Name: repression of multiple myeloma cell growth in vivo by single-wall carbon nanotube (swcnt)-delivered malat1 antisense oligos
Uploaded: 2018-12-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube SWCNT-delivered MALAT1 Antisense Oligos at JoVE.com

著者に感謝ラーナー研究所ゲノム、プロテオームと彼らの支援のためのイメージング コアとサポートします。資金: この作業は、財政的に NIH/NCI の助成 R00 CA172292 (J.J.Z.) に (J.J.Z.) をスタートアップ資金と臨床トランスレーショナル科学共同 (CTSC) (J.J.Z.) にケース ウェスタン リザーブ大学コア使用率のパイロット グラントのによって支えられました。この作品は、国立機関の健康 SIG グラント 1S10OD019972-01 からの資金で購入したライカ SP8 共焦点顕微鏡を利用されています。

すべての実験動物を含む事前クリーブランド クリニック IACUC (機関動物ケアおよび使用委員会) によって承認されました。
1. 機能性カーボンナノ チューブの合成
<ol><li>単層カーボンナノ チューブの 1 mg、5 mg DSPE ・ PEG2000 - アミンとシンチレーション バイアル (20 mL) での滅菌ヌクレアーゼ フリー水 5 mL を混ぜます。それを振るも完全にすべての試薬を溶解します。</li>
	...

