Name: repression of multiple myeloma cell growth in vivo by single-wall carbon nanotube (swcnt)-delivered malat1 antisense oligos
Uploaded: 2018-12-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube SWCNT-delivered MALAT1 Antisense Oligos at JoVE.com

Авторы благодарят proteomic Лернер научно-исследовательский институт, геномные и изображений ядра за их помощь и поддержку. Финансирование: Эта работа была финансовой поддержке гранта NIH/NCI R00 CA172292 (для J.J.Z.) и начальных средств (для J.J.Z.) и клинические и поступательного науки совместных (АОЗТ) дело Вестерн Резерв университета Core использования пилот гранта (J.J.Z.). Эта работа использовали Конфокальный микроскоп Leica SP8, который был приобретен с финансирования из национальных институтов здравоохранения SIG Грант 1S10OD019972-01.

Все эксперименты с участием животных были предварительно одобренных IACUC клиники Кливленда (институциональный уход животных и использование Комитета).
1. Синтез функционализированных SWCNTs
<ol><li>Смешайте 1 мг SWCNTs, 5 мг DSPE-PEG2000-Амин и 5 мл стерилизованные нуклеиназы свободной ?...

<ol>
	<li>Jiang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNase+non-sensitive+and+endocytosis+independent+siRNA+delivery+system:+delivery+of+siRNA+into+tumor+cells+and+high+efficiency+induction+of+apoptosis.">RNase non-sensitive and endocytosis independent siRNA delivery system: delivery of siRNA into tumor cells and high efficiency induction of apoptosis.</a> Nanoscale. 5 (16), 7256-7264 (2013).</li><li>Murakami, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water-dispersed+single-wall+carbon+nanohorns+as+drug+carriers+for+local+cancer+chemotherapy.">Water-dispersed single-wall carbon nanohorns as drug carriers for local cancer chemotherapy.</a> Nanomedicine (Lond). 3 (4), 453-463 (2008).</li><li>Kam, N. W., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+nanotubes+as+intracellular+protein+transporters:+generality+and+biological+functionality.">Carbon nanotubes as intracellular protein transporters: generality and biological functionality.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (16), 6021-6026 (2005).</li><li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionalization+of+carbon+nanotubes+via.+cleavable+disulfide+bonds+for+efficient+intracellular+delivery+of+siRNA+and+potent+gene+silencing.">Functionalization of carbon nanotubes via. cleavable disulfide bonds for efficient intracellular delivery of siRNA and potent gene silencing.</a> Journal of the American Chemical Society. 127 (36), 12492-12493 (2005).</li><li>Kam, N. W., Liu, Z., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+nanotubes+as+intracellular+transporters+for+proteins+and+DNA:+an+investigation+of+the+uptake+mechanism+and+pathway.">Carbon nanotubes as intracellular transporters for proteins and DNA: an investigation of the uptake mechanism and pathway.</a> Angewandte Chemie International Edition in English. 45 (4), 577-581 (2006).</li><li>Ntziachristos, P., Abdel-Wahab, O., Aifantis, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+concepts+of+epigenetic+dysregulation+in+hematological+malignancies.">Emerging concepts of epigenetic dysregulation in hematological malignancies.</a> Nature Immunology. 17 (9), 1016-1024 (2016).</li><li>Evans, J. R., Feng, F. Y., Chinnaiyan, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bright+side+of+dark+matter:+lncRNAs+in+cancer.">The bright side of dark matter: lncRNAs in cancer.</a> Journal of Clinical Investigation. 126 (8), 2775-2782 (2016).</li><li>Ronchetti, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+lncRNA+transcriptional+fingerprints+characterize+progressive+stages+of+multiple+myeloma.">Distinct lncRNA transcriptional fingerprints characterize progressive stages of multiple myeloma.</a> Oncotarget. 7 (12), 14814-14830 (2016).</li><li>Wong, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+silencing+of+a+long+non-coding+RNA+KIAA0495+in+multiple+myeloma.">Epigenetic silencing of a long non-coding RNA KIAA0495 in multiple myeloma.</a> Molecular Cancer. 14, 175 (2015).