Name: in vitro method to control concentrations of halogenated gases in cultured alveolar epithelial cells
Uploaded: 2018-10-23T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Method to Control Concentrations of Halogenated Gases in Cultured Alveolar Epithelial Cells at JoVE.com

الكتاب يعترف المجلس الإقليمي اوفرن ("برنامج نوفو تشيرتشيور de la ضمور اوفيرني" عام 2013) والفرنسية الوكالة الوطنية للبحث ودي الاتجاه Générale de L'Offre سوينس (برنامج بحوث de ترانسلاتيوننيلي en "الصحة" ANR-13-PRTS-0010) للمنح. وكان الممولين لا تؤثر في تصميم الدراسة والسلوك، والتحليل، أو في إعداد هذه المادة.

1-ثقافة "الخلايا الظهارية السنخية" (حلبي)
<ol><li>ذوبان الجليد<ol>
<li>"الماصة؛" 4 مل من زراعة جاهزة للاستخدام البشري السنخية الظهارية (هوايك) المتوسطة في أنبوب بلاستيك 15 مل وسرعة ذوبان الجليد القنينة في حمام مائي مسخن (37 درجة مئوية).</li>
		<li>نقل تعليق خلية المذابة إلى أنبوب بلاستيك 15 مل يحتوي على 4 مل ...

