Name: a controlled mouse model for neonatal polymicrobial sepsis
Uploaded: 2019-01-27T14:00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis at JoVE.com

Speciale dank aan Claire Harrison en het dier zorg faciliteit in British Columbia kinder ziekenhuis Research Institute (BCCHR) voor hun steun in de dierlijke werk, alsmede aan Dr. Po-Yan Cheng voor hun begeleiding en inzet voor dierlijke controle en welzijn.

<ol>
	<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+causes+of+child+mortality+in+2000-13,+with+projections+to+inform+post-2015+priorities:+an+updated+systematic+analysis.">Global, regional, and national causes of child mortality in 2000-13, with projections to inform post-2015 priorities: an updated systematic analysis.</a> The Lancet. 385 (9966), 430-440 (2015).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+mortality+and+altered+immunity+in+neonatal+sepsis+produced+by+generalized+peritonitis.">Increased mortality and altered immunity in neonatal sepsis produced by generalized peritonitis.</a> Shock. 28 (6), 675-683 (2007).</li><li>Fink, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis.">Animal models of sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 143-153 (2014).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+innate+immunity+predisposes+murine+neonates+to+poor+sepsis+outcome+but+is+reversed+by+TLR+agonists.">Defective innate immunity predisposes murine neonates to poor sepsis outcome but is reversed by TLR agonists.</a> Blood. 112 (5), 1750-1758 (2008).</li><li>Cuenca, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+for+CXC+ligand+10/CXC+receptor+3+signaling+in+the+murine+neonatal+response+to+sepsis.">Critical role for CXC ligand 10/CXC receptor 3 signaling in the murine neonatal response to sepsis.</a> Infection and Immunity. 79 (7), 2746-2754 (2011).</li><li>Gentile, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+immunity+and+defects+in+the+neonatal+and+elderly+immune+response+to+sepsis.">Protective immunity and defects in the neonatal and elderly immune response to sepsis.</a> Journal of Immunology. 192 (7), 3156-3165 (2014).</li><li>Cuenca, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+emergency+myelopoiesis+following+polymicrobial+sepsis+in+neonates.">Delayed emergency myelopoiesis following polymicrobial sepsis in neonates.</a> Innate Immunity. 21 (4), 386-391 (2015).</li><li>Gentile, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+emergency+myelopoiesis+and+survival+in+neonatal+sepsis+by+caspase-1/11+ablation.">Improved emergency myelopoiesis and survival in neonatal sepsis by caspase-1/11 ablation.</a> Immunology. 145 (2), 300-311 (2015).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+IL-17A+attenuates+neonatal+sepsis+mortality+induced+by+IL-18.">Targeting IL-17A attenuates neonatal sepsis mortality induced by IL-18.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), E2627-E2635 (2016).</li><li>Fallon, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Program+Cell+Death+Receptor-1-Mediated+Invariant+Natural+Killer+T-Cell+Control+of+Peritoneal+Macrophage+Modulates+Survival+in+Neonatal+Sepsis.">Program Cell Death Receptor-1-Mediated Invariant Natural Killer T-Cell Control of Peritoneal Macrophage Modulates Survival in Neonatal Sepsis.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1469 (2017).</li><li>Young, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+survival+after+induction+of+sepsis+by+cecal+slurry+in+PD-1+knockout+murine+neonates.">Improved survival after induction of sepsis by cecal slurry in PD-1 knockout murine neonates.</a> Surgery. 161 (5), 1387-1393 (2017).</li><li>Rincon, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvant+pretreatment+with+alum+protects+neonatal+mice+in+sepsis+through+myeloid+cell+activation.">Adjuvant pretreatment with alum protects neonatal mice in sepsis through myeloid cell activation.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 191 (3), 268-278 (2018).</li><li>Starr, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+cecal+slurry+preparation+protocol+with+improved+long-term+reproducibility+for+animal+models+of+sepsis.">A new cecal slurry preparation protocol with improved long-term reproducibility for animal models of sepsis.</a> PLoS ONE. 9 (12), e115705 (2014).</li><li>Hansen, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+in+milk+fat+globule-epidermal+growth+factor-factor+8+exacerbates+organ+injury+and+mortality+in+neonatal+sepsis.">Deficiency in milk fat globule-epidermal growth factor-factor 8 exacerbates organ injury and mortality in neonatal sepsis.</a> Journal of Pediatric Surgery. 52 (9), 1520-1527 (2017).</li><li>Fujioka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+heme+oxygenase-1+attenuates+the+severity+of+sepsis+in+a+non-surgical+preterm+mouse+model.">Induction of heme oxygenase-1 attenuates the severity of sepsis in a non-surgical preterm mouse model.</a> SHOCK. 47 (2), 242-250 (2017).</li><li>Al Asmari, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+quinacrine+against+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+rats.">Protective effect of quinacrine against glycerol-induced acute kidney injury in rats.</a> BMC Nephrology. 18, PMC5273840 (2017).</li><li>Geng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+gene+expression+profiles+and+signaling+pathways+in+rhabdomyolysis-induced+acute+kidney+injury.">Differences in gene expression profiles and signaling pathways in rhabdomyolysis-induced acute kidney injury.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 8 (11), 14087-14098 (2015).</li><li>Kim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+depletion+ameliorates+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+mice.">Macrophage depletion ameliorates glycerol-induced acute kidney injury in mice.</a> Nephron Experimental Nephrology. 128 (1-2), 21-29 (2014).</li><li>Nara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluations+of+lipid+peroxidation+and+inflammation+in+short-term+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+rats.">Evaluations of lipid peroxidation and inflammation in short-term glycerol-induced acute kidney injury in rats.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 43 (11), 1080-1086 (2016).</li><li>Zager, R. A., Johnson, A. C. M., Lund, S., Hanson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure:+determinants+and+characteristics+of+the+injury-induced+hyperinflammatory+response.">Acute renal failure: determinants and characteristics of the injury-induced hyperinflammatory response.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 291 (3), F546-F556 (2006).</li><li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humane+Endpoints+for+Infectious+Disease+Animal+Models.">Humane Endpoints for Infectious Disease Animal Models.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (2), 99-104 (2000).</li><li>Canadian Council on Animal Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guidelines on: choosing an appropriate endpoint in experiments using animals for research, teaching and testing. , (1998).</li><li>Nemzek, J. A., Xiao, H. Y., Minard, A. E., Bolgos, G. L., Remick, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humane+endpoints+in+shock+research.">Humane endpoints in shock research.</a> SHOCK. 21 (1), 17-25 (2004).</li><li>Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+approach+for+establishing+humane+endpoints.">A systematic approach for establishing humane endpoints.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (2), 80-86 (2000).</li></ol>

Dr. James Wynn ontvangt steun van de National Institutes of Health (NIH) / Nationaal Instituut voor algemene medische wetenschappen (R01GM128452) en de NIH /Eunice Kennedy Shriver Nationaal Instituut van gezondheid van het kind en de menselijke ontwikkeling (NICHD) () R01HD089939).

