Name: a controlled mouse model for neonatal polymicrobial sepsis
Uploaded: 2019-01-27T14:00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis at JoVE.com

Særlig tak til Claire Harrison og Animal Care anlægget på British Columbia children's Hospital Research Institute (BCCHR) for deres støtte i den animalske arbejde, samt at Dr. Po-Yan Cheng for deres vejledning og input på animalsk kontrol og velvære.

<ol>
	<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+causes+of+child+mortality+in+2000-13,+with+projections+to+inform+post-2015+priorities:+an+updated+systematic+analysis.">Global, regional, and national causes of child mortality in 2000-13, with projections to inform post-2015 priorities: an updated systematic analysis.</a> The Lancet. 385 (9966), 430-440 (2015).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+mortality+and+altered+immunity+in+neonatal+sepsis+produced+by+generalized+peritonitis.">Increased mortality and altered immunity in neonatal sepsis produced by generalized peritonitis.</a> Shock. 28 (6), 675-683 (2007).</li><li>Fink, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis.">Animal models of sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 143-153 (2014).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+innate+immunity+predisposes+murine+neonates+to+poor+sepsis+outcome+but+is+reversed+by+TLR+agonists.">Defective innate immunity predisposes murine neonates to poor sepsis outcome but is reversed by TLR agonists.</a> Blood. 112 (5), 1750-1758 (2008).</li><li>Cuenca, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+for+CXC+ligand+10/CXC+receptor+3+signaling+in+the+murine+neonatal+response+to+sepsis.">Critical role for CXC ligand 10/CXC receptor 3 signaling in the murine neonatal response to sepsis.</a> Infection and Immunity. 79 (7), 2746-2754 (2011).</li><li>Gentile, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+immunity+and+defects+in+the+neonatal+and+elderly+immune+response+to+sepsis.">Protective immunity and defects in the neonatal and elderly immune response to sepsis.</a> Journal of Immunology. 192 (7), 3156-3165 (2014).</li><li>Cuenca, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+emergency+myelopoiesis+following+polymicrobial+sepsis+in+neonates.">Delayed emergency myelopoiesis following polymicrobial sepsis in neonates.</a> Innate Immunity. 21 (4), 386-391 (2015).</li><li>Gentile, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+emergency+myelopoiesis+and+survival+in+neonatal+sepsis+by+caspase-1/11+ablation.">Improved emergency myelopoiesis and survival in neonatal sepsis by caspase-1/11 ablation.</a> Immunology. 145 (2), 300-311 (2015).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+IL-17A+attenuates+neonatal+sepsis+mortality+induced+by+IL-18.">Targeting IL-17A attenuates neonatal sepsis mortality induced by IL-18.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), E2627-E2635 (2016).</li><li>Fallon, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Program+Cell+Death+Receptor-1-Mediated+Invariant+Natural+Killer+T-Cell+Control+of+Peritoneal+Macrophage+Modulates+Survival+in+Neonatal+Sepsis.">Program Cell Death Receptor-1-Mediated Invariant Natural Killer T-Cell Control of Peritoneal Macrophage Modulates Survival in Neonatal Sepsis.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1469 (2017).</li><li>Young, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+survival+after+induction+of+sepsis+by+cecal+slurry+in+PD-1+knockout+murine+neonates.">Improved survival after induction of sepsis by cecal slurry in PD-1 knockout murine neonates.</a> Surgery. 161 (5), 1387-1393 (2017).</li><li>Rincon, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvant+pretreatment+with+alum+protects+neonatal+mice+in+sepsis+through+myeloid+cell+activation.">Adjuvant pretreatment with alum protects neonatal mice in sepsis through myeloid cell activation.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 191 (3), 268-278 (2018).</li><li>Starr, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+cecal+slurry+preparation+protocol+with+improved+long-term+reproducibility+for+animal+models+of+sepsis.">A new cecal slurry preparation protocol with improved long-term reproducibility for animal models of sepsis.</a> PLoS ONE. 9 (12), e115705 (2014).</li><li>Hansen, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+in+milk+fat+globule-epidermal+growth+factor-factor+8+exacerbates+organ+injury+and+mortality+in+neonatal+sepsis.">Deficiency in milk fat globule-epidermal growth factor-factor 8 exacerbates organ injury and mortality in neonatal sepsis.</a> Journal of Pediatric Surgery. 52 (9), 1520-1527 (2017).</li><li>Fujioka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+heme+oxygenase-1+attenuates+the+severity+of+sepsis+in+a+non-surgical+preterm+mouse+model.">Induction of heme oxygenase-1 attenuates the severity of sepsis in a non-surgical preterm mouse model.</a> SHOCK. 47 (2), 242-250 (2017).</li><li>Al Asmari, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+quinacrine+against+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+rats.">Protective effect of quinacrine against glycerol-induced acute kidney injury in rats.</a> BMC Nephrology. 18, PMC5273840 (2017).</li><li>Geng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+gene+expression+profiles+and+signaling+pathways+in+rhabdomyolysis-induced+acute+kidney+injury.">Differences in gene expression profiles and signaling pathways in rhabdomyolysis-induced acute kidney injury.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 8 (11), 14087-14098 (2015).</li><li>Kim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+depletion+ameliorates+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+mice.">Macrophage depletion ameliorates glycerol-induced acute kidney injury in mice.</a> Nephron Experimental Nephrology. 128 (1-2), 21-29 (2014).</li><li>Nara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluations+of+lipid+peroxidation+and+inflammation+in+short-term+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+rats.">Evaluations of lipid peroxidation and inflammation in short-term glycerol-induced acute kidney injury in rats.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 43 (11), 1080-1086 (2016).</li><li>Zager, R. A., Johnson, A. C. M., Lund, S., Hanson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure:+determinants+and+characteristics+of+the+injury-induced+hyperinflammatory+response.">Acute renal failure: determinants and characteristics of the injury-induced hyperinflammatory response.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 291 (3), F546-F556 (2006).</li><li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humane+Endpoints+for+Infectious+Disease+Animal+Models.">Humane Endpoints for Infectious Disease Animal Models.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (2), 99-104 (2000).</li><li>Canadian Council on Animal Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guidelines on: choosing an appropriate endpoint in experiments using animals for research, teaching and testing. , (1998).</li><li>Nemzek, J. A., Xiao, H. Y., Minard, A. E., Bolgos, G. L., Remick, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humane+endpoints+in+shock+research.">Humane endpoints in shock research.</a> SHOCK. 21 (1), 17-25 (2004).</li><li>Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+approach+for+establishing+humane+endpoints.">A systematic approach for establishing humane endpoints.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (2), 80-86 (2000).</li></ol>

Dr. James Wynn modtager støtte fra National Institutes of Health (NIH) / nationale Institut for almen medicinske videnskaber (R01GM128452) og NIH /Eunice Kennedy Shriver nationale Institut for børns sundhed og menneskelige udvikling (NICHD) () R01HD089939).