<ol>
	<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNase+non-sensitive+and+endocytosis+independent+siRNA+delivery+system:+delivery+of+siRNA+into+tumor+cells+and+high+efficiency+induction+of+apoptosis.">RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis.</a> Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).</li><li>Murakami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water-dispersed+single-wall+carbon+nanohorns+as+drug+carriers+for+local+cancer+chemotherapy.">Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy.</a> Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).</li><li>Kam, N. W., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+nanotubes+as+intracellular+protein+transporters:+generality+and+biological+functionality.">Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).</li><li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionalization+of+carbon+nanotubes+via.+cleavable+disulfide+bonds+for+efficient+intracellular+delivery+of+siRNA+and+potent+gene+silencing.">Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).</li><li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+nanotubes+as+intracellular+transporters+for+proteins+and+DNA:+an+investigation+of+the+uptake+mechanism+and+pathway.">Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).</li><li>Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+of+epigenetic+dysregulation+in+hematological+malignancies.">Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies.</a> Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).</li><li>Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bright+side+of+dark+matter:+lncRNAs+in+cancer.">The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).</li><li>Ronchetti, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+lncRNA+transcriptional+fingerprints+characterize+progressive+stages+of+multiple+myeloma.">Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma.</a> Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).</li><li>Wong, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+silencing+of+a+long+non-coding+RNA+KIAA0495+in+multiple+myeloma.">Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma.</a> Molecular Cancer. 14, 175 (2015).</li><li>Schmidt, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+long+noncoding+MALAT-1+RNA+indicates+a+poor+prognosis+in+non-small+cell+lung+cancer+and+induces+migration+and+tumor+growth.">The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth.</a> Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).</li><li>Ji, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALAT-1,+a+novel+noncoding+RNA,+and+thymosin+beta4+predict+metastasis+and+survival+in+early-stage+non-small+cell+lung+cancer.">MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer.</a> Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).</li><li>Luo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+and+genomic+analysis+of+human+hepatocellular+carcinomas+and+hepatoblastomas.">Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas.</a> Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).</li><li>Guffanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transcriptional+sketch+of+a+primary+human+breast+cancer+by+454+deep+sequencing.">A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing.</a> BMC Genomics. 10, 163 (2009).</li><li>Cho, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALAT1+long+non-coding+RNA+is+overexpressed+in+multiple+myeloma+and+may+serve+as+a+marker+to+predict+disease+progression.">MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression.</a> BMC Cancer. 14, 809 (2014).</li><li>Handa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+non-coding+RNA+MALAT1+is+an+inducible+stress+response+gene+associated+with+extramedullary+spread+and+poor+prognosis+of+multiple+myeloma.">Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma.</a> British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).</li><li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+MALAT1/PARP1/LIG3+complex+induces+DNA+damage+and+apoptosis+in+multiple+myeloma.">Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma.</a> Leukemia. , (2018).</li><li>Lennox, K. A., Behlke, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+localization+of+long+non-coding+RNAs+affects+silencing+by+RNAi+more+than+by+antisense+oligonucleotides.">Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides.</a> Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).</li><li>Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+nanotubes+as+multifunctional+biological+transporters+and+near-infrared+agents+for+selective+cancer+cell+destruction.">Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).</li><li>Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+polyethylene+glycol+integrity+in+specific+receptor+targeting+of+carbon+nanotubes+to+cancer+cells.">Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells.</a> Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).</li><li>Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+modifications+in+multiple+myeloma:+recent+advances+on+the+role+of+DNA+and+histone+methylation.">Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).</li><li>Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+theragnostics+for+the+clinical+management+of+multiple+myeloma.">MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma.</a> Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).</li><li>Amodio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugging+the+lncRNA+MALAT1+via.+LNA+gapmeR+ASO+inhibits+gene+expression+of+proteasome+subunits+and+triggers+anti-multiple+myeloma+activity.">Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity.</a> Leukemia. , (2018).</li><li>Highleyman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+approves+fomivirsen,+famciclovir,+and+Thalidomide.+Food+and+Drug+Administration.">FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration.</a> BETA. 5, (1998).</li><li>Smith, R. J., Hiatt, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+drugs+for+homozygous+familial+hypercholesterolemia:+managing+benefits+and+risks+in+a+rare+disorder.">Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder.</a> JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).</li><li>Aartsma-Rus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval+of+Nusinersen+for+Spinal+Muscular+Atrophy+Makes+2016+the+Year+of+Splice+Modulating+Oligonucleotides.">FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides.</a> Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).</li><li>Nelson, S. F., Miceli, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval+of+Eteplirsen+for+Muscular+Dystrophy.">FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy.</a> The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480 (2017).</li><li>Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supramolecular+chemistry+on+water-soluble+carbon+nanotubes+for+drug+loading+and+delivery.">Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery.</a> American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).</li><li>Ali-Boucetta, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiwalled+carbon+nanotube-doxorubicin+supramolecular+complexes+for+cancer+therapeutics.">Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics.</a> Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).</li><li>Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomedical+applications+of+functionalised+carbon+nanotubes.">Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes.</a> Chemical communications. (5), 571-577 (2005).</li><li>Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+single-walled+carbon+nanotube+solubility+by+noncovalent+PEGylation+using+experimental+design+methods.">Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods.</a> International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).</li><li>Padilla-Parra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+imaging+of+endosome+acidification+and+single+retrovirus+fusion+with+distinct+pools+of+early+endosomes.">Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).</li><li>Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-sensitive+poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG+co-polymer+micelles+for+cytosolic+drug+delivery.">pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery.</a> Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).</li><li>Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smart+polyion+complex+micelles+for+targeted+intracellular+delivery+of+PEGylated+antisense+oligonucleotides+containing+acid-labile+linkages.">Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages.</a> Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).</li><li>Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+polyethylenimine-grafted+graphene+nanoribbon+for+cellular+delivery+of+locked+nucleic+acid+modified+molecular+beacon+for+recognition+of+microRNA.">The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA.</a> Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).</li><li>Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+reduction+of+disulfide+bonds+in+lysosomes:+characterization+of+a+gamma-interferon-inducible+lysosomal+thiol+reductase+(GILT).">Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).</li><li>Lelimousin, M., Sansom, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+perturbation+by+carbon+nanotube+insertion:+pathways+to+internalization.">Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization.</a> Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).</li><li>Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertion+mechanism+and+stability+of+boron+nitride+nanotubes+in+lipid+bilayers.">Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers.</a> J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).</li><li>Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-particle+tracking+of+endocytosis+and+exocytosis+of+single-walled+carbon+nanotubes+in+NIH-3T3+cells.">Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells.</a> Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).</li><li>Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-dependent+cellular+uptake+and+expulsion+of+single-walled+carbon+nanotubes:+single+particle+tracking+and+a+generic+uptake+model+for+nanoparticles.">Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles.</a> American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).</li><li>Ruggiero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paradoxical+glomerular+filtration+of+carbon+nanotubes.">Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).</li></ol>