Postnatale neonatale muizen hebben zeer beperkte mobiliteit en niet het recht zich na gelegd op hun rug, zelfs als onbetwist. Door DOL 7, de leeftijd van muizen uitgedaagd in dit model, een bereik van beweging variërend van rechten-Mobile naar FTR-Mobile werd waargenomen in onbetwiste muizen, met een belangrijk verschil, namelijk dat een onbetwiste muis op deze leeftijd FTR-lethargisch gedrag niet heeft weergegeven. Alleen muizen met polymicrobial sepsis uitgedaagd werden waargenomen te worden FTR-lusteloos; deze reactie kan dus een marker van de ernst van de ziekte. Attente wordt aan de cutoff van een 90° hoek van horizontaal voor hip beweging zorgt voor de consistente en accurate toewijzing van lusteloos of mobiele hip beweging in muizen. Het tijdsbestek van 4 s om te zien als een muis zelf recht kan werd geselecteerd omdat onbetwiste muizen waren in staat om consequent het recht zich binnen dit tijdsbestek. Herhaalde meting van de dezelfde muis werd vermeden, terwijl de tijd naar rechts zelf en de meting van de heup mobiliteit werd beperkt tot 4 s, om te voorkomen dat overdreven vermoeiend de muis, die anders van invloed kan zijn op haar vermogen om het verkrijgen van voedsel en warmte en kan van invloed zijn op de prognose om beter te krijgen. Wetswijziging zelf van zowel de linker- en de rechterkant werden waargenomen, en de hoogste van de scores werd gebruikt om te bepalen als de muis op een humane eindpunt was, omdat sommige muizen werden gevonden om weer te geven van FTR-Nonmobile aan de ene kant nog een hogere mobiliteit aan de andere kant en b e kunt herstellen uiteindelijk.
Het scoresysteem gebruikt om te evalueren van de muis gezondheid vertrouwden op de toepassing van categorische cutoffs op wat een spectrum van beweging is en kon dus vatbaar voor individuele bias. Personeel was samen getraind om ervoor te zorgen dat elke persoon scoorde de muizen hetzelfde; Er zal waarschijnlijk blijven echter een niveau van subjectiviteit leidt tot variatie. De consistentie van het scoren werd geëvalueerd door het hebben van zeven onderzoekers die had niet eerder uitgevoerd het toezicht op de neonatale muis leren de vereisten die worden vermeld in dit protocol en de video en, vervolgens, onafhankelijk toewijzen van gedrag en bepalen humane eindpunt. Een nauwkeurigheid van 97% werd waargenomen met scoren uitgevoerd op 60 uitgedaagd muizen, suggereren dat individuele bias niet een belangrijke rol in het gedrags toewijzingen van dit model speelt. De gepresenteerde gedrags monitoringsprotocol is gebaseerd op observaties van dieren op DOL 7 aangevochten, maar muizen jonger dan 6 dagen in een gezonde toestand van onbetwiste kunnen niet consequent recht zelf. Dus, de criteria beschreven humane eindpunt niet kunnen worden toegepast direct op jongere muizen. Als jongere muizen worden gebruikt in dit experimenteel model of als een andere uitdaging model met andere ziekte kinetiek wordt toegepast, dan geschikt humane eindpunt criteria moeten worden ontwikkeld en geïntroduceerd om te voorkomen dat de euthanasie van muizen die zou anders, uiteindelijk, herstellen. Het scoresysteem geeft een robuuste methode voor het verbeteren van de humane eindpunt classificatie, met testen en bevestiging, mogelijk kan worden toegepast op andere modellen.
Elk preparaat van cecal drijfmest of het gebruik van een nieuwe stam van de muis vereist de retitration van de cecal drijfmest dosis te beheren om een soortgelijke letale dosis. Elk preparaat is gestandaardiseerd door de uitlezing van belang, namelijk overleven, in plaats van het geven van de dezelfde kiemen. Elke cecal drijfmest voorbereiding van levensvatbare bacteriële concentratie gevarieerd enigszins, mogelijk als gevolg van verschillen in de commensale bacteriën van de donor, of als gevolg van verschillen in het gewicht links in de cel zeef van de cecal drijfmest voorraad postfiltration. Tijdens de titratie van de cecal drijfmest, de eerste twee nestjes werden in twee groepen verdeeld en elke helft uit het nest werden uitgedaagd met één van de twee doses, zodat elk van de doses zou worden getest in twee nesten. Als de resulterende overlevingskans niet overeenkomt met het vereiste niveau, in de dan de dosis uitdaging was ofwel verhoogd of verlaagd met 5% - 10%, en het experiment herhaald. Meerdere nesten werden gebruikt om de rekening voor nest-naar-nest verschillen die kunnen leiden tot resistentie of gevoeligheid voor sepsis binnen een nestje toegenomen. Het was belangrijk om nauwkeurig de voorraad cecal drijfmest met elke nieuwe voorbereiding om ervoor te zorgen dat de nieuwe titratie van cecal drijfmest vergelijkbaar met vorige cecal drijfmest preparaten was titer. Periodes van teveel lawaai en trillingen, speciaal tijdens het comprimeren van asfalt en de bouw van een nabijgelegen gebouw en de weg, werden waargenomen te verhogen van de spanning in de dammen. Dit gecorreleerd met verhoogde tarieven van kannibalisatie en de sterfte van de experimenten van de overleving, zelfs op het gebied van onbetwiste muizen, wat erop duidt dat er vreemde effecten op neonatale overleving die ook moeten worden gecontroleerd voor kan worden beïnvloed.
Voorafgaande methoden voor cecal drijfmest voorraad voorbereiding inbegrepen het gebruik van verse cecal drijfmest of de voorbereiding van bevroren cecal drijfmest, met behulp van een verscheidenheid van methoden, met inbegrip van de opslag in glycerol die onvermijdelijk tijdens de uitdaging zou worden overgedragen. Terwijl het gebruik van verse cecal drijfmest het voordeel biedt van het hebben van een bacteriële samenstelling die zich het dichtst bij de oorspronkelijke cecal inhoud, is er het risico van variantie tussen afzonderlijke donor muizen als gevolg van de variatie van de commensale bacteriën. Terwijl dit werd geminimaliseerd door middel van cecal donoren van dezelfde leverancier met minimale tijd tussen aankomst en voortgang van het experiment, deze kon uitgegroeid tot een kosten-verbiedend optie voor sommige laboratoria en gepresenteerd een andere timing logistieke uitdaging in het hebben van leeftijd-matched muizen beschikbaar wanneer begint een cecal drijfmest experimenteren in neonatale muizen die 7 dagen oud waren. Een alternatieve methode voor het gebruik van verse cecal drijfmest werd gebruikt, waar meerdere volwassen donorlanden cecal inhoud werden gebundeld, geresuspendeerde in D5W, bevroren bij-80 ° C zonder van glycerol en ontdooid één aliquot tegelijkertijd voor de experimenten. Het gebruik van volwassen donor cecal drijfmest te bestuderen van neonatale sepsis konden potentieel overdragen soorten bacteriën aanwezig zijn in de cecal drijfmest die de neonatale muis is niet blootgesteld aan, maar het is een strategie die het mogelijk voor de studie van sepsis in neonatale muizen maakt en is gebruikt voor het bestuderen van neonatale muis biologie in de afgelopen13,14,15. Cecal drijfmest was verdund in D5W om voeding aan de bacteriën, waardoor de oprichting van een actieve infectie zodra de bacteriën werden ingespoten, en werd gedaan om te bootsen de beschikbaarheid van nutriënten in de peritoneale holte tijdens necrotiserende enterocolitis. Glycerol werd niet opgenomen als een stabilisator in de bevriezing van bacteriën vanwege de potentiële negatieve bijwerkingen, die zouden kunnen uit glycerol injectie alleen voortvloeien. Als glycerol had overgenomen in de voorbereiding van de cecal drijfmest, dan de potentiële schade die alleen glycerol kan induceren zou moeten worden getest voor door het opnemen van een alleen-glycerol (ontbreekt cecal drijfmest) injectie bij muizen, die zou zijn toegenomen muis gebruik. De levensvatbaarheid van de bacteriën van de voorraden van de cecal drijfmest na de bevriezing van de cecal drijfmest voorraad zonder glycerol is getest en bleek te zijn constant, met geen verandering in de concentratie van de bacteriën in aparte porties van de dezelfde cecal drijfmest voorbereiding opgeslagen bij-80 ° C via een 6 de maandperiode van de. Dit suggereert dat de opslag zonder glycerol in het verstrekken van een consistente biologische resultaat haalbaar is. Het gebruik van een bulk-bereid bevroren cecal drijfmest voorraad ook toegestaan voor het gebruik van muizen gefokt intern, de kosten te verlagen en gebruik makend van mannelijke muizen die anders zou teveel van fokken, dus het verminderen van verspilling van de muis.
De identificatie van mislukte uitdagingen bij muizen was het belangrijk om te voorkomen dat extra ruis toe te voegen aan het systeem. Na het ondergaan van een intraperitoneale injectie van cecal drijfmest, werden de muizen waargenomen voor de aanwezigheid van een bobbel onder de huid, die een mislukte injectie die eigenlijk subcutane was aangegeven. Muizen werden waargenomen voor lekken op de injectieplaats, zowel onmiddellijk na verwijdering van de naald en na waardoor ze een stap te zetten na de injectie, omdat muizen zou soms (zelden) lekken alleen na het verplaatsen van de ledematen van de injectieplaats door het nemen van een stap. De aanwezigheid van een verdikking of lek na de injectie resulteerde in het verwijderen van de muis van de analyse. Immers, een van deze kan leiden tot een ander resultaat als gevolg van de onjuiste hoeveelheid cecal drijfmest geïnjecteerd als een 5% verschil in uitdaging dosis geconstateerd bij latere overleven.
Cecal drijfmest uitdaging experimenten vaak nodig verschillende doel dodelijke doses met verschillende doses gewogen. Wegens dit, kunnen injectie volumes variëren van zo weinig als 20 µL en tot 100 µL. De evenredige experimentele fout geassocieerd met dode naald volume verandert ook samen met het geïnjecteerde volume, verhogen de moeilijkheid als u wilt direct vergelijken verschillende doses. Met de eenvoudige wijziging van het standaardiseren van het geïnjecteerde volume, wordt deze bron van variantie verwijderd uit het experiment.
Gedrags controlesysteem van de neonatale muis gebruikt in dit protocol is het eerste in zijn soort. Onderzoekers bedoeling op ethisch onderzoek met pasgeboren muizen worden vaak geconfronteerd met de uitdagende gebrek aan middelen om te beoordelen van het welzijn van het dier op deze leeftijd. Het gepresenteerde intuïtief en consistent monitoringsysteem begint aan deze kenniskloof. Bovenal dit bewijs gebaseerde aanpak niet alleen verhoogt de kwaliteit van de experimentele gegevens verkregen maar, tegelijkertijd, vermindert ook het lijden van de proefdieren.

