Name: digital analysis of immunostaining of zw10 interacting protein in human lung tissues
Uploaded: 2019-05-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Digital Analysis of Immunostaining of ZW10 Interacting Protein in Human Lung Tissues at JoVE.com

Bu proje Çin 'in ulusal doğal Vakfı (No. 81500151, 81400121, 81270607, 81541027 ve 81501352) ve Hubei eyaleti (Çin) doğal temeli (No. 2017CFB631) tarafından destekleniyordu. Yazarlar Guo Qin, Chang Min, li Hui ve Wuhan Google biyolojik teknoloji Co, LTD onların teknik destek için meslektaşları onların takdir ifade. Yazarlar da dil düzenleme için muhammed Jamal teşekkür ederiz.

Burada açıklanan tüm yöntemler Wuhan Üniversitesi Zhongnan Hastanesi Etik Komitesi ve Wuhan Üniversitesi Renmin Hastanesi tarafından onaylanmıştır.
1. ıHC slaytlarının hazırlanması
<ol><li>Akciğer dokusu örneğini, insan akciğer dokusu parçası (yaklaşık 3 x 3 cm),% 4 civarında formaldehite fosfat-tamponlu tuz (PBS) içinde 24 saat oda sıcaklığında (RT) daldırarak düzeltin.</li>
	<li>% 80,% 95 ve% 100 etanol, sırasıyla, oda sıcaklığında 15 dakika, 20 dakika ...

