Name: ex vivo corneal organ culture model for wound healing studies
Uploaded: 2019-02-15T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי NIH-NEI R01 EY024942, מחקר כדי למנוע עיוורון, בצפון לרפואה אוניברסיטת בלתי מוגבלת וקרנות מחקר, ואת מחוז אריות 20-י' מיקרוסקופ וניתוח תמונה של פרפין סעיפים בוצעו בתוך ליבת מיקרוסקופ, הכנת שקופית היסטולוגית בוצעה Biorepository, פתולוגיה הליבה בבית הספר לרפואה של Icahn במעמד הר סיני.

1. איבר תרבות
<ol><li>
ההכנות
	<ol>
<li>להכין פתרון אגר כדלקמן. בבקבוקון קטן, להכין אגר 1% 1 מ"ג/מ"ל קולגן ב- DMEM-F12 עד 20 מ ל. להביא לרתיחה על פלטה חמה. לשים את הפתרון לתוך צינור חרוטי 50 מ. הצב צינור בתוך אמבט מים על פלטה חמה כדי למנוע את הפתרון שהשרף מתהווה.</li>
		<li>להכין שהושלם ללא סרום מדיה (SSFM) לפי ...

פרוטוקול זה מתאר מודל לימוד ריפוי הפצע בסביבה תלת-ממד מרובדת טבעית. השימוש של תרבות איברים כמו ביניים בין תרבית תאים ולימודי ויוו מפחיתה באופן משמעותי את עלויות, כמו גם הליכי הפחתת בבעלי חיים. דגמי תלת-ממד אחרים להיות היתרון הגדול לשדה כולל עצמי סינתזה קולגן ג'לים זני העיקרי fibroblasts הקרנית ה...