Sepsis is een belangrijke oorzaak van menselijke pasgeboren besmettelijke sterfgevallen1. Omdat pasgeboren sepsis slecht wordt begrepen, is weinig vooruitgang geboekt in zowel de identificatie van risicogroepen pasgeborenen vroeg tijdens de ziekte en de ontwikkeling van doeltreffende behandelingen of prophylaxes. Dit vereist het gebruik van dierlijke modellen van sepsis om het proces en test mogelijke interventies beter te begrijpen. Bovendien, volwassen knaagdieren reageren anders op sepsis, met statistisch significante verschillen in het aantal bacteriën te beheren om te verkrijgen van de dezelfde letale dosis (LD) en in het resulterende host antwoord ten opzichte van pasgeborenen2. Neonatale sepsis heeft dus worden bestudeerd bij pasgeborenen. Verschillende volwassen sepsis modellen zijn gebruikt in sepsis onderzoek. Deze omvatten een intraveneuze uitdaging met specifieke organismen betrokken bij volwassen menselijke sepsis of cecal afbinding en punctie (CLP). Het CLP is een model van de endogene uitdaging waar de blindedarm is operatief geïsoleerd, afgebonden en doorboord zodat lekkage van intestinale inhoud in het buikvlies, uiteindelijk zal leiden tot de systematische verspreiding van microben en hun producten-3. Echter, de chirurgische procedure minimaal vereist voor invoering van CLP is dodelijk voor pasgeboren dieren; een alternatieve methode is daarom noodzakelijk om na te bootsen de uitdaging van de polymicrobial van het CLP voor het opwekken van neonatale sepsis. De cecal drijfmest model voor polymicrobial van de neonatale sepsis is ontwikkeld om deze behoefte, waarbij de cecal inhoud van dieren zijn geoogst, geschorst in steriele dextrose 5% in water (D5W) en intraperitoneally in pasgeboren muizen2geïnjecteerd. Dit geworden sinds, een steeds populairder wordende model te bestuderen van sepsis in zowel volwassen als pasgeboren dieren en zich aanzienlijk ontwikkeld mechanistische inzichten in van de ziekte proces4,5,,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15.
Gezien het toenemende gebruik van dit model en wil van onderzoekers direct resultaten van publicaties met elkaar vergelijken, is er een noodzaak voor de technische aspecten zijn goed beschreven en gestandaardiseerde via studies. Normalisatie is van toepassing op drie aspecten van het model, namelijk i) de voorbereiding van de cecal drijfmest voorraad, ii) de opstelling van de uitdaging aliquots voor injectie in de proefdieren, en iii) de definitie van de humane eindpunt waarbij dieren nonsurvivors in uitdaging experimenten worden geacht. In het bijzonder wordt methoden ter voorbereiding van de voorraad cecal drijfmest vaak verwezen naar het originele artikel voor de invoering van het model2. Een korte samenvatting van dat model is dat cecal inhoud van volwassen muizen werden geoogst, in steriele D5W tot een concentratie van 80 mg/mL opgeschort, en binnen 2 uur te injecteren de proefdieren gebruikt. Deze originele model gebruikt muizen van dezelfde leeftijd, aan de zelfde leverancier, die gehuisvest waren in hun respectieve onderzoeksfaciliteiten voor minder dan 2 weken vóór de oogst van cecal inhoud. Het gebruik van in-house gefokte muizen, hoewel de verlaging van de kosten van de leverancier van de regelmatige levering en rekening houdend met het gebruik van overtollige muizen voor een breder scala van geslacht en leeftijd, ook aanzienlijk toegenomen variabiliteit van de donor-naar-donor. Dit gemotiveerd de ontwikkeling van een alternatieve techniek, waarbij de cecal inhoud van meerdere muizen samen te bereiden een grote voorraad, toenmalig aliquoted en opgeslagen bij-80 ° C13werden gebundeld. Deze alternatieve methode werd aangepast met meerdere groepen14,15. Echter, dat aanpassing resulteerde in enkele technische varianten, zowel in het opslagmedium gebruikt (10% of 15% glycerol of D5W alleen) als in de strategie van de filtratie verwijderen deeltjes (meertraps filtratie door een 860 µm en, vervolgens, een 190 µm filter of persoon filteringen via 100 µm of 70 µm filters)13,14,15. De injectie van glycerol alleen zou kunnen leiden tot schade, gezien het feit dat 25% - 50% glycerol injecties zijn gebruikt als een knaagdier model van renale letsel16,17,18,19, 20. Om te voorkomen dat onbedoelde neveneffecten glycerol, cecal drijfmest voorraad voorbereid op muizen in deze studie is bevroren in D5W zonder glycerol en tests van bacteriële levensvatbaarheid van opslag bij-80 ° C worden uitgevoerd. De strategie van de filtratie gebruikt in deze studie is één doorheen een 70 µm filter, dat is niet direct vergeleken met de andere filtratie strategieën vermeld.
Dodelijke gewogen doses van geïnjecteerd cecal drijfmest kunnen variëren van faciliteit aan faciliteit en moeten titered uit om de gewenste letaliteit voor afzonderlijke groepen. Met verschillende uitdaging doses wijzigen de begeleidende uitdaging volumes door noodzaak. Dit methodologisch detail is echter niet gemeld vóór. Bovendien, strategieën voor standaardprocedures, zoals intraperitoneale injectie, worden zelden uitgewerkt op binnen de literatuur, maar individuele technieken kunnen beïnvloeden of pasgeboren muizen lekken wanneer ze worden geïnjecteerd en invloed op hun uiteindelijke resultaten.
Het welzijn van dieren, met inbegrip van een definitie van humane eindpunt, is een centraal aspect van dit model en in ieder model van infecties en ontstekingen in knaagdieren21. In 1998 publiceerde de Canadese Raad op Animal Care (CCAC) uitgebreide richtsnoeren voor humane eindpunt de selectie, het humane eindpunt te definiëren als "daadwerkelijke of potentiële pijn, leed en de eventuele ongemak moet worden geminimaliseerd of verminderd door te kiezen voor de vroegste eindpunt dat is compatibel met de wetenschappelijke doelstellingen van het onderzoek"22. Anderen ook voorzichtigheid dat humane eindpunten moeten worden vastgesteld op basis van wetenschappelijke verantwoording niet op een subjectieve interpretatie van het dier staat alleen21. Hoewel er een schat aan middelen voor klinische, gedrags, en lichaam-conditie teken gebaseerde criteria voor humane eindpunt, zelfs in de context van infectie en ontsteking specifiek21,23,24, geen van deze , met inbegrip van de CCAC richtsnoeren voor humane eindpunt22, pasgeboren muizen noemen. Objectief en wetenschappelijk gemotiveerde humane eindpunten zijn dus veel moeilijker om vast te stellen voor pasgeboren dieren, gezien hun beperkte gedrags mogelijkheden én het gebrek aan bewijs van criteria zoals gewichtsverlies, die meestal voor volwassene gebruikt wordt muizen. Op dit moment, de criteria voor het humaan eindpunt gebruikt voor 5 - tot 12-dag oude neonatale muizen in de literatuur van de cecal drijfmest alle verwijzing terug naar het originele manuscript die het model2. In deze oorspronkelijke papier, was de definitie van humane eindpunt voor pasgeboren dieren gebaseerd op twee criteria; namelijk, de locatie van een muis buiten het nest (verstrooiing) en het gebrek aan melk vlekken had gezien te resulteren in de dood binnen uur. Een complicerende zaak bij het toekennen van een humane eindpunt is dat melk vlekken moeilijk te zien bij muis stammen met donkere vacht, zoals de algemeen werkzame C57BL/6J stam, na de eerste week van het leven, terwijl zieke dieren worden gecontroleerd tot de 14e dag van het leven (DOL) geworden. Verdere, dode dieren kunnen worden gevonden postchallenge wanneer de toepassing van dit criterium (eigen waarneming, ongepubliceerd); een strengere definitie van humane eindpunt is dus nodig om te verlichten van lijden van proefdieren en sterfte in situaties waar het resultaat worden nauwkeurig eerder onderscheidde kon voorkomen.
Alle drie methodologische aspecten van het model cecal drijfmest worden gepresenteerd in een standaard gebruiksprocedure detaillering van de voorbereiding van cecal drijfmest voorraad, een methode voor het injecteren van de proefdieren die houdt de constante injectie volume tussen de doses en vermindert het risico op lekken, en een definitie van humane eindpunt voor 7 - tot 12-dag oude muizen gebaseerd op een systeem van gedrags modelleren. Gedrags informatie van muis gezondheid scores uit meer dan 240 proefdieren was verzameld en gegroepeerd op definitieve overleving resultaat, aan te tonen een bewijs gebaseerde definitie van humane eindpunt. Het lijden van proefdieren is teruggebracht door het identificeren van stervende neonatale muizen op het vroegst mogelijke tijdstip, terwijl biologisch belangrijke overleving resultaten kunnen worden afgeleid door het observeren van de belangrijkste variabelen. De visuele representatie van zowel cecal drijfmest voorbereiding en neonatale muis gedrag zal dienen als een uitstekend middel om een groep studeren sepsis of pasgeboren uitdaging model dieren.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:609px;" width="610">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">0.1 - 20 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0799</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">1.8 mL Microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">Costar</td>
			<td style="width:123px;">3621</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">100 - 1000 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0801</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:222px;">1 - 200 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0800</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">15 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">FroggaBio</td>
			<td style="width:123px;">TB15-25</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:84px;width:222px;">23G1 needles</td>
			<td style="width:95px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:123px;">305145</td>
			<td style="width:171px;">only the needle, not the syringe, used for pinning mouse to styrofoam</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">28G 0.5 mL Insulin syringe</td>
			<td style="width:95px;">BD</td>
			<td style="width:123px;">329461</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">2 mL Cryogenic vial</td>
			<td style="width:95px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">430488</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">50 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:123px;">14-432-22</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">5 mL pipette</td>
			<td>Costar</td>
			<td style="width:123px;">4487</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">6 - 10 week old C57BL/6J adult mice</td>
			<td style="width:95px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">664</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">7 + day old C57BL/6J neonatal mice</td>
			<td style="width:95px;">Bred in house</td>
			<td style="width:123px;">n.a</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">70 &#956;m Cell strainer</td>
			<td style="width:95px;">Falcon</td>
			<td style="width:123px;">352350</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Defibrinated Sheep&#39;s Blood</td>
			<td style="width:95px;">Dalynn</td>
			<td style="width:123px;">HS30-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dextrose 5% Water (D5W)</td>
			<td style="width:95px;">Baxter</td>
			<td style="width:123px;">JB0080</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dissecting forceps</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">&#160;82027-386</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dissecting Scissors, Sharp Tip</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">&#160;82027-592</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Dissecting Scissors, Sharp/Blunt Tip</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">82027-594</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Ethanol (HistoPrep 95% Denatured Ethyl Alcohol)</td>
			<td style="width:95px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">HC11001GL</td>
			<td style="width:171px;">diluted to 70% with double distilled water</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Ethanol-proof marker; Lab marker</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">52877-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">EZ Anesthesia Vaporizer</td>
			<td style="width:95px;">EZ Anesthesia</td>
			<td style="width:123px;">EZ-155</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:222px;">Germinator 500, Dry sterilize surgicial instrument (Hot bead sterilizer)</td>
			<td style="width:95px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:123px;">GER 5287-120V</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:95px;">Fresenius Kabi</td>
			<td style="width:123px;">CP0406V2</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Micro Spatula</td>
			<td style="width:95px;">Chemglass</td>
			<td style="width:123px;">CG-1983-12</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Pipette-Aid</td>
			<td>Drummond</td>
			<td style="width:123px;">4-000-100</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-1000</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008653</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-20</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008650</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-200</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008652</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Scale</td>
			<td style="width:95px;">Sartorius</td>
			<td style="width:123px;">BL 150 S</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Specimen forceps</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">82027-440 / 82027-442</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Square 1000 mL Storage Bottle</td>
			<td style="width:95px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">431433</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Styrofoam board</td>
			<td style="width:95px;">Any</td>
			<td style="width:123px;">n.a</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Sure-Seal Mouse/Rat euthanasia chamber</td>
			<td style="width:95px;">Euthanex</td>
			<td style="width:123px;">EZ-178</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Tryptic Soy Agar</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">22091-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:222px;">VX-200 Lab Vortex Mixer</td>
			<td style="width:95px;">Labnet International</td>
			<td style="width:123px;">S0200</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">weigh paper</td>
			<td style="width:95px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">09-898-12B</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a controlled mouse model for neonatal polymicrobial sepsis