<ol>
	<li>Endo, H., Ikeda, K., Urano, T., Horie-Inoue, K., Inoue, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Terf/TRIM17+stimulates+degradation+of+kinetochore+protein+ZWINT+and+regulates+cell+proliferation.">Terf/TRIM17 stimulates degradation of kinetochore protein ZWINT and regulates cell proliferation.</a> The Journal of Biochemistry. 151 (2), 139-144 (2012).</li><li>Wang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Zwint-1+specifies+localization+of+Zeste+White+10+to+kinetochores+and+is+essential+for+mitotic+checkpoint+signaling.">Human Zwint-1 specifies localization of Zeste White 10 to kinetochores and is essential for mitotic checkpoint signaling.</a> Journal of Biological Chemistry. 279 (52), 54590-54598 (2004).</li><li>Lin, Y. T., Chen, Y., Wu, G., Lee, W. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hec1+sequentially+recruits+Zwint-1+and+ZW10+to+kinetochores+for+faithful+chromosome+segregation+and+spindle+checkpoint+control.">Hec1 sequentially recruits Zwint-1 and ZW10 to kinetochores for faithful chromosome segregation and spindle checkpoint control.</a> Oncogene. 25 (52), 6901-6914 (2006).</li><li>Ying, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overexpression+of+Zwint+predicts+poor+prognosis+and+promotes+the+proliferation+of+hepatocellular+carcinoma+by+regulating+cell-cycle-related+proteins.">Overexpression of Zwint predicts poor prognosis and promotes the proliferation of hepatocellular carcinoma by regulating cell-cycle-related proteins.</a> OncoTargets and Therapy. 11, 689-702 (2018).</li><li>Yuan, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioinformatic+analysis+of+prognostic+value+of+ZW10+interacting+protein+in+lung+cancer.">Bioinformatic analysis of prognostic value of ZW10 interacting protein in lung cancer.</a> OncoTargets and Therapy. 11, 1683-1695 (2018).</li><li>Higgins, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+and+challenges+of+digital+pathology+and+whole+slide+imaging.">Applications and challenges of digital pathology and whole slide imaging.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry. 90 (5), 341-347 (2015).</li><li>Webster, J. D., Dunstan, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-slide+imaging+and+automated+image+analysis:+considerations+and+opportunities+in+the+practice+of+pathology.">Whole-slide imaging and automated image analysis: considerations and opportunities in the practice of pathology.</a> Veterinary Pathology. 51 (1), 211-223 (2014).</li><li>Al-Janabi, S., Huisman, A., van Diest, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+pathology:+current+status+and+future+perspectives.">Digital pathology: current status and future perspectives.</a> Histopathology. 61 (1), 1-9 (2012).</li><li>Bonomi, P. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictive+biomarkers+for+response+to+EGFR-directed+monoclonal+antibodies+for+advanced+squamous+cell+lung+cancer.">Predictive biomarkers for response to EGFR-directed monoclonal antibodies for advanced squamous cell lung cancer.</a> Annals of Oncology. 29 (8), 1701-1709 (2018).</li><li>Villalobos, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ERCC1+assessment+in+upfront+treatment+with+and+without+cisplatin-based+chemotherapy+in+stage+IIIB/IV+non-squamous+non-small+cell.">ERCC1 assessment in upfront treatment with and without cisplatin-based chemotherapy in stage IIIB/IV non-squamous non-small cell.</a> Medical Oncology. 35 (7), 106 (2018).</li><li>Griffin, J., Treanor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+pathology+in+clinical+use:+where+are+we+now+and+what+is+holding+us+back?.">Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back?.</a> Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).</li><li>Huisman, A., Looijen, A., van den Brink, S. M., van Diest, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Creation+of+a+fully+digital+pathology+slide+archive+by+high-volume+tissue+slide+scanning.">Creation of a fully digital pathology slide archive by high-volume tissue slide scanning.</a> Human Pathology. 41 (5), 751-775 (2010).</li><li>Gray, A., Wright, A., Jackson, P., Hale, M., Treanor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+histochemical+stains+using+whole+slide+imaging:+development+of+a+method+and+demonstration+of+its+usefulness+in+laboratory+quality+control.">Quantification of histochemical stains using whole slide imaging: development of a method and demonstration of its usefulness in laboratory quality control.</a> Journal of Clinical Pathology. 68 (3), 192-199 (2015).</li><li>Hofman, F. M., Taylor, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemistry.">Immunohistochemistry.</a> Current Protocols in Immunology. 103, (2013).</li><li>Ramos-Vara, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+and+Methods+of+Immunohistochemistry.">Principles and Methods of Immunohistochemistry.</a> Methods in Molecular Biology. 1641, 115-128 (2017).</li><li>Otali, D., Fredenburgh, J., Oelschlager, D. K., Grizzle, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+standard+tissue+as+a+control+for+histochemical+and+immunohistochemical+staining.">A standard tissue as a control for histochemical and immunohistochemical staining.</a> Biotechnic &amp; Histochemistry. 91 (5), 309-326 (2016).</li><li>Clarke, E. L., Treanor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colour+in+digital+pathology:+a+review.">Colour in digital pathology: a review.</a> Histopathology. 70 (2), 153-163 (2017).</li><li>Potts, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+pathology+in+drug+discovery+and+development:+multisite+integration.">Digital pathology in drug discovery and development: multisite integration.</a> Drug Discovery Today. 14 (19-20), 935-941 (2009).</li><li>Tabata, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-slide+imaging+at+primary+pathological+diagnosis:+Validation+of+whole-slide+imaging-based+primary+pathological+diagnosis+at+twelve+Japanese+academic+institutes.">Whole-slide imaging at primary pathological diagnosis: Validation of whole-slide imaging-based primary pathological diagnosis at twelve Japanese academic institutes.</a> Pathology International. 67 (11), 547-554 (2017).</li><li>Saco, A., Bombi, J. A., Garcia, A., Ram&#237;rez, J., Ordi, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Status+of+Whole-Slide+Imaging+in+Education.">Current Status of Whole-Slide Imaging in Education.</a> Pathobiology. 83 (2-3), 79-88 (2016).</li><li>Griffin, J., Treanor, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Digital+pathology+in+clinical+use:+where+are+we+now+and+what+is+holding+us+back?.">Digital pathology in clinical use: where are we now and what is holding us back?.</a> Histopathology. 70 (1), 134-145 (2017).</li></ol>

Tüm slayt tarama güçlü tarama ve klinik ve araştırma amaçlı yüksek kaliteli görüntüler üretimi için sıcak bir konu haline geliyor11,12,13. Görseller,11,12,13dakika içinde slayt tarama mikroskopları tarafından üretilebilmektedir. Bu metodolojisi uygulayarak, ZWıNT ıFC slaytları için yüksek kaliteli görüntüler ...

