Name: novel object recognition and object location behavioral testing in mice on a budget
Uploaded: 2018-11-20T15:00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget at JoVE.com

Ce travail a été financé par R00 NS089938 du NIH et des fonds de démarrage d’une lésion cérébrale chronique et thèmes de découverte à la Ohio State University à EDK.

Le protocole suivant a été approuvé par l’animalier institutionnel et utilisation Comité (IACUC) à l’Ohio State University (OSU).
1. mise en place des arènes
<ol><li>Commander les matériaux décrits dans le tableau 1: cinq feuilles d’acrylique, ciment acrylique et un 16 G hypo applicateur.</li>
	<li>Portez un équipement de sécurité qui s’imposent conformément aux instructions du fabricant, qui peut inclure des yeux, la peau et autres types de protection.</li>
	<li>Enlever l’enduit de papier protecteur par rapport aux feuilles d’acrylique.</li>
	<li>Cloisonner tous les matériaux pour confirmer que les tailles sont corrects (Figure 1 a).</li>
	<li>Assembler et charger la seringue avec du ciment acrylique.</li>
	<li>Alignez le bord long d’un mur extérieur (partie B) avec une partie supérieure de la base (partie C) et s’assurer qu’ils sont perpendiculaires les uns aux autres à l’aide d’un carré de combinaison ou de machiniste.</li>
	<li>À l’aide de la seringue, appliquer un cordon petit et régulier du ciment directement à l’angle des deux pièces qui sont jointes.</li>
	<li>Maintenez les deux pièces (pièces B et C) en place jusqu'à ce qu’elles sont définies au départ (environ 5 min). Remarque : En règle générale, ils seront 80 % durci en 24h, mais l’assembly peut continuer après 5 min.</li>
	<li>Répétez les étapes 1,5 à 1,7 avec l’autre mur extérieur (partie B) sur la même base.</li>
	<li>Fixez les deux murs intérieurs (partie A), un à la fois, à la base à l’aide de mesures 1,5 à 1,7.</li>
	<li>En outre, utiliser la seringue pour appliquer un petit et talon stable de ciment directement jusqu'à l’angle maintenant constitué par le mur extérieur (partie B) et l’intérieur de mur (partie A).</li>
	<li>Maintenez ces morceaux en place pendant 5 min.</li>
	<li>Après 24 à 48 h, procéder à la mise en place l’environnement de test comportemental.</li>
</ol>2. configurer l’environnement de test comportemental et équipement
<ol><li>Placer les signaux environnementaux (comme décrit dans la section « discussion ») en face les uns aux autres et face à des arènes dans la zone d’essai (Figure 1 b).</li>
	<li>Organiser les quatre arènes essais d’une manière 2 par 2, soit sur le sol ou une table solide à distance appropriée depuis les repères et la caméra pour maximiser l’entrée visuelle aux souris (Figure 1 b).</li>
	<li>Vérifiez la ligne de mire, aide d’un bâtonnet de compteur calé de chaque étage de l’aréna par-dessus le mur vers les indices pour confirmer que ces écarts entre les arènes et les repères sont appropriées.</li>
	<li>Déterminer la longueur du trajet optique optimale qui permet la documentation vidéo de tous les quatre arènes en ajustant la hauteur de la caméra ou la hauteur de la table. (Figure 1 b).</li>
	<li>Connectez la caméra à un câble d’Extension USB.</li>
	<li>À l’aide de chemins de câble, faites passer le câble à travers le plafond et un mur sur un ordinateur exécutant vidéo logiciel de capture.</li>
	<li>Masquer l’ordinateur derrière un rideau qui séparera les souris dans la zone d’essai de la chercheuse (Figure 1).</li>
	<li>Assembler les 4 chacune d’au moins 3 objets différents qui sont environ de 2 à 5 cm en longueur et en largeur et jusqu'à 10 cm de hauteur à utiliser pour l’essai (Figure 1).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig1.jpg"> Figure 1 : préparation de test comportementale. (A) Open-champ-tests Assemblée arène avec partie A correspondant à la paroi intérieure, comme la paroi extérieure de la partie B et partie C comme base. L’arène fini aura deux murs extérieurs (partie B) qui s’exécutent la totalité de l’arête de la base et deux murs intérieurs (pièces A) qui s’engagent entre les murs extérieurs sur les bords adjacents de la base (partie C). Tous les murs seront reposera sur le dessus de la base. (B) arrangement représentatif des arénas sur une table de haute 0,62 m, signaux environnementaux 60 x 90 cm, lumières et une caméra pour un domaine d’expérimentation qui permet la capture de tous les quatre arènes simultanément. (C) un rideau cache l’expérimentateur et un système informatique de la souris pendant les essais. Les plafonniers sont aux fins de la prise de cette photographie, mais durant les tests, seulement les lampadaires sont sur. Aussi, un des signaux environnementaux a été supprimé pour cette photo de la zone d’essai, mais au cours des essais, il y a une quatrième queue devant les arènes, face à la queue tout noir derrière le tableau. (D) un objet représentatif (et dirigeant pour l’échelle) qui est appropriée pour les BTA ou NORT tests sur des souris. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig1large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
<ol start="9"><li>Valider ces objets.<ol>
<li>Obtenir un minimum de 8 souris de type sauvage dans le sexe, souche et groupe d’âge représentant des souris expérimentales qui sera utilisé (par exemple, 6 à 9 souris C57Bl/6 femelles et mâles semaines).</li>
		<li>Gérez toutes les souris par jour pendant 1 min au cours des 3 à 5 jours avant le test.</li>
		<li>Diviser les souris en groupes de 4 et, si elles ne sont pas déjà individuellement logés, déplacez-les vers la titulaire propres cages.</li>
		<li>Introduire dans la salle d’examen et les laisser s’acclimater pendant au moins 30 min. Remarque : Présence de l’expérimentateur dans la salle pendant ces 30 min sera réduire le stress sur les souris au cours de la tâche, surtout si l’expérimentateur est masculin20.</li>
		<li>Après acclimatation est faite et l’expérimentateur est prêt à démarrer, commencer l’enregistrement de la vidéo.</li>
		<li>Chaque souris est face à des murs d’un coin de l’arène (appelé l’angle de sortie) (Figure 2 a).</li>
		<li>Laissez les souris explorer les arènes librement pendant 10 min.</li>
		<li>Arrêter l’enregistrement de la vidéo.</li>
		<li>Souris de retour à leurs propre exploitation des cages pour une durée de 20 min.</li>