הצטלקות הקרנית הנובע פציעה, טראומה או זיהום יכול להוביל מתישה opacities, אובדן ראייה קבועים. לפיכך, יש צורך קריטי כדי לזהות מסלולים אשר ניתן לפלח התערבות טיפולית. אפשרויות הטיפול הנוכחי מוגבל, מורכב בעיקר השתלות הקרנית, אשר אינם נגישים לחולים ברחבי העולם. האדם (איור 1) והן לקרנית בעלי חיים יכול להיות מנוצל עבור דו-ממדי ולומד תרבית תאים 3D1,2. ניתן להשיג לקרנית גווייה האנושית לא מתאימה להשתלה העין בנקים או רקמות מרכזי בנקים (לאומי מחלות מחקר מחלף (NDRI)), עיניים חייתיות ניתן להשיג בית-מטבחיים. ראשי תאים אפיתל הקרנית, סטרומה fibroblasts ועוד לאחרונה, תאי אנדותל, יכול להיות מבודדת ותרבותית של רקמות אלה לריפוי הפצע ולא של הרעלים לימודים3,4,5. מעבר לחשיבות של הבנת הבסיס המולקולרי של מסנוור מחלת עיניים, הנגישות של רקמות ואת היכולת תרבות ראשי תאים הפך הקרנית מערכת מודל חשוב למחקר. הקרנית הוא אידיאלי עבור בחינת השפעת סוכנים על צלקות כפי הקרנית נורמלי הוא שקוף וליצור סוגים מסוימים של פצעים אטימות או שהותירה צלקות (נבדקה ב6). מספר ויוו הפצע הקרנית הריפוי מודלים יש גם בהרחבה מנוצל עבור צלקות מחקרים1. פחות מנוצל היה לשעבר vivo הקרנית פצע ריפוי מודל7,8 המתארים בפירוט כאן. המטרה של שיטה זו היא לכמת את התוצאות הצטלקות מאופיין על-ידי עושי שהותירה ב- 3D multicellular הקרנית ex-vivo מודל המערכת.
הקרנית אפיתל ופצעו זה אינו מפר קרום המרתף אפיתל בדרך כלל סוגר תוך 24-72 h9. זמן קצר לאחר פציעתו, התאים בקצה של האפיתל להתחיל להפיץ ושל העברת לתוך השטח חינם אפיתל, להקים מחדש את פונקציית מחסום האפיתל. פעילות זו ברצף ואחריו הפעלה של התפשטות התאים הבזליים הקרנית קודם, בשלב מאוחר יותר, של תאים קודמן ממוקם באיזור limbal החיצונית כדי להשיג התאוששות של תאים אפיתל המונים10,11. הפצעים האלו לעיתים קרובות לרפא ללא צלקות. עם זאת, פצע חודר קרום המרתף stroma לעיתים קרובות גורמת היווצרות צלקת1. לאחר ופצעו סטרומה הקרנית, מאוכלסת stroma תאים של מקורות מרובים כולל תושב סטרומה תאים, כמו גם הנגזרות מח עצם fibrocytes12,13,14. שהותירה צלקות מאופיין על ידי ההתמדה של myofibroblasts פצע ריפוי. אלה myofibroblasts פתולוגית להדגים אדהזיה מוגבר באמצעות ההצטברות של אינטגרינים הדבקויות מוקד, סיבי סטרס אקטין (α-SMA) השריר α חלקה כויץ ו ההפעלה המקומי של מטריצה חוץ-תאית (ECM)-מבודד כמוס-צורה של גורם גדילה-בטא (TGFβ). הבידול של תאים אפיתל נגזר, המכונה אפיתל המעבר mesenchymal (אמבולנס), עשויים לתרום גם צלקת היווצרות6.
יש איזון עדין בין תאית התמיינות אפופטוזיס לאחר פציעתו. בגלל הקרע בתוך קרום המרתף, צמיחה גורמים כמו פקטורי גדילה נגזר טסית (דם PDGF) ואת TGFβ מרוב דמעות האפיתל להתרחץ stroma, גרימת myofibroblast בידול, לולאה autocrine מתמשכת של הפעלת TGFβ, ו הפרשת לא מאורגן שהותירה ECM15,16. התמדתו של myofibroblasts בתוך הפצע נרפא מקדם אובך, הצטלקות הקרנית (איור 2). עם זאת, ב- regeneratively נרפא פצע למרות myofibroblasts לפתח, הם apoptose, ובכך הם נעדרים או מספר מופחת באופן משמעותי ברקמה בריאה (נבדקה תוך התייחסות6,10). לפיכך, מחקר על שהותירה צלקות התמקדה לפחות בחלקו מיקוד מולקולות המונעים התפתחות myofibroblast מוגזמת או myofibroblast התמדה17,18. כי התמדה myofibroblast מאפיינת במחלה וצלקות וגם שהותירה רקמות כל19, הקרנית עשויה להועיל כמערכת מודל ללמוד כללי המנגנונים התאיים של פיברוזיס.
במערכת מודל שלנו, הקרנית פצוע עם להב גלילי המכונה trephine בעוד עדיין בתוך העולם. בני אדם ונפצעו חזיר לקרנית יכול להיות עם גם 6 או 7 מ מ trephine; ארנב לקרנית trephine 6 מ מ היא המועדפת. הקרנית חזיר דומה בגודל של הקרנית האנושית. כי הן חסכוניות וזמין במספרים גדולים, החזיר את הקרנית משמשים באופן שגרתי לתרבות איברים. יתר על כן, נוגדנים, siRNAs עשוי להגיב עם האדם יש בעקביות cross-reacted עם חזיר7. לאחר פציעתו, קרניות מנותקים מן העולם עם לימבוס ללא פגע, רכוב על אגר/קולגן הבסיס. קרניות הן בתרבית בתקשורת ללא סרום פלוס התייצב ויטמין C כדי לדמות פיברובלסט התפשטות ו- ECM התצהיר20. התוספת של סרום ולא גורמי גדילה לא נחוצים כדי לעודד היווצרות myofibroblast7. לקרנית באופן שגרתי קבוע, מעובד עבור היסטולוגיה לאחר שבועיים של תרבות. עבור גנים, או כדי לבדוק את ההשפעות של סוכן על ריפוי הפצע, הפצע יכולים להיות מטופלים עם siRNA בפצע לאחר ופצעו7 או סוכן מסיסים יכולים להתווסף לתקשורת, בהתאמה8.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10-010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen Strep&#160;</td>
			<td>MP Biomedicals</td>
			<td>91670049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Collagen Solution</td>
			<td>Advance Biomatrix</td>
			<td>5005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pig eyes with lids attached&#160;</td>
			<td>Pel-freeze, Arkansas</td>
			<td>N/A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6.0 mm trephine&#160;</td>
			<td>Katena</td>
			<td>K28014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Blade&#160;</td>
			<td>Personna</td>
			<td>0.009</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small scissor</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>895110</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>08953-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kim Wipes&#160;</td>
			<td>Kimberly-Clark&#8482; 34120</td>
			<td>06-666</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>60 mm cell culture dishes&#160;</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>08-772B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Supplemented Serum- Free media (SSFM)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Add all of the following components to DMEM/F-12:&#160; ITS, RPMI, Glutathione, L-Glutamine, MEM Non essential amino acids, MEM Sodium Pyruvate, ABAM, Gentamicin, Vitamin C.&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11330</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ITS Liquid Media Supplement&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>I3146</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 Vitamins Solution&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>R7256</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutathione</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G6013</td>
