Name: how to quantify the fraction of photoactivated fluorescent proteins in bulk and in live cells
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells at JoVE.com

نود أن نشكر المختبر دوريغو و "دائرة التصوير علم الأعصاب" في "كلية الطب في جامعة ستانفورد" لتوفير المعدات ومساحة لهذا المشروع.

1-بلازميد البناء
<ol><li>توليد المسابير اللونين الانصهار. استخدام ناقل تعبير خلايا الثدييات (انظر الجدول للمواد) في mCherry112 والسلطة الفلسطينية-mCherry113 التي تم إدراجها مع التقييد مواقع يجئ و بسرجي-
</li>
	<li>ترتيب النيوكليوتيدات اليغو مخصصة لتضخيم المتغ?...

<ol>
	<li>Patterson, G. H., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+photoactivatable+GFP+for+selective+photolabeling+of+proteins+and+cells.">A photoactivatable GFP for selective photolabeling of proteins and cells.</a> Science. 297 (5588), 1873-1877 (2002).</li><li>Ando, R., Hama, H., Yamamoto-Hino, M., Mizuno, H., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optical+marker+based+on+the+UV-induced+green-to-red+photoconversion+of+a+fluorescent+protein.">An optical marker based on the UV-induced green-to-red photoconversion of a fluorescent protein.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (20), 12651-12656 (2002).</li><li>Renz, M., Lippincott-Schwartz, J., Day, R. N., Davidson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+9.">Ch. 9.</a> The Fluorescent Protein Revolution Series in Cellular and Clinical Imaging. , 201-228 (2014).</li><li>Shcherbakova, D. M., Sengupta, P., Lippincott-Schwartz, J., Verkhusha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photocontrollable+fluorescent+proteins+for+superresolution+imaging.">Photocontrollable fluorescent proteins for superresolution imaging.</a> Annual Review of Biophysics. , 303-329 (2014).</li><li>Betzig, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+intracellular+fluorescent+proteins+at+nanometer+resolution.">Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution.</a> Science. 313 (5793), 1642-1645 (2006).</li><li>Hess, S. T., Girirajan, T. P., Mason, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-high+resolution+imaging+by+fluorescence+photoactivation+localization+microscopy.">Ultra-high resolution imaging by fluorescence photoactivation localization microscopy.</a> Biophysical Journal. 91 (11), 4258-4272 (2006).</li><li>Henderson, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+the+photoactivatable+green+fluorescent+protein.">Structure and mechanism of the photoactivatable green fluorescent protein.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (12), 4176-4177 (2009).</li><li>Subach, F. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivation+mechanism+of+PAmCherry+based+on+crystal+structures+of+the+protein+in+the+dark+and+fluorescent+states.">Photoactivation mechanism of PAmCherry based on crystal structures of the protein in the dark and fluorescent states.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (50), 21097-21102 (2009).</li><li>Wiedenmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EosFP,+a+fluorescent+marker+protein+with+UV-inducible+green-to-red+fluorescence+conversion.">EosFP, a fluorescent marker protein with UV-inducible green-to-red fluorescence conversion.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (45), 15905-15910 (2004).</li><li>Habuchi, S., Tsutsui, H., Kochaniak, A. B., Miyawaki, A., van Oijen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mKikGR,+a+monomeric+photoswitchable+fluorescent+protein.">mKikGR, a monomeric photoswitchable fluorescent protein.</a> PLoS One. 3 (12), e3944 (2008).</li><li>McKinney, S. A., Murphy, C. S., Hazelwood, K. L., Davidson, M. W., Looger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bright+and+photostable+photoconvertible+fluorescent+protein.">A bright and photostable photoconvertible fluorescent protein.</a> Nature Methods. 6 (2), 131-133 (2009).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+monomeric+red,+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein.">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 22 (12), 1567-1572 (2004).</li><li>Subach, F. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivatable+mCherry+for+high-resolution+two-color+fluorescence+microscopy.">Photoactivatable mCherry for high-resolution two-color fluorescence microscopy.</a> Nature Methods. 6 (2), 153-159 (2009).</li><li>Zacharias, D. A., Violin, J. D., Newton, A. C., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partitioning+of+lipid-modified+monomeric+GFPs+into+membrane+microdomains+of+live+cells.">Partitioning of lipid-modified monomeric GFPs into membrane microdomains of live cells.</a> Science. 296 (5569), 913-916 (2002).</li><li>Slocum, J. D., Webb, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Double+Decarboxylation+in+Superfolder+Green+Fluorescent+Protein+Leads+to+High+Contrast+Photoactivation.">A Double Decarboxylation in Superfolder Green Fluorescent Protein Leads to High Contrast Photoactivation.</a> Journal of Physical Chemistry Letters. 8 (13), 2862-2868 (2017).</li><li>Subach, F. V., Patterson, G. H., Renz, M., Lippincott-Schwartz, J., Verkhusha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bright+monomeric+photoactivatable+red+fluorescent+protein+for+two-color+super-resolution+sptPALM+of+live+cells.">Bright monomeric photoactivatable red fluorescent protein for two-color super-resolution sptPALM of live cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 132 (18), 6481-6491 (2010).</li><li>Renz, M., Wunder, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internal+rulers+to+assess+fluorescent+protein+photoactivation+efficiency.">Internal rulers to assess fluorescent protein photoactivation efficiency.</a> Cytometry A. , (2017).</li><li>Renz, M., Daniels, B. R., Vamosi, G., Arias, I. M., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+the+asialoglycoprotein+receptor+deciphered+by+ensemble+FRET+imaging+and+single-molecule+counting+PALM+imaging.">Plasticity of the asialoglycoprotein receptor deciphered by ensemble FRET imaging and single-molecule counting PALM imaging.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (44), E2989-E2997 (2012).</li></ol>