		<li>Nettoyer tous les arènes avec animalerie la méthodes, telles que l’essuyage avec 70 % d’éthanol pour réduire au minimum les signaux olfactifs avant la prochaine utilisation de nettoyage recommandée.</li>
		<li>À l’aide de ruban adhésif double-face, coller 2 objets différents près de 2 coins non finale telle que les objets sont contrebalancés dans l’arène et 6 x 6 cm2 de chaque mur de cet angle (Figure 2 b).</li>
		<li>Démarrer l’enregistrement de la vidéo.</li>
		<li>Placez chaque souris face à des murs dans le coin de la libération.</li>
		<li>Autoriser les souris enquêter sur l’arène et les objets librement pendant 10 min.</li>
		<li>Arrêter l’enregistrement de la vidéo.</li>
		<li>Mice place de retour dans leur propre exploitation pour une durée de 20 min.</li>
		<li>Nettoyer tous les arénas et les objets avec l’animalerie de nettoyage recommandée méthodes telles que l’essuyage avec 70 % d’éthanol pour réduire au minimum les signaux olfactifs.</li>
		<li>Répéter les essais de formation avec 2 nouveaux objets apposés aux mêmes endroits, jusqu'à ce que tous les objets (au moins trois objets différents si elle dispense les BTA et NORT) ont été testés avec chacune des souris.</li>
		<li>Exclure des objets qui permettent aux souris de s’asseoir sur le dessus de l’objet.</li>
		<li>Analyser les temps de l’enquête de chaque souris avec chaque objet selon l’étape 4.</li>
		<li>Exclure des objets qui ont une valeur intrinsèque positive ou négative.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. effectuer le Test comportemental
<ol><li>Une semaine avant le test : familiarisation aux personnes effectuant les tests comportements<ol>
<li>Poignée adulte 6 à 9 semaines mâles et femelles C57Bl/6 des souris par jour pendant 1 min au cours des 3 à 5 jours avant le test.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Journée 1 : séances d’accoutumance<ol>
<li>Diviser les souris en groupes de 4 et, si elles ne sont pas déjà individuellement logés, déplacez-les vers la titulaire propres cages.</li>
		<li>Les apporter la salle d’examen et de leur permettre de s’acclimater à la salle d’examen pendant au moins 30 min. NOTE: présence de l’expérimentateur dans la salle pendant ces 30 min sera réduire le stress sur les souris au cours de la tâche, surtout si l’expérimentateur est masculin20.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Après acclimatation est faite et l’expérimentateur est prêt à démarrer, commencer l’enregistrement de la vidéo.</li>
	<li>Placez chaque souris dans l’arène (une souris par arena) face à des murs de l’angle de sortie (Figure 2 a).</li>
	<li>Laissez les souris explorer les arènes librement pendant 6 min.</li>
	<li>Arrêter l’enregistrement de la vidéo.</li>
	<li>Souris de retour à leurs propre exploitation des cages pendant l’intervalle inter du procès (ITI).</li>
	<li>Nettoyer tous les arènes avec animalerie recommandé nettoyage des méthodes telles que l’essuyage avec 70 % d’éthanol pour réduire au minimum les signaux olfactifs.</li>
	<li>Répétez les étapes 3.3 – 3,9 deux fois plus pour un total de 3 séances d’accoutumance pour chaque souris.</li>
	<li>Retourner toutes les souris à leur cage maison.</li>
	<li>Nettoyer tous les arènes avec animalerie méthodes telles que l’aide d’éthanol à 70 % de nettoyage recommandée pour minimiser les signaux olfactifs avant utilisation le lendemain.</li>
	<li>Jours 2 : essai de formation, OLT, NORT Remarque : Le NORT est un essai facultatif.<ol>
<li>Après 24 h, faire le même groupe de souris dans la salle d’examen et leur permettre de s’acclimater à la salle d’examen pendant au moins 30 min comme fait avant les séances d’accoutumance le jour précédent.</li>
		<li>Faire un essai de formation à l’aide de 2 objets placés dans l’arène (Figure 2 b).<ol>
<li>À l’aide de ruban adhésif double-face, apposer objets 6 x 6 cm2 loin 2 angles de dégagement non tels qu’ils sont contrebalancés dans l’arène.</li>
			<li>Démarrer l’enregistrement de la vidéo.</li>
			<li>Placez chaque souris dans les murs de l’angle de sortie tel qu’effectué durant les séances d’accoutumance.</li>
			<li>Autoriser les souris enquêter sur l’arène et les objets librement pendant 10 min.</li>
			<li>Arrêter l’enregistrement de la vidéo.</li>
			<li>Mice place arrière dans leur propre exploitation pour un ITI de 20 min.</li>
			<li>Nettoyer tous les arénas et les objets avec l’animalerie de nettoyage recommandée méthodes telles que l’essuyage avec 70 % d’éthanol pour réduire au minimum les signaux olfactifs.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Effectuer le BTA.<ol>
<li>Déplacez l’un des objets utilisés dans la formation du procès à un nouveau coin non finale et d’apposer l’objet 6 cm de chaque mur de cet angle avec du ruban adhésif double-face (Figure 2). Remarque : L’autre objet doit rester où il était lors de la formation du procès.</li>
			<li>Démarrer l’enregistrement de la vidéo.</li>
			<li>Placez chaque souris face à des murs dans le coin de la libération.</li>
			<li>Autoriser les souris étudier les objets pendant 10 min.</li>
			<li>Arrêter l’enregistrement de la vidéo.</li>
			<li>Mice place arrière dans leur propre exploitation pour un ITI de 20 min.</li>
			<li>Nettoyer tous les arénas et les objets avec l’animalerie de nettoyage recommandée méthodes telles que l’essuyage avec 70 % d’éthanol pour réduire au minimum les signaux olfactifs.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Effectuer la NORT.<ol>
<li>Remplacer l’objet qui n’était pas déplacé pendant le BTA avec un objet nouveau et d’apposer l’objet roman 6 cm des deux parois du coin avec ruban double-face (Figure 2D).</li>
			<li>Démarrer l’enregistrement de la vidéo.</li>
			<li>Placez chaque souris face à des murs dans le coin de la libération.</li>
			<li>Autoriser les souris étudier les objets pendant 10 min.</li>
			<li>Arrêter l’enregistrement de la vidéo.</li>
			<li>Replacez les souris dans leur cage maison.</li>