ZW10 etkileşime giren protein (zwint), mitotik mil kontrol noktası1,2,3' te yer alan kinetochore kompleksinin gerekli bir bileşenidir. Bu zwint tükenmesi anormal prematüre kromozom segregasyon1,2,3yol açmaktadır bildirilmiştir. Son çalışmalar, zwint 'in tümör hücrelerinin proliferasyonunun yaygınlaştırılması ile multipl tümörlerin patogenezine dahil olduğunu öne sürdü4,5. Daha önce akciğer kanserinde zwınt ekspresyonu bildirdi5. CLM kullanarak patologlar tarafından slaytların Analizi zaman alıcı ve niceliksel6,7,8olduğunu yaygın olarak kabul edilmiştir. Dahası, saklanan cam slaytların bozulması daha önce oluşturulan slaytları geri çekmek imkansız hale gelebilir. Bilgisayar tabanlı, dijital tüm slayt görüntüleme (WSI) gelişmekte olan yöntem bu sınırlamalar6,7,8üstesinden gelebilir.
Bu amaçla, insan akciğer kanseri dokularında zwınt immün boyama bir metodoloji tarif, tüm slayt dijital tarama ve yazılım tabanlı görüntü analizi ile birleştiğinde. Bu metodolojinin ana avantajı, CLM ile uyumlu sonuçlar üretilmesi. Bu teknoloji, Hematoksilin-eozin lekeleme (H & E) ve IHC, floresans in situ hibridizasyon (balık), doku mikrodizileri (TMA) ve ilaç keşfi ve gelişimi gibi patolojik skorlama alanlarında yaygın olarak kullanılabilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Pannoramic MIDI</td>
			<td>3D HISTECH</td>
			<td>Cat: PMIDI-040709</td>
			<td>An automated digital slide scanner with a remarkable feature set :12-slide capacity, fluorescence scanning, and many more.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuantCenter</td>
			<td>3D HISTECH</td>
			<td>Downloaded from the official website of the company</td>
			<td>The framework for 3DHISTCH&#39;s image analysis applications.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA RM2235</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>Cat: 14050038604</td>
			<td>The enhanced precision of the new accessories will add convenience to block to knife approach as well as specimen orientation.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit anti-human Anti-ZWINT antibody</td>
			<td>Abcam</td>
			<td>Cat: ab197794</td>
			<td>Immunohistochemical analysis of ZWINT in human lung tissue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit secondary antibody</td>
			<td>Wuhan Goodbio Technology</td>
			<td>Cat:GB23303-1</td>
			<td>Secondary antibody for IHC staining.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-buffered saline</td>
			<td>Wuhan Goodbio Technology</td>
			<td>Cat:G0002</td>
			<td>A solution containing a phosphate buffer.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>OLYMPUS CX23</td>
			<td>OLYMPUS</td>
			<td>Cat:6M87620</td>
			<td>Microscope for detection of H&#38;E or IHC slides.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylbenzene</td>
			<td>Shanghai Lingfeng Chemical Reagent</td>
			<td>Cat:1330-20-7</td>
			<td>A colorless, flammable fluid used as a solvent and clarifying agent in the preparation of tissue sections for microscopic study.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin Staining Solution</td>
			<td>Wuhan Servicebio technology</td>
			<td>Cat:G1039</td>
			<td>It is commonly used for histologic studies, oftern colors the nuclei of cells blue.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Baitg</td>
			<td>Cat:2005-64-5</td>
			<td>It is a polysorbate-type nonionic surfactant formed by the ethoxylation of sorbitan before the addition of lauric acid. It is used as a deterent and emulsifier in pharmacological applications.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid repair liquid</td>
			<td>Wuhan Servicebio technology</td>
			<td>Cat:G1202</td>
			<td>Is is used to repair antigen after fixation during IHC procedure.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA ASP200s</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Cat: 14048043626</td>
			<td>It was designed for routine and research histopathology of up to 200 cassettes.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA Arcadia H</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Cat: 14039354103</td>
			<td>It is a heated paraffin embedding station and allows for simple operation and precise control, resulting in improved quality, a smooth workflow and reliability.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LEICA Arcadia C</td>
			<td>Leica</td>
			<td>Cat: 14039354102</td>
			<td>It is a cold plate holding more than 60/65 cassettes on its large working surface. It was designed with an environment adaptive control module to make sure the operating temperature is always stabilized at -6&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaseViewer Software</td>
			<td>3DHISTECH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

digital analysis of immunostaining of zw10 interacting protein in human lung tissues

