Name: novel object recognition and object location behavioral testing in mice on a budget
Uploaded: 2018-11-20T15:00:00
Duration: 5 min 57 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget at JoVE.com

עבודה זו מומן על ידי R00 NS089938 מ- NIH, זרע מימון של פגיעה מוחית כרונית וערכות גילוי ב אוניברסיטת אוהיו EDK.

להלן כללי התנהגות אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) ב אוניברסיטת מדינת אוהיו (אוסו).
1. בניית ארנאס
<ol><li>סדר את החומרים המפורטים בטבלה1: חמישה גיליונות של אקריליק, צמנט אקרילי, 16 G היפו המוליך.</li>
	<li>ללבוש ציוד בטיחות המתאים על פי הוראות היצרן, אשר עשויים לכלול העין, עור, סוגים אחרים של הגנה.</li>
	<li>הסר את ציפוי מגן הנייר גליונות אקרילי.</li>
	<li>יבש מתאים כל החומרים כדי לוודא כי כל הגדלים הנכון (איור 1 א').</li>
	<li>להרכיב וטען את המזרק עם צמנט אקרילי.</li>
	<li>ליישר האורכי של הקיר החיצוני (חלק ב') עם קצה העליון של הבסיס (חלק ג) ולהבטיח כי הם מאונכים אחד לשני באמצעות ריבוע השילוב או מכונאי.</li>
	<li>בעזרת המזרק, להחיל חרוז קטן ויציב של מלט ישירות אל הפינה של שני החלקים להיות חברו.</li>
	<li>להחזיק שתי חתיכות (חלקים B ו- C) במקום עד שהם מוגדרים בתחילה (כ- 5 דקות). הערה: בדרך כלל, הם יהיו 80% מוקשח בתוך 24 שעות, אך מכלול יכול להמשיך אחרי 5 דקות.</li>
	<li>חזור על שלבים 1.5-1.7 עם אחרים הקיר החיצוני (חלק ב') לבסיס אותו.</li>
	<li>הקירות הפנימיים שני (חלק א'), אחד בכל פעם, לצרף הבסיס באמצעות צעדים 1.5-1.7.</li>
	<li>בנוסף, השתמש במזרק כדי להחיל קטן, חרוז יציב של מלט ישירות אל הפינה עכשיו להיות שהוקמה על ידי הקיר החיצוני (חלק ב') הבתוך קיר (חלק א).</li>
	<li>מחזיקים את החתיכות במקומו במשך 5 דקות.</li>
	<li>לאחר 24-48 שעות, להמשיך הגדרת סביבת הבדיקות התנהגותית.</li>
</ol>2. הגדרת סביבת בדיקה התנהגותית וציוד
<ol><li>המקום רמזים סביבתיים (כמתואר בסעיף הדיון) מול אחד את השני, מול ארנאס באזור הבדיקה (איור 1B).</li>
	<li>לארגן ארנאס בדיקות ארבע באופן 2 על 2 או על הריצפה או חסון השולחן המתאים המרחקים בין המקלות ואת המצלמה כדי למקסם את הקלט החזותי העכברים (איור 1B).</li>
	<li>ודא לקו הראייה באמצעות מקל מד הרב-שפתי מ בכל קומה ארנה מעל החומה לכיוון הותאם כדי לאשר את המרחקים האלה בין ארנאס הותאם מתאימים.</li>
	<li>לקבוע את האורך האופטימלי אופטי המאפשר תיעוד וידיאו של ארנס כל 4 על-ידי התאמת הגובה של המצלמה או גובה השולחן. (איור 1B).</li>
	<li>לחבר את המצלמה בכבל מאריך USB.</li>
	<li>באמצעות כבל העולם, עובר, עובר על פני התקרה וללכוד את קיר למחשב של הפעלת וידאו תוכנה.</li>
	<li>להסתיר את המחשב מאחורי וילון שתפריד העכברים באזור הבדיקה החוקר (איור 1C).</li>
	<li>להרכיב כל ארבעת לפחות 3 חפצים שונים, המהווים כ- 2-5 ס מ אורך ורוחב עד 10 ס מ גובה לשימוש עבור בדיקות (איור 1D).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig1.jpg"> איור 1: הכנה בדיקה התנהגותית- (א) פתח שדה-בדיקות ארנה הרכבה עם חלק א התואם החומה הפנימית, חלק ב' כמו הקיר החיצוני של חלק ג כבסיס. הזירה המוגמר יהיה הקירות החיצוניים שני (ב' חלקים) הפועלות לכל השוליים של הבסיס שני הפנימי קירות (חלקים א) שמתאימים בין קירותיו החיצוניים בקצוות הסמוך של הבסיס (חלק ג). כל הקירות ינוח על גבי הבסיס. (B) סידור נציג של ארנס על שולחן גבוה מ 0.62, רמזים סביבתיים 60 x 90 ס מ, אורות, מצלמה עבור אזור בדיקה המאפשרת לכידתו של כל ארבע זירות בו זמנית. (ג) A וילון מסתיר הנסיין ומערכת המחשב של עכברים במהלך ניסויים. תקורה האורות דלוקים למטרות של לוקח את התמונה הזאת, אבל במהלך הבדיקה, רק מנורות הרצפה דולקים. בנוסף, לאחד רמזים סביבתיים הוסר עבור התמונה הזאת של אזור הבדיקה, אך במהלך הבדיקה, יש רמז הרביעית מול ארנאס, מול הסימן הכל שחור מאחורי השולחן. אובייקט נציג (D) א (ו סרגל עבור קנה מידה) זה מתאים לבדיקה OLT או צפונית עם עכברים <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<ol start="9"><li>אמת אובייקטים אלה.<ol>
<li>להשיג מינימום של 8 עכברים פראי-סוג של הנציג מין זן, קבוצת גיל של העכברים ניסיוני שישמש (למשל, 6 עד 9 בת שבוע הנקביים והזכריים C57Bl/6 עכברים).</li>
		<li>להתמודד עם עכברים כל מדי יום עבור 1 דקות במשך 3-5 ימים לפני הבדיקה.</li>
		<li>חלק עכברים לקבוצות של 4, אם הם לא כבר ביחידים, להעביר אותם לתוך אדם נקי מחזיק כלובים.</li>
		<li>להכניס אותם מחדר הבדיקות ולאפשר להם להסתגלות במשך לפחות 30 דקות. הערה: נוכחות של הנסיין בחדר למשך 30 דקות האלה תפחית מתח על העכברים במהלך הפעילות, במיוחד אם הנסיין הוא זכר20.</li>
		<li>לאחר להתאקלמות נעשית הנסיין ומוכן להתחיל, התחל הקלטת הוידאו.</li>
		<li>הנח את העכבר כל מול החומות של פינה אחת של הזירה (נקרא לפינה שחרור) (איור 2 א).</li>
		<li>לאפשר העכברים לחקור את ארנס בחופשיות למשך 10 דקות.</li>
		<li>לעצור את הקלטת הוידאו.</li>
		<li>להחזיר עכברים לכלובים מעצר נקי עבור משך זמן של 20 דקות.</li>
		<li>נקי כל ארנס עם מתקן חיות מומלץ ניקוי שיטות, כמו ניגוב עם 70% אתנול כדי למזער את חוש הריח רמזים לפני השימוש הבא.</li>
		<li>באמצעות סרט הדבקה דו-צדדי, מוספית 2 אובייקטים שונים ליד 2 פינות-שחרור כזה כי האובייקטים הם ולאזנה ארנה ו ס 6 x 62 מהכותל כל מהפינה הזאת (איור 2B).</li>
		<li>. תתחיל להקליט וידאו</li>
		<li>הנח את העכבר כל אל מול הקירות בפינה שחרור.</li>