			<li>Nettoyer tous les arénas et les objets avec l’animalerie de nettoyage recommandée méthodes telles que l’essuyage avec 70 % d’éthanol pour réduire au minimum les signaux olfactifs avant de l’utiliser.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig2.jpg"> Figure 2 : configuration de l’arène pour les essais. (A) plein champ test arène sans objets de session de l’accoutumance. La flèche noire indique un angle de sortie. Ce coin doit être le même emplacement relatif dans chaque arène et correspondre pour chaque souris mis à l’essai et pour toutes les épreuves. (B) pour le procès de la formation, deux objets différents sont fixés pour le champ ouvert à distance leurs murs respectifs de 6 x 6 cm. (C) pour le BTA, un objet est déplacé vers un nouvel emplacement, aussi 6 x 6 cm hors les murs et pas au coin de la libération. (D) pour the NORT, l’objet qui était immobile dans le BTA est remplacé par un nouvel objet, tandis que l’objet déplacé de l’OLT est maintenant l’objet familier. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig2large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>
4. analyse des données de Test comportemental
Remarque : Analyse de vidéo doit idéalement être établie par au moins deux expérimentateurs indépendants, aveugles.
<ol><li>Ouvrez le fichier vidéo.</li>
	<li>Appliquer un cercle transparent offrant une bordure de 2 cm autour de chaque objet sur l’écran pour vous aider à déterminer les recherches actives. Utiliser une image de fichier vidéo avec une règle placée dans une arène calibrer cette grille.</li>
	<li>Observer le comportement de la souris et enregistrer aux fois la souris est activement enquêter sur l’objet, qui consiste au nez pointé vers l’objet à une distance maximale de 2 cm de cet objet.<ol>
<li>Enregistrement de l’horodatage de la souris commence à enquêter sur un objet et l’horodatage quand il cesse d’enquêter sur cet objet.</li>
		<li>Répétez cette opération pour les deux objets dans l’arène pour la durée du procès.</li>
		<li>Calculer le temps total que la souris a étudié chaque objet en soustrayant l’heure de début de l’heure d’arrêt pour chaque instance d’enquête de l’objet et en ajoutant l’ensemble de ces valeurs.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Calculer le pourcentage du temps total d’enquête ou de l’indice de discrimination avec les formules suivantes :<ol>
<li>Calculer le pourcentage du temps total enquête = <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58593/58593eq1.jpg"> NOTE : Une valeur supérieure à 50 % indique une plus grande enquête de l’objet ou de nouveaux lieux.</li>
		<li>Calculer l’indice de discrimination = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58593/58593eq2.jpg"> NOTE : Une valeur positive indique plus temps à étudier l’objet du roman. Un indice de discrimination de zéro indique autant de temps passé avec les deux objets.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Représenter graphiquement les résultats et les analyses statistiques complets utilisant un test t ou ANOVA au nombre de groupes à comparer.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Krakauer, J. W., Ghazanfar, A. A., Gomez-Marin, A., Maclver, M. A., Poeppel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroscience+Needs+Behavior:+Correcting+a+Reductionist+Bias.">Neuroscience Needs Behavior: Correcting a Reductionist Bias.</a> Neuron. 93 (3), 480-490 (2017).</li><li>Lange, F., Seer, C., Kopp, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+flexibility+in+neurological+disorders:+Cognitive+components+and+event-related+potentials.">Cognitive flexibility in neurological disorders: Cognitive components and event-related potentials.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 83, 496-507 (2017).</li><li>Barnett, J. H., Blackwell, A. D., Sahakian, B. J., Robbins, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Paired+Associates+Learning+(PAL)+Test:+30+Years+of+CANTAB+Translational+Neuroscience+from+Laboratory+to+Bedside+in+Dementia+Research.">The Paired Associates Learning (PAL) Test: 30 Years of CANTAB Translational Neuroscience from Laboratory to Bedside in Dementia Research.</a> Current Topics in Behavioral Neuroscience. 28, 449-474 (2016).</li><li>Eichenbaum, H., Otto, T., Cohen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hippocampus-what+does+it+do?.">The hippocampus-what does it do?.</a> Behavioral and Neural Biology. 57 (1), 2-36 (1992).</li><li>Bartsch, T., Wulff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hippocampus+in+aging+and+disease:+From+plasticity+to+vulnerability.">The hippocampus in aging and disease: From plasticity to vulnerability.</a> Neuroscience. 19 (309), 1-16 (2015).</li><li>Smith, B. M., Yao, X., Chen, K. S., Kirby, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Larger+Social+Network+Enhances+Novel+Object+Location+Memory+and+Reduces+Hippocampal+Microgliosis+in+Aged+Mice.">A Larger Social Network Enhances Novel Object Location Memory and Reduces Hippocampal Microgliosis in Aged Mice.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 10 (142), 1-16 (2018).</li><li>Chieffi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+Influence+on+Hippocampal+Function:+Possible+Involvement+of+Orexin-A.">Exercise Influence on Hippocampal Function: Possible Involvement of Orexin-A.</a> Frontiers in Physiology. 14 (8), 85 (2017).</li><li>Garth, A., Roeder, I., Kempermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+in+an+enriched+environment+learn+more+flexibly+because+of+adult+hippocampal+neurogenesis.">Mice in an enriched environment learn more flexibly because of adult hippocampal neurogenesis.</a> Hippocampus. 26 (2), 261-271 (2016).</li><li>Brown, R. E., Stanford, L., Schellinck, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+standardized+behavioral+tests+for+knockout+and+mutant+mice.">Developing standardized behavioral tests for knockout and mutant mice.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (3), 163-174 (2000).</li><li>Barker, G. R., Warburton, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+is+the+hippocampus+involved+in+recognition+memory?.">When is the hippocampus involved in recognition memory?.</a> Journal of Neuroscience. 31 (29), 10721-10731 (2011).</li><li>Savage, S., Ma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+behavior+testing:+memory.">Animal behavior testing: memory.</a> British Journal of Anaesthesia. 113 (1), 6-9 (2015).