Name: ex vivo corneal organ culture model for wound healing studies
Uploaded: 2019-02-15T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies at JoVE.com

Dit werk werd gesteund door de NIH-NEI R01 EY024942, onderzoek te voorkomen blindheid, Upstate medische universiteit onbeperkte middelen voor onderzoek, en Lions District 20-Y. microscopie en beeldanalyse van paraffine secties werden uitgevoerd in de kern van de microscopie en histologische prepareren van objectglaasjes werd uitgevoerd in het Biorepository en de pathologie kern aan de School of Medicine van Icahn op de berg Sinaï.

1. orgel cultuur
<ol><li>
Voorbereidingen
	<ol>
<li>Bereid agar-oplossing als volgt. In een kleine kolf, bereiden 1% agar en 1 mg/mL boviene collageen in DMEM-F12 tot 20 mL. Breng aan de kook op een verwarmingsplaat. Zet de oplossing in een conische buis van 50 mL. Plaats de buis in een waterbad op een hete plaat om te voorkomen dat de oplossing stollen.</li>
		<li>Bereiden aangevuld serumvrij media (SSFM) volgens de samenstelling die in de Tabel van materialen. Opmerking:</...

Dit protocol beschrijft een model voor het bestuderen van de wondgenezing in een natuurlijke gestratificeerd 3D-omgeving. Gebruik van orgel cultuur als een intermediair tussen de celcultuur en in vivo onderzoek reduceert kosten alsmede vermindering procedures op levende dieren. Andere 3D-modellen hebben van groot nut zijn voor het veld inclusief zelf de synthese van collageen gels gemaakt van primaire menselijke hoornvlies fibroblasten2 of deze dezelfde cellen ingebed in gels gemaakt van dierlijke...