Neonatale sepsis blijft een globale belasting. Een preklinische model tot effectieve profylactische of therapeutische interventies op scherm nodig is. Neonatale muis polymicrobial sepsis kan worden opgewekt door het injecteren van cecal drijfmest intraperitoneally naar dag van leven 7 muizen en toezicht op hen voor de volgende week. Hier zijn de gedetailleerde stappen nodig voor de uitvoering van dit model neonatale sepsis. Dit omvat het maken van een homogene cecal drijfmest voorraad, verdunnen het voor een dosis en nest-gewogen, een overzicht van de tijdschema's monitoring en een definitie van de waargenomen gezondheid categorieën gebruikt om te definiëren van humane eindpunten. De generatie van een homogene cecal drijfmest voorraad van gebundelde donoren zorgt voor het beheer in vele nesten na verloop van tijd, vermindering van de variatie tussen donoren, en voorkoming van het gebruik van potentieel toxische glycerol. De bewakingsstrategie gebruikt zorgt voor de anticipatie van overleving resultaat en de identificatie van muizen die later ter dood, waardoor voor een eerdere identificatie van de humane eindpunt zou vooruitgang. Twee belangrijkste gedragsmatige kenmerken worden gebruikt voor het definiëren van de scores van de gezondheid, namelijk, het vermogen van de neonatale muizen om recht zelf wanneer geplaatst op hun rug en hun niveau van mobiliteit. Deze criteria kunnen mogelijk worden toegepast op adres humane eindpunten in andere studies van neonatale ziekte in muizen, zo lang als een pilot-studie is uitgevoerd om te controleren nauwkeurigheid. Kortom, biedt deze benadering een gestandaardiseerde methode om model pasgeboren sepsis bij muizen, terwijl het verstrekken van middelen voor de beoordeling van het welzijn van dieren gebruikt voor het definiëren van vroege menselijke eindpunten voor uitgedaagd dieren.