<ol>
	<li>Bellani, G., Laffey, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology,+Patterns+of+Care,+and+Mortality+for+Patients+With+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome+in+Intensive+Care+Units+in+50+Countries.">Epidemiology, Patterns of Care, and Mortality for Patients With Acute Respiratory Distress Syndrome in Intensive Care Units in 50 Countries.</a> JAMA:T Journal of the American Medical Association. 315 (8), 788-800 (2016).</li><li>Thompson, B. T., Chambers, R. C., Liu, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Respiratory+Distress+Syndrome.">Acute Respiratory Distress Syndrome.</a> The New England Journal of Medicine. 377 (6), 562-572 (2017).</li><li>Weiser, T. G., Regenbogen, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+estimation+of+the+global+volume+of+surgery:+a+modelling+strategy+based+on+available+data.">An estimation of the global volume of surgery: a modelling strategy based on available data.</a> The Lancet. (9633), 139-144 (2008).</li><li>Khuri, S. F., Henderson, W. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determinants+of+long-term+survival+after+major+surgery+and+the+adverse+effect+of+postoperative+complications.">Determinants of long-term survival after major surgery and the adverse effect of postoperative complications.</a> Annals of Surgery. 242 (3), 341-343 (2005).</li><li>De Conno, E., Steurer, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anesthetic-induced+improvement+of+the+inflammatory+response+to+one-lung+ventilation.">Anesthetic-induced improvement of the inflammatory response to one-lung ventilation.</a> Anesthesiology. 110 (6), 1316-1326 (2009).</li><li>Fu, H., Sun, M., Miao, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+different+concentrations+of+isoflurane+pretreatment+on+respiratory+mechanics,+oxygenation+and+hemodynamics+in+LPS-induced+acute+respiratory+distress+syndrome+model+of+juvenile+piglets.">Effects of different concentrations of isoflurane pretreatment on respiratory mechanics, oxygenation and hemodynamics in LPS-induced acute respiratory distress syndrome model of juvenile piglets.</a> Experimental Lung Research. 41 (8), 415-421 (2015).</li><li>Reutershan, J., Chang, D., Hayes, J. K., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+isoflurane+pretreatment+in+endotoxin-induced+lung+injury.">Protective effects of isoflurane pretreatment in endotoxin-induced lung injury.</a> Anesthesiology. (3), 511-517 (2006).</li><li>Uhlig, C., Bluth, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Volatile+Anesthetics+on+Mortality+and+Postoperative+Pulmonary+and+Other+Complications+in+Patients+Undergoing+Surgery:+A+Systematic+Review+and+Meta-analysis.">Effects of Volatile Anesthetics on Mortality and Postoperative Pulmonary and Other Complications in Patients Undergoing Surgery: A Systematic Review and Meta-analysis.</a> Anesthesiology: The Journal of the American Society of Anesthesiologists. 124 (6), 1230-1245 (2016).</li><li>Li, Q. F., Zhu, Y. S., Jiang, H., Xu, H., Sun, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+preconditioning+ameliorates+endotoxin-induced+acute+lung+injury+and+mortality+in+rats.">Isoflurane preconditioning ameliorates endotoxin-induced acute lung injury and mortality in rats.</a> Anesthesia and Analgesia. (5), 1591-1597 (2009).</li><li>Voigtsberger, S., Lachmann, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sevoflurane+ameliorates+gas+exchange+and+attenuates+lung+damage+in+experimental+lipopolysaccharide-induced+lung+injury.">Sevoflurane ameliorates gas exchange and attenuates lung damage in experimental lipopolysaccharide-induced lung injury.</a> Anesthesiology. (6), 1238-1248 (2009).</li><li>Englert, J. A., Macias, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isoflurane+Ameliorates+Acute+Lung+Injury+by+Preserving+Epithelial+Tight+Junction+Integrity.">Isoflurane Ameliorates Acute Lung Injury by Preserving Epithelial Tight Junction Integrity.</a> Anesthesiology. (2), 377-388 (2015).</li><li>Jabaudon, M., Boucher, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sevoflurane+for+Sedation+in+ARDS:+A+Randomized+Controlled+Pilot+Study.">Sevoflurane for Sedation in ARDS: A Randomized Controlled Pilot Study.</a> American Journal of Respiratory and Critical. , (2016).</li><li>Blondonnet, R., Audard, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAGE+inhibition+reduces+acute+lung+injury+in+mice.">RAGE inhibition reduces acute lung injury in mice.</a> Scientific Reports. 7 (1), (2017).</li><li>Jabaudon, M., Blondonnet, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+Receptor+for+Advanced+Glycation+End-Products+Predicts+Impaired+Alveolar+Fluid+Clearance+in+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome.">Soluble Receptor for Advanced Glycation End-Products Predicts Impaired Alveolar Fluid Clearance in Acute Respiratory Distress Syndrome.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 192 (2), 191-199 (2015).</li><li>Jabaudon, M., Blondonnet, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soluble+Forms+and+Ligands+of+the+Receptor+for+Advanced+Glycation+End-Products+in+Patients+with+Acute+Respiratory+Distress+Syndrome:+An+Observational+Prospective+Study.">Soluble Forms and Ligands of the Receptor for Advanced Glycation End-Products in Patients with Acute Respiratory Distress Syndrome: An Observational Prospective Study.</a> PloS One. 10 (8), e0135857 (2015).</li><li>Kuehn, A., Kletting, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+alveolar+epithelial+cells+expressing+tight+junctions+to+model+the+air-blood+barrier.">Human alveolar epithelial cells expressing tight junctions to model the air-blood barrier.</a> ALTEX. 33 (3), 251-260 (2016).</li><li>Yue, T., Roth Z'graggen, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postconditioning+with+a+volatile+anaesthetic+in+alveolar+epithelial+cells+in+vitro.">Postconditioning with a volatile anaesthetic in alveolar epithelial cells in vitro.</a> The European Respiratory Journal: Official Journal of the European Society for Clinical Respiratory Physiology. 31 (1), 118-125 (2008).</li><li>Suter, D., Spahn, D. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immunomodulatory+effect+of+sevoflurane+in+endotoxin-injured+alveolar+epithelial+cells.">The immunomodulatory effect of sevoflurane in endotoxin-injured alveolar epithelial cells.</a> Anesthesia and Analgesia. (3), 638-645 (2007).</li><li>Schl&#228;pfer, M., Leutert, A. C., Voigtsberger, S., Lachmann, R. A., Booy, C., Beck-Schimmer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sevoflurane+reduces+severity+of+acute+lung+injury+possibly+by+impairing+formation+of+alveolar+oedema.">Sevoflurane reduces severity of acute lung injury possibly by impairing formation of alveolar oedema.</a> Clinical and Experimental Immunology. (1), 125-134 (2012).</li><li>Nickalls, R. W. D., Mapleson, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Age-related+iso-MAC+charts+for+isoflurane,+sevoflurane+and+desflurane+in+man.">Age-related iso-MAC charts for isoflurane, sevoflurane and desflurane in man.</a> British Journal of Anaesthesia. 91 (2), 170-174 (2003).</li><li>Bourdeaux, D., Sautou-Miranda, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+assay+of+plasma+sevoflurane+and+its+metabolite+hexafluoroisopropanol+by+headspace+GC-MS.">Simple assay of plasma sevoflurane and its metabolite hexafluoroisopropanol by headspace GC-MS.</a> Journal of Chromatography. B, Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 878 (1), 45-50 (2010).</li><li>Eger, E. I., Saidman, L. J., Brandstater, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimum+alveolar+anesthetic+concentration.">Minimum alveolar anesthetic concentration.</a> Anesthesiology. 26 (6), 756-763 (1965).</li><li>Perbet, S., Fernandez-Canal, C., Pereira, B., Cardot, J. M., Bazin, J. E., Constantin, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+Richmond+Agitation+Sedation+Scale+According+To+Alveolar+Concentration+of+Sevoflurane+During+a+Sedation+With+Sevoflurane+in+Icu+Patients.">Evaluation of Richmond Agitation Sedation Scale According To Alveolar Concentration of Sevoflurane During a Sedation With Sevoflurane in Icu Patients.</a> Intensive Care Medicine Experimental. 3 (Suppl 1), (2015).</li><li>Goolaerts, A., Pellan-Randrianarison, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conditioned+media+from+mesenchymal+stromal+cells+restore+sodium+transport+and+preserve+epithelial+permeability+in+an+in+vitro+model+of+acute+alveolar+injury.">Conditioned media from mesenchymal stromal cells restore sodium transport and preserve epithelial permeability in an in vitro model of acute alveolar injury.</a> American Journal of Physiology. Lung Cellular and Molecular Physiology. 306 (11), L975-L985 (2014).</li></ol>