حتى الآن، وجود أي أسلوب لتحديد جزء صغير من السلطة الفلسطينية-FPs المعرب عنها في الخلايا الحية التي فوتواكتيفاتيد أن تكون فلورسنت بكميات كبيرة. يمكن استخدام البروتوكول المقدم لأي زوج بروتين فلوري طيفيا متميزة. بينما يتضح هنا للا رجعة فيها السلطة الفلسطينية السلطة الفلسطينية-FPs-التجارة والن...

في عام 2002، تم وصف أول فوتواكتيفاتابل المطبقة على نطاق واسع (1من السلطة الفلسطينية-التجارة والنقل) والبروتينات الفلورية فوتوكونفيرتيبلي (كايد2). هذه البروتينات الفلورية مبرز بصري تغيير خصائصها الطيفية عند التشعيع بالأشعة فوق البنفسجية-الضوء، أي أنها تصبح مشرقة (البروتينات الفلورية فوتواكتيفاتابل، أي السلطة الفلسطينية-في الثانية)، أو تغيير لونها (فوتوكونفيرتيبلي إطارا في الثانية). وحتى الآن، كانت عدة بروتينات الفلورسنت فوتواكتيفاتابل وفوتوكونفيرتيبلي عكسها ولا رجعة فيها نمواً3،4. في دراسات الفرقة أو السائبة، استخدمت أقلام ضوئية لدراسة ديناميات خلايا بأكملها أو البروتينات، وربط الأجزاء الأخرى سوبسيلولار. وعلاوة على ذلك، تقوم أقلام ضوئية ممكنة واحدة جزيء سوبيريسولوشن تقنيات مثل النخيل5 و6من فبالم التصوير.
على الرغم من أن العملياتالكيميائية الصورة أثناء فوتواكتيفيشن-أو التحويل وقد وصفت العديد من أقلام ضوئية وهياكل بلورية حتى قبل وبعد فوتواكتيفيشن/--بذلت التحويل المتوفرة7 , 8، والكامنة وراء الصورةالمادية إليه فوتواكتيفيشن--والتحويل ليست مفهومة تماما. وعلاوة على ذلك، حتى الآن تقديرات النفط الخام فقط موجودة كفاءة فوتواكتيفيشن--والتحويل، وهو جزء صغير البروتينات الفلورية أعرب هو فعلا فوتوكونفيرتيد أو فوتواكتيفاتيد أن تكون مضيئة. وأفيد في المختبر الدراسات فرقة التحديد الكمي لهذا التحول في امتصاص الأطياف ومبلغ أصلي وتنشيط البروتين في جل9،،من1011.
نقدم هنا، على بروتوكول يشمل التركيبات البروتينات الفلورية لتقييم جزء البروتينات الفلورية فوتواكتيفاتيد بكميات كبيرة وفي الخلايا الحية. كلما كان العمل مع البروتينات الفلورية وراثيا المرمزة، المبلغ المطلق للبروتين وأعرب يختلف من خلية إلى خلية وغير معروف. إذا خلية واحدة معربا عن السلطة الفلسطينية-FP يظهر إشارة أكثر إشراقا بعد فوتواكتيفيشن من خلية أخرى، لا يميز إذا كانت هذه إشارة أكثر إشراقا بسبب التعبير أعلى من السلطة الفلسطينية-تنظيم الأسرة أو فوتواكتيفيشن أكثر كفاءة من السلطة الفلسطينية-تنظيم