Postnatal neonatal mus har meget begrænset mobilitet og undlader at rette sig efter at være placeret på deres ryg, selv når uantastet. Af DOL 7, alder af mus udfordret i denne model, en vifte af bevægelse spænder fra rettigheder-mobiltelefon til FTR-Mobile blev observeret i uantastet mus, med en væsentlig forskel, nemlig at en uantastet musen i denne alder ikke vise FTR-sløv adfærd. Kun mus udfordret med polymicrobial sepsis blev observeret for at blive FTR-sløv; denne reaktion kan derfor være en markør af sygdommens sværhedsgrad. Bliver opmærksomme på cutoff af en 90° vinkel fra vandret til hip bevægelse giver mulighed for den konsekvente og nøjagtige tildeling af sløv eller mobile hip bevægelse i mus. Tidsrammen på 4 s for at se, hvis en mus kan lige selv blev valgt fordi uantastet mus var i stand til konsekvent lige selv inden for denne tidsramme. Gentaget måling af samme mus blev undgået, mens tid til at rette og måling af hofte mobilitet var begrænset til 4 s, for at undgå alt for trættende med musen, som ellers kunne påvirke dens evne til at skaffe mad og varme og kunne påvirke dens Prognosen til at blive bedre. Oprettende sig fra både venstre og højre side blev observeret, og den højeste af scores, blev brugt til at bestemme, hvis musen var på en human slutpunkt, fordi nogle mus blev fundet til at vise FTR-Nonmobile på den ene side endnu har en højere mobilitet på den anden side og b e købedygtig genoprette til sidst.
Pointsystemet anvendes til at evaluere mus sundhed påberåbt sig anvendelsen af kategorisk cutoffs for hvad er et spektrum af bevægelse, og derfor kunne være tilbøjelige til individuelle bias. Sammen blev uddannet personale til at sikre, at hver person scorede mus det samme; dog vil der sandsynligvis være en grad af subjektivitet, hvilket fører til variation. Sammenhængen i scoring blev evalueret ved at have syv forskere, der ikke havde tidligere udført neonatal mus overvågning lære de krav, der er skitseret i denne protokol og video, derefter, uafhængigt tildele adfærd og bestemme Human slutpunkt. En 97% nøjagtighed blev observeret med scoring udføres på 60 udfordret mus, hvilket tyder på, at enkelte bias ikke spille en væsentlig rolle i de adfærdsmæssige tildelinger af denne model. Den præsenteres adfærdsmæssige kontrol protokol er baseret på observationer af dyr udfordret på DOL 7, men mus yngre end 6 dage i en uantastet sund tilstand konsekvent lige ikke selv. De beskrevne humane slutpunkt kriterier kunne således ikke anvendes direkte til yngre mus. Hvis yngre mus bruges i denne eksperimentelle model, eller hvis en anderledes udfordring model med forskellige sygdom kinetik anvendes, skal derefter egnet Human slutpunkt kriterier være udviklet og afprøvet for at undgå eutanasi af mus der ville ellers, i sidste ende, Genskab. Pointsystemet viser en robust metode til at forbedre Human slutpunkt klassificering, der med test og bekræftelse, potentielt kunne anvendes til andre modeller.
Hvert præparat af cecal gylle eller brug af en ny mus stamme kræves retitration af cecal gylle dosis til at administrere for at opnå en lignende dødelig dosis. Hvert præparat blev standardiseret af udlæsning af interesse, nemlig overlevelse, snarere end at give den samme bakterietallet. Hver cecal gylle forberedelse levedygtige bakteriel koncentration varieret lidt, potentielt skyldes forskelle i donorens commensal bakterier og afvigelser i vægten tilbage i cellen sien af cecal gylle stock postfiltration. Under titrering af cecal gylle, de to første kuld var opdelt i to grupper og hver halvdel af kuldet blev udfordret med en af de to doser, så at hver af doserne vil blive testet i to kuld. Hvis den resulterende overlevelsesraten ikke svarede til det krævede niveau, så udfordring dosis var enten steg eller faldt med 5% - 10% og forsøget gentages. Flere kuld blev brugt for at tage højde for kuld på kuld forskelle, der kunne forårsage modstand eller øget følsomhed over for sepsis på tværs af et kuld. Det var vigtigt at præcist titer cecal gylle bestanden med hver ny forberedelse at sikre, at den nye titrering af cecal gylle var sammenlignelige med tidligere cecal gylle præparater. Perioder af overskydende støj og vibrationer, specielt under komprimering af asfalt og opførelsen af en nærliggende bygning og vejen, blev observeret for at øge stress i dæmninger. Dette korreleret med større procentdel af cannibalization, og påvirket dødeligheden for overlevelse eksperimenter, selv påvirker uantastet mus, der angiver, at der kan være fremmed virkninger på neonatal overlevelse, som også skal kontrolleres.
Forudgående metoder for cecal gylle stock forberedelse opført brugen af friske cecal gylle eller forberedelse af frosne cecal gylle, ved hjælp af en række forskellige metoder, herunder opbevaring i glycerol, der ville uundgåeligt blive overført under udfordringen. Mens brugen af friske cecal gylle giver fordelen at have en bakteriel sammensætning tættest på oprindelige cecal indhold, er der risiko for afvigelsen mellem enkelte donor mus på grund af variationen af commensal bakterier. Mens dette blev minimeret ved hjælp af cecal donorer fra samme leverandør med minimal tid mellem ankomst og progression af eksperimentet, dette kunne blive en cost-uoverkommelige mulighed for nogle laboratorier og præsenteret en anden timing logistik udfordring i at have alder-matchede mus findes når indlede en cecal gylle eksperimentere i neonatal mus, der var 7 dage gammel. En alternativ metode til at bruge friske cecal gylle var udnyttet, hvor flere voksne donorernes cecal indholdet var samlet, genopslemmes i D5W, frosne ved-80 ° C uden glycerol, og optøet en alikvot på et tidspunkt til eksperimenter. Udnyttelse af voksen donor cecal gylle at studere neonatal sepsis kunne potentielt overføre arter af bakterier til stede i cecal gylle neonatal musen ikke har været udsat for, men det er en strategi, der giver mulighed for undersøgelse af sepsis i neonatal mus og har været brugt til at studere neonatal mus biologi i de sidste13,14,15. Cecal gylle blev fortyndet i D5W at give ernæring til bakterier, som tillod oprettelsen af en aktiv infektion, når bakterierne blev sprøjtet, og blev gjort for at efterligne tilgængelighed af næringsstoffer i bughulen under nekrotiserende enterocolitis. Glycerol blev ikke medtaget som en stabilisator i frysning bakterier på grund af de potentielle negative bivirkninger, der kunne opstå fra glycerol injektion alene. Hvis glycerol havde været inkluderet i cecal gylle forberedelse, så den potentielle skade at glycerol alene kunne fremkalde ville har brug for at blive testet ved at medtage en glycerol-only (mangler cecal gylle) injektion i mus, som ville have øget mus skik. Bakterier levedygtighed cecal gylle bestande blev testet efter frysning cecal gylle lager uden glycerol og fandtes for at være konstant, med ingen ændring i bakterier koncentration i separate delprøver af den samme cecal gylle forberedelse opbevares ved-80 ° C over en 6 månedersperiode. Dette tyder på, at opbevaring uden glycerol er muligt at yde en konsekvent biologiske resultatet. Brug af en bulk-forberedt frosne cecal gylle lager også tilladt til brug af mus avlet in-house, at reducere omkostningerne og udnytte mandlige mus, der ellers ville være overskydende fra avl, derfor mus spild.
Identifikation af mislykkede udfordringer i mus var vigtigt at undgå at tilføje ekstra støj til systemet. Efter at være undergivet en intraperitoneal injektion af cecal gylle, blev musene observeret for tilstedeværelsen af en bule under huden, som angivet en mislykket injektion, der var faktisk subkutane. Mus blev observeret for utætheder på injektionsstedet, både umiddelbart efter nålen fjernelse og tillader dem at tage et skridt efter injektionen, fordi mus ville undertiden (sjældent) lække kun efter flytning lemmer af injektionsstedet ved at tage et skridt. Tilstedeværelsen af en bule eller lækage efter injektionen resulterede i at fjerne musen fra analysen. Efter alt, kunne enten af disse resultere i et andet resultat på grund af forkert mængden af cecal gylle injiceres som en 5% forskel i udfordring dosis er blevet observeret for at påvirke efterfølgende overlevelse.
Cecal gylle udfordring eksperimenter ofte kræves varierende mål dødelige doser med varierende vægt-justeret doser. På grund af dette, kan injektionsvolumener variere fra så lidt som 20 µL og op til 100 µL. Den forholdsmæssige eksperimentelle fejl forbundet med døde nål ændrer lydstyrken også sammen med Injektionsvolumen, stigende sværhedsgrad for at direkte sammenligne forskellige doser. Med en simpel ændring af standardisere Injektionsvolumen, er denne kilde af variansen fjernes fra eksperimentet.
Neonatal musen adfærdsmæssige overvågningssystem anvendes i denne protokol er først af sin art. Forskere opsat på at udføre etiske forskning med nyfødte mus er ofte konfronteret med udfordrende manglen på ressourcer til at vurdere dyrets velbefindende i denne alder. Den præsenteres intuitiv og ensartet overvågningssystem begynder at tage denne videnskløft. Vigtigst, denne beviser-driven tilgang ikke kun øger kvaliteten af eksperimentelle data opnået men, på samme tid, reducerer også de eksperimentelle dyr lidelser.