</li><li>Fanselow, M. S., Dong, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+the+dorsal+and+ventral+hippocampus+functionally+distinct+structures?.">Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures?.</a> Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).</li><li>Vogel-Ciernia, A., Wood, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+object+location+and+object+recognition+memory+in+mice.">Examining object location and object recognition memory in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. 69, 1-17 (2014).</li><li>Ammassari-Teule, M., Passino, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dorsal+hippocampus+is+selectively+involved+in+the+processing+of+spatial+information+even+in+mice+with+a+genetic+hippocampal+dysfunction.">The dorsal hippocampus is selectively involved in the processing of spatial information even in mice with a genetic hippocampal dysfunction.</a> Psychobiology. 25 (2), 118-125 (1997).</li><li>Le Merrer, J., Rezai, X., Scherrer, G., Becker, J. A., Kieffer, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+hippocampus-dependent+and+facilitated+striatum-dependent+behaviors+in+mice+lacking+the+delta+opioid+receptor.">Impaired hippocampus-dependent and facilitated striatum-dependent behaviors in mice lacking the delta opioid receptor.</a> Neuropsychopharmacology. 38 (6), 1050-1059 (2013).</li><li>Hattiangady, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+location+and+object+recognition+memory+impairments,+motivation+deficits+and+depression+in+a+model+of+Gulf+War+illness.">Object location and object recognition memory impairments, motivation deficits and depression in a model of Gulf War illness.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 78 (2014).</li><li>Oliveira, A. M., Hawk, J. D., Abel, T., Havekes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-training+reversible+inactivation+of+the+hippocampus+enhances+novel+object+recognition+memory.">Post-training reversible inactivation of the hippocampus enhances novel object recognition memory.</a> Learning and Memory. 17 (3), 155-160 (2010).</li><li>Cohen, S. J., Stackman, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+rodent+hippocampal+involvement+in+the+novel+object+recognition+task.">Assessing rodent hippocampal involvement in the novel object recognition task.</a> Behavioral Brain Research. 285, 105-117 (2014).</li><li>Cohen, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Rodent+Hippocampus+Is+Essential+for+Nonspatial+Object+Memory.">The Rodent Hippocampus Is Essential for Nonspatial Object Memory.</a> Current Biology. 23 (17), 1685-1690 (2013).</li><li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+exposure+to+males,+including+men,+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents.">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li><li>Ennaceur, A., Delacour, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats.+1:+Behavioral+data.">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data.</a> Behavioral Brain Research. 31 (1), 47-49 (1988).</li><li>Leger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+recognition+test+in+mice.">Object recognition test in mice.</a> Nature Protocols. 8 (12), 2531-2537 (2013).</li><li>Wolf, A., Bauer, B., Abner, E. L., Ashkenazy-Frolinger, T., Hartz, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Comprehensive+Behavioral+Test+Battery+to+Assess+Learning+and+Memory+in+129S6/Tg2576+Mice.">A Comprehensive Behavioral Test Battery to Assess Learning and Memory in 129S6/Tg2576 Mice.</a> Public Library of Science ONE. 11 (1), e0147733 (2016).</li><li>Ennaceur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-trial+object+recognition+in+rats+and+mice:+methodological+and+theoretical+issues.">One-trial object recognition in rats and mice: methodological and theoretical issues.</a> Behavioural Brain Research. 215, 244-254 (2010).</li><li>Lueptow, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Object+Recognition+Test+for+the+Investigation+of+Learning+and+Memory+in+Mice.">Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (126), e55718 (2017).</li><li>Wasserstein, R. L., Lazar, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ASA's+Statement+on+p-Values:+Context,+Process,+and+Purpose.">The ASA's Statement on p-Values: Context, Process, and Purpose.</a> The American Statistician. 70 (2), 129-133 (2016).</li><li>Ranstam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+the+P-value+culture+is+bad+and+confidence+intervals+a+better+alternative.">Why the P-value culture is bad and confidence intervals a better alternative.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (8), 805-808 (2012).</li></ol>

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Les tests cognitifs efficaces isoler et d’évaluer la fonction neurale de certaines régions du cerveau en examinant le comportement dans un environnement contrôlé1. Chez l’homme, des tâches spécifiques ont été conçus pour évaluer la performance des régions cérébrales ciblées, telles que la carte de Wisconsin tri tâche pour fonction préfrontale ou les associés appariés test de la Cambridge neuropsychologiques d’essai automatisé batterie (d’apprentissage CANTAB) pour fonction hippocampal2,3. Ces tests sont conçus pour étudier les fonctions des régions spécifiques du cerveau chez l’être humain en évaluant les comportements qui résultent de l’activité neuronale de ces régions. L’objectif final de la recherche biomédicale plus est l’amélioration de la santé humaine ; Cependant, plusieurs études sur le fonctionnement du cerveau en santé ou maladie éthiquement impossible avec des êtres humains. Pour les études qui ne peuvent pas utiliser des participants humains, petits rongeurs comme les souris sont souvent le modèle de choix. À l’aide de modèles murins permet le contrôle direct des manipulations expérimentales, y compris l’altération de l’expression génique, l’induction de la blessure ou même modulation de l’activité de circuit grâce à des techniques d’optogenetic. Tests comportementaux des souris, semblables à l’expérimentation humaine, visant à évaluer l’effet des variables expérimentales sur le fonctionnement du cerveau en mesurant les comportements qui s’appuient sur des régions spécifiques.