الأسرة. لتوحيد مستوى التعبير في الخلايا، نقدم المساطر الداخلية وراثيا إلى جانب البروتينات الفلورية طيفيا متميزة. اقتران يتم إنشاء المعلومات الجينية الخاصة بروتين فلوري فوتواكتيفاتابل طيفيا متميزة دائماً على فلورسنت بروتينات، المساطر الداخلية التي سوف لا يزال تكون أعربت عن إلى مبلغ إجمالي غير معروف ولكن في كمية نسبية ثابتة ومعروفة من 1:1. هذه الاستراتيجية يسمح لوصف كمية من الأشعة فوق البنفسجية-الضوء فوتواكتيفيشن أنظمة مختلفة، أي، تقييم المبلغ النسبي للسلطة الفلسطينية-في الثانية التي يمكن أن تكون فوتواكتيفاتيد مع أنماط مختلفة من فوتواكتيفيشن، ومما يسمح لتعريف المخططات فوتواكتيفيشن التي أكثر فاعلية من غيرها. وعلاوة على ذلك، تسمح هذه الاستراتيجية في مبدأ التقييم الكمي المطلق للكسر فوتواكتيفاتيد السلطة الفلسطينية-تنظيم الأسرة. وتحقيقا لهذه الغاية، من المهم أن ندرك أن هذه الدراسات قدمت فرقة القائم على كثافة مما يجعل التحليل أكثر تعقيداً على النحو المنصوص عليه في هذا البروتوكول. معلمات تحديد قياس كثافة الفلورسنت، أي مختلفة السطوع الجزيئية وامتصاص وأطياف الانبعاث وآثار الحنق، تحتاج إلى أخذها في الاعتبار عند مقارنة الأسفار كثافات مختلفة من البروتينات الفلورية.
راتيوميتريك قدم على أساس كثافة التقدير الكمي للكفاءة فوتواكتيفيشن يتمثل للسلطة الفلسطينية-التجارة والنقل، والسلطة الفلسطينية-الكرز في الخلايا الحية، ولكن من حيث المبدأ المطبق على نطاق واسع ويمكن استخدامها لأي بروتين فلوري فوتواكتيفاتابل تحت أي حالة تجريبية.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pEGFP-N1 mammalian cell expression vector</td>
			<td>Clontech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM w/o phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11054020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin w/o phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabTek 8-well chambers #1.0</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12565470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fugene 6</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E2691</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

how to quantify the fraction of photoactivated fluorescent proteins in bulk and in live cells