証拠は lncRNAs MM7,8,9; を含む癌の多数の生理学的および病態生理学的プロシージャの規則の部分を取ることを示しています。アンチセンスオリゴヌクレオチド20,21,22では実現することができますがん治療の対象となる可能性があります。米国食品医薬品局...

SWCNT は理想的な忍容性と体外1と生体2で最小毒性安定的かつ効率的に薬、タンパク質、低分子核酸などの様々 なタイプを提供できる斬新なナノ材料です。機能性 SWCNT 素晴らしい生体適合性と水への溶解度が小さい分子シャトルとして使用することができます、細胞膜3,4,5を貫通するそれらを運ぶことができます。
lncRNAs は RNA のクラスター (> 200 nt) それはゲノムから mRNA に転写されますが、タンパク質に変換することはできません。増加する証拠は、lncRNAs 遺伝子式6の規制に参加し、開始と MM7,8,9を含むがんのほとんどの種類の進行に関与していることを示しています。MALAT1 は核濃縮の非翻訳転写 2 (NEAT2) と非常に節約された lncRNA10。MALAT1 転移性肺非小細胞癌 (NSCLC)11、当初認識されましたが数多く腫瘍5,12,13; で過剰に発現されています。それは最も高い表現の lncRNAs の一つで、MM8,14の予後と相関しています。MALAT1 の発現レベルは致命的なコース髄 MM 患者のみ15MM と診断されたものと比較して有意に高かった。
以前の研究では、ターゲット MALAT1 gapmer DNA アンチセンス オリゴヌクレオチドを使用してによって、反 MALAT1 oligos 確実 DNA 損傷と MM16アポトーシスにつながるを確認した (アンチ MALAT1) MM 細胞に。Gapmer DNA をアンチセンス DNA 構成・ 2'-青梅-Rna、RNase H 一度バインド活動17MALAT1 胸の谷間を促す可能性がありますしました。アンチセンス oligos の in vivo デリバリー効率はまだその臨床での使用を制限します。
配信をテストするには、DNA は DSPE PEG2000 アミン標識抗 MALAT1 gapmer 抗 MALAT1 gapmer oligos の SWCNT の効果は、SWCNT を官能基化。SWCNT 反 MALAT1、静脈内に注入 MM 播種性マウス モデル;4 回の治療後は、印象的な抑制が観察されます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1168px;" width="1167">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:324px;">SWCNTs</td>
			<td style="width:199px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:209px;">704113</td>
			<td style="width:436px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DSPE-PEG2000-Amine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">bath sonicator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97043-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">4 mL centrifugal filter</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>Z740208-8EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">UV/VIS spectrometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>accuSkan GO UV/Vis Microplate Spectrophotometer</td>
			<td>extinction coefficient of 0.0465 L/mg/cm at 808 nm</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sulfo-LC-SPDP</td>
			<td>ProteoChem</td>
			<td>c1118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DTT solution</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>43815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NAP-5 column</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0853-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">in vivo imaging system</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NOD.CB17-Prkdcscid/J mice</td>
			<td>Charles River lab</td>
			<td>250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Flow cytometer</td>
			<td>Becton Dickinso</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668019</td>
			<td>Lipofectamine2000</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RMPI-1640 medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MALAT1-QF:</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td>5&#8217;- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MALAT1-QR:</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td>5&#8217;- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GAPDH-QF:</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td>5&#8217;- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GAPDH-QR:</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td>5&#8217;- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Quantitative PCR using SYBR Green PCR master mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A25780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RevertAid first-stand cDNA synthesis kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K1621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-MALAT1</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;-mC*mG*mA*mA*mA*C*A*T*T 
			*G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Viability Assay Kit</td>
			<td>Promega Corporation</td>
			<td>G7570</td>
			<td>CellTiter-GloLuminescent Cell Viability Assay Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">accuSkan GO UV/Vis Microplate Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifugal filter</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>UFC910008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPSS software</td>
			<td>IBM</td>
			<td>version 24.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-Luciferin</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>L9504</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repression of multiple myeloma cell growth in vivo by single-wall carbon nanotube (swcnt)-delivered malat1 antisense oligos

