Name: a controlled mouse model for neonatal polymicrobial sepsis
Uploaded: 2019-01-27T14:00:00
Duration: 14 min 54 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis at JoVE.com

Особая благодарность Клэр Харрисон и животных ухода объекта в Британской Колумбии Детская больница исследований института (BCCHR) за их поддержку в работе животных, а также д-р Ро-Ян Чэн за их руководство и вход на животных мониторинг и благополучия.

<ol>
	<li>Liu, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global,+regional,+and+national+causes+of+child+mortality+in+2000-13,+with+projections+to+inform+post-2015+priorities:+an+updated+systematic+analysis.">Global, regional, and national causes of child mortality in 2000-13, with projections to inform post-2015 priorities: an updated systematic analysis.</a> The Lancet. 385 (9966), 430-440 (2015).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+mortality+and+altered+immunity+in+neonatal+sepsis+produced+by+generalized+peritonitis.">Increased mortality and altered immunity in neonatal sepsis produced by generalized peritonitis.</a> Shock. 28 (6), 675-683 (2007).</li><li>Fink, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+sepsis.">Animal models of sepsis.</a> Virulence. 5 (1), 143-153 (2014).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Defective+innate+immunity+predisposes+murine+neonates+to+poor+sepsis+outcome+but+is+reversed+by+TLR+agonists.">Defective innate immunity predisposes murine neonates to poor sepsis outcome but is reversed by TLR agonists.</a> Blood. 112 (5), 1750-1758 (2008).</li><li>Cuenca, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+for+CXC+ligand+10/CXC+receptor+3+signaling+in+the+murine+neonatal+response+to+sepsis.">Critical role for CXC ligand 10/CXC receptor 3 signaling in the murine neonatal response to sepsis.</a> Infection and Immunity. 79 (7), 2746-2754 (2011).</li><li>Gentile, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+immunity+and+defects+in+the+neonatal+and+elderly+immune+response+to+sepsis.">Protective immunity and defects in the neonatal and elderly immune response to sepsis.</a> Journal of Immunology. 192 (7), 3156-3165 (2014).</li><li>Cuenca, A. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delayed+emergency+myelopoiesis+following+polymicrobial+sepsis+in+neonates.">Delayed emergency myelopoiesis following polymicrobial sepsis in neonates.</a> Innate Immunity. 21 (4), 386-391 (2015).</li><li>Gentile, L. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+emergency+myelopoiesis+and+survival+in+neonatal+sepsis+by+caspase-1/11+ablation.">Improved emergency myelopoiesis and survival in neonatal sepsis by caspase-1/11 ablation.</a> Immunology. 145 (2), 300-311 (2015).</li><li>Wynn, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+IL-17A+attenuates+neonatal+sepsis+mortality+induced+by+IL-18.">Targeting IL-17A attenuates neonatal sepsis mortality induced by IL-18.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (19), E2627-E2635 (2016).</li><li>Fallon, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Program+Cell+Death+Receptor-1-Mediated+Invariant+Natural+Killer+T-Cell+Control+of+Peritoneal+Macrophage+Modulates+Survival+in+Neonatal+Sepsis.">Program Cell Death Receptor-1-Mediated Invariant Natural Killer T-Cell Control of Peritoneal Macrophage Modulates Survival in Neonatal Sepsis.</a> Frontiers in Immunology. 8, 1469 (2017).</li><li>Young, W. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+survival+after+induction+of+sepsis+by+cecal+slurry+in+PD-1+knockout+murine+neonates.">Improved survival after induction of sepsis by cecal slurry in PD-1 knockout murine neonates.</a> Surgery. 161 (5), 1387-1393 (2017).</li><li>Rincon, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adjuvant+pretreatment+with+alum+protects+neonatal+mice+in+sepsis+through+myeloid+cell+activation.">Adjuvant pretreatment with alum protects neonatal mice in sepsis through myeloid cell activation.</a> Clinical &amp; Experimental Immunology. 191 (3), 268-278 (2018).</li><li>Starr, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+cecal+slurry+preparation+protocol+with+improved+long-term+reproducibility+for+animal+models+of+sepsis.">A new cecal slurry preparation protocol with improved long-term reproducibility for animal models of sepsis.</a> PLoS ONE. 9 (12), e115705 (2014).</li><li>Hansen, L. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deficiency+in+milk+fat+globule-epidermal+growth+factor-factor+8+exacerbates+organ+injury+and+mortality+in+neonatal+sepsis.">Deficiency in milk fat globule-epidermal growth factor-factor 8 exacerbates organ injury and mortality in neonatal sepsis.</a> Journal of Pediatric Surgery. 52 (9), 1520-1527 (2017).</li><li>Fujioka, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+heme+oxygenase-1+attenuates+the+severity+of+sepsis+in+a+non-surgical+preterm+mouse+model.">Induction of heme oxygenase-1 attenuates the severity of sepsis in a non-surgical preterm mouse model.</a> SHOCK. 47 (2), 242-250 (2017).</li><li>Al Asmari, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effect+of+quinacrine+against+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+rats.">Protective effect of quinacrine against glycerol-induced acute kidney injury in rats.</a> BMC Nephrology. 18, PMC5273840 (2017).</li><li>Geng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+gene+expression+profiles+and+signaling+pathways+in+rhabdomyolysis-induced+acute+kidney+injury.">Differences in gene expression profiles and signaling pathways in rhabdomyolysis-induced acute kidney injury.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 8 (11), 14087-14098 (2015).</li><li>Kim, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+depletion+ameliorates+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+mice.">Macrophage depletion ameliorates glycerol-induced acute kidney injury in mice.</a> Nephron Experimental Nephrology. 128 (1-2), 21-29 (2014).</li><li>Nara, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluations+of+lipid+peroxidation+and+inflammation+in+short-term+glycerol-induced+acute+kidney+injury+in+rats.">Evaluations of lipid peroxidation and inflammation in short-term glycerol-induced acute kidney injury in rats.</a> Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology. 43 (11), 1080-1086 (2016).</li><li>Zager, R. A., Johnson, A. C. M., Lund, S., Hanson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+renal+failure:+determinants+and+characteristics+of+the+injury-induced+hyperinflammatory+response.">Acute renal failure: determinants and characteristics of the injury-induced hyperinflammatory response.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 291 (3), F546-F556 (2006).</li><li>Olfert, E. D., Godson, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humane+Endpoints+for+Infectious+Disease+Animal+Models.">Humane Endpoints for Infectious Disease Animal Models.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (2), 99-104 (2000).</li><li>Canadian Council on Animal Care. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guidelines on: choosing an appropriate endpoint in experiments using animals for research, teaching and testing. , (1998).</li><li>Nemzek, J. A., Xiao, H. Y., Minard, A. E., Bolgos, G. L., Remick, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humane+endpoints+in+shock+research.">Humane endpoints in shock research.</a> SHOCK. 21 (1), 17-25 (2004).</li><li>Morton, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+approach+for+establishing+humane+endpoints.">A systematic approach for establishing humane endpoints.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (2), 80-86 (2000).</li></ol>