			<td>Use at 1 &#181;g/mL. Freeze aliquots; do not reuse after thawing.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% L-glutamine solution&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25030-081</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Non-essential amino acids solution&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11140</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM Sodium pyruvate solution&#160;</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>11360</td>
			<td>1 M Stocks (1000X) and freeze in single use aliquits.&#160; Use from freezer each time media is made.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ABAM&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A7292</td>
			<td>100X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin&#160;</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>30-005-CR</td>
			<td>200X</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin C&#160;</td>
			<td>Wako</td>
			<td>070-0483</td>
			<td>2-0-aD Glucopyranosyl-Ascorbic Acid. 1 mM stocks (1000x)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10% Iodine&#160;</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>SI86-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Path Cassettes&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-272416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Normal Goat Serum (NGS)</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>005-000-121</td>
			<td>We use 3% NGS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mounting Media&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>TA-030-FM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Safe Clear&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>314-629</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl Alcohol</td>
			<td>Ultra Pure</td>
			<td>200CSGP</td>
			<td>200 Proof, diluted at 100%, 70%, 50%)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium citrate&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP327</td>
			<td>10mM, pH 6.4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>M10742500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bluing agent&#160;</td>
			<td>Ricca Chemical Company</td>
			<td>220-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% Triton X-100</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>9002-93-1</td>
			<td>Diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.1% Tween 20&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>BP337</td>
			<td>Diluted in PBS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3% Hydrogen Peroxide&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>H324</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAB Kit&#160;</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>SK-4100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar&#160;</td>
			<td>Fisher&#160;</td>
			<td>BP1423-500</td>
			<td>Agar solution: prepare 1% agar and 1 mg/mL bovine collagen in DMEM-F12 up to 20 mL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm</td>
			<td>Bermis</td>
			<td>13-374-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Moist Chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Use any chamber, cover it with wet Wipe Tissue and then put a layer of Parafilm over it.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lipofectamine 2000</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Qiagen RNAprotect Cell Reagent</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>&#160;76104</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ambion PureLink RNA Mini Kit</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>12183018A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-Fibronectin-EDA Antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F6140</td>
			<td>1:200 Diluted in&#160; 3% normal goat serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-alpha smooth muscle actin Antibody</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A2547 or C6198 (cy3 conjugated)</td>
			<td>1:200 Diluted in 3% normal goat serum</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permafluor&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>TA-030-FM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P36931</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gt anti -MS IgG (H+L) Secondary Antibody, HRP&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>62-6520</td>
			<td>1:100 diluted in 3% normal goat serum (for a-SMA, DAB staining)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gt anti -MS IgM (H+L) Secondary Antibody, HRP&#160;</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>PA1-85999</td>
			<td>1:100 diluted in 3% normal goat serum (for FN-EDA, DAB staining)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gt anti -MS IgG (H+L) Secondary Antibody, Cy3&#160;</td>
			<td>Jackson Immuno Research</td>
			<td>115-165-146</td>
			<td>1:200 Diluted in&#160; 3% normal goat serum (for a-SMA, Fluorescence staining)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;Zeiss Axioplan2&#160;</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>Microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SPOT-2</td>
			<td colspan="2">Diagnostic Instruments, Sterling Heights, Michigan</td>
			<td>CCD camera</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