L’hippocampe est une structure essentielle pour la formation de la mémoire à l’homme et les rongeurs4. Plus précisément, l’hippocampe joue un rôle déterminant dans la mémoire déclarative impliquant des représentations relationnelles, mais de mémoire pas procédurale, qui s’appuie sur les centres moteurs du cerveau4. Fonction mémoire hippocampe a été un objet d’étude à travers de nombreux domaines des neurosciences, parce qu’il est extrêmement sensible aux perturbations. Des perturbations négatives allant de stress prolongé et le vieillissement de convulsions et d’accidents vasculaires cérébraux sont associées à des lésions hippocampiques5. En revanche, des interventions positives, telles que l’interaction sociale, enrichissement environnemental physique ou exercice, améliorent la fonction hippocampal6,7,8. Études sur les rongeurs avec des tests adéquats de mémoire hippocampe peuvent révéler la perspicacité dans les médiateurs cellulaires et moléculaires de la mémoire ainsi que les effets des différentes interventions environnementales sur la fonction hippocampe.
Chez les rongeurs, plusieurs tests ont été développés pour étudier l’hippocampe-dépendantes d’apprentissage et la mémoire9,10,11. Ils peuvent être largement subdivisés en tâches qui requièrent un stimulus avec valence émotionnelle pour susciter un changement de comportement et les tâches qui s’appuient sur la préférence de rongeur pour étudier de nouveaux stimuli11. Contextuelle peur conditionnée, paires, par exemple, un stimulus désagréable (choc de pied) avec un contexte environnemental et de la mémoire de tests puis plus tard pour le cadre en mesurant la peur induite par la congélation comportement de9,11. Le labyrinthe de l’eau de Morris et son homologue sec, le labyrinthe de Barnes, utilisent renforcement externe négatif pour promouvoir l’apprentissage spatial4,11. Dans chaque cas, les rongeurs cherchent échapper à une situation aversive, être immergé dans l’eau froide ou exposées sur une plate-forme lumineuses, respectivement. Le labyrinthe de bras radial, par contre, repose sur le renforcement positif comme les animaux utilisent le comportement alimentaire naturel, couplé avec la mémoire spatiale pour récupérer les petits aliments récompenses4,11. Ces tâches sont largement utilisés et ont donné lieu à des connaissances de base sur la mémoire hippocampe. Cependant, renforts externes ou stimulus induisant la peur comme choc ajoutent une composante émotionnelle à ces comportements positifs et négatifs teste qui dans certains cas peut s’avérer indésirable. Par exemple, le hippocampe dorsal et ventral est associés à des fonctions distinctes, mémoire spatiale versus régulation émotionnelle, respectivement12. Les tests qui s’appuient sur une réaction émotionnelle à un stimulus ne peuvent pas fidèlement troubles de la mémoire spatiale si les fonctions de régulation émotionnelle hippocampe ventral sont également touchées.
Le BTA est un test simple et efficace qui fournit une mesure de la mémoire spatiale hippocampe-dépendantes13. La tâche s’appuie sur la préférence intrinsèque de l’animal pour la nouveauté sans armature externe supplémentaire et peut donc généralement éviter les complications associées à des réactions émotionnelles différentiel13. Le présent protocole pour la BTA est présenté pour les souris, mais il est également efficace chez les rats, si les dimensions de l’équipement sont convenablement réglées. Le protocole se compose d’acclimater une souris à une arène ouverte--essais sur le terrain et ensuite lui permettant d’enquêter sur les 2 objets en ce qui concerne les signaux environnementaux spatiales. La souris est alors supprimée de l’arène, et lors d’un retard (intervalle inter du procès ou ITI), l’un des objets est déplacé. Après l’ITI, la souris est réintroduite dans l’arène et a permis d’explorer librement. En général, les souris préfèrent nouveauté, et si ils souviennent de l’emplacement des objets de leur exposition initiale, ils passeront plus de temps sur l’objet déplacé. Les animaux avec des lésions de l’hippocampe ont une déficience d’apprentissage contextuel spatiale et en conséquence ne démontrent aucune préférence pour les objets dans les nouveaux lieux14,15.
L’OLT peut être utilisé indépendamment ou en combinaison avec un essai supplémentaire de mémoire qui s’appuie sur l’activité neuronale de plusieurs régions du cerveau, la tâche de reconnaissance d’objet roman (NORT). Le NORT est identique à l’OLT jusqu'à la phase de test, quand un des objets est remplacé par un nouvel objet au lieu d’être déplacé vers un nouvel emplacement. Comme c’est le cas avec le BTA, souris avec une bonne mémoire des objets préférera spontanément enquêter sur le nouvel objet. Contrairement à la mémoire de localisation de l’objet, qui s’appuie fortement sur des substrats de l’hippocampe, mémoire de reconnaissance de l’objet semble s’inspirer de diverses régions du cerveau et l’implication de l’hippocampe est instable. Nombreuses études que les lésions hippocampiques ou inactivation n’affecte pas la nouvelle objet préférence10,13,16,17, tandis que d’autres trouvent l’opposé de18,19. Cependant, c’est toujours une tâche couramment utilisée pour évaluer la fonction de mémoire générale chez les rongeurs.