Sepsis er en førende årsag til nyfødte smitsomme døde1. Fordi nyfødte sepsis er dårligt forstået, er der gjort lidt fremskridt i begge identifikation af udsatte nyfødte tidligt i sygdommen og udvikling af effektive behandlinger eller prophylaxes. Dette kræver anvendelsen af dyremodeller for sepsis til bedre at forstå de proces og test mulige interventioner. Derudover reagerer voksen gnavere forskelligt på sepsis, med statistisk signifikante forskelle i antallet af bakterier til at administrere for at få den samme dødelige dosis (LD) og forskelle i den resulterende host reaktion i forhold til nyfødte2. Neonatal sepsis har således, som skal undersøges i nyfødte. Flere voksne sepsis modeller har været brugt i sepsis forskning. Disse omfatter en intravenøs udfordring med specifikke organismer impliceret i voksne menneskers sepsis eller cecal ligatur og punktering (CLP). CLP er en endogen challange model hvor coecum kirurgisk er isoleret, forbundet og punkteret for at tillade lækage af tarmindhold i bughinden, i sidste ende fører til den systemiske formidling af mikrober og deres produkter3. Men den kirurgiske procedure skal udarbejde CLP er dødelig for nyfødte dyr; en alternativ metode er derfor nødvendigt at efterligne polymicrobial udfordringen af CLP til at fremkalde neonatal sepsis. Cecal gylle model for neonatal polymicrobial sepsis blev udviklet for at imødegå dette behov, hvorved cecal indholdet af dyr er høstet, suspenderet i sterile dextrose 5% i vand (D5W), og intraperitoneal indsprøjtes i nyfødte mus2. Dette er siden, blevet en stadig mere populær model til at studere sepsis hos nyfødte og voksne dyr og har betydeligt avancerede mekanistiske indblik i den sygdom proces4,5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15.
I betragtning af den stigende brug af denne model og ønske om forskere at direkte sammenligne resultater på tværs af publikationer, er der behov for de tekniske aspekter til at være godt beskrevet og standardiseret på tværs af undersøgelser. Standardisering gælder for tre aspekter af modellen, nemlig i) forberedelse af cecal gylle stock, ii) udarbejdelse af udfordring delprøver til injektion i de eksperimentelle dyr og iii) definitionen af det humane slutpunkt hvorved dyr anses nonsurvivors i udfordring eksperimenter. Specifikt, er metoder til at forberede cecal gylle bestanden ofte refereres til den oprindelige artikel at indføre model2. Et kort resumé af denne model er, at cecal indholdet fra voksne mus blev høstet, suspenderet i sterile D5W til en koncentration på 80 mg/mL og anvendes inden for 2 h til at injicere de forsøgsdyr. Denne originale model brugt mus i samme aldersgruppe, fra den samme leverandør placering, som var til huse i deres respektive forskningsfaciliteter for mindre end 2 uger før høst cecal indholdet. Brug af in-house opdrættet mus, øget selv om at reducere omkostningerne fra regelmæssige leverandør levering og giver mulighed for anvendelse af overskydende mus af en bredere vifte af køn og alder, også væsentligt donor-til-donor variabilitet. Dette motiveret udvikling af en alternativ teknik, hvorved cecal indhold fra flere mus blev samlet sammen til at forberede et stort lager, som derefter blev aliquoted og opbevares ved-80 ° C13. Denne alternative metode blev tilpasset af flere grupper14,15. Men denne tilpasning resulterede i nogle tekniske varianter, både i den opbevaring medier bruges (10% eller 15% glycerol eller D5W alene) og i strategien for filtrering til at fjerne partikler (flertrins filtrering gennem et 860 µm og derefter en 190 µm filter eller enkelte filtrations gennem 100 µm eller 70 µm filtre)13,14,15. Injektion af glycerol alene kan potentielt skade, at 25% - 50% glycerol indsprøjtninger har været brugt som en gnaver model af nyre skade16,17,18,19, 20. For at undgå utilsigtede bivirkninger af glycerol, cecal gylle stock forberedelse til mus i denne undersøgelse er frosset i D5W uden glycerol, og test af bakteriel levedygtighed fra opbevaring ved-80 ° C udføres. Den filtrering strategi, der anvendes i denne undersøgelse er en pass gennem en 70 µm filter, som ikke har været direkte sammenlignet med de andre filtrering strategier opført.
Dødelige vægt-justeret doser af injicerede cecal gylle kan variere fra anlæg til anlæg og skal titered ud til den ønskede dødelighed for enkelte grupper. Med forskellige udfordring doser ændre de ledsagende udfordring mængder af nødvendighed. Men denne metodologiske detalje er ikke blevet rapporteret før. Derudover strategier for standard procedurer, såsom intraperitoneal injektion, er sjældent udarbejdet på inden for litteraturen, men enkelte teknikker kan påvirke om nyfødte mus lække når injiceres og påvirke deres endelige resultater.
Dyrevelfærd, herunder en definition af human slutpunkt, er et centralt aspekt af denne model og i hvilken som helst model af infektion og betændelse i gnavere21. I 1998 offentliggjort den canadiske Rådet på Animal Care (CCAC) omfattende retningslinjer for human slutpunkt udvælgelse, definere den humane slutpunkt, som "nogen faktiske eller potentielle smerte, angst eller ubehag skal minimeres eller lindres ved at vælge den tidligste Endpoint er forenelige med de videnskabelige mål for forskningen"22. Andre også forsigtig at Human slutpunkter skal oprettes baseret på videnskabeligt grundlag og ikke på en subjektiv fortolkning af dyrets tilstand alene21. Mens der er et væld af ressourcer til klinisk, adfærdsmæssige, og huld tegn-baserede kriterier for human slutpunkt, selv i forbindelse med infektion og betændelse specielt21,23,24, ingen af disse , herunder CCAC retningslinjerne for human slutpunkt22, nævne nyfødte mus. Således er objektivt og videnskabeligt begrundede Human slutpunkter langt vanskeligere at etablere for nyfødte dyr, givet både deres begrænsede adfærdsterapi evner og manglende beviser fra kriterier som vægttab, der er almindeligt anvendt til voksen mus. I øjeblikket, kriterierne for human slutpunktet bruges til 5 til 12 dage gamle neonatal mus i cecal gylle litteratur alle referere tilbage til det originale manuskript, der indførte model2. I dette oprindelige papir, var definition af human slutpunkt for nyfødte dyr baseret på to kriterier; nemlig, placeringen af en mus uden for reden (spredning) og mangel på mælk steder havde været set at resultere i dødsfald inden for timer. Et komplicerende spørgsmål i tildele en human slutpunkt er at mælk steder blive svært at se i mus stammer med mørk pels, som den almindeligvis ansat C57BL/6J stamme, efter den første uge af livet, mens syge dyr er overvåget indtil den 14. dag i livet (DOL). Yderligere, døde dyr kan findes postchallenge ved anvendelsen af disse kriterier (egen observation, upubliceret); således, en strengere definition af human slutpunkt er nødvendige for at lindre lidelse til forsøgsdyr og undgå dødelighed i situationer hvor resultatet kunne præcist skimtes tidligere.
Alle tre metodologiske aspekter af cecal gylle model præsenteres i en standard operating procedure beskriver forberedelse af cecal gylle bestand, en metode til indsprøjtning forsøgsdyr der holder konstanten injektion volumen mellem doser og reducerer risikoen for lækager, og en definition af human slutpunkt for 7 til 12 dage gamle mus baseret på et system af adfærdsmæssige modellering. Adfærdsmæssige oplysninger af mus sundhed scorer fra over 240 forsøgsdyr blev indsamlet og grupperet efter sidste overlevelse resultatet, demonstrerer en tegn-drevet definition af human slutpunkt. Lidelser af forsøgsdyr er reduceret ved at identificere døende neonatal mus på det tidligst mulige tidspunkt, mens biologisk betydelig overlevelse resultater kan udledes ved at observere nøglevariabler. Den visuelle repræsentation af både cecal gylle forberedelse og neonatal mus adfærd vil tjene som en fremragende ressource til enhver gruppe studerer sepsis eller nyfødte udfordring model dyr.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:609px;" width="610">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">0.1 - 20 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0799</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">1.8 mL Microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">Costar</td>
			<td style="width:123px;">3621</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">100 - 1000 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0801</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:222px;">1 - 200 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0800</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">15 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">FroggaBio</td>
			<td style="width:123px;">TB15-25</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:84px;width:222px;">23G1 needles</td>
			<td style="width:95px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:123px;">305145</td>
			<td style="width:171px;">only the needle, not the syringe, used for pinning mouse to styrofoam</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">28G 0.5 mL Insulin syringe</td>
			<td style="width:95px;">BD</td>
			<td style="width:123px;">329461</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">2 mL Cryogenic vial</td>
			<td style="width:95px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">430488</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">50 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:123px;">14-432-22</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">5 mL pipette</td>
			<td>Costar</td>
			<td style="width:123px;">4487</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">6 - 10 week old C57BL/6J adult mice</td>
			<td style="width:95px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">664</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">7 + day old C57BL/6J neonatal mice</td>
			<td style="width:95px;">Bred in house</td>
			<td style="width:123px;">n.a</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">70 &#956;m Cell strainer</td>
			<td style="width:95px;">Falcon</td>
			<td style="width:123px;">352350</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Defibrinated Sheep&#39;s Blood</td>
			<td style="width:95px;">Dalynn</td>
			<td style="width:123px;">HS30-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dextrose 5% Water (D5W)</td>
			<td style="width:95px;">Baxter</td>
			<td style="width:123px;">JB0080</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dissecting forceps</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">&#160;82027-386</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dissecting Scissors, Sharp Tip</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">&#160;82027-592</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Dissecting Scissors, Sharp/Blunt Tip</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">82027-594</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Ethanol (HistoPrep 95% Denatured Ethyl Alcohol)</td>
			<td style="width:95px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">HC11001GL</td>
			<td style="width:171px;">diluted to 70% with double distilled water</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Ethanol-proof marker; Lab marker</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">52877-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">EZ Anesthesia Vaporizer</td>
			<td style="width:95px;">EZ Anesthesia</td>
			<td style="width:123px;">EZ-155</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:222px;">Germinator 500, Dry sterilize surgicial instrument (Hot bead sterilizer)</td>
			<td style="width:95px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:123px;">GER 5287-120V</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:95px;">Fresenius Kabi</td>
			<td style="width:123px;">CP0406V2</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Micro Spatula</td>
			<td style="width:95px;">Chemglass</td>
			<td style="width:123px;">CG-1983-12</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Pipette-Aid</td>
			<td>Drummond</td>
			<td style="width:123px;">4-000-100</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-1000</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008653</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-20</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008650</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-200</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008652</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Scale</td>
			<td style="width:95px;">Sartorius</td>
			<td style="width:123px;">BL 150 S</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Specimen forceps</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">82027-440 / 82027-442</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Square 1000 mL Storage Bottle</td>
			<td style="width:95px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">431433</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Styrofoam board</td>
			<td style="width:95px;">Any</td>
			<td style="width:123px;">n.a</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Sure-Seal Mouse/Rat euthanasia chamber</td>
			<td style="width:95px;">Euthanex</td>
			<td style="width:123px;">EZ-178</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Tryptic Soy Agar</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">22091-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:222px;">VX-200 Lab Vortex Mixer</td>
			<td style="width:95px;">Labnet International</td>
			<td style="width:123px;">S0200</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">weigh paper</td>
			<td style="width:95px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">09-898-12B</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a controlled mouse model for neonatal polymicrobial sepsis

