Name: how to quantify the fraction of photoactivated fluorescent proteins in bulk and in live cells
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells at JoVE.com

ברצוננו להודות המעבדה Dorigo והשירות מדעי המוח הדמיה בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת סטנפורד על מתן שטח וציוד עבור פרוייקט זה.

1. פלסמיד בנייה
<ol><li>צור שני צבעים פיוז'ן הגששים. השתמש וקטור ביטוי בתרבית של תאים (ראה טבלה של חומרים), אילו mCherry112 , PA-mCherry113 נוספו עם ההגבלה באתרי AgeI ו BsrGI.
</li>
	<li>סדר מותאם אישית oligo-נוקלאוטידים כדי להגביר את monomeric וריאציות של eGFP ו- PA-eGFP המכילות את המ...

<ol>
	<li>Patterson, G. H., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+photoactivatable+GFP+for+selective+photolabeling+of+proteins+and+cells.">A photoactivatable GFP for selective photolabeling of proteins and cells.</a> Science. 297 (5588), 1873-1877 (2002).</li><li>Ando, R., Hama, H., Yamamoto-Hino, M., Mizuno, H., Miyawaki, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+optical+marker+based+on+the+UV-induced+green-to-red+photoconversion+of+a+fluorescent+protein.">An optical marker based on the UV-induced green-to-red photoconversion of a fluorescent protein.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 99 (20), 12651-12656 (2002).</li><li>Renz, M., Lippincott-Schwartz, J., Day, R. N., Davidson, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+9.">Ch. 9.</a> The Fluorescent Protein Revolution Series in Cellular and Clinical Imaging. , 201-228 (2014).</li><li>Shcherbakova, D. M., Sengupta, P., Lippincott-Schwartz, J., Verkhusha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photocontrollable+fluorescent+proteins+for+superresolution+imaging.">Photocontrollable fluorescent proteins for superresolution imaging.</a> Annual Review of Biophysics. , 303-329 (2014).</li><li>Betzig, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+intracellular+fluorescent+proteins+at+nanometer+resolution.">Imaging intracellular fluorescent proteins at nanometer resolution.</a> Science. 313 (5793), 1642-1645 (2006).</li><li>Hess, S. T., Girirajan, T. P., Mason, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultra-high+resolution+imaging+by+fluorescence+photoactivation+localization+microscopy.">Ultra-high resolution imaging by fluorescence photoactivation localization microscopy.</a> Biophysical Journal. 91 (11), 4258-4272 (2006).</li><li>Henderson, J. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+mechanism+of+the+photoactivatable+green+fluorescent+protein.">Structure and mechanism of the photoactivatable green fluorescent protein.</a> Journal of the American Chemical Society. 131 (12), 4176-4177 (2009).</li><li>Subach, F. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivation+mechanism+of+PAmCherry+based+on+crystal+structures+of+the+protein+in+the+dark+and+fluorescent+states.">Photoactivation mechanism of PAmCherry based on crystal structures of the protein in the dark and fluorescent states.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106 (50), 21097-21102 (2009).</li><li>Wiedenmann, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EosFP,+a+fluorescent+marker+protein+with+UV-inducible+green-to-red+fluorescence+conversion.">EosFP, a fluorescent marker protein with UV-inducible green-to-red fluorescence conversion.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101 (45), 15905-15910 (2004).</li><li>Habuchi, S., Tsutsui, H., Kochaniak, A. B., Miyawaki, A., van Oijen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mKikGR,+a+monomeric+photoswitchable+fluorescent+protein.">mKikGR, a monomeric photoswitchable fluorescent protein.</a> PLoS One. 3 (12), e3944 (2008).</li><li>McKinney, S. A., Murphy, C. S., Hazelwood, K. L., Davidson, M. W., Looger, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+bright+and+photostable+photoconvertible+fluorescent+protein.">A bright and photostable photoconvertible fluorescent protein.</a> Nature Methods. 6 (2), 131-133 (2009).</li><li>Shaner, N. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+monomeric+red,+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein.">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nature Biotechnology. 22 (12), 1567-1572 (2004).</li><li>Subach, F. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoactivatable+mCherry+for+high-resolution+two-color+fluorescence+microscopy.">Photoactivatable mCherry for high-resolution two-color fluorescence microscopy.</a> Nature Methods. 6 (2), 153-159 (2009).</li><li>Zacharias, D. A., Violin, J. D., Newton, A. C., Tsien, R. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Partitioning+of+lipid-modified+monomeric+GFPs+into+membrane+microdomains+of+live+cells.">Partitioning of lipid-modified monomeric GFPs into membrane microdomains of live cells.</a> Science. 296 (5569), 913-916 (2002).</li><li>Slocum, J. D., Webb, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Double+Decarboxylation+in+Superfolder+Green+Fluorescent+Protein+Leads+to+High+Contrast+Photoactivation.">A Double Decarboxylation in Superfolder Green Fluorescent Protein Leads to High Contrast Photoactivation.</a> Journal of Physical Chemistry Letters. 8 (13), 2862-2868 (2017).</li><li>Subach, F. V., Patterson, G. H., Renz, M., Lippincott-Schwartz, J., Verkhusha, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bright+monomeric+photoactivatable+red+fluorescent+protein+for+two-color+super-resolution+sptPALM+of+live+cells.">Bright monomeric photoactivatable red fluorescent protein for two-color super-resolution sptPALM of live cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 132 (18), 6481-6491 (2010).</li><li>Renz, M., Wunder, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Internal+rulers+to+assess+fluorescent+protein+photoactivation+efficiency.">Internal rulers to assess fluorescent protein photoactivation efficiency.</a> Cytometry A. , (2017).</li><li>Renz, M., Daniels, B. R., Vamosi, G., Arias, I. M., Lippincott-Schwartz, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+the+asialoglycoprotein+receptor+deciphered+by+ensemble+FRET+imaging+and+single-molecule+counting+PALM+imaging.">Plasticity of the asialoglycoprotein receptor deciphered by ensemble FRET imaging and single-molecule counting PALM imaging.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (44), E2989-E2997 (2012).</li></ol>