Le protocole présenté ici délimite les étapes impliquées dans le lancement et l’exécution de l’OLT et NORT, deux utilisent une arène ouverte--essais sur le terrain. Équipement d’essai comportemental disponible dans le commerce peut être prohibitif, notamment pour les plus petits laboratoires. Ce protocole comprend la conception et les étapes simples pour construire des arènes internes au coût minimal et sans outils spécialisés. En outre, ce protocole détaille la zone test comportementale idéale, y compris le placement des arènes, indices contextuels et système d’enregistrement vidéo qui ouvre la voie à la mise en œuvre des protocoles BTA et NORT. Résultats représentatifs d’études réussies mais aussi imparfaites sont présentées, mettant l’accent sur l’importance de l’optimisation de tous les matériaux et les procédures pour chaque étude.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Description</td>
			<td>Option</td>
			<td>Quantité</td>
		</tr>
<tr>
<td>Partie A: feuille acrylique - blanc Opaque (0,635 cm x 40 cm x 40,64 cm)</td>
			<td>Bords routés</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td>Partie B: feuille acrylique - blanc Opaque (0,635 cm x 40 cm x 41,91 cm)</td>
			<td>Bords routés</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td>Partie C: feuille acrylique - blanc Opaque (0,635 x 41,91 cm x 41,91 cm)</td>
			<td>Bords routés</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Ciment acrylique (1 pt.)</td>
			<td>NA</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Applicateur d’Hypo calibre 16</td>
			<td>NA</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Équerre à combinaison</td>
			<td>NA</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Webcam HD</td>
			<td>NA</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Logiciel de Capture vidéo</td>
			<td>NA</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Câble USB 2.0</td>
			<td>NA</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Conduit de câble</td>
			<td>NA</td>
			<td>1</td>
		</tr>
</tbody></table>Tableau 1 : Liste détaillée des matériaux et de matériel nécessaire aux tests comportementaux.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast)</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td>1/4&#34; x 15.75&#34; x 15.75&#34; with Routed Edges</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast)</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td>1/4&#34; x 15.75&#34; x 16.5&#34; with Routed Edges</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast)</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td>1/4&#34; x 16.5&#34; x 16.5&#34; with Routed Edges</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAP Acryllic Cement (1 pt.)</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16 Gauge Hypo Applicator</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Debut Video Capture Software Pro Edition</td>
			<td>NCH Software</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stanely SAE/Metric Comb Square</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>6R171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Logitech Pro Stream Webcam C922x</td>
			<td>CDW</td>
			<td>4429927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Belkin 16&#39; USB 2.0 Active Extension Cable</td>
			<td>CDW</td>
			<td>570691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8&#39;)</td>
			<td>CDW</td>
			<td>300902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatial/Environmental Cues</td>
			<td>Variable</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objects for testing</td>
			<td>Variable</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Variable</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-sided tape</td>
			<td>Variable</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

novel object recognition and object location behavioral testing in mice on a budget

Tests comportementaux éthologiquement pertinents sont un élément essentiel de toute étude qui utilise des modèles de souris pour étudier les effets cognitifs de divers changements physiologiques ou pathologiques. La tâche de localisation de l’objet (BTA) et la tâche de reconnaissance d’objet roman (NORT) sont deux tâches comportementales efficaces couramment utilisés pour révéler la fonction et la santé relative de certaines régions du cerveau impliquées dans la mémoire. Alors que deux de ces essais exploitent la préférence inhérente de souris pour la nouveauté révéler la mémoire pour précédemment rencontrent objets, le BTA évalue principalement l’apprentissage spatial, qui s’appuie fortement sur l’activité de l’hippocampe. Le NORT, évalue, en revanche, apprentissage non spatiales de l’identité de l’objet, qui s’appuie sur plusieurs régions du cerveau. Les deux tâches requièrent une arène ouverte--essais sur le terrain, les objets ayant une valeur intrinsèque équivalente à des souris, des signaux environnementaux appropriés et matériel d’enregistrement vidéo et le logiciel. Les systèmes disponibles dans le commerce, bien que pratiques, peuvent être coûteuses. Ce manuscrit détaille une méthode simple et économique pour la construction des arènes et de mise en place l’équipement nécessaire pour effectuer l’OLT et NORT. En outre, le manuscrit décrit un protocole d’analyse efficace qui incorpore BTA et NORT et fournit les méthodes typiques d’acquisition de données et analyse, ainsi que des résultats représentatifs. La réussite de ces tests peut fournir de précieuses informations sur la fonction de mémoire de divers systèmes de modèles de souris et d’évaluer les régions neurales sous-jacentes qui prennent en charge ces fonctions.

La figure 3 fournit des exemples de résultats positifs et négatifs typiques obtenus avec les souris C57Bl/6 adultes ce protocole6mâles et femelles. Interprétation de données BTA et NORT toujours s’applique aux données agrégées d’un groupe (Voir discussion ci-dessous). Temps d’enquête pour une souris seule ne peut pas être interprétée comme mémoire ou manque de mémoire. Toutefois, les performances d’un groupe de souris (i.e., plusieurs échantillons) peut être comparé à d’autres groupes ou aux chance fixe des niveaux à l’aide de tests statistiques. Lors d’un essai d’entraînement typique, des groupes de souris ne montrent pas une préférence significative en moyenne pour les objets qu’ils sont tous deux également nouveaux et n’ont pas de n’importe quelle valeur intrinsèque positive ou négative à la souris (figures 3 a et 3 b). Si les données agrégées d’un groupe de souris montrent une préférence marquée pour un objet plutôt qu’un autre au cours de la formation, ces objets ne doivent être utilisés que parce que cette préférence/aversion inhérente va entraîner des résultats dans les essais ultérieurs. En outre, le temps de l’enquête totale de toutes les souris doivent satisfaire à une norme minimale (traditionnellement fixée à 20 secondes21) et doivent être comparés pour s’assurer qu’il n’y a aucune différence de base en enquête susceptibles d’influer sur les tests suivants de la mémoire.