لدينا بروتوكول وصف طريقة سهلة للكشف عن خلايا لجزء محدد من عامل مخدر المهلجنة، مثل سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني. وعلاوة على ذلك، لدينا تقرير هنا – لأول مرة – علاقة صارمة بين الكسر الغاز وتركيز سيفوفلوراني وإيسوفلوراني داخل المتوسطة الثقافة نفسها. هذه الخطوة الأساسية الآن يسمح لنا باستخدام...

متلازمة الضائقة التنفسية الحادة (اردز) متلازمة سريرية تتميز بإصابة التهاب منتشر وذمة الرئة هيبوكسيميك فشل في الجهاز التنفسي. على الرغم من الضائقة يمثل أكثر من 10% قبول في وحدة الرعاية المركزة (اتحاد المحاكم الإسلامية) وما يقرب من 25 في المائة من مرضى العناية المركزة التي تتطلب التهوية الميكانيكية، إلا أنها لا تزال تشكل تحديا المعترف بها بالنسبة للأطباء، مع معدل وفيات مستشفى من 35-45%1. على الرغم من الأبحاث المكثفة، لم تاريخ تحديد فعالية الضائقة دوائية العلاج أو الوقاية. اثنين من الميزات الرئيسية المساهمة في معدلات الوفيات في الضائقة: ضعف في إزالة السوائل السنخية (كأس آسيا) (أي، غيرت ارتشاف السوائل ذمة السنخية من أجوائها الرئة القاصي) والتهاب حاد2. نظراً للضائقة الوفيات ما زالت مرتفعة، المبادرات الحالية وينبغي أن تشمل أيضا الوقاية الأولية؛ ومع ذلك، تحديا رئيسيا تحديد المرضى المعرضين للخطر في منهم الضائقة من المرجح أن تطوير والذي سيستفيد إذا منعوا الضائقة.
المسكنات المهلجنة المتقلبة، مثل سيفوفلوراني وإيسوفلوراني، تستخدم على نطاق واسع لتقديم التخدير العام في غرفة العمليات. في جميع أنحاء العالم، أكثر من 230 مليون من المرضى الذين يخضعون لعمليات جراحية كبرى كل سنة تتطلب التخدير العام والتهوية الميكانيكية3، والمضاعفات الرئوية بعد العملية الجراحية تؤثر سلبا على النتائج السريرية واستخدام الرعاية الصحية4 . استخدام سيفوفلوراني بدلاً من بروبوفول ارتبط بالتهاب الرئة محسنة في المرضى الذين يخضعون لجراحة الصدر وحدوث انخفاض كبير في الأحداث السلبية، مثل الضائقة والمضاعفات الرئوية بعد العمل الجراحي5. وبالمثل، المعالجة المسبقة مع isoflurane آثار واقية على ميكانيكا التنفس والأوكسجين والهليوكبتر في نماذج حيوانية تجريبية من الضائقة6،7. على الرغم من أن هناك ما يبرر إجراء المزيد من الدراسات لمعالجة تأثير العوامل المستنشقة على النتائج في جراحة noncardiac، تخفيض مماثل في المضاعفات الرئوية وقد لوحظ مؤخرا في تحليل تلوي، مما يدل على أن استنشاق مخدر وكلاء – ك وتعارض التخدير عن طريق الحقن الوريدي – ترتبط إلى حد كبير مع انخفاض في معدل الوفيات لجراحة القلب8.
لا تتوفر بيانات مستقبلية محددة حول استخدام العوامل المتقلبة لتخدير المرضى العناية المركزة لمنع أو علاج الضرر الرئة. ومع ذلك، عدة محاكمات الآن دعم فعالية وسلامة سيفوفلوراني المستنشق لتخدير المرضى في وحدة العناية المركزة، وقد أظهرت الدراسات الإكلينيكية أن استنشاق سيفوفلوراني و7،إيسوفلوراني9 تحسين تبادل الغازات، والحد الوذمة السنخية، والتهاب تهذيب في نماذج تجريبية من الضائقة. بالإضافة إلى ذلك، يخفف سيفوفلوراني النوع الثاني الخلايا الظهارية الأضرار10، بينما isoflurane يحافظ على سلامة الحاجز السنخية الشعرية عن طريق التحوير من مفرق ضيق البروتين11. بيد أنه يلزم إجراء المزيد من الدراسات للتحقق من وإلى أي مدى يمكن ترجمة الأدلة التجريبية لحماية الجهاز من استنشاق سيفوفلوراني وإيسوفلوراني للبشر. أول واحدة-مركز التحكم-معشاة (RCT) من مجموعتنا وجدت أن الاستخدام المبكر لاستنشاق سيفوفلوراني في المرضى الذين يعانون من الضائقة ترافق مع تحسن الأوكسجين، انخفاض مستويات بعض علامات برو التحريضية، وانخفاض الرئة طلائي الضرر، حسب تقييم مستويات شكل المستقبلات متقدمة glycation المنتجات النهائية (سراج) قابل للذوبان في السوائل البلازما والسنخيه12.