Д-р Джеймс Wynn получает поддержку от национальных институтов здравоохранения (НИЗ) / Национальный институт общих медицинских наук (R01GM128452) и низЮнис Кеннеди Шрайвер Национальный Институт детского здоровья и человеческого развития (NICHD) () R01HD089939).

Послеродовые новорожденных мышей имеют весьма ограниченной мобильности и не право самостоятельно после уделяется их обратно, даже когда никто не оспаривает. DOL 7, возраст мышей, оспаривается в этой модели, широкий спектр движение охватывающих от права-Mobile FTR-Mobile наблюдалось безнаказанное мышей, с одним важным отличием, а именно что безнаказанное мыши в этом возрасте не отображать FTR-вялой поведение. Только мыши оспаривается с сепсисом полимикробная были замечены стать FTR-вялой; Таким образом этот ответ может быть показателем тяжести заболевания. Внимательныя(ый) для отсечки под углом в 90° от горизонтали для хип движения позволяет для последовательной и точной назначения вялым или мобильных хип движения в мышей. Сроки 4 s, чтобы увидеть, если мышь может само право был выбран потому, что безнаказанное мышей были в состоянии последовательно право самостоятельно в течение этого периода времени. Неоднократные измерения же мыши удалось избежать, а время право сами и измерение хип мобильность ограничивается 4 s, чтобы избежать слишком утомительно мышь, которая иначе может повлиять на его способность получения продовольствия и тепло и может повлиять на его прогноз лучше. Выпрямляющий себя от левой и правой стороне были замечены, и выше баллов была использована для определения того, была ли мышь в гуманной конечной точке, потому что некоторые мышей были найдены для отображения FTR-Nonmobile на одной стороне еще выше мобильность на другой стороне и b e возможность восстановить в конечном итоге.
Скоринг система, используемая для оценки здоровья мыши полагались на применение категориальной предохранители на то, что спектр движения и, таким образом, могут быть склонны к отдельным предвзятости. Персонал прошел обучение вместе чтобы убедиться, что каждый человек забил мышей, то же самое; Однако скорее всего останется уровень субъективности, ведущих к вариации. Согласованность скоринга была оценена с семью исследователей, выполнявшая не ранее наблюдения неонатальной мыши узнать требования, изложенные в этом видео и протокол и, затем, самостоятельно назначить поведение и определяют гуманные Конечная точка. Точность 97% было отмечено с скоринга на 60 оспаривается мышей, предполагая, что отдельные уклон не играть существенную роль в поведенческих назначения этой модели. Представленных поведенческие наблюдения протокол основан на наблюдениях из оспаривается на дол 7 животных, но мышей моложе 6 дней бессменный здоровом состоянии не могут последовательно право самостоятельно. Таким образом критерии описанных конечной гуманной точки не может применяться непосредственно к молодых мышей. Если в этой экспериментальной модели используются молодых мышей или если применяется другой вызов модель с различных заболеваний кинетики, затем критерии подходящей конечной гуманной точки должны разрабатываться и избежать эвтаназии мышей, которые бы в противном случае, в конечном счете, на экспериментальной основе Восстановите. Скоринговая система отображает надежный метод улучшения гуманного конечной классификации, которая, с испытаний и подтверждения, потенциально могут применяться к другим моделям.
Каждый подготовка сенситизации навозной жижи или использование нового штамма мыши требуется retitration дозы сенситизации суспензии для администрирования для достижения аналогичных смертельной дозы. Каждый подготовка была стандартизирована, индикация интереса, а именно: выживание, вместо того чтобы давать же бактериальных граф. Каждый сенситизации пульпы подготовки жизнеспособных бактериальных концентратов, различаются незначительно, потенциально вследствие различий в донора синантропных бактерий или разницы в весе оставил в ячейки ситечко сенситизации пульпы акций postfiltration. В ходе титрования сенситизации навозной жижи первых двух помётов были разделены на две группы и каждая половина помета были оспорены с одним из двух доз, таким образом, чтобы каждый из дозы будут испытываться в два помета. Если результирующий коэффициент выживаемости не соответствует требуемого уровня, затем доза вызов был либо увеличился или уменьшился на 5% - 10%, и повторил эксперимент. Для учета помет помет различия, которые могут вызвать сопротивление или повышенной восприимчивости к сепсиса через помет были использованы несколько пометов. Важно, чтобы точно титр фондовой сенситизации пульпы с каждой новой подготовка для обеспечения что новый титрования сенситизации пульпы был сопоставим с предыдущей подготовки сенситизации навозной жижи. Периоды чрезмерного шума и вибрации, специально во время уплотнения асфальта и строительство близлежащие здания и дороги, были замечены увеличить стресс в плотин. Это коррелирует с повышенной частотой раскулачивание и смертности выживания экспериментов, даже затрагивающих безнаказанное мышей, указав, что посторонние воздействия на неонатальной выживаемости, что также необходимо контролировать для пострадавших.