		<li>לאפשר עכברים לחקור את ארנה והאובייקטים בחופשיות למשך 10 דקות.</li>
		<li>לעצור את הקלטת הוידאו.</li>
		<li>המקום עכברים בחזרה בכלובים שלהם מחזיק נקי בשביל משך זמן של 20 דקות.</li>
		<li>נקי כל זירות ואובייקטים עם מתקן חיות מומלץ ניקוי שיטות כמו ניגוב עם 70% אתנול כדי למזער את חוש הריח רמזים.</li>
		<li>חזור על הכשרה ניסויים עם 2 אובייקטים חדשים מוצמדת באותם מיקומים עד כל האובייקטים (לפחות שלושה חפצים שונים אם ניצוח OLT והן צפונית) נבדקו עם כל עכבר.</li>
		<li>לא לכלול אובייקטים לאפשר עכברים לשבת על גבי האובייקט.</li>
		<li>לנתח זמן החקירה של כל עכבר עם כל אובייקט לפי שלב 4.</li>
		<li>לא לכלול אובייקטים בעלי ערך מהותי חיובית או שלילית.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. קיום המבחן ההתנהגותי
<ol><li>שבוע לפני בדיקות: להכרות ליחידים ביצוע הבדיקות התנהגותית<ol>
<li>להתמודד עם 6 מבוגרים כדי 9 בת שבוע הנקביים והזכריים C57Bl/6 עכברים מדי יום עבור 1 דקות במשך 3-5 ימים לפני הבדיקה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>יום 1: habituation הפעלות<ol>
<li>חלק עכברים לקבוצות של 4, אם הם לא כבר ביחידים, להעביר אותם לתוך אדם נקי מחזיק כלובים.</li>
		<li>. תביא אותם מחדר הבדיקות ולאפשר להם להתאקלם מחדר הבדיקות במשך לפחות 30 דקות. הערה: נוכחות של הנסיין בחדר למשך 30 דקות האלה יפחית את הלחץ על העכברים במהלך הפעילות, במיוחד אם הנסיין הוא זכר20.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לאחר להתאקלמות נעשית הנסיין ומוכן להתחיל, התחל הקלטת הוידאו.</li>
	<li>הנח את העכבר כל בזירה (עכבר אחד לאדם ארנה) אל מול הקירות של הפינה שחרור (איור 2 א).</li>
	<li>לאפשר העכברים לחקור את ארנס בחופשיות במשך 6 דקות.</li>
	<li>לעצור את הקלטת הוידאו.</li>
	<li>להחזיר עכברים לכלובים מעצר נקי במהלך מרווח בין משפט (האם).</li>
	<li>נקי כל ארנס עם מתקן חיות מומלץ ניקוי שיטות כמו ניגוב עם 70% אתנול כדי למזער את חוש הריח רמזים.</li>
	<li>חזור על שלבים 3.3 – 3.9 שני פעמים נוספות עבור סכום כולל של 3 מפגשים habituation עבור כל עכבר.</li>
	<li>לחזור עכברים כל הכלובים הביתה.</li>
	<li>נקי כל ארנס עם מתקן חיות מומלץ ניקוי שיטות כמו ניגוב עם 70% אתנול כדי למזער את חוש הריח רמזים לפני השימוש למחרת.</li>
	<li>יום 2: אימון ניסיון, OLT, צפונית הערה: צפונית הוא מבחן אופציונלי.<ol>
<li>לאחר 24 שעות, להביא לאותה הקבוצה של עכברים בתוך מחדר הבדיקות, לאפשר להם להתאקלם מחדר הבדיקות במשך לפחות 30 דקות כפי ההפעלות habituation ביום הקודם.</li>
		<li>לנהל משפט הדרכה באמצעות אובייקטים 2 הממוקם בזירה (איור 2B).<ol>
<li>באמצעות סרט הדבקה דו-צדדי, מוספית אובייקטים 6 x 6 ס מ2 מן 2 פינות-שחרור כזה כי הם נמצאים ולאזנה בזירה.</li>
			<li>. תתחיל להקליט וידאו</li>
			<li>הנח את העכבר כל אל מול הקירות של הפינה שחרור כפי שנעשה במהלך המפגשים habituation.</li>
			<li>לאפשר עכברים לחקור את ארנה והאובייקטים בחופשיות למשך 10 דקות.</li>
			<li>לעצור את הקלטת הוידאו.</li>
			<li>המקום עכברים בחזרה בכלובים שלהם מחזיק נקי בשביל זה של 20 דקות.</li>
			<li>נקי כל זירות ואובייקטים עם מתקן חיות מומלץ ניקוי שיטות כמו ניגוב עם 70% אתנול כדי למזער את חוש הריח רמזים.</li>
		</ol>
</li>
		<li>לבצע את OLT.<ol>
<li>להזיז את אחד מהאובייקטים המשמשים ההכשרה למשפט על פינת-שחרור חדש, ולהצמיד את האובייקט 6 ס מ כל אחד מהקירות מהפינה הזאת עם סרט הדבקה דו-צדדי (איור 2C). הערה: האובייקט אחרים צריכים להישאר איפה זה היה במהלך האימון למשפט.</li>
			<li>. תתחיל להקליט וידאו</li>
			<li>הנח את העכבר כל אל מול הקירות בפינה שחרור.</li>
			<li>לאפשר עכברים לחקור את האובייקטים עבור 10 דקות.</li>
			<li>לעצור את הקלטת הוידאו.</li>
			<li>המקום עכברים בחזרה בכלובים שלהם מחזיק נקי בשביל זה של 20 דקות.</li>
			<li>נקי כל זירות ואובייקטים עם מתקן חיות מומלץ ניקוי שיטות כמו ניגוב עם 70% אתנול כדי למזער את חוש הריח רמזים.</li>
		</ol>
</li>
		<li>לבצע את צפונית.<ol>
<li>להחליף את האובייקט לא הועבר במהלך OLT עם חפץ הרומן, ולהצמיד את האובייקט הרומן 6 ס מ בין שתי החומות של הפינה עם סרט הדבקה דו-צדדי (איור דו-ממדי).</li>
			<li>. תתחיל להקליט וידאו</li>
			<li>הנח את העכבר כל אל מול הקירות בפינה שחרור.</li>
			<li>לאפשר עכברים לחקור את האובייקטים עבור 10 דקות.</li>
			<li>לעצור את הקלטת הוידאו.</li>
			<li>המקום עכברים בחזרה לכלובים שלהם הביתה.</li>
			<li>נקי כל זירות ואובייקטים עם מתקן חיות מומלץ ניקוי שיטות כמו ניגוב עם 70% אתנול כדי למזער את חוש הריח רמזים לפני השימוש הבא.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig2.jpg"> איור 2: ארנה תצורה עבור ניסויים. (א) בשדה פתוח בדיקות ארנה ללא אובייקטים להפעלה habituation. החץ השחור מצביע על פינה שחרור. בפינה הזאת צריכים להיות באותו מיקום יחסית כל בזירה ולהיות עקבית עבור כל עכבר נבדק ועבור כל הנסיונות. (B) למשפט הכשרה, שני עצמים שונים מאובטחים לשדה פתוח ב 6 x 6 ס מן הקירות בהתאמה. (ג) עבור OLT, אובייקט אחד מועבר למיקום חדש, גם 6 x 6 ס מ מן הקירות לא הפינה שחרור. (ד) עבור צפונית, האובייקט שעליו היה נייח ב OLT מוחלף אובייקט הרומן בזמן האובייקט ועבר OLT היא עכשיו אובייקט מוכר. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
4. ניתוח נתוני בדיקה התנהגותית
הערה: ניתוח של וידאו אידיאלי להסתיים ב פחות שני ניסויים עצמאי, עיוור.