أخذت معا، الآثار المفيدة سيفوفلوراني وإيسوفلوراني على إصابة الرئة يمكن أن يشير إلى العديد من الممرات البيولوجية أو العمليات الفنية التي تعتمد على المسار الغضب، أي إزالة السوائل السنخية (الاتحاد الآسيوي)، وإصابة الظهارية، إزفاء عامل النووي (NF)-κB، وتفعيل بلعم. وبالإضافة إلى ذلك، قد تؤثر sevoflurane التعبير عن البروتين الغضب نفسها. نظراً للبحوث السابقة التي لدينا فريق البحوث وغيرها يدعم دور محوري للغضب في التهاب السنخية والرئة الظهارية الإصابة/إصلاح خلال الضائقة، قمنا بتصميم نموذج تجريبي لتوفير فهم متعدية لآليات سيفوفلوراني في الرئة الإصابة وإصلاح13،،من1415. تم التحقيق في المختبر آثار سيفوفلوراني وإيسوفلوراني في خط رواية السنخية الظهارية الابتدائية خلية بشرية المصممة خصيصا لدراسة حاجز الدم الهواء في الرئة المحيطية، حلبي (البشرية LentiVirus طلائي السنخية خلد)، مع نوع السنخية-مثل الخصائص بما في ذلك الوصلات ضيق الوظيفية16.
أثناء إعداد تصميم تحقيقاتنا في المختبر (مثلاً من الثقافات من الخلايا الظهارية السنخية في واجهة الهواء السائل مع التعرض إلى "استنشاق" سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني، أدركنا من نشر قبل الدراسات التي وقد قسمت فقط كسور سيفوفلوراني في "الهواء" واجهة17،،من1819 استخدام الشاشات القياسية (مماثلة لتلك المستخدمة في إعداد سريرية). عامل المهلجنة تركيزات اختيرت عادة وفقا لقيم الحد الأدنى من تركيز السنخية (ماك) (مثلاً، في البشر، سيفوفلوراني، 0.5 و 1.1 والمجلد 2.2 في المائة، تمثل 0.25 و 0.5 و 1 ماك، إيسوفلوراني، 0.6، 0.8، على التوالي؛ و 20من المجلد 1.3% يمثلون 0.25 و 0.5 و 1 ماك، على التوالي). وفي الواقع، حققت تركيزات سيفوفلوراني وإيسوفلوراني ابدأ في المتوسط الثقافة نفسها، مما يحد من صلاحية الصكوك النماذج التجريبية السابقة. وعلاوة على ذلك، يستخدم معظم التجارب جرة اللاهوائية التي أغلقت بعد قد تم مسح سيفوفلوراني تحتوي على مزيج الهواء الداخل. كما أن هدفنا دراسة الخلايا الظهارية السنخية في ظروف "الفسيولوجية"، اعتقدنا أن دولة اللاهوائية قد لا يكون الحل الأمثل، ولن يكون متوافقاً مع فترات طويلة التجريبية. ولذلك، علينا تطوير نظامنا لخلايا الثقافة في واجهة الهواء السائل وتعرضها لوكلاء المهلجنة (سيفوفلوراني وإيسوفلوراني) بهدف توفير دقة الكسور التي تسيطر عليها "الهواء" وتركيزات "المتوسط" لهذه العوامل. وفي رأينا، هذه الخطوة التجريبية، التي لم تبلغ حتى الآن في الأدب، إلزامية قبل أي زيادة في المختبر التحقيقات سيفوفلوراني وإيسوفلوراني.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>Baxter</td>
			<td></td>
			<td>Performing experiments using sevoflurane or isoflurane while being pregnant should be strongly discouraged</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Virbac</td>
			<td></td>
			<td>Performing experiments using sevoflurane or isoflurane while being pregnant should be strongly discouraged</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Alveolar Epithelial cells</td>
			<td>InScreenex</td>
			<td>INS-CI-1015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>huAEC Medium (ready-to-use)</td>
			<td>InScreenex</td>
			<td>INS-ME-1013-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic machine circuit</td>
			<td>Drager</td>
			<td>Fabius</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas analyzer</td>
			<td>Drageer</td>
			<td>Vamos Plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic gas filter</td>
			<td>SedanaMedical</td>
			<td>FlurAbsord</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heated Humifier</td>
			<td>Fisher&#38;Paykel</td>
			<td>MR850</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chamber</td>
			<td>Curver</td>
			<td>00012-416-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gas chromatography coupled with mass detection</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA, USA</td>
			<td>Trace 1310 with TSQ 8000evo</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fused-silica column (30 m x 1.4 &#181;m, 0.25 mm ID)</td>
			<td>Restek, Lisses, France</td>
			<td>Rxi-624Sil MS</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vitro method to control concentrations of halogenated gases in cultured alveolar epithelial cells