Cecal drijfmest levensvatbaarheid opgeslagen bij-80 ° C kan getest worden na verloop van tijd door serieel verdunnen en plating aliquots van cecal drijfmest voorraad op 5% schapenmelk bloed al soja agar gevolgd door 24 h van aërobe incubatie bij 37 ° C. Latere tellen van de culturable kolonie-vormende eenheid (CFU) inhoud van een preparaat cecal drijfmest bleek niet te veranderen in een periode van 6 maanden, en de levensvatbaarheid niet werd beïnvloed door langdurige opslag bij-80 ° C (Figuur 2). Elke donor muis resulteerde, gemiddeld, in genoeg cecal drijfmest te vechten drie tot vier nesten (gegevens niet worden weergegeven).
Muizen uitgedaagd op DOL 7 met cecal drijfmest ertoe polymicrobial sepsis begon tot het humane eindpunt binnen 12 uur van de uitdaging en polymicrobial sepsis werd meestal opgelost door 48 h postchallenge, zoals waargenomen in een Kaplan-Meier overleving curve gecombineerd uit gegevens uit meer dan 200 uitgedaagd muizen (figuur 1A). De letaliteit was afhankelijk van de dosis van de challenge toegediend, met een 5% verandering in de uitdaging dosis resulterend in een ongeveer 15% verschil in overlevingskans (figuur 1B). Het lichaamsgewicht muis werd gemeten op elke controle bezoek. Gewichtsverlies werd gezien in alle uitgedaagd dieren, worden niet-discriminerend tussen muizen die overleven eindigde en die deed niet tijdens de eerste 24 h postchallenge (Figuur 1 c). Na 24u begon meest overlevende dieren te herwinnen hun gewicht, terwijl alle nonsurvivors voortgezet om gewicht te verliezen en naar hun humane eindpunt verhuisde. Echter, een klein deel van de overlevende dieren had behouden hun restarmen reflex verder om gewicht te verliezen of mislukte gewichtstoename, tot het einde van het experiment, zelfs verliezen zo veel als 20% van hun aanvankelijke lichaamsgewicht binnen de 40 uur van de uitdaging. Toen er een overlapping van gewichtsverlies tussen muizen die overleven eindigde en die niet, kan de verandering in gewicht of een drempel van gewichtsverlies niet worden gebruikt als een criterium voor humane eindpunt terwijl nog het handhaven van het doel van de overlevenden nauwkeurig te verdelen van nonsurvivors.
Het gedrag van muizen werd gecontroleerd zoals beschreven in het protocol, en in tabel 2. Momentopnamen van de gezondheid categorieën zijn weergegeven (figuur 3A-C). Deze foto's tonen de gezondheid van de verschillende soorten muizen die niet het recht zich na gelegd op hun rug en een overzicht van het verschil tussen FTR-Mobile en FTR-lusteloos, dat is een belangrijk onderscheid. Onbetwiste gezonde muizen van deze leeftijd weergeven niet FTR-lethargisch activiteit; deze categorie van gezondheid is daarom een marker van de ziekte en een antwoord op de uitdaging. Ziek muizen FTR-lethargisch symptomen (figuur 3B) weergegeven en kunnen terugvallen naar FTR-Nonmobile (Figuur 3 c), waar het bovenbeen parallel met het onderste been blijft, met weinig tot nul hip schommelen beweging, die behoort tot de criteria voor humane eindpunt. De muizen kunnen ook herstellen, verkrijgen van toegenomen hip verkeer en steeds FTR-Mobile (figuur 3A). De restarmen reflex en mobiliteit scores werden bepaald voor zowel de linker- en rechterkant van elke muis, en de hoogste score werd gebruikt om te bepalen of de muis een humane eindpunt had bereikt. Gedrags informatie werd verzameld uit meer dan 240 dieren uitgedaagd met een dodelijke dosis 60 (LD60) cecal drijfmest en 144 humane eindpunten werden waargenomen (figuur 3D-F en tabel 1). Dit bewijs gebaseerde aanpak werd gebruikt om te definiëren en verfijnen van de humane eindpunt in vier stadia van de ziekte, gecategoriseerd door de onderzoekers gebaseerd op beide gedrags verschillen tussen overlevenden en nonsurvivors en door de Fractie van humane eindpunten bereikt tijdens elke time frame. Tijdens de vroege experimenten bleken FTR-Nonmobile muizen die had geen hip beweging consequent dood binnen 4-6 uur dit gedrag in acht worden genomen. In de collectie van de gepresenteerde informatie, werd een FTR-Nonmobile gezondheid score gebruikt als criterium voor een humane eindpunt. 12-21 h postchallenge, terwijl FTR-Nonmobile muizen werden euthanized, zowel de nonsurviving als de overlevende dieren zeer vergelijkbaar gedragspatronen weergegeven en kunnen niet worden onderscheiden op een andere manier (figuur 3D). Vanaf 21-48 h postchallenge, de meerderheid van de muizen te overleven herwonnen hun restarmen reflex, terwijl minder dan 1% van de problemen van de FTR waargenomen waren in dieren die zou gaan om overleven het experiment (3E figuur). Muizen die niet het recht zich aan beide zijden werd dus een extra criterium voor humane eindpunt gedurende deze tijd. Tussen 12 en 20 h postchallenge, werden 12,5% van het totale aantal humane eindpunten waargenomen, versus 80,5% tussen 20 en 48 h en 7% na 48 uur (tabel 1). Een onderscheidend kenmerk tussen muizen die eindigde overleven en dat uiteindelijk nog verergerd op een humane eindpunt was het verlies van de restarmen reflex, onafhankelijk van de heup mobiliteit (figuur 3F). Inderdaad, tussen 20 en 48 h na de uitdaging, een totaal van 121 muizen niet het recht zich aan beide zijden, met 116 van deze muizen uiteindelijk vordert naar een humane eindpunt (waarmee een 96% nauwkeurigheid bij het identificeren van muizen die niet zou herstellen). Na 48u na de uitdaging, werden 11 muizen waargenomen niet het recht zich van beide zijden, en 10 van deze vordering aan een humane eindpunt (een 91% nauwkeurigheid). Dan 20 h na de uitdaging voorspelt het aantal muizen dat de restarmen reflex voor beide kanten verloren het eindresultaat met een nauwkeurigheid van meer dan 90%; Daarom is dit toegevoegd aan de criteria van de humane eindpunt, minimum te identificeren nonrecovering muizen eerder muis lijden (tabel 1).
De frequentie dat muizen controle moeten verandert na verloop van tijd, te wijten aan verschillende tarieven van dood postchallenge, en in tabel 1wordt beschreven. Een muis werd beschouwd als het humane eindpunt op elk gewenst moment als het naar rechts zelf had gefaald en nonmobile heup beweging aan beide zijden, weergegeven of als de muis is gevonden uit het nest, verspreid kon recht zelf, en lethargisch hip beweging had. Muizen met een van deze voorwaarden werden niet naar verwachting zal kunnen terugkeren van het nest en zijn waargenomen FTR-Nonmobile worden binnen 4-6 h. vanaf 20 h na de uitdaging, is een nieuwe humane endpoint toegevoegd omdat de gepresenteerde informatie toont aan dat de overgrote meerderheid van de muizen die FTR van beide kanten eindigt aan ziekte bezwijken.
De video's, tabellen en middelen gepresenteerd in dit manuscript zijn een effectieve onderwijs-bron voor de juiste gedrags toewijzing van uitgedaagd muizen. Zeven onderzoekers werden gevraagd de opleiding video en zowel het protocol en de tabellen lezen voordat u gedragingen aan 60 uitgedaagd dieren toewijst. De identificatie van humane eindpunt toewijzing was nauwkeurig zowel voor onderscheidende FTR-Nonmobile muizen van muizen die de andere gedragingen (figuur 4A) weergegeven en FTR muizen van muizen die konden het recht zich binnen het toegestane tijdsbestek ( Figuur 4B).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig1.jpg"> Figuur 1 : Kaplan-Meier overleving kromme cecal drijfmest dosistitraties en gewicht verandering na de uitdaging cecal drijfmest. (A) overleven uitkomst van neonatale C57BL/6J muizen met een intraperitoneaal cecal drijfmest injecteren op DOL 7 uitgedaagd. De gegevens voor dit cijfer werden van onafhankelijke experimenten met behulp van meerdere uitdaging doses, variërend van 0,7 tot 1,3 mg cecal drijfmest per gram lichaamsgewicht werd toegediend aan deze muizen samengevoegd. (B) bij pasgeborenen muizen uitgedaagd met 0,80 tot 0.95 mg cecal drijfmest per gram lichaamsgewicht van één cecal drijfmest preparaat weergeven een dosisafhankelijk relatie tussen de hoeveelheid cecal drijfmest gegeven en het percentage van overleving. ()C) het percentage verandering in gewicht in vergelijking met het gewicht van de uitdaging, met de stippellijn ter aanduiding van een 20% verlies van gewicht uit de tijd van de uitdaging. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig1large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig2.jpg"> Figuur 2 : CFU concentratie in cecal drijfmest voorraad opgeslagen bij-80 ° C niet verandert over een periode van 6 maanden. Het effect van de cecal drijfmest leeftijd op CFU concentratie werd getest met behulp van lineaire regressie. Elk punt vertegenwoordigt een aliquoot gedeelte van het zelfde cecal drijfmest preparaat, serieel verdund en verguld over een periode van 6 maanden. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig2large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig3.jpg"> Figuur 3 : Heup mobiliteit categorieën van muizen die niet het recht zich en dierlijke gedrag op verschillende tijden postchallenge. Muizen die zijn aangevochten met sepsis, wanneer geplaatst op hun rug, verschijnt tekenen van morbiditeit die kan worden gemeten door de mate van heup beweging. (A) A fail naar rechts (FTR)-Mobile mouse toont hip rockende beweging van hun meer dan 90 ° hoek van horizontaal bovenbeen. (B) een FTR-lethargisch muis toont hip schommelen verkeer maar niet hoger is dan 90 ° hoek van horizontaal op elk moment tijdens de 4 s van monitoring. (C) sommige FTR-Nonmobile muizen zal verlengen hun been, buigen bij de knie, maar zeer weinig (minder dan 10 ° hoeken) zal tonen aan nul hip schommelen van beweging, en de benen blijft parallel aan elkaar. (D) dierlijke gedrag 12-21 h postchallenge blijkt dat alleen FTR-Nonmobile gedrag scheiden overlevenden van de nonsurvivors. (E) van 21 tot en met 48 h postchallenge, slechts 4 uit de 592 waargenomen FTR gedrag (0,67%) behoren tot de overlevenden, waardoor de wetswijziging reflex te voorspellen van het uiteindelijke resultaat en worden gebruikt als een nieuw criterium voor humane eindpunt. (F) na 48 h postinfection, 6 uit 131 muizen (4.55%), die had een restarmen reflex ging deel uitmaken van de groep FTR en werden opgeofferd aan het einde van het experiment, aanhoudende controle in de loop van herstel te rechtvaardigen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig3large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58574/58574fig4.jpg"> Figuur 4 : Educatieve middelen resulteren in nauwkeurige gedrags classificatie door onafhankelijke onderzoekers. Onderzoekers opgeleid door te kijken naar de video bij dit protocol video's van 60 neonatale muizen ingedeeld in groepen van verschillende gezondheid. (A) het vermogen om te onderscheiden van een humane eindpunt was vastbesloten en gemiddeld 97% van gedrag werd nauwkeurig gecategoriseerd als FTR-Nonmobile of niet, terwijl slechts 1% van FTR-Nonmobile muizen werden onrechte. Twee procent van de muizen werden ten onrechte geïdentificeerd als FTR-Nonmobile. (B) de identificatie van het tweede humane eindpunt criterium correct onderscheid te maken tussen FTR muizen of degenen met de mogelijkheid om het recht van zich binnen 4 s van gelegd op hun rug was correct toegewezen in 97% van de scorings, terwijl enige 0,96% van de muizen werden ten onrechte toegewezen als zich vergissingen en 2% van de muizen ten onrechte als FTR werden toegewezen. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58574/58574fig4large.jpg" target="_blank">Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.</a>