Bu çalışmanın amacı, insan akciğer dokularının immunoster bir metodolojisi tanıtmak, tüm slayt dijital tarama ve görüntü analizi izledi. Dijital tarama, bir slayt yığınını taramak ve yüksek kalitede dijital görüntüler üretmek için hızlı bir yoldur. Bu, patologlar tarafından konvansiyonel ışık mikroskobu (CLM) ile uyumlu sonuçlar üretebilir. Ayrıca, dijital görüntülerin kullanılabilirliği, aynı slaytın birden çok kişi tarafından aynı anda gözlemlenmesini mümkün kılar. Ayrıca, slaytların dijital görüntüleri bir veritabanında depolanabilir, bu da cam kaydırakların uzun süreli bozulmasını önlenir. Bu tekniğin sınırlamaları aşağıdaki gibidir. İlk olarak, yüksek kaliteli hazırlanmış doku ve orijinal immünhistokimya (ıHC) herhangi bir hasar veya aşırı sızdırmazlık kalıntısı olmadan slaytlar gerekir. İkinci olarak, tümör veya nontümör alanları Puanlama sırasında tümör veya nontümör alanları hakkında herhangi bir karışıklık önlemek için, yazılım kullanarak analiz önce deneyimli patologlar tarafından belirtilmelidir. Üçüncü olarak, operatör tüm slayt görüntüleme içinde dijitalleştirme işlemi boyunca renk çoğaltılması kontrol etmek gerekir.

ZWıNT 'in ifade düzeylerini, ıHC tarafından 14 skuayöz Hücre Karsinomu (SCCs) ve 14 adenokarsinomları (ADCs) dahil olmak üzere, küçük hücreli olmayan akciğer kanseri (NSCLC) numunelerinin (tümör ve bitişik nontümör dokularında) 28 çifti olarak ölçtük. Slaytların tüm slayt dijital tarama yüksek kalitede dijital görüntüler (Şekil 1a) sağladı. Sonuçlar, akciğer kanserinin H-skoru komşu noncancer dokulardan önemli ölçüde dah...

Watch this Scientific Journal Video about Digital Analysis of Immunostaining of ZW10 Interacting Protein in Human Lung Tissues at JoVE.com

Digital Analysis of Immunostaining of ZW10 Interacting Protein in Human Lung Tissues

Insan akciğer dokularında ZW10 etkileşim protein Immünoster dijital Analizi

ZW10 etkileşen protein (ZWıNT) mitotik mil kontrol noktasına ve karsinomun patogenezine katılır. Burada, insan akciğer kanseri dokularında zwınt immün boyama bir metodoloji tanıtmak, tüm slaytlar ve görüntü analizi dijital tarama izledi. Bu metodoloji, yüksek kaliteli dijital görüntüler ve güvenilir sonuçlar sağlayabilir.

The purpose of this study is to introduce a methodology of the immunostaining of human lung tissues, followed by whole-slide digital scanning and image ...