עד כה, אין שיטה קיימת כדי לקבוע בצובר השבר של הרשות הפלסטינית-FPs לידי ביטוי תאים חיים זה photoactivated להיות פלורסנט. פרוטוקול שהוצגו ניתן לכל זוג חלבון פלואורסצנטי spectrally נפרדים. בעוד ביטוי כאן עבור הפיכה הרשות הפלסטינית-FPs-GFP, הרשות הפלסטינית-שרי, גישה זו היא עקרונית החלים photoconvertible חלבונים גם כן. ...

בשנת 2002, תוארו של photoactivatable בהרחבה ישים הראשון (PA-GFP1), photoconvertible (קאךה2) חלבונים פלורסנט. אלו חלבונים פלורסנט אופטי סימון לשנות תכונות ספקטרליות שלהם על הקרנה עם אור UV, קרי, הם הופכים בהירים (חלבונים פלורסנט photoactivatable, קרי, הרשות הפלסטינית-FPs), או לשנות את צבעם (photoconvertible FPs). עד כה, הפיך ובלתי הפיכה photoactivatable ו- photoconvertible פלורסנט חלבונים שונים כבר פיתח3,4. במחקרים אנסמבל או בכמות גדולה, עטי סימון אופטיים שימשו כדי ללמוד את הדינמיקה של תאים שלמים או חלבונים, הקישוריות של תאים subcellular. יתר על כן, עטי סימון אופטי התומך יחיד מולקולה מבוססת superresolution הדמיה טכניקות כגון PALM5 ו FPALM6.
למרות מעבד צילוםכימי במהלך photoactivation או - המרה תוארו עבור רבים עטי סימון אופטי, אפילו לחקר הגבישים מבנים לפני ואחרי photoactivation / - המרה נעשו זמינים7 , 8, המנגנון הבסיסי שלהפיזי צילום של photoactivation והמרה אינה מובנת לחלוטין. יתר על כן, עד כה הערכות גולמי בלבד קיים ליעילות של photoactivation והמרה, כלומר, השבר של חלבונים פלורסנט הביע זה בעצם photoconverted או photoactivated להיות פלורסנט. מחקרים במבחנה אנסמבל דווחו לכימות המשמרת ב ספקטרום בליעה ואת מידת מקורי ומופעל חלבון10,9,ג'ל11.
כאן, אנו מציגים פרוטוקול מעורבים חלבון פלואורסצנטי כימרות כדי להעריך את השבר של photoactivated פלורסנט חלבונים בכמות גדולה, תאים חיים. בכל פעם עובד עם חלבונים פלורסנט מקודדים גנטית, כמות החלבונים הביע מוחלט משתנה מתא לתא, אינו ידוע. אם תא אחד לבטא של הרשות הפלסטינית-FP מראה אות בהיר יותר לאחר photoactivation מאשר תא אחר, זה לא יכול להיות מבודלים אם האות בהיר הזה הוא ביטוי גבוה יותר של הרשות הפלסטינית-FP או של photoactivation יעיל יותר של הרשות הפלסטינית-FP. כדי לתקנן את רמת הביטוי בתאים, אנחנו מציגים פנימי שליטי גנטית בשילוב חלבונים פלורסנט spectrally נפרדים. זיווגו המידע הגנטי של חלבון פלואורסצנטי photoactivatable spectrally ברורים תמיד בפלורסנט חלבונים, סרגלים פנימי נוצרים זה עדיין יתבטא לסכום הכולל אינו ידוע אך בכמות היחסית קבועים וידועים של ציור אסטרטגיה זו מאפשרת אפיון שונה אור UV photoactivation מזימות, קרי, כמותיים להערכת הכמות היחסית של הרשות הפלסטינית-FPs זה יכול להיות photoactivated עם מצבים שונים של photoactivation, ובכך מאפשרת כדי להגדיר ערכות photoactivation יעילים יותר מאחרים. יתר