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Ziektestadium</td>
			<td>A: hoge morbiditeit, geen mortaliteit</td>
			<td>B: hoge morbiditeit, lage sterfte</td>
			<td>C: hoge morbiditeit, hoge mortaliteit</td>
			<td>D: lage morbiditeit, mortaliteit lage</td>
		</tr>
<tr>
<td>Uren post uitdaging</td>
			<td>0−12</td>
			<td>12−20</td>
			<td>20−48</td>
			<td>> 48</td>
		</tr>
<tr>
<td>Bewakingsfrequentie</td>
			<td>2 h post uitdaging</td>
			<td>elke 4−6 h</td>
			<td>Elke 4−6 h, 8 h, 's nachts zonder toezicht</td>
			<td>1−2 keer per dag, meer indien nodig</td>
		</tr>
<tr>
<td>Percentage van totale humane eindpunten waargenomen</td>
			<td>0/144</td>
			<td>18/144</td>
			<td>116/144</td>
			<td>10/144</td>
		</tr>
<tr>
<td>Percentage van humane eindpunten waargenomen</td>
			<td>0%</td>
			<td>12,5%</td>
			<td>80,5%</td>
			<td>7%</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Humane eindpunt criteria</td>
			<td colspan="2">1. FTR−Nonmobile aan beide zijden</td>
			<td colspan="2">1. FTR−Nonmobile aan beide zijden</td>
		</tr>
<tr>
<td colspan="2">2. verspreid van nest en is FTR−Lethargic</td>
			<td colspan="2">2. verspreid van nest en is FTR−Lethargic</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td colspan="2">3. FTR op zowel links of rechts (met eventuele mobiliteit-score)</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 1: frequentie van monitoring en humane eindpunt criteria in de verschillende stadia van de ziekte. Bewakingsfrequentie, humane eindpunten waargenomen, het percentage van humane eindpunten en humane eindpunt criteria die tijdens verschillende stadia van de ziekte.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Wetswijziging Reflex</td>
			<td>Mobiliteit</td>
			<td>Termijn naar rechts na gelegd op rug</td>
			<td>Termijn aan maatregel hoeveelheid verkeer (mobiele / lethargisch / nonmobile)</td>
			<td>Criteria voor het scoren van mobiliteit</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Rechten</td>
			<td>Mobile</td>
			<td rowspan="6">4 s</td>
			<td rowspan="3">Een extra 8 s</td>
			<td>De muis neemt meerdere stappen in een rij, behoud van de dynamiek van het naar voren, en verkent zijn omgeving. Pup zal niet omvallen.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Lusteloos</td>
			<td>De muis kan een stap, maar zal stoppen en pauzeren alvorens een andere. Pup kan omvallen.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nonmobile</td>
			<td>De muis neemt geen stappen niet na de wetswijziging zelf. Pup kan omvallen.</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="3">Mislukken naar rechts</td>
			<td>Mobiele heupen</td>
			<td rowspan="3">Dezelfde 4 s gebruikt voor het meten van restarmen reflex</td>
			<td>Heeft energiek hip beweging met het bovenbeen roterende buiten 90° van horizontaal ten minste eenmaal binnen 4 s.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Lusteloos heupen</td>
			<td>Hip beweging tot, maar niet verder dan 90° van horizontaal.</td>
		</tr>
<tr>
<td>Nonmobile heupen</td>
			<td>Ledematen kunnen verplaatsen door uit te breiden en intrekken, maar de heupen zal niet draaien. Pup ziet er heel ziekelijk.</td>
		</tr>
</tbody></table>Tabel 2: tabel en criteria bij het bepalen van de score van de gezondheid van muizen Monitoring. De verstrekte criteria werden gebruikt gezondheid categorie om groepen te definiëren met muizen, en om individuele afwijking bij het toekennen van de scores van de gezondheid.

Watch this Scientific Journal Video about A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis at JoVE.com

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Dit protocol biedt de nodige maatregelen treffen en evalueren van neonatale sepsis in 7 dagen oude muizen.