単層カーボンナノ チューブ (SWCNT) は、合成小分子薬、オリゴヌクレオチド、タンパク質などの細胞に複数の種類の薬を提供するのに使用されているナノ粒子の新しいタイプです。SWCNT、カスタマイズ可能な寸法、表面的な広域がありその表面にさまざまな変更を薬で柔軟にバインドできます。したがって、それは細胞に薬を輸送するための理想的なシステムです。長鎖非コード Rna (lncRNAs) 性 RNA 200 以上のクラスターは、nt では、蛋白質に翻訳することはできませんが、生物学的および病態生理学的プロセスに重要な役割を果たします。転移による肺腺癌成績証明書 1 (MALAT1) は非常に節約された lncRNA です。ハイレベル MALAT1 多発性骨髄腫 (MM) を含む様々 な癌の予後に関連していることを示した。我々 は MALAT1 が MM; 重さ: DNA 修復と細胞死を調節することを明らかにしました。したがって、MALAT1 は、ミリメートルのため治療上のターゲットとして考えることが。しかし、体内の MALAT1 の抑制/ノックダウンするアンチセンスの oligo の効率的な配信はまだ問題です。本研究で我々 ペグ 2000 SWCNT を変更してそれに反 MALAT1 オリゴを共役、この化合物の in vitro の配信をテスト、播種 MM マウス モデルに静脈内に挿入し、観察する示す MM 進行を大幅に抑制その SWCNT 反 MALAT1 gapmer DNA の最適な配信シャトルしています。

反 MALAT1 gapmer MM で DNA の抑制効果を示すためには、我々 は MALAT1 の発現をノックダウンし、H929 および MM.1S 細胞でそれを使用します。48 時間後、ノックダウン効率の分析のため収集された細胞と抗 MALAT1 gapmer またはコントロール DNA 細胞のアポトーシスの状態をトランスフェクトしました。qRT PCR 結果反 MALAT1 gapmer DNA が効率的にノックダウン H929 と MM.1S 細胞における M...

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Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube SWCNT-delivered MALAT1 Antisense Oligos

この原稿は、単層カーボンナノ チューブ (SWCNT) の合成を説明します-共役、SWCNT の確実な配信との強力な治療効果を発揮する MALAT1 gapmer アンチセンス DNA オリゴヌクレオチド (SWCNT 対策 MALAT1)反 MALAT1 の in vitro および in vivo。合成、修正、活用方法を使用し、SWCNT 反 MALAT1 の注入.

単層カーボンナノ チューブ (SWCNT) による生体内での多発性骨髄腫細胞の増殖の抑制-MALAT1 アンチセンス Oligos を配信

The single-wall carbon nanotube (SWCNT) is a new type of nanoparticle, which has been used to deliver multiple kinds of drugs into cells, such as ...