Предыдущие методы для сенситизации пульпы массоподготовки включали использование свежих сенситизации суспензии или подготовки замороженных сенситизации шлама, с использованием различных методов, включая хранение в глицерин, который неизбежно будет передаваться во время вызова. В то время как использование свежих сенситизации пульпы обеспечивает преимущество бактериальный состав ближе к оригинальной сенситизации содержимое, существует риск расхождения между отдельными донорами мышей из-за изменения синантропных бактерий. Хотя это было сведено к минимуму с помощью сенситизации доноров от того же производителя с минимальным временем между прибытием и прогрессии эксперимента, это может стать непомерно вариант для некоторых лабораторий и другой проблемой сроков логистики в том соответствует возрасту мышей, когда начала сенситизации навозной жижи эксперимент в новорожденных мышей, которые были 7 дней. Альтернативный метод с использованием свежих сенситизации пульпы использовался, где несколько взрослых доноров сенситизации содержание были объединены, высокомобильна в D5W, Замороженные при температуре-80 ° C без глицерина и размороженным один Алиготе в то время для экспериментов. Использование сенситизации пульпы взрослых доноров изучить неонатального сепсиса потенциально могут передавать видов бактерий, присутствующих в сенситизации шлама, что новорожденных мышь не были подвержены, но она является стратегией, которая позволяет для изучения сепсиса у новорожденных мышей и был использован для изучения биологии новорожденных мыши в последних14,,1315. Сенситизации пульпы был разбавленным в D5W для обеспечения питания для бактерий, которые позволили создание активной инфекции после бактерии были введены и было сделано, чтобы имитировать доступность питательных веществ в брюшной полости во время Некротический энтероколит. Глицерин не был включен в качестве стабилизирующих агента в замораживания бактерий из-за потенциальные негативные побочные эффекты, которые могут возникнуть из глицерина инъекции только. Если глицерин был включен в подготовке сенситизации пульпы, то потенциальный ущерб только что глицерин может побудить будет нужен для проверки, включая глицерин только (не хватает сенситизации пульпы) инъекций в мышей, которые бы повысили мыши использования. Жизнеспособность бактерий сенситизации пульпы запасов был испытан после замораживания сенситизации пульпы акций без глицерина и было установлено постоянное, без изменения концентрации бактерий в отдельных аликвоты же подготовки сенситизации пульпы, температуре-80 ° C над 6 месячного периода. Это свидетельствует о том, что хранилище без глицерина осуществимо в обеспечении последовательной биологической результат. Использование массового подготовлен замороженные сенситизации пульпы фондовой также допускается для использования мышей разводят, снижая стоимость и используя мышей-самцов, которые иначе были бы избыток от разведения, поэтому уменьшение потерь мыши.
Идентификация неудачных вызовов в мышах важно избегать добавления дополнительных шумов в систему. После прохождения внутрибрюшинного введения сенситизации пульпы, мышей наблюдались на наличие выпуклость под кожу, которая указывается неудачных инъекций, что было на самом деле подкожной. Мышей наблюдались для утечек в месте инъекции, как сразу же после удаления иглой, так и после позволяя им сделать шаг после инъекции, потому что мышь иногда (редко) течь только после переезда конечности инъекции шаг. Присутствие выпуклость или утечки после инъекции привело к удаление мыши из анализа. В конце концов любой из них может привести к другой результат из-за неправильного количества сенситизации раствор вводят как 5% разницы в дозе вызов наблюдалась влияют на последующие выживания.
Сенситизации пульпы вызов эксперименты часто требуется различной цели летальных дозах с различной регулировать вес доз. Благодаря этому инъекции тома могут варьироваться от всего лишь 20 мкл и до 100 мкл. Пропорциональной экспериментальной ошибки, связанной с мертвой иглы тома также изменяется вместе с объемом впрыска, возрастающей сложности непосредственно сравнить разные дозы. С простой модификации стандартизации объем впрыска этот источник дисперсии удаляется из эксперимента.
Новорожденных мыши поведенческие системы мониторинга, используемые в настоящем Протоколе является первым в своем роде. Намерения исследователей на проведение этических исследований с новорожденных мышей часто сталкиваются с сложной нехватка ресурсов для оценки благосостояния животного в этом возрасте. Представленные интуитивно и последовательной системы мониторинга начинает решать этот пробел в знаниях. Важно отметить, что этот подход, ориентированный на конкретные доказательства не только увеличивает качество полученных экспериментальных данных, но, в то же время, также уменьшает страданий подопытных животных.