فوتواكتيفاتابل-والبروتينات الفلورية القابلة للتحويل (السلطة الفلسطينية-FPs) قد استخدمت في الأسفار يعيش خلية مجهرية لتحليل ديناميات الخلايا والبروتين الفرق. حتى الآن، أي أسلوب كانت متاحة للقياس الكمي بكميات كبيرة وفي العيش الخلايا أعرب عن كم من السلطة الفلسطينية-في الثانية فوتواكتيفاتيد فلوريس.
هنا، فإننا نعرض على بروتوكول يشمل الحكام الداخلية، أي وراثيا زوجت بروتينات الفلورسنت طيفيا متميزة (فوتواكتيفاتابل)، إلى راتيوميتريكالي التحديد الكمي لجزء صغير من جميع FPs السلطة الفلسطينية أعرب في خلية التي يتم تشغيلها على أن تكون الفلورسنت. باستخدام هذا البروتوكول، نظهر أن أوضاع مختلفة من فوتواكتيفيشن أسفرت عن كفاءات فوتواكتيفيشن مختلفة. فوتواكتيفيشن عالية الطاقة قصيرة مع ليزر [كنفوكل] المسح مجهر (كلسم) أدت إلى ما يصل إلى أربع مرات أقل كفاءة فوتواكتيفيشن من مئات من التعرض ذات المستوى المنخفض التي تطبقها كلسم أو نبضة قصيرة تطبقها الإضاءة ويديفيلد. بينما البروتوكول قد تم يتضح هنا للتجارة والنقل (السلطة الفلسطينية-) و (PA-) الكرز، فإنه يمكن من حيث المبدأ تطبيق أي زوج طيفيا متميزة من البروتينات الفلورية فوتواكتيفاتابل أو فوتوكونفيرتيبلي وأي الإعداد التجريبية.

البروتوكول المعروضة هنا يظهر التحديد الكمي لجزء صغير البروتينات الفلورية التي فوتواكتيفاتيد لتكون نيون راتيوميتريك (الشكل 1). هذا الكسر يختلف تبعاً لطريقة فوتواكتيفيشن.
نتيجة نموذجية باستخدام فوتواكتيفيشن عالية الطاقة ...

Watch this Scientific Journal Video about How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells at JoVE.com

How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells

كيفية تحديد جزء صغير البروتينات الفلورية فوتواكتيفاتيد بكميات كبيرة وفي الخلايا الحية

نقدم هنا، بروتوكول ينطوي على فوتواكتيفاتابل طيفيا متميزة إلى جانب وراثيا والبروتينات الفلورية. تسمح هذه التركيبات بروتين فلوري التحديد الكمي للكسر FP السلطة الفلسطينية هو فوتواكتيفاتيد أن تكون نيون، أي كفاءة فوتواكتيفيشن. البروتوكول يكشف عن أن أوضاع مختلفة من فوتواكتيفيشن تحقق الكفاءة فوتواكتيفيشن مختلفة.

Photoactivatable and -convertible fluorescent proteins (PA-FPs) have been used in fluorescence live-cell microscopy for analyzing the dynamics of cells ...