<ol><li>פתח את קובץ הווידאו.</li>
	<li>החל עיגול שקוף המספק שוליים של 2 ס מ סביב כל אובייקט על המסך כדי לקבוע חקירה פעילה. שימוש בתמונת קובץ וידאו עם סרגל להציב זירה לכיול רשת זו.</li>
	<li>העכבר בהתנהגות ולהקליט את הזמנים שהעכבר הוא פעיל בחקירת האובייקט, אשר מורכב של האף שלה מכוונים את האובייקט במרחק מרבי של 2 ס מ מאותו האובייקט.<ol>
<li>שיא חותמת הזמן העכבר מתחיל לחקור אובייקט ואת חותמת הזמן כשהוא עוצר חוקרים אותו אובייקט.</li>
		<li>חזור על הפעולה עבור שני אובייקטים בזירה עבור משך הזמן של המשפט.</li>
		<li>חישוב הזמן המצטבר שהעכבר חקרה כל אובייקט על-ידי חיסור שעת ההתחלה מרגע העצירה עבור כל מופע של אובייקט החקירה, והוספת כל הערכים האלה.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לחשב את אחוז הזמן הכולל החקירה או מדד אפליה עם הנוסחאות הבאות:<ol>
<li>לחשב את אחוז זמן החקירה סה כ = <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/58593/58593eq1.jpg"> הערה: ערך מעל 50% מציין חקירה גדולה יותר של המיקום או האובייקט.</li>
		<li>חישוב מדד אפליה = <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/58593/58593eq2.jpg"> הערה: ערך חיובי מציין עוד פעם חוקרים את האובייקט הרומן. אינדקס אפליה של אפס מציין זמן שווה בילה עם שני העצמים.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לייצג בצורה גרפית תוצאות וניתוחים סטטיסטיים מלאה באמצעות מבחן t או ANOVA בהתאם למספר קבוצות נערכת השוואה.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Krakauer, J. W., Ghazanfar, A. A., Gomez-Marin, A., Maclver, M. A., Poeppel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroscience+Needs+Behavior:+Correcting+a+Reductionist+Bias.">Neuroscience Needs Behavior: Correcting a Reductionist Bias.</a> Neuron. 93 (3), 480-490 (2017).</li><li>Lange, F., Seer, C., Kopp, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cognitive+flexibility+in+neurological+disorders:+Cognitive+components+and+event-related+potentials.">Cognitive flexibility in neurological disorders: Cognitive components and event-related potentials.</a> Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 83, 496-507 (2017).</li><li>Barnett, J. H., Blackwell, A. D., Sahakian, B. J., Robbins, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Paired+Associates+Learning+(PAL)+Test:+30+Years+of+CANTAB+Translational+Neuroscience+from+Laboratory+to+Bedside+in+Dementia+Research.">The Paired Associates Learning (PAL) Test: 30 Years of CANTAB Translational Neuroscience from Laboratory to Bedside in Dementia Research.</a> Current Topics in Behavioral Neuroscience. 28, 449-474 (2016).</li><li>Eichenbaum, H., Otto, T., Cohen, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hippocampus-what+does+it+do?.">The hippocampus-what does it do?.</a> Behavioral and Neural Biology. 57 (1), 2-36 (1992).</li><li>Bartsch, T., Wulff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hippocampus+in+aging+and+disease:+From+plasticity+to+vulnerability.">The hippocampus in aging and disease: From plasticity to vulnerability.</a> Neuroscience. 19 (309), 1-16 (2015).</li><li>Smith, B. M., Yao, X., Chen, K. S., Kirby, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Larger+Social+Network+Enhances+Novel+Object+Location+Memory+and+Reduces+Hippocampal+Microgliosis+in+Aged+Mice.">A Larger Social Network Enhances Novel Object Location Memory and Reduces Hippocampal Microgliosis in Aged Mice.</a> Frontiers in Aging Neuroscience. 10 (142), 1-16 (2018).</li><li>Chieffi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exercise+Influence+on+Hippocampal+Function:+Possible+Involvement+of+Orexin-A.">Exercise Influence on Hippocampal Function: Possible Involvement of Orexin-A.</a> Frontiers in Physiology. 14 (8), 85 (2017).</li><li>Garth, A., Roeder, I., Kempermann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mice+in+an+enriched+environment+learn+more+flexibly+because+of+adult+hippocampal+neurogenesis.">Mice in an enriched environment learn more flexibly because of adult hippocampal neurogenesis.</a> Hippocampus. 26 (2), 261-271 (2016).</li><li>Brown, R. E., Stanford, L., Schellinck, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+standardized+behavioral+tests+for+knockout+and+mutant+mice.">Developing standardized behavioral tests for knockout and mutant mice.</a> Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (3), 163-174 (2000).</li><li>Barker, G. R., Warburton, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+is+the+hippocampus+involved+in+recognition+memory?.">When is the hippocampus involved in recognition memory?.</a> Journal of Neuroscience. 31 (29), 10721-10731 (2011).</li><li>Savage, S., Ma, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+behavior+testing:+memory.">Animal behavior testing: memory.</a> British Journal of Anaesthesia. 113 (1), 6-9 (2015).</li><li>Fanselow, M. S., Dong, H. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Are+the+dorsal+and+ventral+hippocampus+functionally+distinct+structures?.">Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures?.</a> Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).</li><li>Vogel-Ciernia, A., Wood, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Examining+object+location+and+object+recognition+memory+in+mice.">Examining object location and object recognition memory in mice.</a> Current Protocols in Neuroscience. 69, 1-17 (2014).</li><li>Ammassari-Teule, M., Passino, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dorsal+hippocampus+is+selectively+involved+in+the+processing+of+spatial+information+even+in+mice+with+a+genetic+hippocampal+dysfunction.">The dorsal hippocampus is selectively involved in the processing of spatial information even in mice with a genetic hippocampal dysfunction.</a> Psychobiology. 25 (2), 118-125 (1997).</li><li>Le Merrer, J., Rezai, X., Scherrer, G., Becker, J. A., Kieffer, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+hippocampus-dependent+and+facilitated+striatum-dependent+behaviors+in+mice+lacking+the+delta+opioid+receptor.">Impaired hippocampus-dependent and facilitated striatum-dependent behaviors in mice lacking the delta opioid receptor.</a> Neuropsychopharmacology. 38 (6), 1050-1059 (2013).</li><li>Hattiangady, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+location+and+object+recognition+memory+impairments,+motivation+deficits+and+depression+in+a+model+of+Gulf+War+illness.">Object location and object recognition memory impairments, motivation deficits and depression in a model of Gulf War illness.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 78 (2014).</li><li>Oliveira, A. M., Hawk, J. D., Abel, T., Havekes, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-training+reversible+inactivation+of+the+hippocampus+enhances+novel+object+recognition+memory.">Post-training reversible inactivation of the hippocampus enhances novel object recognition memory.</a> Learning and Memory. 17 (3), 155-160 (2010).</li><li>Cohen, S. J., Stackman, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+rodent+hippocampal+involvement+in+the+novel+object+recognition+task.">Assessing rodent hippocampal involvement in the novel object recognition task.</a> Behavioral Brain Research. 285, 105-117 (2014).</li><li>Cohen, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Rodent+Hippocampus+Is+Essential+for+Nonspatial+Object+Memory.">The Rodent Hippocampus Is Essential for Nonspatial Object Memory.</a> Current Biology. 23 (17), 1685-1690 (2013).</li><li>Sorge, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory+exposure+to+males,+including+men,+causes+stress+and+related+analgesia+in+rodents.">Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents.</a> Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).</li><li>Ennaceur, A., Delacour, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+one-trial+test+for+neurobiological+studies+of+memory+in+rats.+1:+Behavioral+data.">A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data.</a> Behavioral Brain Research. 31 (1), 47-49 (1988).</li><li>Leger, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Object+recognition+test+in+mice.">Object recognition test in mice.</a> Nature Protocols. 8 (12), 2531-2537 (2013).</li><li>Wolf, A., Bauer, B., Abner, E. L., Ashkenazy-Frolinger, T., Hartz, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Comprehensive+Behavioral+Test+Battery+to+Assess+Learning+and+Memory+in+129S6/Tg2576+Mice.">A Comprehensive Behavioral Test Battery to Assess Learning and Memory in 129S6/Tg2576 Mice.</a> Public Library of Science ONE. 11 (1), e0147733 (2016).</li><li>Ennaceur, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=One-trial+object+recognition+in+rats+and+mice:+methodological+and+theoretical+issues.">One-trial object recognition in rats and mice: methodological and theoretical issues.</a> Behavioural Brain Research. 215, 244-254 (2010).</li><li>Lueptow, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Object+Recognition+Test+for+the+Investigation+of+Learning+and+Memory+in+Mice.">Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice.</a> Journal of Visualized Experiments. (126), e55718 (2017).</li><li>Wasserstein, R. L., Lazar, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ASA's+Statement+on+p-Values:+Context,+Process,+and+Purpose.">The ASA's Statement on p-Values: Context, Process, and Purpose.</a> The American Statistician. 70 (2), 129-133 (2016).</li><li>Ranstam, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+the+P-value+culture+is+bad+and+confidence+intervals+a+better+alternative.">Why the P-value culture is bad and confidence intervals a better alternative.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (8), 805-808 (2012).</li></ol>