Сепсис является основной причиной человеческих смертей новорожденных инфекционных1. Потому что плохо понимается сепсис новорожденных, был достигнут незначительный прогресс в идентификации риска новорожденных рано во время болезни и разработки эффективных методов лечения или профилактики. Это обусловливает необходимость использования животных моделей сепсиса, чтобы лучше понять процесс и тестирования возможных вмешательств. Кроме того Взрослый грызунов по-разному реагировать на сепсис, статистически значимых различий в количество бактерий, чтобы управлять для получения же летальной дозы (LD) и различия в результате ответа хоста по сравнению с новорожденным2. Таким образом неонатального сепсиса должен изучаться в новорожденных. Несколько взрослых сепсиса модели были использованы в исследованиях сепсиса. К ним относятся внутривенные вызов с конкретных организмов, причастны взрослого человека сепсис или сенситизации перевязки и прокол (CLP). CLP — это эндогенного вызов модель где слепой кишки хирургическим путем изолированных, лигируют и прокалываться допустить утечки кишечного содержимого в брюшине, в конечном итоге приводит к системных распространения микробов и их продукция3. Однако хирургической процедуры, необходимые для создания CLP является смертельным для новорожденных животных; Таким образом альтернативный метод необходимо имитировать полимикробная вызов CLP побудить неонатального сепсиса. Для удовлетворения этой потребности, whereby сенситизации содержание животных собирают, приостановлено в стерильных декстрозы, 5% в воде (D5W) и внутрибрюшинно вводили в новорожденных мышей2была разработана модель сенситизации суспензии для полимикробная неонатального сепсиса. Это, так как, стал все более популярным модель для изучения сепсиса у новорожденных и взрослых животных и существенно продвинулась механистический идеи в этой болезни процесс4,5,6,7 ,8,9,10,11,12,13,14,15.
Учитывая все более широкое использование этой модели и исследователей желание непосредственно сравнивать результаты различных публикациях, существует необходимость для технических аспектов быть хорошо описаны и стандартизированных различных исследований. Стандартизация относится к трем аспектам модели, а именно, i подготовка акций сенситизации пульпы, ii) подготовка аликвоты вызов для инъекции в экспериментальных животных и iii) определение конечной гуманной которой животных считаются nonsurvivors в экспериментах вызов. В частности методы для подготовки сенситизации пульпы фондовой часто ссылки на оригинал статьи, представляя модель2. Краткое изложение этой модели является что сенситизации содержания от взрослых мышей были собирают, приостановлено в стерильные D5W к концентрации 80 мг/мл и используется в течение 2 ч для внедрения экспериментальных животных. Эта оригинальная модель использовали мышей того же возраста, из того же места поставщиков, которые были размещены в их соответствующих исследовательских учреждений для менее чем за 2 недели до уборки сенситизации содержимое. Использование собственных разводят мышей, хотя снижение стоимости от регулярной доставки и позволяющие использовать излишки мышей более широкий спектр пола и возраста, также существенно увеличил изменчивости доноров и доноров. Это побудило развитие альтернативный подход, согласно которому сенситизации содержимое из нескольких мышей были объединены вместе подготовить большой запас, который был затем aliquoted и хранятся в-80 ° C13. Этот альтернативный метод был адаптирован несколько групп14,15. Однако, что адаптация привело некоторых технических вариантов, как в средствах хранения используется (10% или 15% глицерина, или только D5W), так и в стратегию фильтрации для удаления твердых частиц (многоступенчатая фильтрация через 860 мкм и, затем, 190 мкм фильтр, или частное лицо 14,13,фильтрации через 100 мкм или 70 мкм фильтры)15. Инъекции глицерина только потенциально могло бы причинить вред, учитывая, что 25% - 50% глицерина инъекции были использованы как модель грызунов почечных травм16,,1718,19, 20. Чтобы избежать непредвиденных побочных эффектов глицерина, сенситизации пульпы массоподготовки для мышей в этом исследовании заморожен в D5W без глицерина, и испытания бактериальной жизнеспособности от хранения при температуре-80 ° C. Стратегия фильтрации, используемые в данном исследовании является один проход через 70 мкм фильтром, который непосредственно не сравнивают с другими стратегиями фильтрации перечисленных.
Смертельное вес скорректирована дозы вводят сенситизации пульпы может варьироваться от объекта до объекта и должен быть titered из желаемых летальность для отдельных групп. С различными задача доз сопровождающих томов задача изменения по необходимости. Однако эта методологическая деталь не сообщалось до. Кроме того на редко разрабатываются стратегии для стандартных процедур, таких как внутрибрюшинной инъекции, в литературе, но отдельные методы могут повлиять на ли новорожденных мышей утечки, когда вводят и влияние их окончательных результатов.