Neonatal sepsis forbliver en global byrde. En prækliniske model til skærmen effektiv profylaktisk eller terapeutisk indgreb er nødvendigt. Neonatal mus polymicrobial sepsis kan være fremkaldt ved at indsprøjte cecal gylle intraperitoneal i dag af liv 7 mus og overvåge dem for den følgende uge. Præsenteres her er de detaljerede trin er nødvendige for gennemførelsen af denne neonatal sepsis model. Dette omfatter ligeledes, at en homogen cecal gylle bestand, fortynde det til en vægt - og kuld-justeret dosis, en oversigt over den overvågning tidsplan og en definition af observerede sundhed kategorier bruges til at definere slutpunkter, human. Generation af en homogen cecal gylle bestand fra poolede donorer tillader administration i mange kuld over tid, at reducere variation mellem donorer og forhindre brug af potentielt giftige glycerol. Overvågningsstrategien anvendes giver mulighed for foregribelse af overlevelse resultatet og identifikation af mus der ville senere gå videre til døden, giver mulighed for en tidligere identifikation af human slutpunktet. To vigtigste adfærdsmæssige funktioner bruges til at definere sundhed scorer, nemlig neonatal musene evne til at rette når de placeres på deres ryg og deres grad af mobilitet. Disse kriterier kunne potentielt anvendes til adresse Human slutpunkter i andre undersøgelser af neonatal sygdom i mus, så længe en pilotundersøgelse er udført for at bekræfte nøjagtigheden. Afslutningsvis giver denne tilgang en standardiseret metode til model nyfødte sepsis hos mus, men samtidig give ressourcer til at vurdere dyrevelfærd bruges til at definere begyndelsen Human slutpunkter for angrebne dyr.