Een gecontroleerde muismodel voor neonatale Sepsis van de Polymicrobial

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Het cecal drijfmestmodel voor polymicrobiële sepsis is een krachtig hulpmiddel om unieke neonatale pathofysiologie te ontleden. Het kan variabel zijn, en humane eindpunten zijn niet goed beschreven. Hier presenteren we onze sterk gestandaardiseerde procedure om een cecal drijfmest voor te bereiden en te injecteren in proefdieren.Daarnaast gebruiken we een datagedreven aanpak om stervende pups zo snel mogelijk te identificeren. Laten we beginnen met het bereiden van een bevroren cecal drijfmest voorraad. Dit wordt gedaan door het bundelen van cecal concent van ten minste vijf volwassen muizen, op te schorten in steriel dextrose water, en op te slaan op min 80 voor later gebruik.U gebruik maken van mannen of vrouwen, maar het geslacht, leeftijd en achtergrond van muizen voor uw experimenten moeten constant worden gehouden. Laten we eerst onze gereedschappen voorbereiden op dissectie. Deze omvatten een set van schaar en tangen voor de huid en een tweede set voor de inwendige organen.Zet de hete kraal sterilisator ten minste 30 minuten voor gebruik. Dompel de gereedschappen in 70% ethanol en dompel ze vervolgens gedurende ten minste één minuut onder in de hete kraalsterilisator. Spray een mat met papieren handdoeken met 70%-ethanol en verwijder vervolgens de gereedschappen uit de sterilisator zonder het gesteriliseerde deel van het gereedschap aan te raken aan de niet-steriele handgrepen van andere gereedschappen.Leg ze op de papieren handdoek om af te koelen. Ontleed de muizen in een biologische veiligheidskast. Pin de benen van de muis aan een piepschuim bord met behulp van 23 meter naalden, zodat de muis is buik omhoog.Spray de buik met 70% ethanol. Met behulp van steriele tangen en scharen, snijd door de huid, los de huid van de buikvlies met de schaar, en snijd open een rechthoekig gebied van de lies naar het borstbeen en de linkerkant naar de rechterkant. Verwijder alle bont rond het buikvlies.Schakel over naar een nieuw paar steriele gereedschappen om door het buikvlies te snijden, waardoor ook een rechthoekige opening wordt gemaakt. Identificeer de cecum, die moet worden uitgevoerd van links naar rechts over het lichaam. Verstoor bindweefsel om de cecum takken van de darmen te identificeren en snijd het cecum uit de buurt van de darmen.Leg het op een gesteriliseerd vel weegpapier. Met behulp van steriele gereedschappen, snijd door beide uiteinden van de cecum. Houd het midden van de cecum met tangen en gebruik een platte metalen spatel om voorzichtig duw de cecal inhoud uit de uiteinden met behulp van een rollende beweging.Verzamel de inhoud en plaats ze in een vooraf gewogen 15 milliliter centrifuge buis. Pool cecal inhoud van maximaal vijf muizen in dezelfde buis. Gewicht de buis weer zodra alle inhoud is toegevoegd.Om het volume van dextrose water toe te voegen aan cecal inhoud in elke buis te berekenen, verdeel het gewicht van de cecal inhoud in de buis door uw gewenste concentratie in milligram per milliliter. Houd een aliquot van dextrose water op ijs voor de re-schorsing van cecal inhoud. Voeg de benodigde hoeveelheid dextrosewater toe aan de 15 milliliter centrifugebuis met cecal-inhoud.Vortex de buis verticaal en horizontaal gedurende ongeveer 30 seconden. Let op de aanwezigheid van deeltjes met een diameter van meer dan een paar millimeter en blijf, indien aanwezig, vortexen totdat alle deeltjes zichtbaar verdwenen zijn. Plaats een 50 milliliter centrifuge buis op ijs om het filtraat te verzamelen en installeer een steriele 70 micrometer cel zeef over de top.Pipette vier milliliter van opnieuw opgeschorte drijfmest van één buis van 15 milliliter over de celzeef en in de inzamelingsbuis. Hang de deeltjes opnieuw op door twee tot drie keer op en neer te pipetten. Voorzichtig uitpuilen bubbels om de filtersnelheid te verhogen, terwijl roeren de inhoud met de pipette tip totdat er geen vloeistof meer wordt gefilterd.Dit duurt ongeveer 30 seconden. Verander cel strainers tussen elke buis van cecal drijfmest, maar bundel alle inhoud in dezelfde 50 milliliter collectie buis. Als uw voorraad meer dan 40 milliliter, dan vortex het voor 15 seconden, en plaats 20 milliliter in een nieuwe centrifuge buis.Verdeel de drijfmest in cryogene flesjes van elk 500 microliter aliquots. Vortex de drijfmest tussen elke drie flesjes. Houd de meester voorraad in flesjes op ijs.Door aliquots op min 80 op te slaan, verandert de concentratie van de aërobe kolonievorming in een cecaldrijfmestpreparaat niet over een periode van zes maanden. Nu de cecal drijfmest is voorbereid, kunnen we het gebruiken om een nest van zeven tot acht dagen oude muizen uit te dagen met een gewichtsgecorrigeerde dosis cecal drijfmest. Letaliteit van de drijfmest is dosisafhankelijk.U moet de gewenste dodelijke dosis in uw faciliteit bepalen voor elke nieuwe voorraad met een nieuwe dosis titratie. Per nest wordt één cecal slurry injectie aliquot bereid. We normaliseren het entmateriaal tot een volume van 100 microliter, ronding naar de dichtstbijzijnde 10 microliter voor elk dier in het nest.Voor de voorbereiding van de uitdaging aliquot vereist drie berekeningen, de hoeveelheid drijfmest voorraad nodig, extra volume van dextrose water, en het afgeronde volume voor elke pup in het nest. Details over het uitvoeren van elke berekening vindt u in sectie drie van het protocol. Het uitvoeren van deze berekeningen met de hand voor elk experiment kan tijdrovend zijn en zal bijdragen aan experimentele fouten, dus een spreadsheet kan worden gedownload samen met het protocol waar u uw voorraadconcentratie, gewenste dosis en gewicht van uw nest invoert, en de hoeveelheid drijfmestvoorraad, volume van dextrosewater en het werkelijke volume per pup wordt automatisch geretourneerd.U dit vel afdrukken en meenemen wanneer u klaar bent om uw dieren uit te dagen. Bereid de injectie aliquot in een biologische veiligheidskast en houd het op ijs. Voordat u de spuit laadt, mengt u de microcentrifugebuis door 20 keer te vegen.Pups worden uitgedaagd met een 28-ijkige insulinespuit. Voordat u drijfmest optekent, mengt u de aliquot door 300 tot 500 microliters van de uitdaging in en uit de microcentrifugebuis te inspireren en uit te werpen. Dan, opstellen ongeveer 150 microliter van de uitdaging aliquot.Dit moet groter zijn dan het injectievolume voor een zeven tot acht dagen oude pup. Veeg naar de spuit om bellen uit de zuiger te halen en trek iets terug op de spuit om luchtbellen te verdrijven. Raak tijdens dit proces de naald of de zuigas niet aan.Doe de overtollige cecaldrijfmest terug in de microcentrifugebuis totdat de berekende hoeveelheid cecaldrijfmest voor de muis in de spuit wordt geladen. Cecal drijfmest wordt toegediend met een intraperitoneale injectie. Voer dit uit volgens het protocol van uw dierenzorginstelling.Om lekken te minimaliseren, kantel de pup naar beneden en steek de naald tussen het been en de genitaliën, waarbij de naald ondiep en onderhuids. Na het inbrengen van de naald ongeveer een centimeter, druk naar beneden en naar voren totdat u voelt dat de naald lek het buikvlies, dan langzaam deprimeren van de zuiger. Trek de naald voorzichtig terug volgens dezelfde route als u naar binnen ging, waardoor u uw middelvinger ontspant.Let op eventuele lekken in uw lab notebook en overwegen weglaten dieren met aanzienlijke lekken uit uw uiteindelijke resultaat. In deze sectie zullen we de verschillende gezondheidsniveaus schetsen die we waarnemen bij muizen die worden uitgedaagd met polymicrobiële sepsis en hun bijbehorende humane eindpunt. Voor alle procedures met neonatale muizen brengen we het beddengoed over naar een nieuwe kooi.Dit brengt de geur van de dame op uw handschoenen en vermindert de stress op de dame van herhaalde binnenkomst in haar kooi. We maken een tweede nest in de nieuwe kooi om de bewaakte pups tot het einde van de procedure te houden of te controleren wanneer het hele nest klaar is om terug te keren naar de kooi van de dame. Plaats een muis op de rug en monitor voor de mogelijkheid om binnen vier seconden.Als het goed kan, wacht dan nog acht seconden om het niveau van mobiliteit te bepalen. Een onbetwiste of herstellende muis is meestal in staat om de omgeving te verbeteren en te verkennen door meerdere stappen achter elkaar te nemen. Hergroeperen muizen die in staat zijn om zichzelf recht te zetten en neem een paar stappen om zijn omgeving te verkennen als rechten-lusteloos.Deze muizen kunnen omvallen tijdens het nemen van een stap en kijken wankel op hun voeten. Een muis die niet in staat is om rechts en heeft heupbeweging die meer dan 90 graden van horizontale we groep als niet aan rechts-mobiel. Deze muis zal uiteindelijk recht, maar kan niet binnen vier seconden.Vanwege zijn heupbewegingen, is het gegroepeerd als niet aan rechts-mobiel. Pups die niet in staat waren om rechts en hebben heupbeweging onder de 90 graden van horizontaal zijn gegroepeerd als niet aan rechts-lusteloos. Dit is een ander voorbeeld van een muis waarvan de heupen niet meer dan 90 graden van horizontaal en is gegroepeerd als niet aan rechts-lusteloos.Een niet aan rechts-niet-mobiele pup zal hebben benen die kunnen schudden of trillen, maar hebben geen heupbeweging. Ledematen kunnen zich uitbreiden en intrekken, maar hebben geen zijdelingse beweging. De pup is zichtbaar ziek en heeft het humane eindpunt bereikt.Dit is een ander voorbeeld van een niet-rechtse niet-mobiele pup. De heupen schudden niet van links naar rechts, maar de poten trillen wel. Bij het hanteren van de dame kooi, pups kunnen worden gesleept uit het nest als de verpleegkundige dame loopt.We vervangen deze en controleren vervolgens op andere verspreide pups die weg zijn van hun nestmates. Als die verspreide pups niet goed-lusteloos zijn, zijn ze op een humaan eindpunt. Hier is een Kaplan-Meier overlevingscurve van ons sepsis model.De meettijdpunten zijn te vinden in de bijgevoegde SOP. Op elk punt langs de overlevingscurve als een muis niet aan juist-niet-mobiel wordt gevonden, is het op zijn humane eindpunt en geëuthanaseerd. Tussen 12 en 21 uur na de challenge zullen muizen ziek lijken en ongeveer de helft van de muizen zal aan de ene kant kunnen rechts, terwijl de andere helft niet aan een van hun kanten rechts is.Dit is het tijdsbestek waar de muizen zullen beginnen af te wijken in de gezondheid score en het humane eindpunt van niet te rechts-niet-mobiel te bereiken. Dit zijn representatieve resultaten van gezondheidsscores waargenomen in dit tijdsbestek. De survivor en non-survivor groepen kunnen op dit moment niet worden onderscheiden op basis van hun gezondheidsscores.In deze fase van de ziekte, 21 tot 48 uur na de uitdaging, observeren we het hoogste percentage humane eindpunten. We hebben ook geconstateerd dat de overgrote meerderheid van de muizen die niet in staat zijn om recht aan beide zijden zal niet uiteindelijk herstellen van de ziekte, die dus wordt een nieuwe criteria voor humane eindpunt in aanvulling op de niet-recht-niet-mobiele criteria. De waargenomen gezondheidsscores tijdens deze fase van de ziekte resulteerden in een scheiding van overlevenden van niet-overlevenden.De overgrote meerderheid van de muizen die niet in staat waren om rechts aan beide zijden niet herstellen van de ziekte. Deze gegevens ondersteunen dat een nieuwe criteria voor humane eindpunt begin bij 21 uur na de uitdaging moet zijn om te euthanaseren muizen die niet recht te maken aan beide zijden. Meer dan 48 uur na de uitdaging zullen veel muizen beginnen om meer activiteit en een betere juiste reflex weer te geven.Hoewel het aandeel van humane eindpunten lager zijn in deze periode, kunnen de muizen nog steeds uitwijken en zieker worden, en ze vereisen nog steeds controle voor humane eindpunt. Gedurende dit tijdsbestek, sommige van die muizen die uiteindelijk werden gegroepeerd als niet-overlevenden had getoond verhoogde activiteit op een gegeven moment, maar later deed het slechter en bereikte een humaan eindpunt. Dit vereist een voortdurende controle van zieke dieren met een verhoogde frequentie als ze beginnen te vertonen slechtere gezondheidsresultaten.Onafhankelijke onderzoekers die geen persoonlijke training hebben genoten en die alleen deze instructievideo observeren, werden getest in hun vermogen om dezelfde score toe te wijzen als de onderzoekers met behulp van opgenomen testvideo's. Deze instructievideo resulteert in een nauwkeurige gedragsclassificatie. De mogelijkheid om de juiste score toe te wijzen om niet te voldoen aan rechts-niet-mobiele neonatale muizen, wat een maat is voor humane eindpunt, werd bepaald uit 60 neonatale muizen, en een gemiddelde van 97% van het gedrag werd nauwkeurig onderscheiden, waarbij slechts 3% verkeerd werd geïdentificeerd.Vervolgens werd de mogelijkheid getest om neonatale muizen te onderscheiden die niet goed waren of die binnen vier seconden konden rechtzetten. Dit is een andere maat van humane eindpunt en werd nauwkeurig toegewezen in 97% van neonatale muizen, terwijl 3% van pups ten onrechte als rechtzettend werden toegewezen. Hier zijn representatieve resultaten voor de procentuele gewichtsverandering van muizen in vergelijking met hun tijd van uitdaging.De gemiddelde gewichtsverandering tussen overlevenden en niet-overlevenden begon te scheiden op 24 uur na de uitdaging, maar er is veel overlap tussen de groepen. Er waren een aantal overlevenden die verloren meer dan 20%,, maar nog steeds hersteld van de ziekte. Gewichtsverandering was niet zo efficiënt in het voorspellen van de uitkomst in vergelijking met de verschillen in gezondheidsscores, daarom wordt het niet gebruikt als een criterium om te bepalen of muizen op een humaan eindpunt zijn.Tot slot moet u nu in staat zijn om een voorraad bevroren cecal drijfmest voor te bereiden, de gewichtscorrigeerde dosis te berekenen. En injecteer en monitor pasgeboren muizen op humane eindpunten. We hopen dat dit een waardevolle bron voor uw muis onderzoek.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Colon ascendens Stent Peritonitis (CASP) - een gestandaardiseerd model voor polymicrobiële abdominale sepsis