Животных, включая определение конечной гуманной точки, является центральным аспектом этой модели и в любой модели инфекции и воспаления в грызунов21. В 1998 году Канадский совет по уход животных (CCAC) опубликовал подробные руководящие принципы для конечной гуманной точки отбора, определения конечной гуманной точки, как «любых фактических или потенциальных боль, бедствия или дискомфорта следует свести к минимуму или уменьшить, выбрав ранние конечную точку, совместим с научными целями исследования»22. Другие также предостережение, что гуманные конечные точки должны создаваться на основе научного обоснования а не субъективной интерпретации животного состояния только21. Хотя есть множество ресурсов для клинических, поведенческих и состояние тела на основе знак критерии для конечной гуманной точки, даже в контексте инфекции и воспаления специально21,23,24, ни один из этих , включая CCAC руководящие принципы гуманного конечной22, упомянуть новорожденных мышей. Таким образом объективно и научно обоснованной гуманного конечные точки являются гораздо более трудно установить для новорожденных животных, учитывая их ограниченные возможности поведенческих и отсутствие доказательств от критериев, как потеря веса, который обычно используется для взрослых мышей. В настоящее время критерии для гуманной конечной точки, используемой для 5-12-дневных новорожденных мышей в литературе сенситизации пульпы, все ссылки обратно в оригинальный манускрипт, который представил модель2. В этой оригинальной бумаги определение конечной гуманной точки для новорожденных животных основано на двух критериях; а именно расположение мыши вне гнезда (россыпь) и отсутствие молоко пятна видел приведет к смерти в течение нескольких часов. Осложняющим дело в присвоении гуманного конечной точки является, что молоко пятна становятся трудно увидеть в мыши штаммы с темный мех, например, часто занятых C57BL/6J штамм, после первой недели жизни, в то время как больных животных контролируются до 14 дня жизни (DOL). Кроме того, мертвых животных можно найти postchallenge при применении этих критериев (собственные наблюдения неопубликованных); Таким образом более строгое определение конечной гуманной точки необходимо облегчить страдания для подопытных животных и избежать смертности в ситуациях, где результат может быть точно проследить ранее.
Все три методологические аспекты сенситизации пульпы модели представлены в Стандартная операционная процедура подробно подготовке акций сенситизации пульпы, метод для инъекций экспериментальных животных, что держит постоянный объем впрыска между дозами и уменьшает риск утечки и определение конечной гуманной точки для 7 - 12-дневных мышей, на основе системы поведенческого моделирования. Поведенческие информация мыши исправности из более чем 240 подопытных животных была собрана и группирование по результату Финал выживания, демонстрируя свидетельства driven определение конечной гуманной точки. Страданий подопытных животных снижается путем выявления умирающий новорожденных мышей в кратчайшие сроки точке, в то время как результаты биологически значимыми выживания может быть выведен, наблюдая ключевых переменных. Визуальное представление подготовки сенситизации навозной жижи и неонатальной мыши поведения будет служить отличным ресурсом для любой группы, изучая сепсиса или новорожденных вызов модели животных.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:609px;" width="610">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">0.1 - 20 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0799</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">1.8 mL Microcentrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">Costar</td>
			<td style="width:123px;">3621</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">100 - 1000 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0801</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:222px;">1 - 200 &#956;L pipette tips</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">732-0800</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">15 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">FroggaBio</td>
			<td style="width:123px;">TB15-25</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="83">
			<td height="83" style="height:84px;width:222px;">23G1 needles</td>
			<td style="width:95px;">Becton Dickinson</td>
			<td style="width:123px;">305145</td>
			<td style="width:171px;">only the needle, not the syringe, used for pinning mouse to styrofoam</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">28G 0.5 mL Insulin syringe</td>
			<td style="width:95px;">BD</td>
			<td style="width:123px;">329461</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">2 mL Cryogenic vial</td>