Littekens in het hoornvlies als gevolg van letsel, trauma of infectie kan leiden tot slopende opaciteit en permanente visie verlies. Er is dus dringend behoefte om te identificeren van de trajecten die voor therapeutische interventie kunnen worden gericht. Huidige behandelingsopties zijn beperkt en bestaat voornamelijk uit het hoornvlies transplantaties, die niet toegankelijk voor patiënten over de hele wereld zijn. Zowel de mens (Figuur 1) en de dierlijke hoornvlies kunnen worden gebruikt voor 2D en 3D-celkweek studies1,2. Menselijke cadaver hoornvlies niet geschikt is voor transplantatie kunnen worden verkregen van eye banken of gecentraliseerd weefselbanken (nationale ziekte onderzoek Interchange (NDRI)), en dierlijke ogen kunnen worden verkregen in een abattoir. Primaire hoornvlies epitheliale cellen, stromale fibroblasten en meer recentelijk, endotheliale cellen, kunnen worden geïsoleerd en gekweekt uit deze weefsels voor wondgenezing en toxicologische studies3,4,5. Naast het belang van inzicht in de moleculaire basis van verblindende oogziekte, heeft de toegankelijkheid van weefsel en de mogelijkheid om cultuur primaire cellen gemaakt het hoornvlies een belangrijk model-systeem voor studie. Het hoornvlies is ideaal voor het testen van de effecten van agenten op littekens als het normale hoornvlies transparant is en bepaalde soorten wonden maken opaciteit of fibrotische littekens (herzien in6). Verschillende in vivo hoornvlies wond genezing modellen hebben ook uitgebreid gebruikt voor studies1littekens. Minder gebruikt is geweest de ex vivo hoornvlies wond genezing model7,8 die in detail hier is beschrijven. Het doel van deze methode is te kwantificeren littekens resultaten gekenmerkt door fibrotische beleidsmakers in een 3D meercellige hoornvlies ex vivo modelsysteem.
Hoornvlies epitheliale verwonding die geen inbreuk op de epitheliale kelder membraan normaal vormt sluit binnen 24-72 h9. Kort na de verwonding beginnen de cellen aan de rand van het epithelium verspreiden en migreren naar de epitheliale vrije oppervlakte, te herstellen van epitheliale barrièrefunctie. Deze activiteit wordt opeenvolgend gevolgd door activering van hoornvlies basale celproliferatie, ten eerste en in een later stadium, van voorlopercellen attractiepark van de buitenste limbal zone tot herstel van de epitheliale cellen massa10,11. Deze wonden genezen vaak zonder littekens. Een wond die het membraan van de kelder in het stroma vaak doordringt resulteert echter in litteken vorming1. Na het hoornvlies stromale verwonden, is het stroma gevuld met cellen van verschillende oorsprong, met inbegrip van gedifferentieerde resident stromale cellen, alsmede het beenmerg-afgeleide fibrocytes12,13,14. Fibrotische littekens wordt gekenmerkt door de persistentie van myofibroblasts in een genezende wond. Deze pathologische myofibroblasts tonen verhoogde hechting door de accumulatie van verschijnsel in focal verklevingen, contractiele α-smooth actine (α-SMA) stress spiervezels en lokaal activeren van extracellulaire matrix (ECM)-afgezonderd latente-transformeren groeifactor-beta (TGFβ). De differentiatie van epitheliale-afgeleide cellen, bekend als epitheliale mesenchymale overgang (EMT), kan ook bijdragen tot litteken vorming6.
Er is een delicaat evenwicht tussen celdifferentiatie en apoptosis na verwonding. Wegens de breuk in het membraan van de kelder, groeifactoren zoals bloedplaatjes afkomstige groei factor (PDGF) en TGFβ van tranen en het epithelium baden de stroma, inducerende myofibroblast differentiatie, een lus van de duurzame autocrine van TGFβ de activering, en de secretie van ongeorganiseerd fibrotische ECM15,16. De persistentie van de myofibroblasts in de genezen wond bevordert haze en littekens in het hoornvlies (Figuur 2). Echter, in regeneratively genezen wond hoewel myofibroblasts ontwikkelen, ze neutrophil en aldus zijn afwezig of aanzienlijk verminderd in aantal in het genezen weefsel (herzien in verwijzing6,10). Zo heeft onderzoek focuste fibrotische littekens op zijn minst gedeeltelijk zich op gericht op moleculen die voorkomen buitensporige myofibroblast ontwikkeling of myofibroblast persistentie17,18 dat. Omdat myofibroblast persistentie zowel littekens en fibrotische ziekte in alle weefsels19 kenmerkt, kan het hoornvlies zinvol zijn als een modelsysteem om te studeren van algemene cellulaire mechanismen van fibrose.
In ons modelsysteem, wordt het hoornvlies verwond met een cilindrische mes genaamd een trephine terwijl nog steeds in de hele wereld. Mens en varken hoornvlies kunnen worden verwond met beide een 6 of 7 mm trephine; voor konijn hoornvlies heeft een 6 mm trephine de voorkeur. Het varken hoornvlies is gelijkaardig in grootte aan het menselijke hoornvlies. Omdat ze kosteneffectief en beschikbaar in grote aantallen zijn, worden varken hoornvlies routinematig gebruikt voor orgel cultuur. Bovendien hebben antilichamen en siRNAs gemaakt om te reageren met mens consequent cross-reacted met varken7. Na de verwonding, hoornvlies worden gesneden uit de hele wereld met de limbus intact en gemonteerd op een agar/collageen basis. Het hoornvlies zijn gekweekt in serumvrij media plus gestabiliseerde vitamine C ter simulering van de fibroblast proliferatie en ECM afzetting20. De toevoeging van serum noch groeifactoren zijn nodig voor het opwekken van de myofibroblast formatie7. Hoornvlies worden routinematig vast en verwerkt voor histologie na twee weken van cultuur. Voor gen knockdown of voor het testen van de effecten van een agent op de wondgenezing, de wond kan worden behandeld met siRNA in de wond na verwonding7 of een oplosbare agent kan worden toegevoegd aan de media, respectievelijk8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10-010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep&#160;</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>91670049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Collagen Solution</td>
			<td>Advance Biomatrix</td>
			<td>5005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pig eyes with lids attached&#160;</td>
			<td>Pel-freeze, Arkansas</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6.0 mm trephine&#160;</td>
			<td>Katena</td>
			<td>K28014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Blade&#160;</td>
			<td>Personna</td>
			<td>0.009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small scissor</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>895110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08953-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kim Wipes&#160;</td>
			<td>Kimberly-Clark&#8482; 34120</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm cell culture dishes&#160;</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08-772B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplemented Serum- Free media (SSFM)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Add all of the following components to DMEM/F-12:&#160; ITS, RPMI, Glutathione, L-Glutamine, MEM Non essential amino acids, MEM Sodium Pyruvate, ABAM, Gentamicin, Vitamin C.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITS Liquid Media Supplement&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I3146</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Vitamins Solution&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R7256</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G6013</td>
			<td>Use at 1 &#181;g/mL. Freeze aliquots; do not reuse after thawing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% L-glutamine solution&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-essential amino acids solution&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Sodium pyruvate solution&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360</td>
			<td>1 M Stocks (1000X) and freeze in single use aliquits.&#160; Use from freezer each time media is made.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABAM&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7292</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>30-005-CR</td>
			<td>200X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin C&#160;</td>
			<td>Wako</td>
			<td>070-0483</td>
			<td>2-0-aD Glucopyranosyl-Ascorbic Acid. 1 mM stocks (1000x)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Iodine&#160;</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>SI86-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path Cassettes&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum (NGS)</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>005-000-121</td>
			<td>We use 3% NGS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting Media&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>TA-030-FM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe Clear&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>314-629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Alcohol</td>
			<td>Ultra Pure</td>
			<td>200CSGP</td>
			<td>200 Proof, diluted at 100%, 70%, 50%)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP327</td>
			<td>10mM, pH 6.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>M10742500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing agent&#160;</td>
			<td>Ricca Chemical Company</td>
			<td>220-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% Triton X-100</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1% Tween 20&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP337</td>
			<td>Diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3% Hydrogen Peroxide&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>H324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB Kit&#160;</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar&#160;</td>
			<td>Fisher&#160;</td>
			<td>BP1423-500</td>
			<td>Agar solution: prepare 1% agar and 1 mg/mL bovine collagen in DMEM-F12 up to 20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bermis</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moist Chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Use any chamber, cover it with wet Wipe Tissue and then put a layer of Parafilm over it.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qiagen RNAprotect Cell Reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>&#160;76104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ambion PureLink RNA Mini Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12183018A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Fibronectin-EDA Antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6140</td>
			<td>1:200 Diluted in&#160; 3% normal goat serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-alpha smooth muscle actin Antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2547 or C6198 (cy3 conjugated)</td>
			<td>1:200 Diluted in 3% normal goat serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permafluor&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>TA-030-FM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gt anti -MS IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>62-6520</td>
			<td>1:100 diluted in 3% normal goat serum (for a-SMA, DAB staining)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gt anti -MS IgM (H+L) Secondary Antibody, HRP&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>PA1-85999</td>
			<td>1:100 diluted in 3% normal goat serum (for FN-EDA, DAB staining)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gt anti -MS IgG (H+L) Secondary Antibody, Cy3&#160;</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>115-165-146</td>
			<td>1:200 Diluted in&#160; 3% normal goat serum (for a-SMA, Fluorescence staining)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Zeiss Axioplan2&#160;</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPOT-2</td>
			<td colspan="2">Diagnostic Instruments, Sterling Heights, Michigan</td>
			<td>CCD camera</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo corneal organ culture model for wound healing studies