متلازمة الضائقة التنفسية الحادة (اردز) مرض منتشر الإصابة السنخية مع إزالة السوائل السنخية البصر والتهاب حاد. استخدام وكلاء المهلجنة، مثل سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني، لتخدير المرضى في وحدة العناية المركزة (اتحاد المحاكم الإسلامية) يمكن تحسين تبادل الغازات والحد من الوذمة السنخية، وتخفف من التهاب أثناء الضائقة. ومع ذلك، تفتقر إلى البيانات المتعلقة باستخدام العوامل المستنشقة للتخدير المستمر في وحدة العناية المركزة لعلاج أو منع تلف الرئة. لدراسة آثار وكلاء المهلجنة في الخلايا الظهارية السنخية في ظروف "الفسيولوجية"، وصف نظام سهل لخلايا الثقافة في واجهة الهواء السائل ويعرضهم لوكلاء المهلجنة لتوفير الكسور الدقيقة التي تسيطر عليها "الهواء" و "المتوسطة" التركيزات لهذه العوامل. قمنا بتطوير دائرة الغلق مختومة التي يمكن أن تتعرض لوحات مع الخلايا البشرية السنخية الظهارية مخلدة لكسر الدقيقة، التي تسيطر عليها سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني باستخدام تدفق غاز مستمرة المقدمة من دائرة آلة مخدر. تعرض الخلايا إلى 4% سيفوفلوراني و 1% من إيسوفلوراني لمدة 24 ساعة. أجرى الغاز الكتلي لتحديد تركيز وكلاء المهلجنة حله في المتوسط. بعد الأول ساعة، وتركيزات سيفوفلوراني وإيسوفلوراني في المتوسط كانت 251 مغ/لتر و 25 مغ/لتر، على التوالي. حل منحنيات تمثل تركيزات سيفوفلوراني وإيسوفلوراني على المديين المتوسط وأظهرت دورات مماثلة على مر الزمن، مع هضبة الذي تم التوصل إليه في ساعة واحدة بعد التعرض.
هذا البروتوكول صمم خصيصا لتصل إلى تركيزات محددة والتي تسيطر عليها من سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني في المختبر لتحسين فهمنا للآليات التي تشارك في إصابة الرئة الظهارية خلال الضائقة واختبار علاجات جديدة متلازمة.