			<td style="width:95px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">430488</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">50 mL Centrifuge tube</td>
			<td style="width:95px;">Fisher scientific</td>
			<td style="width:123px;">14-432-22</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">5 mL pipette</td>
			<td>Costar</td>
			<td style="width:123px;">4487</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">6 - 10 week old C57BL/6J adult mice</td>
			<td style="width:95px;">Jackson Laboratories</td>
			<td style="width:123px;">664</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">7 + day old C57BL/6J neonatal mice</td>
			<td style="width:95px;">Bred in house</td>
			<td style="width:123px;">n.a</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">70 &#956;m Cell strainer</td>
			<td style="width:95px;">Falcon</td>
			<td style="width:123px;">352350</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Defibrinated Sheep&#39;s Blood</td>
			<td style="width:95px;">Dalynn</td>
			<td style="width:123px;">HS30-500</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dextrose 5% Water (D5W)</td>
			<td style="width:95px;">Baxter</td>
			<td style="width:123px;">JB0080</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dissecting forceps</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">&#160;82027-386</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Dissecting Scissors, Sharp Tip</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">&#160;82027-592</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Dissecting Scissors, Sharp/Blunt Tip</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">82027-594</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Ethanol (HistoPrep 95% Denatured Ethyl Alcohol)</td>
			<td style="width:95px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">HC11001GL</td>
			<td style="width:171px;">diluted to 70% with double distilled water</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Ethanol-proof marker; Lab marker</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">52877-310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">EZ Anesthesia Vaporizer</td>
			<td style="width:95px;">EZ Anesthesia</td>
			<td style="width:123px;">EZ-155</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:222px;">Germinator 500, Dry sterilize surgicial instrument (Hot bead sterilizer)</td>
			<td style="width:95px;">Braintree Scientific</td>
			<td style="width:123px;">GER 5287-120V</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:95px;">Fresenius Kabi</td>
			<td style="width:123px;">CP0406V2</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Micro Spatula</td>
			<td style="width:95px;">Chemglass</td>
			<td style="width:123px;">CG-1983-12</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Pipette-Aid</td>
			<td>Drummond</td>
			<td style="width:123px;">4-000-100</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-1000</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008653</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-20</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008650</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Rainin Classic Pipette PR-200</td>
			<td style="width:95px;">Rainin</td>
			<td style="width:123px;">17008652</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Scale</td>
			<td style="width:95px;">Sartorius</td>
			<td style="width:123px;">BL 150 S</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Specimen forceps</td>
			<td style="width:95px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">82027-440 / 82027-442</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Square 1000 mL Storage Bottle</td>
			<td style="width:95px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">431433</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">Styrofoam board</td>
			<td style="width:95px;">Any</td>
			<td style="width:123px;">n.a</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Sure-Seal Mouse/Rat euthanasia chamber</td>
			<td style="width:95px;">Euthanex</td>
			<td style="width:123px;">EZ-178</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:222px;">Tryptic Soy Agar</td>
			<td style="width:95px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:123px;">22091-2.5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="62">
			<td height="62" style="height:63px;width:222px;">VX-200 Lab Vortex Mixer</td>
			<td style="width:95px;">Labnet International</td>
			<td style="width:123px;">S0200</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:222px;">weigh paper</td>
			<td style="width:95px;">Fisherbrand</td>
			<td style="width:123px;">09-898-12B</td>
			<td style="width:171px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a controlled mouse model for neonatal polymicrobial sepsis