Cecal gylle levedygtighed opbevares ved-80 ° C kan testes over tid ved seriel fortynding og plating delprøver af cecal gylle bestand på 5% får blod tryptic soja agar efterfulgt af 24 h af aerobe inkubation ved 37 ° C. Efterfølgende optælling af bestemmelse kolonidannende enhed (CFU) indholdet af et cecal gylle forberedelse fandtes ikke for at ændre over en periode på 6 måneder, og levedygtighed blev ikke ramt af langvarig opbevaring ved-80 ° C (figur 2). Hver donor mus resulterede i gennemsnit i nok cecal gylle til at udfordre tre til fire kuld (data ikke vist).
Mus udfordret på DOL 7 med cecal gylle til at fremkalde polymicrobial sepsis begyndte at kommer til human slutpunktet inden for 12 timer af udfordringen, og polymicrobial sepsis var for det meste løst af 48 h postchallenge, som bemærket i en Kaplan-Meier overlevelse kurven kombineret fra data fra mere end 200 udfordret mus (figur 1A). Dødelighed var afhængige af den udfordring dosis, med en 5% ændring i udfordring dosis resulterer i en omtrent 15% forskel i overlevelsen (figur 1B). Kropsvægt mus blev målt ved hvert kontrolbesøg. Vægttab blev set i alle angrebne dyr, er ikke-diskriminerende mellem mus, der endte med overlevende og dem, der ikke under første 24 h postchallenge (figur 1 c). Efter 24 h begyndte mest overlevende dyr at genvinde deres vægt, mens alle nonsurvivors fortsatte med at tabe sig og flyttede til deres Human slutpunkt. Men en lille del af overlevende dyr, der havde bevaret deres oprettende refleks fortsatte også med at tabe sig eller har undladt at vinde vægt, indtil slutningen af forsøget, selv at miste så meget som 20% af deres oprindelige kropsvægt inden for 40 h udfordring. Da der var en overlapning af vægttab mellem mus, der endte med overlevende og dem, der gjorde ikke, ændring i vægt eller en tærskel på vægttab kunne ikke bruges som et kriterium for human slutpunkt samtidig bibeholde mål præcist opdeling overlevende fra nonsurvivors.
Opførsel af mus blev overvåget som skitseret i protokollen og i tabel 2. Snapshots af sundhed kategorier vises (figur 3A-C). Disse fotos viser forskellige sundhedsmæssige kategorier af mus som ikke lige selv efter at blive placeret på ryggen og skitsere forskellen mellem FTR-mobiltelefon og FTR-sløv, hvilket er en vigtig forskel. Ubestridte sund mus i denne alder vise ikke FTR-sløv aktivitet; Derfor, denne sundhed kategori er en markør af sygdom og et svar til at udfordre. Syg mus vises FTR-sløv symptomer (figur 3B) og kunne relatere mod FTR-Nonmobile (figur 3 c), hvor den øverste ben forbliver parallelt med bunden benet, med lidt at nul hip vuggende bevægelse, som er et af kriterierne for Human slutpunkt. Mus kan også gendanne, at få øget hip bevægelse og bliver FTR-Mobile (figur 3A). Den oprettende refleks og mobilitet noder blev bestemt for både venstre og højre side af hver mus, og den højeste score blev udnyttet til at afgøre, om musen havde nået en human slutpunkt. Adfærdsmæssige oplysninger blev indsamlet fra over 240 dyr udfordret med en dødelig dosis 60 (LD60) cecal gylle, og 144 Human slutpunkter blev observeret (figur 3D-F og tabel 1). Dette beviser-driven tilgang blev brugt til at definere og forfine den humane slutpunkt på tværs af fire sygdom stadier, kategoriseret eksperimentatorer baseret på begge adfærdsmæssige forskelle mellem overlevende og nonsurvivors og brøkdel af human slutpunkter nåede under hver tidsramme. Ved tidlige forsøg fandtes FTR-Nonmobile mus, der havde ingen hip bevægelse konsekvent døde inden for 4-6 h af denne adfærd, overholdes. I samlingen af de oplysninger, der præsenteres blev en FTR-Nonmobile sundhed score anvendt som kriterium for en human slutpunkt. Fra 12-21 h postchallenge, mens FTR-Nonmobile mus blev aflivet, både overlevende og nonsurviving dyr vises meget lignende adfærdsmønstre og kunne ikke fornemme på anden måde (figur 3D). Fra 21-48 h postchallenge, fleste overlevende mus genvandt deres oprettende refleks, mens færre end 1% af de FTR adfærd observeret var i dyr, der ville gå på at overleve eksperimentet (figur 3). Mus der har kunnet rette fra begge sider blev dermed, et yderligere kriterium for human slutpunkt i løbet af denne tid. Mellem 12 og 20 h postchallenge, blev 12,5% af det samlede antal Human slutpunkter observeret, versus 80,5% mellem 20 og 48 h, og 7% efter 48 h (tabel 1). Et særkende mellem mus der endte med at overleve og til sidst forværret til en human endpoint var tabet af den oprettende refleks, uafhængig af hip mobilitet (figur 3F). Ja, mellem 20 og 48 timer efter udfordringen, ialt 121 mus havde undladt at sig ret fra begge sider, med 116 af disse mus til sidst udvikler sig til en human slutpunkt, (som repræsenterer en 96% nøjagtighed i at identificere mus, der ikke ville gendrive). Ud over 48 timer efter udfordringen, blev 11 mus observeret for at undlade at rette fra begge sider, og 10 af disse skred til en human slutpunkt (en 91% nøjagtighed). Over 20 h efter udfordringen anslår antallet af mus der mistede den oprettende refleks for begge parter det endelige resultat med en nøjagtighed på mere end 90%; Derfor er dette blevet føjet til human slutpunkt kriterier til at identificere nonrecovering mus tidligere og reducere mus lidelser (tabel 1).
Hyppigheden, mus brug for overvågning af ændringer over tid, på grund af forskellige satser for død postchallenge, og er skitseret i tabel 1. En mus blev anset for at være ved sin humane slutpunkt på ethvert tidspunkt, hvis det havde undladt at rette sig selv og vises nonmobile hofte bevægelse på begge sider, eller hvis musen blev fundet spredt fra reden, var ikke i stand til at rette sig selv, og havde sløv hip bevægelse. Mus med en af disse betingelser ikke var forventes at være i stand til at slutte sig til kuldet og er blevet observeret for at være FTR-Nonmobile inden for 4-6 h. starter 20 h efter udfordringen, blev en ny Human slutpunkt tilføjet fordi de præsenterede oplysninger viser, at den store størstedelen af mus der FTR fra begge sider ender med at bukke under for sygdommen.