ex vivo corneal organ culture model for wound healing studies

הקרנית כבר בשימוש נרחב כמערכת מודל ללמוד ריפוי הפצע. היכולת ליצור ולהשתמש תאים בתרבית של ראשי שני מימד (2D) ואת שלושת ממדי (3D) תרבות יצר שפע של מידע לא רק על ביולוגיה הקרנית, אלא גם על הפצע ריפוי, ביולוגיה myofibroblast, וצלקות באופן כללי . המטרה של הפרוטוקול היא מערכת assay לכימות myofibroblast פיתוח, המאפיינת הצטלקות. נדגים איברים הקרנית תרבות שמחוץ דגם באמצעות העיניים חזיר. ב- keratectomy הקדמי זה פצע, קרניות עדיין בתוך העולם פצועים עם להב מעגלית הנקראת trephine. פקק של 1/3 של הקרנית הקדמי הוא הסיר כולל האפיתל, קרום המרתף של החלק הקדמי של stroma. לאחר פציעתו, קרניות לחתוך מהגלוב, רכוב על בסיס קולגן/אגר, תרבותי במשך שבועיים במדיום בחינם בתוספת-סרום יחודיי מיוצב להעצמת התפשטות תאים והפרשת מטריצה חוץ-תאית על ידי fibroblasts תושב. הפעלה של myofibroblasts ב stroma הקדמי ניכרת הקרנית נרפא. מודל זה יכול לשמש כדי assay הפצע הסגר, ההתפתחות של myofibroblasts וסמנים שהותירה ולאחר ללימודי הרעלים. בנוסף, ההשפעות של מעכבי מולקולה קטנה, כמו גם בתיווך השומנים siRNA תקנים עבור גנים יכול להיבדק במערכת זו.

אימונוהיסטוכימיה הוא ראשיות וזמינותו מנוצל כדי לנתח את ההצלחה של האקס vivo פצע ריפוי הניסוי. איור 4 מתאר את אפיתל ואת משתית הקדמי ברקמת שליטה (איור 4A, 4B). שש שעות לאחר פציעתו, האפיתל היה נעדר (איור 4C, 4 D). שישה י...

Watch this Scientific Journal Video about Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies at JoVE.com

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

פרוטוקול עבור אקסית vivo איברים הקרנית תרבות מודל שימושי עבור לימודי ריפוי הפצע מתואר. מערכת מודל זה יכול לשמש כדי להעריך את ההשפעות של סוכני כדי לקדם ריפוי משובי או רעילות התרופה סביבה מאורגנת multicellular תלת-ממד.