ここで使用している方法は、薬物送達のための新しいタイプのナノ粒子である単層カーボンナノチューブでオリゴヌクレオチドをパッケージ化するのに役立ちます。この技術の主な利点は、生体内の細胞へのオリゴヌクレオチド薬物のより効率的な送達である。この技術の意味は、オリゴヌクレオチド薬の送達を改善するためにナノ粒子を導入しているため、多発性骨髄腫の研究にも及ぶ。この方法を通して多発性骨髄腫の治療に関する洞察を提供できる。また、他の疾患に適用され、タンパク質や小分子などの他の貨物と共役することができます。まず、1ミリグラムの単層カーボンナノチューブ、DSPE-PEG 2000アミン5ミリグラム、滅菌ヌクレアーゼフリー水5ミリリットルを20ミリリットルガラスシンチレーションバイアルに混ぜます。室温で1時間90ワットの電力レベルで水浴ソニケーターでバイアルを超音波処理します。超音波処理に続いて、6時間24,000回gでバイアルを遠心分離します。その後、上清溶液を収集します。100キロダルトンの分子量カットオフ遠心フィルター装置に単層カーボンナノチューブ溶液の1ミリリットルを加え、続いて殺菌されたヌクレアーゼを含まない水を4ミリリットル加えます。遠心分離機は室温で4,000倍gで10分間、過剰なアミンを除去した。アミン機能化された単層カーボンナノチューブの450マイクロリットルにスルフォ-LC-SPDPの0.5ミリグラムを加えます。その後、50マイクロリットルの10倍PBSを加え、室温で2時間インキュベートします。次に、反応混合物を100キロダルトン分子量カットオフ遠心フィルター装置に加え、続いて4ミリリットルのヌクレアーゼを含まない水を加える。試料を室温で4,000回gで10分間遠心し、過剰なスルホン-LC-SPDPを除去する。フィルターに残されたSulfo-LC-SPDP処理アミン単層カーボンナノチューブ溶液を回収し、以前に調製した抗MALAT1-Cy3溶液を500マイクロリットルで希釈します。その後、一晩摂氏4度でサンプルをインキュベートします。比較の最良の結果を達成するために、各グループに7匹、各群で同じ男女比を持つ試験または対照群に14匹のマウスを無作為に配置する。次に、手術台を清掃し、70%エチルアルコールで殺菌します。加熱ランプを使用して、尾静脈が現れるのを助けるためにマウスの1つを温めます。尾部注入の抑制剤でマウスを正しく拘束してください。尾静脈を通して50マイクロリットルのPBSでMM.1S-luc/mCherry細胞を注入する。アルコール綿棒で注射部位を30秒間押します。次に、注射されたマウスにマークを付け、クリーンケージに戻します。7日目、MM1S細胞注射後、マウスの尾静脈に単一壁カーボンナノチューブ抗MALAT1を含むPBSの50マイクロリットルを注入する。その後、アルコール綿棒で注射部位を30秒間押します。尾の局所出血とマウスの一般的な挙動を1分間観察し、清潔なケージに戻します。ケージをラックに戻す前に、注射されたすべてのマウスを再び観察して、注射が十分に許容されることを確認します。解剖前に各マウスの重量を量る。心臓から末梢血を採取し、血液細胞カウンター装置によって行われる完全な血数アッセイを行う。次に、骨髄、脾臓、リンパ節、腎臓、および目に見える転移を有する組織の組織を採取する。骨髄サンプルからRNAとタンパク質を抽出します。ホルマリンの残りの組織をすべて修正します。24時間の固定後、骨サンプルを0.5モルEDTA溶液に5日間浸漬して脱灰します。その後、すべてのサンプルを75%エチルアルコールに浸して長期保存します。QRT PCRの結果は、抗MALAT1ギャップメRDNAがMALAT1発現をノックダウンし、H929およびMM.1S細胞で有意にアポトーシスを誘発したことを示した。単層カーボンナノチューブ抗MALAT1-Cy3をMM細胞の核に送達し、H929およびMM.1S細胞の両方で内因性MALAT1レベルを有意に抑制した。BMEC-1細胞の生存率は、単層カーボンナノチューブ抗MALAT1-Cy3の処理後、または異なる用量およびタイムポイントでの制御後に有意な差はない。これは、単層カーボンナノチューブ抗MALAT1-Cy3の毒性が、高用量で正常細胞に対して限定的かつ許容可能な毒性を有することを示している。ヒトMM播種マウスモデルを確立し、生体内における単層カーボンナノチューブ反MALAT1の治療効果を評価した。単層カーボンナノチューブ抗MALAT1治療群におけるマウスのルシフェロンシグナルは、21日間の治療後の対照と比較して著しく低かった。これらの結果から、静脈注射による単層カーボンナノチューブ抗MALAT1治療は、抗MALAT1オリゴを腫瘍細胞に効果的に送達できると結論付けた。治療の有意な副作用は認められず、単層カーボンナノチューブ抗MALAT1注射がマウスにとって安全な治療法であることを示す。この手順を試みる間、細胞分子組成物はオリゴヌクレオチド薬の送達、効率、および治療効果に影響を与えることを覚えておくことが重要である。この手順に従って、タンパク質または小分子の結合のような他の方法は、追加の質問に答えるために行うことができる。他の薬を提供するために単一壁カーボンナノチューブを使用するように。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube (SWCNT)-delivered MALAT1 Antisense Oligos