המחברים אין לחשוף.

מבחנים קוגניטיביים יעילים לבודד ולהעריך את הפונקציה עצבית של אזורים ספציפיים במוח על ידי בחינת התנהגות בסביבה מבוקרת1. בבני אדם, משימות ספציפיות עוצבו כדי להעריך את הביצועים של אזורים במוח יישוב, כגון כרטיס ויסקונסין מיון פעילות הקדם חזיתית הפונקציה או השותפים לזווג למידה במבחן (Cambridge שתלמידים הבדיקה האוטומטית סוללה CANTAB) עבור הפונקציה בהיפוקמפוס2,3. בדיקות אלו נועדו ללמוד את הפונקציות של אזורים ספציפיים במוח אצל בני אדם על-ידי הערכת התנהגויות הנובעות הפעילות העצבית של אזורים אלה. היעד הסופי של המחקר הביו-רפואי ביותר הוא השיפור של בריאות האדם; עם זאת, מחקרים רבים של תפקוד המוח בריאות או מחלה אין אפשרות מבחינה מוסרית לבצע עם משתתפים אנושי. ללימודים שלא יכולים להשתמש המשתתפים אנושי, מכרסמים קטנים כגון עכברים לעיתים קרובות מודל הבחירה. באמצעות העכבר מודלים מאפשר שליטה ישירה מניפולציות ניסיוני כולל שינוי של ביטוי גנים, אינדוקציה של פציעה או אפילו מודולציה של פעילות המעגל באמצעות טכניקות optogenetic. בדיקה התנהגותית של עכברים, בדומה לניסויים בבני-אדם, שמטרתו להעריך את השפעת משתני הניסוי על תפקוד המוח על ידי מדידת התנהגויות המסתמכים על אזורים ספציפיים.
ההיפוקמפוס הוא מבנה חיוני עבור יצירת זיכרון מכרסמים ובני4. ליתר דיוק, ההיפוקמפוס ממלאת תפקיד קריטי זיכרון הצהרתי הכוללים ייצוגים יחסיים, אך זיכרון פרוצדורלי לא הנשענת על המרכזים המוטוריים של המוח4. פונקצית זיכרון hippocampal היה מוקד המחקר על פני שדות רבים של מדעי המוח כי הוא רגיש להפליא ההפרעות. לפליטת שלילית החל מתח ממושך והתיישנות התקפים, שבץ משויכות נזק בהיפוקמפוס5. לעומת זאת, התערבויות חיוביות, כגון אינטראקציה חברתית, העשרת הסביבה הפיזית או פעילות גופנית, לשפר תפקוד בהיפוקמפוס-6,-7,-8. מחקרים מכרסמים עם הבדיקות הנכונות של זיכרון hippocampal יכול לחשוף תובנות המתווכים תאית ומולקולרית של זיכרון, כמו גם את ההשפעות של התערבויות סביבתיים שונים על הפונקציה בהיפוקמפוס.
בחולדות, פותחו מספר בדיקות כדי ללמוד את ההיפוקמפוס תלויי למידה ואת הזיכרון9,10,11. הם באופן כללי נחלקים משימות הדורשות גירוי עם הרגשי הערכי להפיק שינוי בהתנהגות, כמו גם משימות לצייר על ההעדפה מכרסמים לחקור גירויים חדשניים11. לדוגמה, פחד הקשרי מיזוג, זוגות של גירוי לא נעים (רגל הלם) עם ההקשר הסביבתי, ואחר כך בדיקות זיכרון של הקשר על ידי מדידת הנוצרות על-ידי פחד מקפיא התנהגות9,11. מבוך המים מוריס והקובץ המקביל יבש, המבוך בארנס, השתמש חיזוק חיצוני שלילי כדי לקדם למידה מרחבית4,11. בכל מקרה, מכרסמים מבקשים לברוח מן מצב aversive, להיות שקוע במים קרים או חשוף על פלטפורמה ומוארים, בהתאמה. המבוך זרוע רדיאלית, לעומת זאת, מסתמך על חיזוקים חיוביים, כמו חיות להשתמש בהתנהגות הרעיה טבעי בשילוב עם זיכרון מרחבי כדי לאחזר מזון קטנות תגמולים4,11. משימות אלה נמצאים בשימוש נרחב, הניבו למעין ידיעה זיכרון hippocampal. עם זאת, שליליים או חיוביים תגבורת חיצוני או גרימת פחד גירויים כמו הלם להוסיף את המרכיב הרגשי כדי התנהגות אלה בדיקות אשר במקרים מסוימים עשויים להיות לא רצוי. לדוגמה, hippocampi הגבי ו הגחון קשורים עם פונקציות שונות, זיכרון מרחבי לעומת ויסות רגשי, בהתאמה12. בדיקות המסתמכים על תגובה רגשית לגירויים לא ישקפו במדויק זיכרון מרחבי לקוי אם פונקציות הגחון ויסות רגשי בהיפוקמפוס מושפעים גם הם.
OLT היא בדיקה פשוטה ויעילה מספק מידה של זיכרון מרחבית ההיפוקמפוס תלויי13. הפעילות מסתמך על העדפה פנימיים של חיות חידוש ללא חיזוק חיצוני נוסף, יכול ולכן בדרך כלל להימנע מסיבוכים הקשורים עם תגובות רגשיות דיפרנציאלית13. בפרוטוקול הנוכחי עבור OLT מוצג עבור עכברים, אך היא גם יעילה בחולדות אם הממדים של הציוד גדלים בהתאם. הפרוטוקול מורכב הסתגלות עכבר כדי זירה פתוחה-שדה-בדיקות ואז מאפשר לחקור אובייקטים 2 ביחס מרחבי רמזים סביבתיים. העכבר ואז הוסר מן הזירה, במהלך השהיה (המרווח הבין-משפט או האם), אחד מהאובייקטים מועבר. לאחר, תחתום העכבר מופיעה שוב אל הזירה, מותר לחקור בחופשיות. באופן כללי, עכברים מעדיפים החדשנות, אם הם זוכרים את מיקום האובייקטים של החשיפה הראשונית שלהם, הם אבלה יותר זמן לחקור את האובייקט שהועבר. בעלי חיים עם נגעים בהיפוקמפוס בעלי ליקויי למידה מרחבית הקשרית ומדגימים כתוצאה מכך אין העדפה לעצמים המיקום14,15.