Sepsis remains a persistent problem on intensive care units all over the world. Understanding the complex mechanisms of sepsis is the precondition for ...

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

Cecal ligatie en punctie-geïnduceerde Sepsis als een model om Autophagy studie bij muizen

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Een muismodel voor pathogenen geïnduceerde Chronische ontsteking op lokale en systemische sites

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model van Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infectie in de Neonatale Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Antibody Binding Specificity for Kappa (V&#954;) Light Chain-containing Human (IgM) Antibodies: Polysialic Acid (PSA) Attached to NCAM as a Case Study

Antibody Binding Specificity for Kappa VÃƒÅ½Ã‚Âº Light Chain-containing Human IgM Antibodies: Polysialic Acid PSA Attached to NCAM as a Case Study

Antilichaam bindende specificiteit voor Kappa (VK-) lichte keten bevattende de Mens (IgM) antilichamen: Polysialic Acid (PSA) Gehecht aan NCAM als Case Study

Antibodies of the IgM isotype are often neglected as potential therapeutics in human trials, animal models of human diseases as well as detecting agents ...

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

-Cefoperazone behandelde muismodel van klinisch relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; Strain R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Influenza-A Virus Studies in een muismodel van infectie

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

Effecten van blootstelling van Formaldehyde aan een Rat Model van atopische Dermatitis veroorzaakt door neonatale capsaïcine behandeling

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Ontwerp van Cecal afbinding en punctie en Intranasal infectie Dual model van sepsis-geïnduceerde immunosuppressie

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Een neonatale beeldvorming model van gram-negatieve bacteriële sepsis

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...