Bu yöntem patolojik ve immünohistokimya anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir. Bu tekniğin en büyük avantajı yeterince hızlı ve yüksek kalitede dijital medya üretir. Oda sıcaklığında 24 saat boyunca% 4 paraformaldehit bir üç-by-üç santimetre kung doku örneği sabitleme ile başlayın.Ertesi gün, oda sıcaklığında artan etanol daldırma doku dehydrate, tedavi başına 20 dakika boyunca% 100 ksilen üç daldırma izledi. Son ksilen daldırma sonra, 30 dakika boyunca 63 derece santigrat parafin doku yerleştirin, taze 63 derece santigrat parafin ikinci bir 45 dakikalık daldırma takip, sonra son bir saatlik kuluçka için bir kez daha parafin değiştirin. Parafin soğuduğunda, parafin gömülü doku örneğinin beş mikrometre kalınlığındaki bölümlerini elde etmek için döner bir mikrotom kullanın ve mililitre başına 20 mikrogramlık poli-L-l-lizin kaplı slaytların kesitlerini yakalayın.Dewaxing için, iki saat boyunca 65 derece santigrat fırında slaytlar yerleştirin, dimetilbenzen daldırma ardından 15 dakika ve 15 dakika boyunca% 100 ksilen içinde ıslatma, sonra azalan bir etanol daldırma serisi slaytlar rehydrating. Antijen onarımı için, bir antijen onarım kutusuna slaytlar yerleştirin ve kutuya sitrik asit onarım sıvı 300 mililitre ekleyin. Isı iki dakika boyunca yüksek güçte bir mikrodalga fırında kutu, altı dakika kaynama sürdürmek için düşük güçte ısıtma izledi.Slaytlar oda sıcaklığına kadar soğuduğunda, doku örneklerini oda sıcaklığında döner çalkalayıcıda üç beş dakikalık 0.01 molar PBS yıkar ile yıkayın. Endojen peroksidaz ortadan kaldırmak için, oda sıcaklığında ıslak bir kutu içinde 30 dakika boyunca çift distile suda% 3 hidrojen peroksit ile slaytlar inkübed. Kuluçka sonunda, slaytları gösterildiği gibi yıkayın ve her bölümdeki nonspesifik bağlanmayı 100 mikrolitre 10 mikrolitre 10 keçi serumu ile 39 dakika boyunca 37 santigrat derecede takın.Daha sonra, bir gecede slayt başına 100 mikrolitre anti-ZWINT antikor içeren dokuları etiketle, ardından 0,01 molar PBS'de üç yıkayArak etiketlendi. Son yıkamadan sonra, 37 santigrat derece 30 dakika için uygun bir ikincil antikor ile slaytlar kuluçka, üç 0.01 molar PBS yıkar izledi. Son yıkamadan sonra, 10 dakika boyunca taze DAB 300 mikrolitre slaytlar ekleyin, oda sıcaklığında musluk suyu ile 10 saniyelik yıkama izledi.Sayaçlar oda sıcaklığında iki dakika hematoksilin boyama çözeltisi ile dokuları lekeler, ardından musluk suyunda 15 dakika yıkar, ardından artan etanol daldırmadoku tekrar dehydrate, oda sıcaklığında ksilen iki 15 dakikalık daldırma takip. Son %100 etanol daldırma sonra, nötr diş eti çözeltisi% 5 ksilen 15 mikrolitre ile bölümleri monte ve bir kapak camı ile her doku örneğini kaplayın. Bölümlerin otomatik olarak tam slayt taraması için, önce doku örneklerini kurutmak için slaytların oda sıcaklığında 12 saat kurumasını bekleyin.Ardından, otomatik tüm slayt tarayıcısında Brightfield'ı el ile seçin ve manuel tarama arabirimine girin. Slaytların adını gözden geçirin ve görüntüler için bir depolama yolu seçin. Tarama alanını ayarlayın ve Kullanıcı Ayarlı Eşikler seçeneğini kullanarak tarama örneklerini seçin.Eşik 200 mikrometre tarama alanı genişleme değeri ile yaklaşık 50 olduğunu. Tarama lı odak değerini ayarlayın ve Otomatik Odaklama ve Tek Katman modunu seçin, ardından slaytları iş istasyonuna yükleyin ve otomatik taramayı başlatın. Tüm slaytlar tarandığında, görüntüleri daha sonraki çözümlemeiçin kaydedin.Akciğer dokusu bölümlerinin görüntülerini analiz etmek için histopatolojik görüntü analiz yazılımını açın ve tarama verileriyle dosyayı açmak için Yerel Bilgisayar'ı seçin. Uygun yakınlaştırma düzeyini seçin ve rengi en uygun karşıtlaşmaya ayarlamak için Renk Ayarlama'yı kullanın, ardından her görüntüde ilgi çekici bölgeleri daire içine alın ve adlayın. Ardından, eklentiler altında QC'yi seçin. Senaryo Oluşturucu açılır.Yoğunluk Quant'ı seçin ve algılama çubuğunu ayarlayın. Daire içine alınan alanların boyama yoğunluğu orijinal görüntülere benzeyene kadar puan düzeylerini ayarlayın ve modeli yeni bir dosya olarak saklayın ve adlandırın, ardından modeli diğer slaytlara uygulayın ve yazılımın her görüntüdeki ilgi alanlarıiçin APE puanını otomatik olarak hesaplamasını sağlamak için Seçili Ek Açıklama'yı seçin. Küçük hücreli dışı akciğer kanseri örneklerinden tümörün akciğer dokusu bölümlerinin ve komşu tümör dışı dokuların tam slaytlı dijital taraması, yüksek kalitede dijital görüntüler üretmektedir.Bu tip akciğer kanseri örneklerinden hesaplanan APE skorları tipik olarak komşu kanser dışı dokular için belirlenenlerden önemli ölçüde daha yüksektir. Buna ek olarak, skuamöz hücreli karsinom doku kesitlerinde ZWINT ekspresyon düzeyleri sıklıkla abnokarsinom doku örneklerinde ölçülenlere göre anlamlı olarak daha yüksek olarak belirlenmiştir. Bu işlemi denerken patolojik tarama yaparken tümör veya tümör bölgelerinin yüksek kalitede hazırlanmasını unutmamak önemlidir.Bu işlemden sonra ek soruları cevaplamak için mikroskopinin diğer yöntemleri de yapılabilir. Patolojik tarama için ne de farklı bir yöntem. Bu teknikten sonra patolojik tarama alanında araştırmacıların araştırma amaçlı dijital tanıyı keşfetmelerinin önünü açmıştır.Paraformaldehit ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve bu işlemi gerçekleştirirken maske gibi önlemlerin her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo Imaging of Resident CD8 T Lymphocytes in Human Lung Tumor Slices Using Confocal Microscopy