Ex-Vivo איברים הקרנית מודל תרבות עבור ריפוי פצעים מחקרים

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

מאמר זה תיאר שיטה פשוטה לראית פצעים במערכת תלת מימדית ורב-תאית של מודלים של תרבות איברים. אנחנו עושים את זה באמצעות עיני חזיר, אבל גם אם אתה לא מכיר את העיניים, אתה יכול לעשות את הראיה הזאת. כ סקירה כללית, קיבלנו עיני פורצ'ין, לגזור את הגלובוסים, לעשות פצע מעגלי בקרנית שעוברת את האפיתל וכשליש מהסטרומה.אנחנו חותכים את הקרנית, ולהוות אותו על בסיס אגר, ולשים את המבנה הזה באינקובטור. הרקמה תמלא ביצירת צלקת בקרנית. אתה לא צריך להוסיף כל גורמי גדילה, או אפילו סרום.הדבר נעשה במדיה נטולת סרום. למרות שזה מבוצע בקרנית, זה יכול לשמש כמערכת מודל לריפוי פיברוטי בכלל. כמו רבים של מסלולים הסלולר המופעלים במהלך הצטלקות דומים בין מערכות.במכסה המנוע biosafety, להשתמש בלהב כירורגי קצה ישר כדי להסיר את הגלובוס מהמכסה על קרש חיתוך ניקה אתנול, ולהסיר את רקמת השומן העודפת מכל עין. החזקת הגלובוס הנקי לאחר מכן במטסים טובלים מיד את העין ב-PBS ואחריו שלושה מטבלים מהירים ב-10% יוד ושני מטבלים מהירים ב-PBS. ואז לעטוף את העין היקפית עם רקמת מעבדה נקייה לעטוף עם מספיק לחץ כדי להשיג משטח קרנית מתוח מבלי ליצור קשר עם הקרנית.באמצעות טרפין שישה מילימטר, לחדור את האפיתל בסטרומה הקדמית במרכז הקרנית מבלי לעשות פצע עובי מלא דרך הקרנית כולה, ולסובב את trephine 180 מעלות בכיוון השעון נגד כיוון השעון חמש פעמים תוך הפעלת לחץ אור כדי להעמיק את הפצע. כאשר הפצע עמוק מספיק כדי לאפשר לדש רקמה להיות מורם עם ממטרות, להשתמש בלהב כירורגי לחתוך את הדש במקביל לגלובוס תוך המשך להרים את הקרנית הפנימית בתוך שולי הפצע. כאשר הדש כולו הוסר, פצע עגול צריך להיות ממוקם במרכז הקרנית.כדי לקצור את הקרנית לתפוס את העין עם רקמת המעבדה, ולהשתמש בלהב כירורגי כדי להפוך חתך קטן מילימטר אחד מקצה הקרנית כדי לכלול את הגפיים ואת איסוף הרקמות. באמצעות מספריים קטנים וחדים ממשיכים את החתך ברחבי העולם ושומרים על שוליים מילימטריים על פני הקרנית כדי לשמור על הלימבוס במישוש. לאחר מכן מניחים את הקרנית, בצד הפצע למטה, בצלחת 60 מילימטר, או 100 מילימטר המכיל מיליליטר אחד של PBS.כדי לעלות על הקרנית, השתמשו בשני זוגות מדפים כדי להחזיק את קרנית האפיתל בצד למעלה כדי ליצור, ולהשתמש פיפטה העברה סטרילית להוסיף פתרון אגר מחומם לתוך הקרנית עד ה מלאה. לאחר אגר מתקשה, בזהירות למקם את הקרנית חדש 60 מילימטר צלחת אגר בצד למטה לכסות את הצלחת עם מכסה. לאחר מכן הוסיפו ארבעה מיליליטר של מדיום בתוספת סרום לכל צלחת קרניות ששומרות על הקרניות בממשק נוזלי אוויר בגבול הלימבי באינקובטור של תרבות התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס ב-5% פחמן דו-חמצני, והרטבת משטחי הקרנית פעם ביום עם טיפה אחת של מדיום ללא סרום בתוספת מהמדיום הממוזג בצלחת כדי לשמור על הרקמות לחות.להפלת גנים, יש לערבב חמישה מיקרוליטרים של הפרעה קטנה או siRNa עם 50 מיקרוליטרים של מדיום חיוני מינימלי מופחת בסרום ושני מיקרוליטרים של ריאגנטים לתרגום. עם 50 מיקרוליטרים של מדיום סרום מופחת לכל קרנית. לאחר חמש דקות, מערבבים את שתי תערובות יחד, ומוסיפים 200 microliters של בינוני מינימלי סרום מופחת לכל תערובת siRNA.ואז פיפטה פתרונות siRNA טיפה חכם על כל פצע. ואז לשים את הקרניות לתוך החממה. לאחר שלוש שעות, השתמש במדיום בכל מנה כדי לשטוף את siRNA מפני הקרנית, ולהחליף את המדיום הממוזג בכל מנה עם מדיום טרי בתוספת סרום בתוספת אנטיביוטיקה.ואז להחזיר את תרבות הקרנית לחממת תרבות התא, ולאורות במשך שבועיים. שש שעות לאחר הפציעה, אפיתל הקרנית נעדר. שישה ימים לאחר הפציעה, האפיתל גדל מחדש.כתמי אמינו פלואורסצנטיים עם אקטין שרירים חלק אלפא מגלה שיפוע של myofibroblasts פעיל לאורך שולי הפצע מן הפצע מהקדימה אל סטרומה האחורית. כתמים אימונו-היסטוכימיים עבור אקטין שרירים חלק אלפא מגלה עלייה דרמטית בביטוי חלבון אקטין שריר חלק אלפא פצוע בתוספת בקרניות siRNA שליטה. בהשוואה ל- siRNA חלבון לא מבוסס ומטרה מטופל, קרניות פצועות.באופן דומה, תחום נוסף fibronectin A מוסדר בקרניות פצועות siRNA מטופלים לעומת siRNA חלבון unwounded ו היעד מטופלים קרניות פצועות. הפגנת הפלה מוצלחת של חלבון היעד. כמו כן, טיפול בקרניות הפצועות עם הרעלן שכוון באופן לא ספציפי לחלבון היעד מונע אפיתליזציה מחדש וכתוצאה מכך מוות תאי איכותי, מטריצה לא מאורגנת, ו vacuoles סטרומה מציע כי הרעלן אינו מקדם ריפוי בריכוז assayed.לסיכום, בעת ניסיון הליך זה חשוב לזכור לשמור על הלהב מקביל לרקמה בעת החיתוך, כך שהוא לא לחדור את כדור הארץ. טכניקות פציעה שונות ניתן להשתמש עם בדיקה זו, כולל כוויה כימית או שריטה אפיתל. זה יכול לשמש גם עבור בדיקות רעילות סמים כדי לקבוע אם האפיתל מרפא ובקצב.זוהי חיסכון בעלויות ex vivo, מערכת מודל תרבות איברים שיכולה להקדים את מחקרי ריפוי פצעים in vivo שלך.