OLT ניתן להשתמש בנפרד או במשולב עם מבחן נוסף של זיכרון מצייר על פעילות עצבית מרובות אזורים במוח, הפעילות זיהוי האובייקט הרומן (צפונית). צפונית הוא זהה OLT עד שלב הבדיקה, כאשר אחד מהאובייקטים מוחלף על-ידי אובייקט הרומן במקום מועברים למיקום חדש. כמו במקרה OLT, עכברים עם זיכרון טוב של האובייקטים באופן ספונטני יעדיפו חוקרים את האובייקט הרומן. בניגוד אובייקט מיקום זיכרון, אשר מסתמכת במידה רבה על מצעים בהיפוקמפוס, זיכרון זיהוי האובייקט מופיע להסתמך על מגוון של אזורים במוח, המעורבות של ההיפוקמפוס הוא מעורער. הרבה מחקרים הדו ח כי נגעים בהיפוקמפוס או איון אינן משפיעות על אובייקט הרומן העדפה10,13,16,17, בעוד אחרים למצוא את18,מול19. עם זאת, זה עדיין פעילות נפוץ כדי להעריך את פונקצית זיכרון כללי מכרסמים.
פרוטוקול המובאת כאן מתארת את השלבים מעורב בייזום וביצוע של OLT צפונית, ששניהם להשתמש זירה פתוחה-שדה-בדיקות. ציוד בדיקה התנהגותית זמינים מסחרית ניתן שאבטחה, במיוחד עבור מעבדות קטנות יותר. פרוטוקול זה כולל את העיצוב ואת צעדים פשוטים כדי לבנות ארנאס ללא צורך במיקור חוץ במחיר מינימלי, ללא כלים מיוחדים. יתר על כן, הפרוטוקול מפרט אידיאלי באזור בדיקה התנהגותית, כולל המיקום של ארנס, רמזים הקשריים ומערכת הקלטת וידאו שמגדיר את הבמה עבור יישום של הפרוטוקולים OLT וצפונית. נציג תוצאות מחקרים מוצלח, כמו גם פגומים מוצגים, הדגשת החשיבות של אופטימיזציה של כל החומרים והתהליכים בכל לימוד.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>תיאור</td>
			<td>אפשרות</td>
			<td>כמות</td>
		</tr>
<tr>
<td>חלק א': גיליון אקרילי - לבן אטום (0.635 ס"מ על 40 ס"מ x 40.64 ס מ)</td>
			<td>קצוות מנותבים</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td>חלק ב': גיליון אקרילי - לבן אטום (0.635 ס"מ על 40 ס"מ x 41.91 ס"מ)</td>
			<td>קצוות מנותבים</td>
			<td>2</td>
		</tr>
<tr>
<td>חלק ג': גיליון אקרילי - לבן אטום (0.635 ס"מ 41.91 ס"מ x 41.91 ס"מ)</td>
			<td>קצוות מנותבים</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>Acryllic מלט (1 pt).</td>
			<td>נה</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>מד 16 היפו המוליך</td>
			<td>נה</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>שילוב כיכר</td>
			<td>נה</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>מצלמת HD</td>
			<td>נה</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>תוכנה ללכידת וידאו</td>
			<td>נה</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>כבל USB 2.0 מאריך</td>
			<td>נה</td>
			<td>1</td>
		</tr>
<tr>
<td>צינור כבלים</td>
			<td>נה</td>
			<td>1</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: רשימה מפורטת של חומרים וציוד נדרש לבדיקה התנהגותית.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast)</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td>1/4&#34; x 15.75&#34; x 15.75&#34; with Routed Edges</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast)</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td>1/4&#34; x 15.75&#34; x 16.5&#34; with Routed Edges</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast)</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td>1/4&#34; x 16.5&#34; x 16.5&#34; with Routed Edges</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TAP Acryllic Cement (1 pt.)</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>16 Gauge Hypo Applicator</td>
			<td>TAP Plastics</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Debut Video Capture Software Pro Edition</td>
			<td>NCH Software</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stanely SAE/Metric Comb Square</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>6R171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Logitech Pro Stream Webcam C922x</td>
			<td>CDW</td>
			<td>4429927</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Belkin 16&#39; USB 2.0 Active Extension Cable</td>
			<td>CDW</td>
			<td>570691</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8&#39;)</td>
			<td>CDW</td>
			<td>300902</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatial/Environmental Cues</td>
			<td>Variable</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Objects for testing</td>
			<td>Variable</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Variable</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Double-sided tape</td>
			<td>Variable</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