Неонатального сепсиса остается глобального бремени. Доклинические модель для экрана эффективных профилактических или терапевтических мероприятий необходима. Полимикробная сепсис новорожденных мыши может быть вызвана внутрибрюшинно впрыскивать сенситизации навозной жижи в день жизни 7 мышей и мониторинг их на следующей неделе. Здесь представлены подробные шаги, необходимые для реализации этой модели неонатального сепсиса. Это включает в себя создание однородной суспензии сенситизации запас, разбавляя его вес и помет скорректированы дозы, наброски плана мониторинга и определение наблюдаемых здоровья категорий используется для определения гуманного конечных точек. Поколение однородной суспензии сенситизации запас от объединения доноров позволяет администрации во многих помета с течением времени, сократить различия между донорами и предотвращение использования потенциально токсичных глицерина. Стратегия мониторинга используется позволяет в ожидании результатов выживания и выявление мышей, которые позже будет развиваться до смерти, позволяя более ранней идентификации гуманного конечной точки. Две основные поведенческие особенности используются для определения исправности, а именно способность новорожденных мышей право самостоятельно при помещении их обратно и их уровень мобильности. Эти критерии могли бы потенциально применяться к гуманной адрес конечных точек в других исследованиях заболевания у новорожденных мышей, до тех пор, как экспериментальное исследование проводится для подтверждения точности. В заключение этот подход обеспечивает стандартизированный метод для новорожденных сепсиса модели мышей, обеспечивая ресурсы для оценки благополучия животных, используется для определения ранних гуманного конечных точек для оспаривается животных.