Videoer, tabeller og ressourcer præsenteres i dette håndskrift er en effektiv undervisning ressource for den korrekte adfærdsmæssige tildeling af udfordret mus. Syv eksperimentatorer blev bedt om at se uddannelse video og Læs tabellerne og protokollen før tildeling adfærd til 60 angrebne dyr. Identifikation af human slutpunkt tildeling var nøjagtig både for karakteristiske FTR-Nonmobile mus fra mus, vises anden adfærd (figur 4A) og FTR mus fra mus, der var i stand til at rette sig selv inden for den tilladte tidsramme ( Figur 4B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig1.jpg"> Figur 1 : Kaplan-Meier overlevelse kurven, cecal gylle dosis titrering og vægtændring efter cecal gylle udfordring. (A) overlevelse resultatet af neonatal C57BL/6J mus udfordret med en intraperitoneal cecal gylle indsprøjtning på DOL 7. Data for denne figur blev kombineret fra uafhængige eksperimenter ved hjælp af flere udfordring doser, lige fra 0,7 1,3 mg af cecal gylle pr. gram vægt blev administreret til disse mus. (B) Neonatal mus udfordret med 0,80 til 0,95 mg af cecal gylle pr. gram vægt fra én cecal gylle forberedelse vise en dosis-afhængige relation mellem mængden af cecal gylle i betragtning og procentdelen af overlevelse. ()C) procentdelen af ændring i vægt i forhold til vægten, udfordring, med den stiplede linje angiver en 20% tab vægt fra tidspunktet for udfordringen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig1large.jpg" target="_blank">Venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig2.jpg"> Figur 2 : CFU koncentration i cecal gylle stock opbevares ved-80 ° C ændrer ikke over en periode på 6 måneder. Effekt af cecal gylle alder på CFU koncentration blev testet ved hjælp af lineær regression. Hvert punkt repræsenterer en alikvot af det samme cecal gylle forberedelse, seriefremstillede fortyndet og forgyldt over en periode på 6 måneder. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig2large.jpg" target="_blank">Venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig3.jpg"> Figur 3 : Hip mobilitet kategorier af mus, der undlader at rette sig selv og af animalsk opførsel på forskellige tidspunkter, postchallenge. Mus, der har været udfordret med sepsis, når de placeres på ryggen, vil vise tegn på sygelighed, der kan måles ved graden af hofte bevægelser. (A) A fail til ret (FTR)-mobil mus viser hip vuggende bevægelse af deres øverste ben overstiger 90 ° vinkel fra vandret. (B) en FTR-sløv mus viser hip vuggende bevægelse men ikke overstiger 90 ° vinkel fra vandret på ethvert tidspunkt i løbet af 4 s af overvågning. (C) nogle FTR-Nonmobile mus vil udvide deres ben, bøjning på knæ, men vil vise meget lille (mindre end 10 ° vinkler) til nul hofte vuggende bevægelse, og benene vil forblive parallelt med hinanden. (D) dyrs adfærd 12-21 h postchallenge viser, at kun FTR-Nonmobile adfærd separate overlevende fra nonsurvivors. (E) fra 21 til 48 h postchallenge, kun 4 ud af 592 observerede FTR adfærd (0,67%) tilhører overlevende, giver mulighed for den oprettende refleks at forudsige det endelige resultat og bruges som en ny criterium for human slutpunkt. (F) ud over 48 h efter infektion, 6 ud af 131 mus (4.55%), der havde en oprettende refleks endte med at blive en del af gruppen FTR og blev ofret ved udgangen af eksperimentet, begrunder vedvarende overvågning i hele forløbet af recovery. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig3large.jpg" target="_blank">Venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig4.jpg"> Figur 4 : Instruktions ressourcer resultere i nøjagtig adfærdsmæssige klassificering af uafhængige eksperimentatorer. Eksperimentatorer uddannet ved at se video ledsager denne protokol kategoriseret videoer af 60 neonatal mus i forskellige sundhedsmæssige grupper. (A) evne til at skelne en human slutpunkt blev fastlagt og 97% af adfærd i gennemsnit var præcist kategoriseret som FTR-Nonmobile eller ej, mens kun 1% af FTR-Nonmobile mus var fejlidentificerede. To procent af musene var fejlagtigt identificeret som FTR-Nonmobile. (B) identifikation af anden Human slutpunktet criterium korrekt skelne mellem FTR mus eller dem, der har evnen til at rette inden 4 s for at blive placeret på ryggen var tildelt korrekt i 97% af partiturer, mens kun 0,96% af musene var fejlagtigt tildelt som oprettende selv og 2% af mus blev fejlagtigt tildelt som FTR. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig4large.jpg" target="_blank">Venligst klik her for at se en større version af dette tal.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Sygdom Stage</td>
			<td>A: høj sygelighed, ingen dødelighed</td>
			<td>B: høj sygelighed, lav dødelighed</td>
			<td>C: høj sygelighed, høj dødelighed</td>
			<td>D: lav sygelighed, lav dødelighed</td>
		</tr>
<tr>
<td>Timer sende udfordring</td>
			<td>0−12</td>
			<td>12−20</td>
			<td>20−48</td>
			<td>> 48</td>
		</tr>
<tr>
<td>Overvågning frekvens</td>
			<td>2 h post udfordring</td>
			<td>hver 4−6 h</td>
			<td>Hver 4−6 Hansen, 8 h, automatiseret natten over</td>
			<td>1−2 gange dagligt, mere hvis det er nødvendigt</td>
		</tr>
<tr>
<td>Andel af total Human slutpunkter observeret</td>
			<td>0/144</td>
			<td>18/144</td>
			<td>116/144</td>
			<td>10/144</td>
		</tr>
<tr>
<td>Procentdel af human slutpunkter observeret</td>
			<td>0%</td>
			<td>12,5%</td>
			<td>80,5%</td>
			<td>7%</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Human slutpunkt kriterier</td>
			<td colspan="2">1. FTR−Nonmobile på begge sider</td>
			<td colspan="2">1. FTR−Nonmobile på begge sider</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">2. spredt fra reden og er FTR−Lethargic</td>
			<td colspan="2">2. spredt fra reden og er FTR−Lethargic</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td colspan="2">3. FTR på både venstre eller højre side (med nogen mobilitet score)</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: hyppigheden af overvågning og human slutpunkt kriterier i de forskellige stadier af sygdommen. Overvågning frekvens, Human slutpunkter observeret, procentdelen af human slutpunkter og human slutpunkt kriterier i forskellige stadier af sygdommen.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Oprettende refleks</td>
			<td>Mobilitet</td>
			<td>Frist, lige efter at blive placeret på ryggen</td>
			<td>Frist til foranstaltning mængde bevægelse (mobile / sløv / nonmobile)</td>
			<td>Mobilitet scoring kriterier</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Rettigheder</td>
			<td>Mobiltelefon</td>
			<td rowspan="6">4 s</td>
			<td rowspan="3">En yderligere 8 s</td>
			<td>Med musen tager flere trin i en række, opretholdelse af fremdrift, og udforsker omgivelserne. Hvalpen vil ikke falde over.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sløv</td>
			<td>Musen kan tage et skridt, men stop og pause før du tager en anden. Pup kan falde over.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nonmobile</td>
			<td>Med musen tager ikke nogen trin efter oprettende selv. Pup kan falde over.</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Ikke ret</td>
			<td>Mobile hofter</td>
			<td rowspan="3">De samme 4 s bruges til at måle oprettende refleks</td>
			<td>Har energisk hip bevægelse med låret roterende ud over 90° fra vandret mindst én gang inden for 4 s.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Sløv hofter</td>
			<td>Hip flytning op til men ikke over 90° fra vandret.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nonmobile hofter</td>
			<td>Lemmer kan flytte ved udvidelse og tilbagetrækningskraften men hofterne roterer ikke. Hvalp ser meget syg.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 2: overvågning af bordet og kriterier ved fastsættelsen af sundhed score af mus. De angivne kriterier blev anvendt til at definere sundhed artsgrupper til mus og reducere individuelle afvigelse i tildeling af sundhed scorer.