על כן, אסטרטגיה זו מאפשרת באופן עקרוני את ההערכה של כימות מוחלטת של השבר photoactivated הרשות הפלסטינית-FP. לשם כך, חשוב להבין כי המחקרים שהוצגו אנסמבל הם מבוססי-עוצמת שעושה הניתוח מורכב יותר בהתאם לפריסתו של פרוטוקול זה. פרמטרים לקביעת את עוצמת פלורסנט נמדד, קרי, בהירות מולקולרי שונה, ספיגת, ספקטרום הפליטה ואפקטים סריג, צריכים לקחת בחשבון כאשר משווים עוצמות קרינה פלואורסצנטית של חלבונים שונה פלורסנט.
רציומטרי הציג המבוסס על עוצמת כימות של יעילות photoactivation הוא דוגמה עבור הרשות הפלסטינית-GFP והרשות הפלסטינית-שרי בתאים חיים, אבל הוא ישים באופן כללי עקרוני והוא יכול לשמש עבור כל חלבון פלואורסצנטי photoactivatable בשום תנאי הניסוי.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>pEGFP-N1 mammalian cell expression vector</td>
			<td>Clontech</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM w/o phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11054020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin w/o phenol red</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15400054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (200 mM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15630080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LabTek 8-well chambers #1.0</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12565470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fugene 6</td>
			<td>Promega</td>
			<td>E2691</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

how to quantify the fraction of photoactivated fluorescent proteins in bulk and in live cells

Photoactivatable וחלבונים - להמרה פלורסנט (PA-FPs) שימשו פלורסצנטיות לחיות תאים במיקרוסקופ לניתוח את הדינמיקה של תאים, חלבון הרכבים. עד כה, אין שיטה כבר זמין לכמת בצובר, שידור חי תאי ביטא כמה של הרשות הפלסטינית-FPs הם photoactivated כדי לזרוח.
כאן, אנו מציגים פרוטוקול מעורבים סרגלים הפנימי, קרי, גנטית בשילוב חלבונים פלורסנט ברורים spectrally (photoactivatable), כדי ratiometrically לכמת את השבר של כל הרשות הפלסטינית-FPs הביע בתא אינם כבויים. פלורסנט. באמצעות פרוטוקול זה, נראה כי מצבים שונים של photoactivation הניבו היעילות photoactivation שונים. Photoactivation ובעוצמת קצר עם לייזר קונפוקלי סורק מיקרוסקופ (CLSM) הביא עד ארבע פעמים photoactivation ליעילות נמוכה יותר מאות חשיפות נמוכה שהוחלו על-ידי CLSM או דופק קצר שהוחלו על-ידי תאורה widefield. בעוד יש כבר ביטוי בפרוטוקול כאן (נולד ב- PA) GFP, (נולד ב- PA) שרי, זה באופן עקרוני ניתן להחיל לכל זוג חלבון פלואורסצנטי נפרדים spectrally של photoactivatable או photoconvertible, כל הגדרת ניסיוני.