نقدم هنا بروتوكول يتضمن الاقتران جينياً بشكل طيفي متميز للصور القابلة للتفعين والبروتينات الفلورية. تسمح هذه المساطر الداخلية بالكمية من جزء PAFP الذي يتم تنشيط الصورة لتكون الفلورسنت. حتى الآن، لم تكن هناك طريقة متاحة لتحديد كمي في الجزء الأكبر في خلايا الحياة كم من PAFP أعرب عن الصورة تنشيطها إلى الفلور. وتجسد الكمية المعروضة لكفاءة تنشيط الصور PA-GFP و PA Cherry في الخلايا الحية ولكنها من حيث المبدأ قابلة للتطبيق على نطاق واسع ويمكن استخدامها لأي بروتين فلوري قابل للتنشيط في ظل أي حالة تجريبية. كلما كان العمل مع البروتينات الفلورية المشفرة وراثيا، فإن المبلغ المطلق من البروتينات التي أعرب عنها يختلف من خلية إلى خلية وأنه غير معروف. لتوحيد التعبير بين الخلايا، نقدم حكام داخليين من البروتينات الفلورية المتميزة من الناحية الجينية. عن طريق اقتران المعلومات الوراثية من البروتين الفلورسنت القابلة للتفعيل بالصور إلى متميزة طيفيا دائما على المساطر الداخلية البروتين الفلورية التي سيتم إنشاؤها لا يزال يتم التعبير عن كمية إجمالية غير معروفة ولكن في كمية نسبية ثابتة معروفة من واحد إلى واحد. لبدء بناء البلازميدات كما هو موضح في بروتوكول النص المرافق. أيضا، والثقافة في خط الخلية القياسية في وجهة نظرها المتوسطة باستخدام النسخة الحمراء الفينول. عندما تكون على استعداد لبدء التجربة، حصاد الخلايا باستخدام التربسين دون أحمر الفينول للحد من الفلوركنس الخلفية. بعد الحصاد، تعبئة ماصة 2 مل مع تعليق الخلية من ثقافة الخلية التقاء نمت في قارورة ثقافة خلية T 12.5. إضافة قطرة واحدة في كل غرفة من ثمانية قطعة زجاج الغرفة الشريحة. احتضان الشريحة تحت شروط ثقافة الخلية القياسية لمدة 24 ساعة. نقل الخلايا التالية باستخدام الكواشف التجارية التالية بروتوكول الموزعين. Transfect الخلايا مع GFP الكرز، PA-GFP الكرز وGFPPA الكرز الكيميرا. ثم إعادة الخلايا إلى الحاضنة للسماح للتعبير البروتين، للطي، والنضج. بعد ما مجموعه 20 ساعة بعد النقل، ونقل الخلايا إلى مرحلة مجهر فلورسنت confocal مجهزة غرفة بيئية مرطبة وساخنة قبل warmed إلى 37

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization والتعبير وتنقية، وتبلور من السيروتونين الناقل الإنسان ملزمة ل<em&gt; S</em&gt; -citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

إعداد هيدروليساتي الكيراتين من ريش الدجاج وتطبيقه في مستحضرات التجميل

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

ميكروجرافيميتري المسرف لدراسة ديناميات ملزمة فسفوليبيد ملزمة البروتين أنيكسين A2 إلى بليرس الدهن الصلب-يؤيد استخدام جهاز رنان مرو

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

تعديل ناقلات التعبير باكولوفيروس لإنتاج يفرز البروتينات النباتية في خلايا الحشرات

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

تلوين الفضة الفلورسنت من البروتينات في المواد الهلامية Polyacrylamide

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

Using High Content Imaging to Quantify Target Engagement in Adherent Cells

استخدام المحتوى العالي من التصوير لقياس الهدف المشاركة في خلايا ملتصقة

Quantitating the interaction of small molecules with their intended protein target is critical for drug development, target validation and chemical probe ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

استخدام البروتينات الانصهار المؤتلف في منصة فحص حوزتي فلورسنت وما ريناتوريشن في جل

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

تحليل لطي البروتين، والنقل، وتدهور في الخلايا الحية بمطاردة نبض المشعة

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Localization of SUMO-modified Proteins Using Fluorescent Sumo-trapping Proteins

توطين البروتينات المعدلة السومو باستخدام السومو الفلورسنت-البروتينات الملائمة

Here we are presenting a novel method to study the sumoylation of proteins and their sub-cellular localization in mammalian cells and nematode oocytes. ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

تحليل تفاعل البروتينات ذات العلامات الفلورية مع الحويصلات الدقيقة الفوسفاتية الاصطناعية باستخدام قياس التدفق الخلوي الكمي

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...