Research

JoVE Journal

Medicine

Murine Model of Wound Healing

מודל עכברי של ריפוי פצע

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

העכברי אנדוסקופיה ל<em&gt; בVivo</em&gt; ריפוי Multimodal הדמיה של היווצרות הסרטן וההערכה של מעיים פצע ודלקת

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

מודל בעלי חיים קטנים של זלוף הכבד Normothermic Vivo לשעבר

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

אפיתל שחיקה הקרנית עם עינית Burr כמודל עבור קרנית ריפוי פצעים

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Targeting Gray Rami Communicantes in Selective Chemical Lumbar Sympathectomy

פילוח רמי אפור Communicantes ב Sympathectomy סלקטיבית המותני כימי

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the ...

An Ex Vivo Tissue Culture Model for Fibrovascular Complications in Proliferative Diabetic Retinopathy

מודל תרביות רקמה לשעבר Vivo עבור סיבוכים Fibrovascular Proliferative רטינופתיה סוכרתית

Diabetic retinopathy (DR) is the most common microvascular complication of diabetes and one of the leading causes of blindness in working-age adults. No ...

Scratch Migration Assay and Dorsal Skinfold Chamber for In Vitro and In Vivo Analysis of Wound Healing

שיטת העברת שריטות וחדר מתקפל לחלל מתורבת בניתוח Vivo של ריפוי פצעים

Impaired cutaneous wound healing is a major concern for patients suffering from diabetes and for elderly people, and there is a need for an effective ...

A Porcine Corneal Endothelial Organ Culture Model Using Split Corneal Buttons

מודל של הקרנית של הקרניות הפותל באמצעות לחצני הקרנית מפוצלת

Experimental research on corneal endothelial cells is associated with several difficulties. Human donor corneas are scarce and rarely available for ...

Optocardiography and Electrophysiology Studies of Ex Vivo Langendorff-perfused Hearts

אופקרדיוגרפיה ולימודי אלקטרופיזיולוגיה של לשעבר Vivo נגדורף

Small animal models are most commonly used in cardiovascular research due to the availability of genetically modified species and lower cost compared to ...

An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

מודל שחיקה אפיתליאלית לחקר ריפוי פצעי הקרנית

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...