التركيزات من سيفوفلوراني وإيسوفلوراني، التي حلت في الأجل المتوسط على مر الزمن، ترد في الجدول 1 و الجدول 2، على التوالي.
الدورات الدراسية لتركيزات سيفوفلوراني وإيسوفلوراني في الأجل المتوسط كانت متشابهة مع مرور الوقت. فو...

Watch this Scientific Journal Video about In Vitro Method to Control Concentrations of Halogenated Gases in Cultured Alveolar Epithelial Cells at JoVE.com

In Vitro Method to Control Concentrations of Halogenated Gases in Cultured Alveolar Epithelial Cells

يصف لنا بروتوكولا سهلة مصممة خصيصا للوصول إلى التركيزات الدقيقة والتي تسيطر عليها من سيفوفلوراني أو إيسوفلوراني في المختبر بغية تحسين فهمنا للآليات التي تشارك في إصابة الرئة الظهارية واختبار الرواية العلاج لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة.

في المختبر أسلوب التحكم بتركيزات غازات المهلجنة في استزراع الخلايا الظهارية السنخية

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) is a syndrome of diffuse alveolar injury with impaired alveolar fluid clearance and severe inflammation. The ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على السؤال الرئيسي في مجال البحث عن إصابة الرئة وإصلاح مثل اختبار مساعد هالجنات كعلاجات جديدة محتملة لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة. والميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أنها تعتمد على طريقة بسيطة جدا لثقافة الخلايا وتعريضها لعوامل هالوجينة من أجل الوصول إلى تركيزات دقيقة وخاضعة للرقابة. لبناء غرفة محكم, استخدام مربع البولي بروبلين المحكم بسعة 6.5 لتر.حفر حفرة قطرها 2.5 سنتيمتر على الجانب السفلي من الجدار الجانبي للمربع. ثم إدراج أنبوب المموج مع علامة خضراء والتي ستكون بمثابة أنبوب مدخلات خليط الهواء الغاز. وختم مع السيليكون.بعد ذلك، حفر حفرة ثانية بقطر 2.5 سنتيمتر على الجانب العلوي من الجدار الجانبي المقابل. إدراج أنبوب آخر المموج مع علامة حمراء وربطه مع مرشح الفحم الذي سيكون بمثابة أنبوب إخراج خليط الهواء الغاز. ثم ختمه مع السيليكون.في وقت لاحق حفر حفرة ضيقة مع قطرها أربعة ملليمترات في وسط الجدار. إدراج أنابيب التسريب قصيرة التي يتم توصيلها في متعددة مع قفل إغراء الذكور الدورية. قم بتوصيله إلى محلل الغاز وختمه بالسيليكون.ثم ضع ميزان حرارة رقمي داخل الغرفة محكم. تحت غطاء مستخرج مختبر، تخصيص دائرة آلة مخدرة للتبديل خط غاز أكسيد النيتروز عن طريق ثاني أكسيد الكربون. أدخل مرطبًا ساخنًا في الأنبوب بين آلة التخدير والغرفة محكمًا لتدفئة خليط تدفق الغاز إلى حوالي 37 درجة مئوية.قم بتوصيل الغرفة محكم مع أنبوب المموج الأخضر ملحوظ في دائرة آلة التخدير المخصصة. المقبل، وضع غرفة محكم على لوحة ساخنة تعيين إلى 37 درجة مئوية. ضع ستة صحن يحتوي على خلايا ظهارية بشرية مقزّزة في غرفة محكم وختم الغطاء.تنظيم معدل تدفق الغاز للحصول بسرعة على 5٪ من ثاني أكسيد الكربون. ثم افتح متبخر العامل المهلجنة وقم بضبط النسبة المئوية المطلوبة. بمجرد تحقيق القيم المستهدفة، تقليل معدل تدفق الغاز الطازج إلى لتر واحد في الدقيقة.يمكن الحفاظ على غرفة محكم مع هذا معدل تدفق الغاز طالما لزم الأمر للتجربة. وكانت دورات تركيزات سيفوفلوران وإيزوفلوران في الوسط متشابهة مع مرور الوقت. مباشرة بعد تحديد التركيز المطلوب من العامل المهلجن ، ارتفعت التركيزات خلال الساعة الأولى.ثم تم التوصل إلى هضبة استمرت حتى تم إيقاف إدارة العامل المهلجن. بعد انقطاع الإدارة، انخفضت التركيزات في غضون ساعة واحدة. تظهر هنا كسور العامل المهلجن بمرور الوقت في غرفة محكم تقاس من قبل محلل الغاز.هذا الإجراء غير مكلفة نسبيا وسهلة جدا لاعتماد حتى عندما يكون الباحثون لم يتلاعب غرفة محكم من قبل. بعد هذا الإجراء، يمكن تنفيذ طرق أخرى مثل البروتين والرنا الكم، والفلوروس المناعية، وقياس نفاذية البروتين والنقل الحر من أجل الإجابة على الأسئلة حول الآثار المحددة للعوامل المهلجنة أثناء إصابة الرئة الظهارية وحسمها. بعد تطورها، قد تمهد هذه التقنية الطريق للبحث في مجال متلازمة الضائقة التنفسية الحادة لمواصلة دراسة الآلية التي تنطوي عليها إصابة الرئة الظهارية خلال ARDS واختبار العلاجات الجديدة.