Het hoornvlies is gebruikt uitgebreid als een modelsysteem om te studeren wondgenezing. De mogelijkheid om te produceren en gebruiken van primaire cellen van zoogdieren in twee dimensionale (2D) en drie dimensionale (3D) cultuur heeft geleid tot een schat aan informatie niet alleen over hoornvlies biologie, maar ook over de wond genezing, myofibroblast biologie, en littekens in het algemeen . Het doel van het protocol is een assay-systeem voor het kwantificeren van de ontwikkeling van de myofibroblast, die kenmerkend is voor littekens. We tonen een hoornvlies orgel cultuur ex vivo model met behulp van varken ogen. In deze voorste keratectomy wond, zijn cornea's nog steeds in de hele wereld gewond met een cirkelvormige mes genaamd een trephine. Een stekker van ongeveer 1/3 van het anterieure hoornvlies wordt verwijderd met inbegrip van het epitheel, de kelder-membraan en het voorste deel van het stroma. Na verwonding, hoornvlies gesneden uit de hele wereld, gemonteerd op basis van de collageen/agar en gekweekte voor twee weken in de gratis medium aangevuld-serum met gestabiliseerde vitamine C uitbreiden van celproliferatie en afscheiding van de extracellulaire matrix door fibroblasten resident. Activering van myofibroblasts in het anterieure stroma is duidelijk in het hoornvlies genezen. Dit model kan worden gebruikt voor de gehaltebepaling van wond sluiting, de ontwikkeling van myofibroblasts en fibrotische markeringen, en toxicologische studies. Daarnaast kunnen de effecten van klein molecuul remmers evenals lipide-gemedieerde siRNA transfectie voor gene knockdown worden getest in dit systeem.