Au cours de l’OLT, mémoire pour l’emplacement de l’objet se traduit par la souris, dépensant en moyenne significativement plus de 50 % du temps total d’enquête avec l’objet déplacé (Figure 3 a). Si les temps de l’enquête total des souris individuels varient considérablement, les résultats sont mieux dépeinte comme un indice de discrimination pour les objets (Figure 3 b). L’augmentation significative de l’indice moyen de la discrimination dans la Figure 3 b indique que les souris a passé plus de temps avec l’objet après que elle avait déménagé. Si mesurée par l’augmentation du pourcentage de temps ou indice de discrimination, l’augmentation dans l’enquête de l’objet après un déplacement suggère que les souris rappeler où l’objet se trouvait au cours de la formation.
Le dernier procès de ce protocole évalue la mémoire de reconnaissance de l’objet. Un exemple représentatif avec un groupe de souris montre un pourcentage moyen plus élevé du temps de l’enquête (Figure 3) ainsi que de l’indice de discrimination positive (Figure 3D) par rapport à des valeurs de contrôle fixe de 50 % et 0, respectivement. Comme avec les données de l’OLT, s’il existe une variabilité significative dans le temps total d’enquête entre souris individuels, l’indice de discrimination est probablement la meilleure méthode pour visualiser ces données. 3E figure montre un exemple d’une comparaison de 2 groupes dans le NORT et certaines des statistiques complications qui peuvent survenir lors de ces essais (Voir discussion). Alors qu’un one-sample t-test pour le groupe B présente enquête significativement supérieur à 50 %, le même critère de groupe A ne fonctionne pas. Cette constatation ne signifie pas que A et B sont différents les uns des autres. Pour déterminer les différences entre les groupes, un séparé deux échantillons test non paramétrique de Mann-Whitney en comparant des groupes B de A doit être effectué. Un test non paramétrique de Mann-Whitney deux échantillons de ces données de groupe représentatif ne montre aucune différence significative (p = 0,66) entre les deux groupes en pourcentage du temps d’enquête objet roman.
Tant le BTA et NORT sont très sensibles à la valeur intrinsèque des objets et des tests approfondis de l’équivalence de l’objet est nécessaire pour s’assurer qu’il n’y a aucun biais intrinsèques qui peuvent entraîner des résultats. Figure 3F et 3 G montrent un exemple de sélection d’objets inappropriés. Dans un essai pilote avec un échantillon de 4, les souris ont montré une tendance à dépenser moins de 50 % du temps d’enquête avec l’objet A une fois associé à l’objet B (Figure 3F). Lorsque ces objets ont été ensuite utilisés dans un NORT avec objet A comme l’objet nouveau et une taille d’échantillon supérieure de 16, souris a passé beaucoup moins de 50 % du temps d’enquête avec l’objet A (Figure 3). Cette aversion à l’objet du roman est facilement reconnaissable ici comme un défaut technique dans l’expérience et illustre bien pourquoi l’essai pilote d’objets pour préférence/aversion inhérente est essentiel.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig3.jpg"> Figure 3 : données d’essais comportements avec souris C57Bl/6 adultes de type sauvage. (A) Comparaison des temps d’investigation total pourcentage de l’objet déplacé lors de la formation du procès contre l’OLT montre une augmentation significative dans l’enquête, après que l’objet déplacé. p < 0,0001, test t apparié. (B) résultats représentatifs pour enquête objet déplacé pendant les entraînements ou essais d’OLT affichés comme un indice de discrimination de même montrent une augmentation significative dans l’enquête de l’objet après un déplacement. p < 0,0001, test t apparié. Temps d’investigation total pourcentage (C) de l’objet nouveau dans le NORT montre une préférence marquée pour enquêter sur l’objet de nouveaux. ** p = 0,0024, one-sample t-test vs. 50 %. (D) les résultats représentatifs pour enquête objet roman dans le NORT apparaît comme un indice de discrimination de même montrer préférence pour enquêter sur l’objet de nouveaux. ** p = 0,0024, one-sample t-test vs 0. (E) des résultats représentatifs d’une analyse NORT impliquant deux différents groupes de souris. Groupe B diffère sensiblement de 50 % par one-sample t-test (** p = 0,0024), mais le groupe A ne fonctionne pas (p = 0.5837). Dans une analyse distincte, afin de comparer les groupes, un test de Mann-Whitney deux échantillons est utilisé en raison de la taille des groupes irréguliers et aucune différence significative dans l’enquête est observée (p = 0,66, ns). Pourcentage de temps (F) avec un objet au cours des essais de validation dans un petit échantillon montre une tendance à l’aversion pour l’objet. p = 0.2159, one-sample t-test. (G) avec une taille d’échantillon supérieure et l’objet de (F), utilisé comme un objet nouveau dans un NORT, une aversion importante à l’objet est trouvée, même si c’est l’objet du roman. * p = 0.0270, one-sample t-test. Il s’agit d’un exemple de défaillance technique de sélection d’objet. Les données sont présentées comme moyenne ± SEM. données de panneaux C-E sont adaptées d’une précédente publication6. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig3large.jpg" target="_blank">S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.</a>

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Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget

Ici, nous fournissons un protocole qui comprend des instructions détaillées pour la mise en place économique d’emplacement de l’objet murin et objet nouvelle reconnaissance des tests comportementaux, y compris la conception, coût et construction de l’équipement requis ainsi que exécution de tests comportementaux, de collecte et d’analyse.