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

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NOG マウスの多発性骨髄腫, 骨髄異種のマルチ モーダルな発光とポジトロニック放出断層レントゲン写真撮影/計算断層イメージング

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Neutrophil Extracellular Traps Generated by Low Density Neutrophils Obtained from Peritoneal Lavage Fluid Mediate Tumor Cell Growth and Attachment

低密度の好中球によって生成された好中球細胞外トラップは仲介する腹腔洗浄液から得られた腫瘍細胞の増殖と添付ファイル

Activated neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which can capture and destroy microbes. Recent studies suggest that NETs are involved ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

パラフィン埋め込まれた 3 D 神経膠腫 Neurosphere 文化に免疫組織化学による神経膠腫におけるバイオ マーカーの評価

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

マウスの腫瘍増殖を減少させるマイクロRNAの生体内阻害

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

腫瘍増殖における癌関連線維芽細胞の役割を調べるためのマウスモデル

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

乳がん脳転移性腫瘍増殖を研究し、標的とする Ex Vivo 脳スライスモデル

Brain metastasis is a serious consequence of breast cancer for women as these tumors are difficult to treat and are associated with poor clinical ...

Defining Gene Functions in Tumorigenesis by Ex vivo Ablation of Floxed Alleles in Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells

Defining Gene Functions in Tumorigenesis by Ex vivo Ablation of Floxed Alleles in Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells

悪性末梢神経鞘腫瘍細胞におけるフロックス対立遺伝子の Ex vivo アブレーションによる腫瘍形成における遺伝子機能の定義

The development of new drugs that precisely target key proteins in human cancers is fundamentally altering cancer therapeutics. However, before these ...

In Vivo Immunogenicity Screening of Tumor-Derived Extracellular Vesicles by Flow Cytometry of Splenic T Cells

In Vivo Immunogenicity Screening of Tumor-Derived Extracellular Vesicles by Flow Cytometry of Splenic T Cells

インビボ 脾臓T細胞のフローサイトメトリーによる腫瘍由来細胞外小胞の免疫原性スクリーニング

Immunogenic cell death of tumors, caused by chemotherapy or irradiation, can trigger tumor-specific T cell responses by releasing danger-associated ...

単層カーボンナノ チューブ (SWCNT) による生体内での多発性骨髄腫細胞の増殖の抑制-MALAT1 アンチセンス Oligos を配信

単層カーボンナノチューブ (SWCNT) による生体内での多発性骨髄腫細胞の増殖の抑制-MALAT1 アンチセンス Oligos を配信