Immunohistochemistry is de primaire assay gebruikt voor het analyseren van het succes van de ex vivo wond genezing experiment. Figuur 4 toont de epitheel en anterieure stroma in controle weefsel (figuur 4A, 4B). Zes uur na de verwonding, was het epithelium afwezig (figuur 4C, 4 D). Zes dagen na de verwonding, zoals verwacht, had het epithelium regrown (<strong class=...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies at JoVE.com

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

Een protocol voor een ex vivo hoornvlies orgel cultuur model nuttig voor wond genezing studies wordt beschreven. Dit modelsysteem kan worden gebruikt om te beoordelen van de effecten van de drug toxiciteit in een georganiseerde 3D meercellige omgeving of agenten om regeneratieve genezing te bevorderen.

Ex Vivo wondgenezing hoornvlies orgel cultuur Model voor Studies

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

Dit document beschreef een eenvoudige methode voor het testen van wond in een driedimensionaal, multicellulair orgaancultuurmodelsysteem. We doen dit met behulp van varkensogen, maar zelfs als je niet bekend bent met de ogen, u deze test doen. Als overzicht kregen we varkensogen, knipten de bollen uit, maken een cirkelvormige wond in het hoornvlies dat door het epitheel gaat en ongeveer een derde van de stroma.We snijden het hoornvlies uit, en monteren het op een Agar basis, en zetten deze constructie in de couveuse. Het weefsel zal invullen het creëren van een litteken in het hoornvlies. U hoeft geen groeifactoren toe te voegen, of zelfs serum.Dit gebeurt in serumvrije media. Hoewel dit wordt uitgevoerd in het hoornvlies, het kan worden gebruikt als een modelsysteem voor fibrotische genezing in het algemeen. Zoals veel van de cellulaire trajecten die worden geactiveerd tijdens littekens zijn vergelijkbaar tussen systemen.In een bioveiligheid kap, gebruik maken van een rechte rand chirurgische mes om de wereld te verwijderen van het deksel op een ethanol gereinigde snijplank, en verwijder het overtollige vetweefsel uit elk oog. Houd de gereinigde bol posteriorly met tangen onmiddellijk dip het oog in PBS, gevolgd door drie snelle dips in 10% jodium, en twee snelle dips in PBS. Wikkel vervolgens de oogomtrek met een schoon labweefsel om met voldoende druk te wikkelen om een strak hoornvliesoppervlak te bereiken zonder contact te maken met het hoornvlies.Met behulp van een zes millimeter trephine, penetreren het epitheel in de voorste stroma in het midden van het hoornvlies zonder het maken van een volledige dikte wond door het hele hoornvlies, en draai de trephine 180 graden met de klok mee en tegen de klok in vijf keer, terwijl het toepassen van lichte druk om de wond te verdiepen. Wanneer de wond diep genoeg is om een weefselflap met tangen te kunnen opheffen, gebruikt u een chirurgisch mes om de flap parallel aan de aardbol te snijden terwijl u het voorste hoornvlies binnen de wondmarge blijft optillen. Wanneer de gehele klep is verwijderd, moet een cirkelvormige wond zich in het midden van het hoornvlies bevinden.Om het hoornvlies te oogsten pak het oog met het labweefsel, en gebruik een chirurgisch mes om een kleine incisie een millimeter afstand van de rand van het hoornvlies om de limbus en weefsel collectie op te nemen. Met behulp van kleine, scherpe schaar blijven de incisie over de hele wereld houden van een millimeter marge over het hoornvlies om de limbus in tact te houden. Plaats dan het hoornvlies, wond-kant naar beneden, in een 60 millimeter, of 100 millimeter schotel met een milliliter PBS.Om het hoornvlies te monteren, gebruik maken van twee paar tangen om het hoornvlies epitheel-kant omhoog te houden om een kopje te maken, en gebruik een steriele overdracht pipet om opgewarmde agar oplossing toe te voegen in het hoornvlies totdat de beker vol is. Na de agar verhardt, zorgvuldig plaats het hoornvlies in een nieuwe 60 millimeter plaat agar-kant naar beneden en bedek de plaat met een deksel. Voeg vervolgens vier milliliter van aangevuld serumvrij medium toe aan elke plaat hoornvliezen die de hoornvliezen behoudt op een lucht-vloeibare interface aan de limbale grens in een celkweek incubator bij 37 graden Celsius in 5%kooldioxide, en bevochtiging van de hoornvliesoppervlakten eenmaal daags met één druppel supplementair serumvrij medium van het geconditioneerde medium in de schotel om de weefsels gehydrateerd te houden.Voor gen knockdown, meng vijf microliters van kleine storende of siRNa met 50 microliter van verlaagd serum minimum essentieel medium en twee microliters van transfectie reagens. Met 50 microliter met verlaagd serummedium per hoornvlies. Meng na vijf minuten de twee mengsels door elkaar en voeg 200 microliter met verlaagd serum minimummedium toe aan elk siRNA-mengsel.Dan pipette de siRNA oplossingen vallen verstandig op elke wond. Doe dan de hoornvliezen in de couveuse. Na drie uur, gebruik het medium in elk gerecht om het siRNA te wassen van de hoornvliesoppervlakken, en vervang het geconditioneerde medium in elk gerecht door vers aangevuld serum vrij medium plus antibiotica.Dan terug de hoornvlies culturen aan de cel cultuur incubator, en uitbroeden voor twee weken. Zes uur na het verwonden is het hoornvlieseptheel afwezig. Zes dagen na het verwonden groeit het epitheel.Fluorescentie amino kleuring met alfa gladde spier actin onthult een gradiënt van actieve myofibroblasten langs de wondmarge van de voorste naar achterste stroma. Immuno-histochemische kleuring voor alfa gladde spier actin onthult een dramatische toename van alfa gladde spier actin eiwitexpressie in gewonde plus controle siRNA hoorna enblekken. Vergeleken met afgewikkeld en doeleiwit siRNA behandeld, gewonde hoornvliezen.Op dezelfde manier is fibronectin extra domein A upregulated in siRNA behandelde gewonde hoornvliezen in vergelijking met ongewonden en doeleiwit siRNA behandeld gewonde hoornvliezen. Het aantonen van een succesvolle neerhalen van het doeleiwit. Verder, behandeling van de gewonde hoornvliezen met het toxine dat niet-specifiek richt zich op het doel eiwit voorkomt re-epithelialization en resulteert in kwalitatieve celdood, een ongeorganiseerde matrix, en stromal vacuoles suggereert dat het toxine niet bevorderen genezing bij de concentratie getest.Tot slot, tijdens een poging deze procedure is het belangrijk om te onthouden om het blad parallel te houden aan het weefsel tijdens het snijden, zodat het niet doordringen in de wereld. Met deze test kunnen verschillende wondtechnieken worden toegepast, waaronder chemische verbranding of epitheliale schaafwonden. Het kan ook worden gebruikt voor drug toxiciteit testen om te bepalen of het epitheel geneest en in welk tempo.Dit is een kostenbesparing ex vivo, orgaancultuur model systeem dat kan voorafgaan aan uw in vivo wond genezing studies.