novel object recognition and object location behavioral testing in mice on a budget

בדיקה התנהגותית ethologically הרלוונטי הוא מרכיב קריטי בכל מחקר המשתמשת מודלים העכבר כדי לחקור את ההשפעות קוגניטיבית של שינויים פיזיולוגיים או פתולוגיים שונים. הפעילות מיקום אובייקט (OLT) הפעילות זיהוי האובייקט הרומן (צפונית) שתי פעילויות התנהגותיות יעילות נפוץ כדי לחשוף את תפקוד ואת בריאות יחסית של אזורים ספציפיים במוח המעורבים בזיכרון בקרב אנשי עסקים ותיירים כאחד. בעוד שתי בדיקות אלה לנצל את ההעדפה הטבועה של עכברים החידוש לחשוף זיכרון עבור בעבר נתקל אובייקטים, OLT מוערך בעיקר מרחבי למידה, אשר מסתמכת במידה רבה על פעילות בהיפוקמפוס. צפונית, לעומת זאת, מעריך שאינם מרחבי למידה של זהות האובייקט, הנשענת על מספר אזורים במוח. ששתי הפעילויות דורשות זירה פתוחה-שדה-בדיקות, אובייקטים עם שווה ערך מהותי על עכברים, רמזים סביבתיים מתאימים וציוד הקלטת וידאו ותוכנות. מערכות זמינים מסחרית, בעוד נוח, יכול להיות יקר. כתב יד זה מפרט שיטה פשוטה, חסכונית עבור הגדרת הציוד הנדרש כדי למלא את OLT ואת צפונית ובניית ארנאס. יתר על כן, כתב היד מתאר פרוטוקול הבדיקה יעילה משלבת OLT והן צפונית ומספקת שיטות אופיינית עבור חדרי קירור והקפאה, ניתוח, כמו גם התוצאות נציג. סיומו המוצלח של בדיקות אלו ניתן לספק ערך תובנות פונקצית זיכרון של המערכות השונות של דגם העכבר, להעריך את האזורים עצבית כבסיס לתמוך בפונקציות אלה.

איור 3 מספק דוגמאות של תוצאות חיוביות ושליליות טיפוסי שהושג עם זכר ונקבה עכברים C57Bl/6 למבוגרים באמצעות זה פרוטוקול6. פרשנות של OLT ונתונים צפונית תמיד חל על הנתונים צבירה של קבוצה (ראה דיון להלן). זמן החקירה עכבר אחת לא יכולה להתפרש זיכרון או מחסור בזיכרון. עם זאת, הביצועים של קבוצה של עכברים (כלומר., דגימות מרובים) ניתן להשוואה לקבוצות אחרות או על הרמות הזדמנות קבוע באמצעות בדיקות סטטיסטיות. במהלך משפט אופייני הכשרה, קבוצות של עכברים אינם מראים העדפה משמעותית בממוצע של אחד משני האובייקטים כפי שהם נמצאים באותה מידה הרומן אין כל ערך חיובית או שלילית מיסודה העכברים (איור 3A ו- 3B). אם הנתונים צבירה של קבוצה של עכברים מראים העדפה משמעותית עבור אובייקט אחד על פני האחר במהלך האימון, אובייקטים אלה אין להשתמש בגלל ההעדפה/סלידה הגלום הזה וחיסול תוצאות המשפטים הבאים. בנוסף, הזמן החקירה הכולל של העכברים לעמוד ברמה מינימלית (קבע באופן מסורתי בגיל 20 שניות21), יש להשוות כדי להבטיח כי אין שום הבדל בסיסי בחקירת שעשויים להשפיע על בדיקות עוקבות של זיכרון.
במהלך OLT, זיכרון עבור מיקום אובייקט משתקף על ידי עכברים מבלה בממוצע באופן משמעותי יותר מ 50% מהזמן החקירה הכולל עם האובייקט עבר (איור 3 א). אם בתקופת החקירה הכולל העכברים בודדים להשתנות במידה רבה, התוצאות הן יותר מתוארים בתור אינדקס אפליה עבור האובייקטים (איור 3B). העלייה המשמעותית באינדקס אפליה הממוצע ב- 3B איור מציין כי העכברים מבלה יותר זמן עם האובייקט, אחרי זה עבר. אם למדוד על ידי הגדלת אחוז הזמן או אפליה אינדקס, העלייה בחקירה של אובייקט לאחר העברתו מרמז כי העכברים זוכר היכן האובייקט היה ממוקם במהלך האימון.
המשפט האחרון של פרוטוקול זה מעריך זיכרון זיהוי האובייקט. דוגמה מייצגת עם קבוצה אחת של עכברים מדגים אחוז ממוצע גבוה יותר של זמן החקירה (איור 3C) כמו גם אינדקס אפליה חיובית (איור 3D) לעומת הערכים בקרה קבועה של 50% ו- 0, בהתאמה. כמו עם הנתונים OLT, אם יש השתנות משמעותי בזמן החקירה הכולל בין עכברים בודדים, אפליה האינדקס הוא ככל הנראה השיטה טובה יותר להמחיש נתונים אלה. איור 3E מראה דוגמה של השוואה 2-הקבוצה את צפונית, כמה סיבוכים סטטיסטי שעשויות להתרחש המבחנים האלה (ראה דיון). בעוד אחד-sample t מבחן עבור קבוצה B מראה החקירה באופן משמעותי מעל 50%, אותו מבחן עבור קבוצת A אינו. ממצא זה לא אומר כי A ו- B הם שונים אחד מהשני. כדי לקבוע את ההבדלים קבוצה, נפרדים שני מדגמים שאינם פרמטרי מאן-ויטני מבחן השוואה בין קבוצות B A חייב להתבצע. מבחן מאן-ויטני-פרמטרית שני מדגמים של נתונים אלה קבוצה ייצוגית מראה הבדל משמעותי (p = 0.66) בין שתי הקבוצות באחוזים של הרומן אובייקט החקירה זמן.
שני OLT ואת צפונית רגישים מאוד הערך הפנימי של אובייקטים, בדיקה יסודית של אובייקט שקילות הוא הכרחי כדי להבטיח כי יש הטייה מהותי זה יכול לבלבל את התוצאות. איור 3F ו- 3g להראות דוגמה של הבחירה בעצם לא הולמת. ב מבחן פיילוט עם גודל דגימה של 4, עכברים הראה מגמת מבלה פחות מ 50% מהזמן חקירה עם אובייקט A כאשר מזווגים נגד אובייקט B (איור 3F). כאשר אובייקטים אלה שימשו ואז צפונית עם אובייקט האובייקט הרומן ואת גודל מדגם גדול של 16, עכברים בילה משמעותית פחות מ 50% מהזמן חקירה עם אובייקט (איור 3G). סלידה זו אל האובייקט הרומן הוא קל לזיהוי כאן כמו פגם טכני לניסוי, מדגימה מדוע בדיקות פיילוט של אובייקטים עבור העדפה מובנית/סלידה הוא חיוני.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58593/58593fig3.jpg"> איור 3: נתוני בדיקה התנהגותית עם עכברים C57Bl/6 מבוגרים פראי סוג. (א) השוואה של אחוז החקירה סה כ זמן של האובייקט שהועברו במהלך האימון במשפט נגד OLT מראה עלייה משמעותית בחקירה, אחרי האובייקט עברה. 0.0001 < p, t-test מזווג. תוצאות נציג (B) עבור אובייקט הועברו לחקירה במהלך אימון והתנסות OLT מוצג בעל אינדקס אפליה להראות באופן דומה עלייה משמעותית בחקירה של האובייקט לאחר העברתו. 0.0001 < p, t-test מזווג. (ג) זמן החקירה הכולל אחוז של אובייקט הרומן בצפונית מראה העדפה משמעותית על חקירת האובייקט הרומן. * * p = 0.0024, אחד-sample t-test vs. 50%. (ד) נציג תוצאות עבור הרומן אובייקט החקירה צפונית שיוצג מאינדקס אפליה באופן דומה מראים העדפה על חקירת האובייקט הרומן. * * p = 0.0024, אחד-sample t-test לעומת 0. (E) נציג תוצאות ניתוח צפונית מעורבים שתי קבוצות של עכברים. קבוצת B משתנה באופן משמעותי מ- 50% על ידי אחד-sample t-test (* * p = 0.0024), אך אינה קבוצה A (p = 0.5837). ניתוח נפרד, כדי להשוות בין קבוצות, מבחן מאן-ויטני שני מדגמים משמש בגלל גודל קבוצה לא אחידה, והוא נמצא הבדל משמעותי בחקירה (p = 0.66, ns). פעם באחוזים (F) עם אובייקט במהלך ניסויים אימות גודל מדגם קטן מראה מגמת בסלידה לעצם. p = 0.2159, אחד-sample t-test. (G) עם מידה מדגם גדול יותר, האובייקט (נ) לשמש אובייקט הרומן ב צפונית, סלידה משמעותית האובייקט נמצא, למרות שזה החפץ הרומן. * p = 0.0270, אחד-sample t-test. זוהי דוגמה של כשל טכני בבחירת אובייקט. הנתונים מוצגים אומר ± נתונים ב- SEM של לוחות C-E מותאמים מן הפרסום הקודם6. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58593/58593fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget at JoVE.com

Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget

כאן אנו מספקים פרוטוקול הכוללת הוראות מקיפה להקמת חסכוני של מיקום אובייקט מאתר ובדיקה אובייקט הרומן זיהוי התנהגותית, לרבות עיצוב, עלות, בניית נדרש ציוד כמו גם ביצוע של בדיקה התנהגותית, איסוף נתונים, ניתוח.

הרומן וראייה ומיקום אובייקט ההתנהגותי בוחן בעכברים על תקציב

Ethologically relevant behavioral testing is a critical component of any study that uses mouse models to study the cognitive effects of various ...

שיטה זו יכולה לסייע לענות על שאלות מפתח אודות ויסות זיכרון. לדוגמה, אנו קובעים את התפקיד של חלבונים ספציפיים בזיכרון על ידי בדיקת עכברי נוקאאוט מהודקים במשימות אלה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שזו דרך מהירה וחסכונית לבצע בדיקות זיכרון בכל מעבדה.הדגמה של בניית הזירה היא קריטית, כי ריתוך ממס יניב תוצאות חזקות רק אם מבוצע בזהירות. התחל על ידי רכישת חמישה גיליונות של אקריליק, מלט אקרילי, ומוליך היפו 16-מד. הסר את ציפוי נייר המגן מהסדינים האקריליים.ואז לייבש את כל החומרים כדי לאשר כי הגדלים נכונים. לאחר מכן, להרכיב טען את המזרק עם מלט אקרילי. יישר את הקצה הארוך של קיר חיצוני עם הקצה העליון של הבסיס וודא שהם ניצבים זה לזה באמצעות ריבוע משולב או מכוניסט.לאחר מכן השתמש במזרק כדי להחיל חרוז קטן ויציב של מלט ישירות לפינה של שני החלקים להיות מחובר. החזק את שני החלקים במקום במשך חמש דקות עד שהם מוגדרים בתחילה. חזור על אותם שלבים כדי לחבר את הקיר החיצוני השני לבסיס.לאחר מכן, חבר שני קירות פנימיים, אחד בכל פעם, את הבסיס עם מלט אקרילי. לבסוף, להשתמש במזרק כדי להחיל חרוז קטן ויציב של מלט ישירות לפינה עכשיו נוצר על ידי הקיר החיצוני ואת הקיר הפנימי. התחילו את מפגש ההרגלה על ידי חלוקת עכברים לקבוצות של ארבעה, ושכן אותם בכלובים בודדים נקיים.לאחר מכן, להביא קבוצה אחת של עכברים לחדר הבדיקה ולאפשר להם להתאקלם לפחות 30 דקות. לאחר ההתאקלמות, התחל להקליט את הווידאו. מניחים כל עכבר בזירה מול הקירות של פינת השחרור, ולאפשר לעכברים לחקור את הזירות בחופשיות במשך שש דקות.לאחר מכן, להפסיק להקליט את הווידאו, ולהחזיר עכברים לכלובי החזקה נקיים שלהם במהלך מרווח בין משפטים. נקו את כל הזירות בעזרת שיטות ניקוי מומלצות של בעלי חיים, כגון ניגוב עם 70% אתנול כדי למזער רמזים חוש הריח. לבסוף, לאחר השלמת שלושה מפגשי מגורים בסך הכל, החזירו את כל העכברים לכלובי הבית שלהם.לאחר 24 שעות, להביא את אותה קבוצה של עכברים לחדר הבדיקה, ולאפשר להם להתאקלם לחדר הבדיקה לפחות 30 דקות, כפי שנעשה לפני מפגשי המגורים ביום הקודם. לנהל את משפט האימון באמצעות שני אובייקטים להציב בזירה. הדבק חפצים עם סרט דו-צדדי שישה על שישה סנטימטרים משתי פינות שאינן משחררות, כך שהם מאוזנים בזירה.אפשר לעכברים לחקור את הזירה וחפצים בחופשיות במשך 10 דקות. אז תפסיק את הקלטת הוידאו. מניחים עכברים בחזרה בכלובי החזקה נקיים שלהם במשך 20 דקות, ולנקות את האזורים עם אתנול.לאחר מכן, כדי לבצע את משימת מיקום האובייקט OLT, העבר את אחד האובייקטים המשמשים במשפט האימון לפינה חדשה שאינה של שחרור והדבק את האובייקט שישה סנטימטרים מכל קיר בפינה זו עם קלטת דו-צדדית. חזור על אותה הקלטת וידאו של העכברים באזור במשך 10 דקות, כפי שתואר קודם לכן. לבסוף, כדי לבצע את המשימה לזיהוי אובייקט הרומן NORT, להחליף את האובייקט שלא הועבר במהלך OLT עם אובייקט הרומן, ולהדביק את האובייקט הרומן שישה סנטימטרים משני הקירות של הפינה עם קלטת דו צדדית.חזור על אותה הקלטת וידאו של העכברים באזור במשך 10 דקות, כפי שתואר קודם לכן. במהלך OLT, זיכרון עבור מיקום אובייקט משתקף על ידי קבוצה של עכברים ההוצאות, בממוצע, באופן משמעותי יותר זמן עם אובייקט לאחר שהוא זז. זה יכול להיות מיוצג גם כעלייה במדד האפליה.ב- NORT, זיכרון עבור מיקום אובייקט משתקף על ידי קבוצה של עכברים ההוצאות, בממוצע, באופן משמעותי יותר מ 50% מזמן החקירה עם האובייקט החדש או מראה מדד אפליה גדול באופן משמעותי מאפס. בחירת אובייקטים שעבורם לעכברים אין העדפה אינהרנטית היא המפתח. לדוגמה, במבחן פיילוט עם גודל מדגם של ארבעה, עכברים הראו מגמה כלפי ההוצאות פחות מ 50% של זמן חקירה עם אובייקט A כאשר מזווג נגד אובייקט B.When אובייקט A שימש אז כאובייקט הרומן NORT, עם גודל מדגם גדול יותר של 16, עכברים בילו באופן משמעותי פחות מ 50% מזמן החקירה עם אובייקט A.אלה נתונים מראים סלידה אינהרנטית אובייקט A.במהלך הליך זה חשוב לזכור לנקות ביסודיות את כל האובייקטים והזירות בין השימוש.בשיטה זו, חקירת אובייקט ניתן להבקיע באופן ידני על ידי חוקרים או באמצעות תוכנה מסחרית. התוכנה יש עלויות מראש גבוהות יותר, אבל, לאחר כיול, עשוי לחסוך זמן ומשאבים כספיים לאורך זמן.

Research

JoVE Journal

Behavior

A Procedure to Observe Context-induced Renewal of Pavlovian-conditioned Alcohol-seeking Behavior in Rats

נוהל ללב התחדשות מושרה הקשר של התנהגות אלכוהול מחפשי מיזוג הפבלובית בחולדות

Environmental contexts in which drugs of abuse are consumed can trigger craving, a subjective Pavlovian-conditioned response that can facilitate ...

Testing for Odor Discrimination and Habituation in Mice

בדיקה לריח אפליה והרגלה בעכברים

This video demonstrates a technique to establish the presence of a normally functioning olfactory system in a mouse. The test helps determine whether the ...

Asymmetric Walkway: A Novel Behavioral Assay for Studying Asymmetric Locomotion

א-סימטרי טיילת: רומן התנהגות Assay עבור לימוד אסימטרית תנועה

Behavioral assays are commonly used for the assessment of sensorimotor impairment in the central nervous system (CNS). The most sophisticated methods for ...

Novel Object Exploration as a Potential Assay for Higher Order Repetitive Behaviors in Mice

חיפושי אובייקט רומן בתור Assay פוטנציאל התנהגויות חוזרות מסדר גבוה של עכברים

Restricted, repetitive behaviors (RRBs) are a core feature of autism spectrum disorder (ASD) and disrupt the lives of affected individuals.  RRBs are ...

The Rodent Psychomotor Vigilance Test (rPVT): A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

The Rodent Psychomotor Vigilance Test rPVT: A Method for Assessing Neurobehavioral Performance in Rats and Mice

מבחן הערנות Psychomotor המכרסם (rPVT): שיטה להערכת ביצועי נוירו-התנהגותיות אצל חולדות ועכברים

The human Psychomotor Vigilance Test (PVT) is a widely used procedure for measuring changes in fatigue and sustained attention. The present article ...

Experience is Instrumental in Tuning a Link Between Language and Cognition: Evidence from 6-  to 7- Month-Old Infants' Object Categorization

הניסיון הוא אינסטרומנטלי ב כוונון קשר בין השפה וקוגניציה: עדויות 6 ל- 7--חודש עתיק תינוקות סיווג אובייקט

At birth, infants not only prefer listening to human vocalizations, but also have begun to link these vocalizations to cognition: For infants as young as ...

Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice

אובייקט הרומן מבחן ההכרה לחקירה של למידה וזיכרון בעכברים

The object recognition test (ORT) is a commonly used behavioral assay for the investigation of various aspects of learning and memory in mice. The ORT is ...

The (Spatial) Memory Game: Testing the Relationship Between Spatial Language, Object Knowledge, and Spatial Cognition

The Spatial Memory Game: Testing the Relationship Between Spatial Language, Object Knowledge, and Spatial Cognition

משחק זיכרון (המרחבי): בדיקת הקשר בין השפה המרחבית, עצם הידע קוגניציה מרחבית

The memory game paradigm is a behavioral procedure to explore the relationship between language, spatial memory, and object knowledge. Using two different ...

The Unpredictable Chronic Mild Stress Protocol for Inducing Anhedonia in Mice

פרוטוקול לא צפוי מתח כרוני מתון להשראת אנהדוניה בעכברים

Depression is a highly prevalent and debilitating condition, only partially addressed by current pharmacotherapies. The lack of response to treatment by ...

Defining the Role Of Language in Infants' Object Categorization with Eye-tracking Paradigms

הגדרת תפקידה של השפה בדיני אובייקט תינוקות עם פרדיגמות עקיבה

Assessing infant category learning is a challenging but vital aspect of studying infant cognition. By employing a familiarization-test paradigm, we ...