטית. לאחר סריקת כל השקופיות, שמור את התמונות לניתוח מאוחר יותר.כדי לנתח את התמונות של חלקי רקמת הריאה, פתח את התוכנה לניתוח תמונה היסטופתולוגי ובחר מחשב מקומי כדי לפתוח את הקובץ עם נתוני הסריקה. בחרו ברמת הזום המתאימה ולהשתמש ב'החלף מצב התאמת צבע' כדי להגדיר את הצבע לניגודיות האופטימלית, ולאחר מכן הקיפו ותנו שם לאזורי העניין בכל תמונה. לאחר מכן, תחת תוספים, בחר QC. בונה התרחישים יצץ.בחר 'כיוונון צפיפות' והתאם את סרגל הזיהוי. התאם את רמות הניקוד עד שעוצמת הכתם של האזורים בעיגול דומה לזו של התמונות המקוריות, ואחסן את המודל ותן לו שם כקובץ חדש, ולאחר מכן החל את המודל על שקופיות אחרות ובחר ביאור נבחר כדי לאפשר לתוכנה לחשב באופן אוטומטי את ציון ה- APE עבור אזורי העניין בכל תמונה. סריקה דיגיטלית שקופיות שלמות של חלקי רקמת ריאה של גידול ורקמות שאינן גידול סמוכות של דגימות סרטן ריאות תאים שאינם קטנים מייצרת תמונות דיגיטליות באיכות גבוהה.ציוני APE המחושבים מסוגים אלה של דגימות סרטן ריאות הם בדרך כלל גבוהים משמעותית מאלה שנקבעו עבור רקמות שאינן סרטן סמוכות. בנוסף, רמות ביטוי ZWINT בסעיפים רקמת קרצינומה של תאים קשקשיים נקבעים לעתים קרובות להיות גבוה באופן משמעותי מאלה שנמדדו דגימות רקמת abnocarcinoma. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור להתכונן עם איכות גבוהה של הגידול או אזורי הגידול במהלך ביצוע סריקה פתולוגית.בעקבות הליך זה, ניתן לבצע שיטות אחרות של המיקרוסקופיה על מנת לענות על שאלות נוספות. לא השיטה או השיטה השונה לסריקה פתולוגית. לאחר טכניקה זו סלל את הדרך לחוקרים בתחום הסריקה הפתולוגית לחקור אבחון דיגיטלי מטרת המחקר.אל תשכח כי עבודה עם paraformaldehyde יכול להיות מסוכן מאוד אמצעי זהירות כגון מסכות תמיד יש לנקוט בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

לשעבר Vivo הדמיה של לימפוציטים מסוג T CD8 תושב באמבריולוגיה הגידול פרוסות משתמש מיקרוסקופיה קונפוקלית

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

הקמת Assay קולוניזציה הריאה עבור מחזור הגידול ויזואליזציה תאים ברקמות הריאה

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

זיהוי של Variant התעתיק נדיר CDH1 ברקמות מוקפאות סרטן קיבה על ידי מבוססי שבב דיגיטלי PCR

CDH1a, a non-canonical transcript of the CDH1 gene, has been found to be expressed in some gastric cancer (GC) cell lines, whereas it is absent in normal ...

Desthiobiotin-Streptavidin-Affinity Mediated Purification of RNA-Interacting Proteins in Mesothelioma Cells

Desthiobiotin-Streptavidin-זיקה מתווכת טיהור של RNA-אינטראקציה חלבונים בתאים מזותליומה

The in vitro RNA-pulldown is still largely used in the first steps of protocols aimed at identifying RNA-binding proteins that recognize specific RNA ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

מכתים אלסטי על פרפין-שקופיות מוטבעות של רקמת סרטן pT3N0M0 קיבה

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Droplet Digital TRAP (ddTRAP): Adaptation of the Telomere Repeat Amplification Protocol to Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

Droplet Digital TRAP ddTRAP: Adaptation of the Telomere Repeat Amplification Protocol to Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

מלכודת droplet דיגיטלית (ddTRAP): הסתגלות פרוטוקול Telomere חזרה הגברה על תגובת שרשרת התגובה של רביב דיגיטלי

The telomere repeat amplification protocol (TRAP) is the most widely used assay to detect telomerase activity within a given a sample. The polymerase ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

רגישות רדיושל תאי גזע סרטן בסרטן ריאות תאים קווי

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

הכנת מיטוכונמיטומיה של רקמות סרטן השחלות בקרת רקמות השחלות עבור ניתוח פרוטאומוניקס כמותיים

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

זיהוי של התקדמות הגידול ריאה בעכברים על ידי הדמיה אולטרסאונד

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

ניתוח פתולוגי של גרורות ריאות בעקבות הזרקת וריד זנב לרוחב של תאים סרטניים

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...