Research

JoVE Journal

Medicine

Murine Model of Wound Healing

Muizenmodel van wondgenezing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Muizen Endoscopie voor<em&gt; In Vivo</em&gt; Multimodal Imaging van Carcinogenese en Evaluatie van intestinale wondgenezing en ontsteking

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Een kleine diermodel van Ex Vivo Normothermic lever perfusie

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

Hoornvlies epitheliale schuren met oogbeschadigingen en/of Burr als een Model voor hoornvlies wondgenezing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Targeting Gray Rami Communicantes in Selective Chemical Lumbar Sympathectomy

Gericht op grijze Rami Communicantes in selectieve chemische Lumbale Sympathectomy

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

Een Ex Vivo weefselkweek Model voor Fibrovascular complicaties in proliferatieve diabetische retinopathie

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...

Scratch Migration Assay and Dorsal Skinfold Chamber for In Vitro and In Vivo Analysis of Wound Healing

Scratch Migration assay en dorsale skinfold Chamber voor in vitro en in vivo analyse van wondgenezing

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

Een porcine Corneale endotheliale orgel cultuur model met behulp van splitsen Corneale knoppen

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts

Optocardiografie en elektrofysiologie studies van ex vivo Langendorff-perfused Hearts

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to ...

An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

Een epitheel schuurmodel voor het bestuderen van corneawondgenezing

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...