Ex Vivo İnsan akciğer tümörü içinde ikamet CD8 T lenfositlerin görüntüleme Confocal mikroskobu kullanma dilim

CD8 T cell are key players in the fight against cancer. In order for CD8 T cells to kill tumor cells they need to enter into the tumor, migrate within the ...

The Establishment of a Lung Colonization Assay for Circulating Tumor Cell Visualization in Lung Tissues

Tümör hücre görselleştirme akciğer dokusu içinde dolaşan bir akciğer kolonizasyon tahlil kurulması

Metastasis is the major cause of cancer death. The role of circulating tumor cells (CTCs) in promoting cancer metastasis, in which lung colonization by ...

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

Detection of a CDH1 Rare Transcript Variant in Fresh-frozen Gastric Cancer Tissues by Chip-based Digital PCR

Bir CDH1 nadir transkript değişken mide kanseri taze donmuş dokularda çip tabanlı dijital PCR tarafından algılanması

CDH1a, a non-canonical transcript of the CDH1 gene, has been found to be expressed in some gastric cancer (GC) cell lines, whereas it is absent in normal ...

Desthiobiotin-Streptavidin-Affinity Mediated Purification of RNA-Interacting Proteins in Mesothelioma Cells

Desthiobiotin-Streptavidin-benzeşme arıtma mezotelyoma hücrelerdeki RNA etkileşim proteinlerin aracılı

The in vitro RNA-pulldown is still largely used in the first steps of protocols aimed at identifying RNA-binding proteins that recognize specific RNA ...

Elastic Staining on Paraffin-embedded Slides of pT3N0M0 Gastric Cancer Tissue

Parafin üzerinde elastik boyama-pT3N0M0 gastrik kanser dokusu gömülü slaytlar

The elastic lamina, which is usually located in the sub-mesothelial layer, adjacent to the peritoneum mesothelial cells, is amphiphilic on hematoxylin and ...

Droplet Digital TRAP (ddTRAP): Adaptation of the Telomere Repeat Amplification Protocol to Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

Droplet Digital TRAP ddTRAP: Adaptation of the Telomere Repeat Amplification Protocol to Droplet Digital Polymerase Chain Reaction

Damlacık dijital tuzak (ddTRAP): telomere tekrar amplifikasyon protokolünün droplet dijital polimeraz zincir reaksiyonuna adaptasyon

The telomere repeat amplification protocol (TRAP) is the most widely used assay to detect telomerase activity within a given a sample. The polymerase ...

Radiosensitivity of Cancer Stem Cells in Lung Cancer Cell Lines

Akciğer Kanseri Hücre Hatlarında Kanser Kök Hücrelerinin Radyosensitivite

The presence of cancer stem cells (CSCs) has been associated with relapse or poor outcomes after radiotherapy. Studying radioresistant CSCs may provide ...

Preparation of Mitochondria from Ovarian Cancer Tissues and Control Ovarian Tissues for Quantitative Proteomics Analysis

Yumurtalık Kanseri Dokularından Mitokondri Hazırlanması ve Kantitatif Proteomik Analizi Için Yumurtalık Dokularının Kontrolü

Ovarian cancer is a common gynecologic cancer with high mortality but unclear molecular mechanism. Most ovarian cancers are diagnosed in the advanced ...

Detection of Lung Tumor Progression in Mice by Ultrasound Imaging

Ultrason Görüntüleme ile Farelerde Akciğer Tümörü İlerlemesinin Saptanması

With ~1.6 million victims per year, lung cancer contributes tremendously to the worldwide burden of cancer. Lung cancer is partly driven by genetic ...

Pathological Analysis of Lung Metastasis Following Lateral Tail-Vein Injection of Tumor Cells

Tümör Hücrelerinin Lateral Kuyruk-Damar Enjeksiyonu Sonrasında Akciğer Metastazının Patolojik Analizi

Metastasis, the primary cause of morbidity and mortality for most cancer patients, can be challenging to model preclinically in mice. Few spontaneous ...