Watch this Scientific Journal Video about A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis at JoVE.com

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Denne protokol giver de nødvendige skridt til at etablere og evaluere neonatal sepsis i 7 dage gamle mus.

En kontrolleret musemodel for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Den cecal gylle model for polymikrobiel sepsis er et kraftfuldt værktøj til at dissekere ud unikke neonatal patofysiologi. Det kan være variabel, og humane slutpunkter er ikke godt beskrevet. Her præsenterer vi vores meget standardiserede procedure for at forberede en cecal gylle og injicere i forsøgsdyr.Desuden bruger vi en datadrevet tilgang til at identificere døende hvalpe på et tidligt muligt tidspunkt. Lad os begynde med at forberede en frossen cecal gylle lager. Dette gøres ved at samle cecal koncent fra mindst fem voksne mus, suspension i sterilt dextrose vand, og opbevaring på minus 80 til senere brug.Du kan bruge hanner eller hunner, men muss køn, alder og baggrund til dine eksperimenter bør holdes konstante. Lad os først forberede vores værktøjer til dissektion. Disse omfatter et sæt saks og snævler til huden og et andet sæt til de indre organer.Tænd for den varme perlesterilator mindst 30 minutter før brug. Dyp værktøjerne i 70% ethanol og derefter nedsænke dem i den varme perle sterilisator i mindst et minut. Spray en måtte af papirservietter med 70% ethanol, derefter fjerne værktøjerne fra sterilisator uden at røre den steriliserede del af værktøjet til de ikke-sterile håndtag af andre værktøjer.Læg dem på køkkenrullen for at køle af. Disseker musene i et biologisk sikkerhedsskab. Pin benene på musen til en styrofoam bord ved hjælp af 23 gauge nåle, så musen er maven op.Spray maven med 70% ethanol. Brug sterile kraftbefæstelser og saks, skær gennem huden, løsne huden fra bughinden med saksen, og skær åbne en rektangulær region fra lysken til brystbenet og venstre side til højre side. Fjern pels omkring bughinden.Skift til et nyt par sterile værktøjer til at skære gennem bughinden, hvilket også gør en rektangulær åbning. Identificer cecum, som skal køre venstre side til højre side på tværs af kroppen. Forstyrre bindevæv til at identificere cecum grene fra tarmene og skære cecum væk fra tarmene.Læg den på et steriliseret stykke vejepapir. Brug sterile værktøjer, skæres gennem begge ender af cecum. Hold midten af cecum med fortriver og bruge en flad metal spatel til forsigtigt at skubbe cecal indholdet ud af enderne ved hjælp af en rullende bevægelse.Indholdet opsamls, og de anbringes i et forvejet centrifugerør med 15 milliliter. Pool cecal indhold fra højst fem mus i samme rør. Vægt røret igen, når alt indhold er tilsat.For at beregne mængden af dextrose vand for at tilføje til cecal indhold i hvert rør, dividere vægten af cecal indholdet i røret med den ønskede koncentration i milligram per milliliter. Hold en aliquot af dextrose vand på is for re-suspension af cecal indhold. Der tilsættes den nødvendige mængde dextrosevand til centrifugerøret på 15 milliliter, der indeholder cecal-indholdet.Vortex røret lodret og vandret i ca 30 sekunder. Overhold for tilstedeværelsen af partikler over et par millimeter i diameter, og hvis de findes, fortsætte vortexing indtil alle partikler er blevet synligt forsvundet. Placer en 50 milliliter centrifuge rør på is til at indsamle filtratet og installere en steril 70 mikrometer celle si over toppen.Der pipetters fire milliliter reshængt gylle fra et 15 milliliterrør over cellesting og ind i opsamlingsrøret. Re-suspendere partiklerne ved pipettering op og ned to til tre gange. Ekstruder forsigtigt bobler for at øge filtreringshastigheden under omrøring af indholdet med pipettenspidsen, indtil der ikke er mere væske, der filtreres.Dette bør tage omkring 30 sekunder. Skift cellesti mellem hvert rør af cecal gylle, men pool alt indhold i samme 50 milliliter opsamlingsrør. Hvis din bestand overstiger 40 milliliter, så vortex det i 15 sekunder, og placere 20 milliliter i en ny centrifuge rør.Opdel gyllen i kryogene hætteglas med 500 mikroliter aliquots hver. Vortex gyllen mellem hver tre hætteglas. Hold master bestanden i hætteglas på is.Ved opbevaring af aliquots på minus 80 ændres den aerobe koloni, der danner enhedskoncentration i et cecal gyllepræparat, ikke over en periode på seks måneder. Nu, hvor cecal gylle er forberedt, kan vi bruge den til at udfordre et kuld på syv til otte dage gamle mus med en vægtjusteret dosis cecal gylle. Gylletredyren er dosisafhængig.Du bliver nødt til at bestemme den ønskede dødelige dosis i dit anlæg for hver ny bestand med en ny dosis titrering. En cecal gylle injektion aliquot fremstilles pr kuld. Vi normaliserer inokulumet til et 100 mikrolitervolumen, afrunding til nærmeste 10 mikroliter for hvert dyr i kuldet.Forberedelse af udfordringen aliquot kræver tre beregninger, mængden af gylle lager kræves, ekstra volumen af dextrose vand, og den afrundede volumen for hver hvalp i kuldet. Nærmere oplysninger om, hvordan du udfører hver beregning, findes i afsnit tre i protokollen. Udførelse af disse beregninger i hånden for hvert eksperiment kan være tidskrævende og vil bidrage til eksperimentelle fejl, således et regneark kan downloades sammen med den protokol, hvor du indtaster din bestand koncentration, ønskede dosis, og vægten af dit kuld, og mængden af gylle lager, mængden af dextrose vand, og faktiske volumen per hvalp returneres automatisk.Du kan udskrive dette ark og tage det med dig, når du er klar til at udfordre dine dyr. Forbered injektionen aliquot i en biologisk sikkerhed kabinet og holde det på is. Før sprøjten sættes i, blandes mikrocentrifugerøret ved at svippe 20 gange.Hvalpe udfordres med en 28 gauge insulinsprøjte. Før der udarbejdes gylle, blandes aliquot ved at inspirere og skubbe 300 til 500 mikroliter af udfordringen aliquot ind og ud af mikrocentrifugerøret. Derefter udarbejde omkring 150 mikroliter af udfordringen aliquot.Dette bør være større end injektion volumen for nogen syv til otte dage gamle hvalp. Svirp på sprøjten for at løsne boblerne fra stemplet og trække lidt tilbage på sprøjten for at fjerne eventuelle luftbobler. Rør ikke ved nålen eller stempelskakslen under denne proces.Den overskydende cecal gylle afgives tilbage i mikrocentrifugerøret, indtil den beregnede mængde cecal gylle til musen er lagt i sprøjten. Cecal gylle administreres med en intraperitoneal injektion. Udfør dette i henhold til protokollen på din dyreinstitution.For at minimere lækager, vippe hvalpen til ansigt nedad og indsætte nålen mellem benet og kønsorganerne, holde nålen lavvandet og subkutane. Efter indsættelse af nålen omkring en centimeter, tryk nedad og fremad, indtil du føler nålen punktere bughinden, derefter langsomt trykke stemplet. Træk forsigtigt nålen tilbage efter samme rute, som du gik ind, afslappende din langfinger, som du gør det.Bemærk eventuelle lækager i din lab notebook og overveje at udelade dyr med betydelige lækager fra dit endelige resultat. I dette afsnit vil vi skitsere de forskellige sundhedsniveauer, som vi observerer i mus udfordret med polymikrobiel sepsis og deres tilsvarende humane endepunkt. For alle procedurer, der involverer neonatal mus, overfører vi strøelsesmaterialet til et nyt bur.Dette overfører dame lugt på dine handsker og reducerer stress på dame fra gentagne indrejse i hendes bur. Vi laver en anden rede i det nye bur til at holde de overvågede hvalpe indtil udgangen af proceduren eller overvågning, når hele kuldet er klar til at blive returneret til dame's bur. Placer en mus på ryggen og overvåge for evnen til at højre inden for fire sekunder.Hvis det kan rigtigt, så vent otte sekunder mere for at bestemme niveauet af mobilitet. En uantastet eller inddrive mus er oftest i stand til højre og udforske sine omgivelser ved at tage flere trin i træk. Omgruppere mus, der er i stand til at rette sig selv og tage et par skridt til at udforske sine omgivelser som rettigheder-sløv.Disse mus kan falde over, mens du tager et skridt og ser rystende på deres fødder. En mus, der ikke er i stand til højre og har hofte bevægelse, der overstiger 90 grader fra vandret vi gruppe som undlader at højre-mobile. Denne mus vil i sidste ende ret, men kan ikke inden for fire sekunder.På grund af sin hofte bevægelser, er det grupperet som undlader at højre-mobile. Hvalpe, der ikke var i stand til højre og har hofte bevægelse under 90 grader fra vandret er grupperet som undlader at højre-sløv. Dette er et andet eksempel på en mus, hvis hofter ikke overstiger 90 grader fra vandret og er grupperet som undlader at højre-sløv.En undlader at højre-nonmobile hvalp vil have ben, der kan ryste eller vibrere, men har ingen hofte bevægelse. Lemmer kan strække sig og trække sig tilbage, men vil ikke have lateral bevægelse. Hvalpen er synligt syg og har nået det humane endepunkt.Dette er endnu et eksempel på en undlader at højre-nonmobile hvalp. Dens hofter ikke ryste fra venstre mod højre, men dens poter gør vibrere. Når du håndterer dame's bur, hvalpe kan trækkes ud af reden, hvis ammende dame løber.Vi erstatter disse og derefter kontrollere for andre spredte hvalpe, som er væk fra deres nestmates. Hvis disse spredte hvalpe ikke er ret-sløv, de er på et humant endepunkt. Her er en Kaplan-Meier overlevelse kurve af vores sepsis model.Overvågningstidspunkterne findes i det vedlagte SOP. På ethvert tidspunkt langs overlevelse kurven, hvis en mus viser sig at være ikke at højre-nonmobile, det er på sit humane endepunkt og aflivet. Mellem 12 og 21 timer efter udfordringen vil mus fremstå syge, og omkring halvdelen af musene vil kunne rettes på den ene side, mens den anden halvdel ikke har ret på en af siderne.Dette er den tidsramme, hvor musene vil begynde at sidespring i sundhed score og nå humane slutpunktet for ikke at højre-nonmobile. Disse er repræsentative resultater af sundhed score observeret i denne tidsramme. De overlevende og ikke-overlevende grupper kan ikke differentieres på nuværende tidspunkt baseret på deres sundhed score.I denne sygdomsfase, 21 til 48 timer efter udfordringen, observerer vi den højeste andel af humane endepunkter. Vi har også bemærket, at langt de fleste mus, der ikke er i stand til at rette på begge sider, ikke vil ende med at komme sig efter sygdommen, hvilket derfor bliver et nyt kriterium for humant endepunkt ud over de manglende ret til ikkemobile kriterier. De observerede sundhedsscorer i denne sygdomsfase resulterede i en adskillelse af overlevende fra ikke-overlevende.Langt størstedelen af mus, der ikke var i stand til at rette på begge sider ikke komme sig efter sygdom. Disse data understøtter, at et nyt kriterium for humant slutpunkt, der begynder ved 21 timer efter udfordringen, bør være at aflive mus, der ikke gør ret på begge sider. Over 48 timer efter udfordring mange mus vil begynde at vise mere aktivitet og en bedre rette refleks.Selv om andelen af humane endepunkter er lavere i denne periode, kan musene stadig sidespring og blive sygere, og de kræver stadig overvågning for humane endepunkt. I løbet af denne tidsramme, nogle af de mus, der til sidst blev grupperet som ikke-overlevende havde vist øget aktivitet på et tidspunkt, men senere gjorde værre og nåede et humant slutpunkt. Dette kræver fortsat overvågning af syge dyr med øget hyppighed, hvis de begynder at vise dårligere sundhedsmæssige resultater.Uafhængige eksperimentatorer, der ikke har modtaget personlig træning, og som kun observerer denne instruktionsvideo, blev testet i deres evne til at tildele den samme score som efterforskerne ved hjælp af optagede testvideoer. Denne instruktionsvideo resulterer i nøjagtig adfærdsklassifikation. Evnen til at tildele den korrekte score til ikke at højre-nonmobile neonatal mus, som er et mål for humane endepunkt, blev bestemt ud af 60 neonatal mus, og et gennemsnit på 97% af adfærd blev præcist skelnes, med kun 3% er fejlidentificeret.Dernæst blev evnen til at skelne neonatal mus, der ikke var rigtigt, eller som var i stand til at ret inden for fire sekunder testet. Dette er endnu et mål for humant endepunkt og blev præcist tildelt i 97% af neonatal mus, mens 3% af hvalpene fejlagtigt blev tildelt som opstilling. Her er repræsentative resultater for den procentvise vægtændring af mus i forhold til deres tid med udfordring.Den gennemsnitlige vægtændring mellem overlevende og ikke-overlevende begyndte at adskille på 24 timer efter udfordring, men der er en masse overlapning mellem grupperne. Der var nogle overlevende, der mistede over 20%vægt, men stadig inddrives fra sygdom. Vægtændring var ikke så effektiv til at forudsige resultatet i forhold til forskellene i sundhedsscore, hvilket er grunden til det ikke bruges som et kriterium for at afgøre, om mus er på et humant endepunkt.Afslutningsvis bør du nu være i stand til at forberede en bestand af frosne cecal gylle, beregne vægtjusteret dosis. Og injicere og overvåge nyfødte mus for humane endepunkter. Vi håber, at dette vil være en værdifuld ressource for din mus forskning.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Sepsis remains a persistent problem on intensive care units all over the world. Understanding the complex mechanisms of sepsis is the precondition for ...