Reconnaissance d’objets nouveaux et emplacement de l’objet comportementale essais chez la souris sur un Budget

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various ...

Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés sur la régulation de la mémoire. Par exemple, nous déterminons le rôle de protéines spécifiques dans la mémoire en testant les souris transgéniques knockout dans ces tâches. Le principal avantage de cette technique est qu’il s’agit d’un moyen rapide et rentable de procéder à des tests de mémoire dans n’importe quel laboratoire.La démonstration de la construction de l’aréna est essentielle, car le soudage solvant ne donnera de bons résultats que s’il est effectué avec soin. Commencez par acquérir cinq feuilles de ciment acrylique, acrylique et un applicateur hypo de calibre 16. Retirer le revêtement de papier protecteur des feuilles acryliques.Ensuite, séchez tous les matériaux pour confirmer que les tailles sont correctes. Ensuite, assemblez et chargez la seringue avec du ciment acrylique. Alignez le long bord d’un mur extérieur avec le bord supérieur de la base et assurez-vous qu’ils sont perpendiculaires les uns aux autres à l’aide d’une combinaison ou d’un carré machiniste.Ensuite, utilisez la seringue pour appliquer une petite perle de ciment stable directement sur le coin des deux pièces jointes. Maintenez les deux pièces en place pendant cinq minutes jusqu’à ce qu’elles soient initialement réglées. Répétez les mêmes étapes pour fixer l’autre mur extérieur à la base.Ensuite, fixez deux murs intérieurs, un à la fois, la base avec du ciment acrylique. Enfin, utilisez la seringue pour appliquer une petite perle de ciment stable directement sur le coin en cours de formation par le mur extérieur et le mur intérieur. Commencez la séance d’accoutumation en divisant les souris en groupes de quatre, et abritez-les dans des cages individuelles propres.Ensuite, amenez un groupe de souris dans la salle d’essai et laissez-les s’acclimater pendant au moins 30 minutes. Après l’acclimation, commencez à enregistrer la vidéo. Placez chaque souris dans l’arène face aux murs du coin de libération, et laissez les souris explorer les arènes librement pendant six minutes.Ensuite, arrêtez d’enregistrer la vidéo et retournez les souris dans leurs cages de détention propres pendant l’intervalle inter-essais. Nettoyer tous les arénas avec des installations animales recommandées méthodes de nettoyage, comme essuyer avec 70% d’éthanol pour minimiser les indices olfactifs. Enfin, après avoir terminé un total de trois séances d’accoutumabilité, retourner toutes les souris dans leurs cages d’origine.Après 24 heures, amener le même groupe de souris dans la salle d’essai, et leur permettre de s’acclimater à la salle d’essai pendant au moins 30 minutes, comme cela a été fait avant les séances d’accoutumation de la veille. Effectuer l’essai d’entraînement à l’aide de deux objets placés dans l’arène. Apposez des objets avec du ruban adhésif à double face à six par six centimètres de deux coins non libérés, de sorte qu’ils sont contrebalancés dans l’arène.Permettre aux souris d’étudier librement l’arène et les objets pendant 10 minutes. Ensuite, arrêtez l’enregistrement vidéo. Remettre les souris dans leurs cages de détention propres pendant 20 minutes et nettoyer les zones avec de l’éthanol.Ensuite, pour effectuer la tâche de localisation de l’objet OLT, déplacez l’un des objets utilisés dans l’essai de formation vers un nouveau coin non-libération, et fixez l’objet à six centimètres de chaque mur de ce coin avec du ruban adhésif à double face. Répétez le même enregistrement vidéo des souris dans la région pendant 10 minutes, comme décrit précédemment. Enfin, pour effectuer la nouvelle tâche de reconnaissance d’objets NORT, remplacez l’objet qui n’a pas été déplacé pendant l’OLT par un objet nouveau, et fixez l’objet nouveau à six centimètres des deux murs du coin par du ruban adhésif à double face.Répétez le même enregistrement vidéo des souris dans la région pendant 10 minutes, comme décrit précédemment. Pendant l’OLT, la mémoire pour l’emplacement de l’objet est reflétée par un groupe de souris passant, en moyenne, beaucoup plus de temps avec un objet après qu’il a bougé. Cela peut également être représenté comme une augmentation de l’indice de discrimination.Dans le NORT, la mémoire pour l’emplacement de l’objet est reflétée par un groupe de souris passant, en moyenne, beaucoup plus de 50% du temps d’investigation avec le nouvel objet ou montrant un indice de discrimination significativement supérieur à zéro. La cueillette d’objets pour lesquels les souris n’ont pas de préférence inhérente est essentielle. Par exemple, lors d’un essai pilote d’une taille d’échantillon de quatre, les souris ont montré une tendance à passer moins de 50 % du temps d’investigation avec l’objet A lorsqu’elles sont jumelées à l’objet B.Lorsque l’objet A a ensuite été utilisé comme objet nouveau dans un NORT, avec une taille d’échantillon plus grande de 16, les souris ont passé beaucoup moins de 50 % du temps d’enquête avec l’objet A.Ces données suggèrent une aversion inhérente à l’objet A.During this procedure. , il est important de se rappeler de bien nettoyer tous les objets et arènes entre l’utilisation.Dans cette méthode, l’investigation des objets peut être notée manuellement par les chercheurs ou à l’aide de logiciels commerciaux. Les logiciels ont des coûts initiaux plus élevés, mais, une fois calibrés, peuvent faire gagner du temps et des ressources financières à long terme.

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