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vitro Method to Control Concentrations of Halogenated Gases in Cultured Alveolar Epithelial Cells

A Simple Method of Mouse Lung Intubation

طريقة بسيطة لتركيب الانبوبة الرئة ماوس

A  simple procedure to intubate mice for pulmonary function measurements would  have several advantages in longitudinal studies with limited numbers or  ...

Cytotoxic Efficacy of Photodynamic Therapy in Osteosarcoma Cells In Vitro

Cytotoxic Efficacy of Photodynamic Therapy in Osteosarcoma Cells In Vitro

السامة للخلايا فعالية العلاج الضوئي في خلايا عظمية<em&gt; في المختبر</em

In recent years, there has been the difficulty in finding more effective therapies against cancer with less systemic side effects. Therefore Photodynamic ...

In vitro Method to Observe E-selectin-mediated Interactions Between Prostate Circulating Tumor Cells Derived From Patients and Human Endothelial Cells

In vitro Method to Observe E-selectin-mediated Interactions Between Prostate Circulating Tumor Cells Derived From Patients and Human Endothelial Cells

في الطريقة المختبر لمراقبة التفاعلات بوساطة selectin E-البروستاتا بين الخلايا السرطانية المنتشرة المستمدة من المرضى والبطانية الإنسان خلايا

Metastasis is a process in which tumor cells shed from the primary tumor intravasate blood vascular and lymphatic system, thereby, gaining access to ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

دراسة سرطان البنكرياس الجذعية خصائص الخلايا لتطوير استراتيجيات علاجية جديدة

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

نضوب خلايا الفأر من Xenografts ورم الإنسان يحسن بشكل ملحوظ تحليل المصب من الخلايا المستهدفة

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Studying the Role of Alveolar Macrophages in Breast Cancer Metastasis

دراسة دور السنخية الضامة في سرطان الثدي ورم خبيث

This paper describes the application of the syngeneic model of breast cancer (4T1) to the studies on a role of pulmonary alveolar macrophages in cancer ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Forskolin-الناجم عن تورم في الأمعاء Organoids: ل<em&gt; في المختبر</em&gt; الفحص لتقييم الاستجابة للدواء في التليف الكيسي المرضى

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

A طريقة لقياس أداء الطرف العلوي في الحياة اليومية عن طريق التسارع

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During In Vitro Wound Healing

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During  In Vitro Wound Healing

مجهرية على أساس أساليب التقييم للهجرة الخلية الظهارية أثناء التئام الجرح في المختبر

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

سحجه الظهارة القرنية مع لدغ العين كنموذج للقرنية التئام الجروح

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...