פרוטוקול המוצגת כאן מראה כימות רציומטרי של השבר של חלבונים פלורסנט כי הם photoactivated להיות פלורסנט (איור 1). שבר זה שונה בהתאם למצב של photoactivation.
תוצאה באמצעות photoactivation ובעוצמת זמן קצר עם לייזר קונפוקלי סורק מיקרוסקופ (CLSM) מוצג <st...

Watch this Scientific Journal Video about How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells at JoVE.com

How to Quantify the Fraction of Photoactivated Fluorescent Proteins in Bulk and in Live Cells

כיצד ניתן לכמת את השבר של Photoactivated פלורסנט חלבונים בכמות גדולה, תאים חיים

כאן, אנו מציגים פרוטוקול זה כרוך photoactivatable spectrally שונות גנטית בשילוב וחלבונים פלורסנט. אלה היו חלבון פלואורסצנטי היתר כימות של השבר הרשות הפלסטינית-FP זה photoactivated להיות פלורסנט, קרי, את יעילות photoactivation. הפרוטוקול מגלה כי מצבים שונים של photoactivation תשואה היעילות photoactivation שונים.

Photoactivatable and -convertible fluorescent proteins (PA-FPs) have been used in fluorescence live-cell microscopy for analyzing the dynamics of cells ...

אנו מציגים כאן פרוטוקול הכולל חלבונים מובחנים מבחינה גנטית הניתנים להפעלה באמצעות פוטו ופלורסנט. שליטים פנימיים אלה מאפשרים לכמת את שבר ה-PAFP המופעל באמצעות תמונה כדי להיות פלואורסצנטי. עד כה, לא הייתה שיטה זמינה לכמת בכמויות גדולות בתאי החיים כמה מה-PAFP המובעים הם תמונה המופעלת ל פלואורסצנטיה. הכימות המוצג של יעילות הפעלת תמונות בא לידי ביטוי עבור PA-GFP ו- PA Cherry בתאים חיים, אך הוא ישים באופן עקרוני וניתן להשתמש בו עבור כל חלבון פלואורסצנטי הניתן להפעלה פוטו בכל תנאי ניסיוני. בכל פעם עבודה עם חלבונים פלואורסצנטיים מקודדים גנטית, הכמות המוחלטת של חלבונים לידי ביטוי משתנה מתא לתא וזה לא ידוע. כדי לתקנן את הביטוי בין התאים, אנו מציגים סרגלים פנימיים של חלבונים פלואורסצנטיים מובחנים מבחינה גנטית. על ידי צימוד המידע הגנטי של חלבון פלורסנט הניתן להפעלה פוטו לנבדל ספקטרלי תמיד על סרגלים פנימיים של חלבון פלואורסצנטי נוצרים שעדיין יבואו לידי ביטוי בכמות כוללת לא ידועה אך בכמות יחסית ידועה קבועה של אחד לאחד. כדי להתחיל לבנות את הפלסמידים כמתואר בפרוטוקול הטקסט הנלווה. כמו כן, תרבות בקו התא הסטנדרטי במדיום הפרספקטיבה שלה באמצעות הגרסה פנול אדום חינם. כאשר מוכן להתחיל את הניסוי, לקצור את התאים באמצעות טריפסין ללא פנול אדום כדי להפחית את הפלורציה ברקע. לאחר הקציר, למלא פיפטה 2 מ"ל עם ההשעיה התא מתרבות תאים confluent גדל בבקבוק תרבות תא T 12.5. הוסף טיפה אחת לכל תא של מגלשת זכוכית תאית שמונה. הדגירה את השקופית בתנאי תרבות תאים סטנדרטיים במשך 24 שעות. לאחר מכן, התפנית הבאה תדביק את התאים באמצעות רייגנטים מסחריים בהתאם לפרוטוקול המפיצים. להדביק את התאים עם דובדבן GFP, PA-GFP דובדבן ו GFPPA שרי כימרות. לאחר מכן החזירו את התאים לחממה כדי לאפשר ביטוי חלבון, קיפול והתבגרות. לאחר 20 שעות לאחר ההתמזגות, העבירו את התאים לשלב של מיקרוסקופ פלורסנטי קונפוקאלי המצויד בתא הסביבתי הלח והחומם שהתחמם מראש ל-37