Watch this Scientific Journal Video about A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis at JoVE.com

A Controlled Mouse Model for Neonatal Polymicrobial Sepsis

Этот протокол обеспечивает необходимые шаги для установления и оценки неонатального сепсиса в 7-день old мышей.

Контролируемые мыши модель для неонатального сепсиса полимикробная

Neonatal sepsis remains a global burden. A preclinical model to screen effective prophylactic or therapeutic interventions is needed. Neonatal mouse ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Colon Ascendens Stent Peritonitis (CASP) - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Colon Ascendens Stent Peritonitis CASP - a Standardized Model for Polymicrobial Abdominal Sepsis

Колон Ascendens Стент Перитонит (CASP) - стандартизированные модели для полимикробная абдоминального сепсиса

Sepsis remains a persistent problem on intensive care units all over the world. Understanding the complex mechanisms of sepsis is the precondition for ...

Cecal Ligation and Puncture-induced Sepsis as a Model To Study Autophagy in Mice

Слепой кишки Лигирование и прокол, вызванной Сепсис как модель для изучения аутофагии у мышей

Experimental sepsis can be induced in mice using the cecal ligation and puncture (CLP) method, which causes polymicrobial sepsis. Here, a protocol is ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Мышь Модель для патогенных микроорганизмов, вызванной хроническим воспалением на локальном и системном сайтов

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Неинвазивного Модель Neuropathogenic<em&gt; Кишечная палочка</em&gt; Инфекция в новорожденной крысы

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Antibody Binding Specificity for Kappa (V&#954;) Light Chain-containing Human (IgM) Antibodies: Polysialic Acid (PSA) Attached to NCAM as a Case Study

Antibody Binding Specificity for Kappa VÃƒÅ½Ã‚Âº Light Chain-containing Human IgM Antibodies: Polysialic Acid PSA Attached to NCAM as a Case Study

Антитела к специфическому связыванию Каппа (Vκ) легкой цепи, содержащей человека (IgM) Антитела: полисиаловая кислота (PSA) Прикрепленный к NCAM как Case Study

Antibodies of the IgM isotype are often neglected as potential therapeutics in human trials, animal models of human diseases as well as detecting agents ...

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Cefoperazone-treated Mouse Model of Clinically-relevant Clostridium difficile Strain R20291

Цефоперазон обработанных мышей Модель Клинически значимых<em&gt; Clostridium несговорчивый</em&gt; Штамм R20291

Clostridium difficile is an anaerobic, gram-positive, spore-forming enteric pathogen that is associated with increasing morbidity and mortality and ...

Influenza A Virus Studies in a Mouse Model of Infection

Исследования вирусов гриппа A в мышиной модели инфекции

Influenza viruses cause over 500,000 deaths worldwide1 and are associated with an annual cost of 12 - 14 billion USD in the United States alone ...

Effects of Exposure of Formaldehyde to a Rat Model of Atopic Dermatitis Induced by Neonatal Capsaicin Treatment

Последствия воздействия формальдегида мышиной модели атопический дерматит вызванных лечения новорожденных капсаицин

Atopic dermatitis is chronically relapsing pruritic eczema and prevails around the world especially in developed countries. Complex interactions between ...

Design of Cecal Ligation and Puncture and Intranasal Infection Dual Model of Sepsis-Induced Immunosuppression

Дизайн Цекал Лигация и прокол и интраназальные инфекции Двойная модель сепсиса индуцированной иммуносупрессии

Sepsis, a severe and complicated life-threatening infection, is characterized by an imbalance between pro- and anti-inflammatory responses in multiple ...

A Neonatal Imaging Model of Gram-Negative Bacterial Sepsis

Неонатальная модель визуализации грамотрицательных бактериальных сепсисов

Neonates are at an increased risk of bacterial sepsis due to the unique immune profile they display in the first months of life. We have established a ...