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

Cecal ligatur og Punktering-induceret sepsis som en model til at studere Autophagy i mus

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

En mus Model for Patogen-induceret kronisk inflammation på lokale og systemiske websteder

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-invasive Model of Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infektion i Neonatal Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Antibody Binding Specificity for Kappa (V&#954;) Light Chain-containing Human (IgM) Antibodies: Polysialic Acid (PSA) Attached to NCAM as a Case Study

Antibody Binding Specificity for Kappa VÃƒÅ½Ã‚Âº Light Chain-containing Human IgM Antibodies: Polysialic Acid PSA Attached to NCAM as a Case Study

Antistof Bindende Specificitet for Kappa (VK) let kæde-holdige Menneskelige (IgM) Antistoffer: Polysialic Acid (PSA) Knyttet til NCAM som en case study

Antibodies of the IgM isotype are often neglected as potential therapeutics in human trials, animal models of human diseases as well as detecting agents ...

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Cefoperazon behandlet musemodel af klinisk relevant<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Influenza A Virus undersøgelser i en musemodel af infektion

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

Virkningerne af eksponering af formaldehyd til en rotte Model af atopisk Dermatitis forårsaget af Neonatal Capsaicin behandling

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Design af cecal ligation og punktering og intranasal infektion Dual model af sepsis-induceret immunsuppression

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

En neonatal Imaging Model af Gram-Negative bakteriel sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...