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

Thermostabilization, ביטוי, טיהור, התגבשות של Transporter סרוטונין האדם Bound כדי<em&gt; S</em&gt; -citalopram

The serotonin transporter is a sodium and chloride-coupled transporter that &#34;pumps&#34; extracellular serotonin into cells. S-citalopram is a drug ...

Preparation of Keratin Hydrolysate from Chicken Feathers and Its Application in Cosmetics

הכנת קרטין Hydrolysate של נוצות העוף ויישומו בתחום הקוסמטיקה

Keratin hydrolysates (KHs) are established standard components in hair cosmetics. Understanding the moisturizing effects of KH is advantageous for ...

Dissipative Microgravimetry to Study the Binding Dynamics of the Phospholipid Binding Protein Annexin A2 to Solid-supported Lipid Bilayers Using a Quartz Resonator

Microgravimetry dissipative ללמוד את הדינמיקה איגוד של פוספוליפיד איגוד חלבון Annexin A2 כדי Bilayers השומנים הנתמכות על-ידי מוצק באמצעות מהוד קוורץ

The dissipative quartz crystal microbalance technique is a simple and label-free approach to measure simultaneously the mass uptake and viscoelastic ...

Modifying Baculovirus Expression Vectors to Produce Secreted Plant Proteins in Insect Cells

שינוי Baculovirus וקטורים ביטוי לייצר מופרש צמח חלבונים בתאי חרקים

It has been a challenge for scientists to express recombinant secretory eukaryotic proteins for structural and biochemical studies. The ...

Fluorescent Silver Staining of Proteins in Polyacrylamide Gels

צביעת כסף פלורסנט של חלבונים בג'לים לזיהוי

Silver staining is a colorimetric technique widely used to visualize protein bands in polyacrylamide gels following sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide ...

Using High Content Imaging to Quantify Target Engagement in Adherent Cells

באמצעות תוכן גבוהה הדמיה לכמת התחייבות היעד תאים חסיד

Quantitating the interaction of small molecules with their intended protein target is critical for drug development, target validation and chemical probe ...

Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

השימוש פיוז'ן רקומביננטי חלבונים פלטפורמה Assay פרוטאז פלורסנט, Renaturation שלהם בג'ל

Proteases are intensively studied enzymes due to their essential roles in several biological pathways of living organisms and in pathogenesis; therefore, ...

Analysis of Protein Folding, Transport, and Degradation in Living Cells by Radioactive Pulse Chase

ניתוח של קיפול חלבונים, תחבורה, והשפלה בתאים חיים על ידי הדופק רדיואקטיבי צ'ייס

Radioactive pulse-chase labeling is a powerful tool for studying the conformational maturation, the transport to their functional cellular location, and ...

Localization of SUMO-modified Proteins Using Fluorescent Sumo-trapping Proteins

לוקליזציה של חלבונים ששונו באמצעות סומו פלורסנט-השמנה חלבונים

Here we are presenting a novel method to study the sumoylation of proteins and their sub-cellular localization in mammalian cells and nematode oocytes. ...

Analyzing the Interaction of Fluorescent-Labeled Proteins with Artificial Phospholipid Microvesicles using Quantitative Flow Cytometry

ניתוח האינטראקציה של חלבונים בעלי תווית פלואורסצנטית עם מיקרו-וסיקלים מלאכותיים של פוספוליפידים באמצעות ציטומטריה כמותית של זרימה

In the human body, most of the major physiologic reactions involved in the immune response and blood coagulation proceed on the membranes of cells. An ...