</li><li>Schmidt, L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+long+noncoding+MALAT-1+RNA+indicates+a+poor+prognosis+in+non-small+cell+lung+cancer+and+induces+migration+and+tumor+growth.">The long noncoding MALAT-1 RNA indicates a poor prognosis in non-small cell lung cancer and induces migration and tumor growth.</a> Journal of Thoracic Oncology. 6 (12), 1984-1992 (2011).</li><li>Ji, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALAT-1,+a+novel+noncoding+RNA,+and+thymosin+beta4+predict+metastasis+and+survival+in+early-stage+non-small+cell+lung+cancer.">MALAT-1, a novel noncoding RNA, and thymosin beta4 predict metastasis and survival in early-stage non-small cell lung cancer.</a> Oncogene. 22 (39), 8031-8041 (2003).</li><li>Luo, J. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptomic+and+genomic+analysis+of+human+hepatocellular+carcinomas+and+hepatoblastomas.">Transcriptomic and genomic analysis of human hepatocellular carcinomas and hepatoblastomas.</a> Hepatology. 44 (4), 1012-1024 (2006).</li><li>Guffanti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+transcriptional+sketch+of+a+primary+human+breast+cancer+by+454+deep+sequencing.">A transcriptional sketch of a primary human breast cancer by 454 deep sequencing.</a> BMC Genomics. 10, 163 (2009).</li><li>Cho, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MALAT1+long+non-coding+RNA+is+overexpressed+in+multiple+myeloma+and+may+serve+as+a+marker+to+predict+disease+progression.">MALAT1 long non-coding RNA is overexpressed in multiple myeloma and may serve as a marker to predict disease progression.</a> BMC Cancer. 14, 809 (2014).</li><li>Handa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+non-coding+RNA+MALAT1+is+an+inducible+stress+response+gene+associated+with+extramedullary+spread+and+poor+prognosis+of+multiple+myeloma.">Long non-coding RNA MALAT1 is an inducible stress response gene associated with extramedullary spread and poor prognosis of multiple myeloma.</a> British Journal of Haematology. 179 (3), 449-460 (2017).</li><li>Hu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+the+MALAT1/PARP1/LIG3+complex+induces+DNA+damage+and+apoptosis+in+multiple+myeloma.">Targeting the MALAT1/PARP1/LIG3 complex induces DNA damage and apoptosis in multiple myeloma.</a> Leukemia. , (2018).</li><li>Lennox, K. A., Behlke, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+localization+of+long+non-coding+RNAs+affects+silencing+by+RNAi+more+than+by+antisense+oligonucleotides.">Cellular localization of long non-coding RNAs affects silencing by RNAi more than by antisense oligonucleotides.</a> Nucleic Acids Research. 44 (2), 863-877 (2016).</li><li>Kam, N. W., O'Connell, M., Wisdom, J. A., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbon+nanotubes+as+multifunctional+biological+transporters+and+near-infrared+agents+for+selective+cancer+cell+destruction.">Carbon nanotubes as multifunctional biological transporters and near-infrared agents for selective cancer cell destruction.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (33), 11600-11605 (2005).</li><li>Zeineldin, R., Al-Haik, M., Hudson, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+polyethylene+glycol+integrity+in+specific+receptor+targeting+of+carbon+nanotubes+to+cancer+cells.">Role of polyethylene glycol integrity in specific receptor targeting of carbon nanotubes to cancer cells.</a> Nano Letters. 9 (2), 751-757 (2009).</li><li>Amodio, N., D'Aquila, P., Passarino, G., Tassone, P., Bellizzi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+modifications+in+multiple+myeloma:+recent+advances+on+the+role+of+DNA+and+histone+methylation.">Epigenetic modifications in multiple myeloma: recent advances on the role of DNA and histone methylation.</a> Expert Opinion on Therapeutic Targets. 21 (1), 91-101 (2017).</li><li>Ahmad, N., Haider, S., Jagannathan, S., Anaissie, E., Driscoll, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA+theragnostics+for+the+clinical+management+of+multiple+myeloma.">MicroRNA theragnostics for the clinical management of multiple myeloma.</a> Leukemia. 28 (4), 732-738 (2014).</li><li>Amodio, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drugging+the+lncRNA+MALAT1+via.+LNA+gapmeR+ASO+inhibits+gene+expression+of+proteasome+subunits+and+triggers+anti-multiple+myeloma+activity.">Drugging the lncRNA MALAT1 via. LNA gapmeR ASO inhibits gene expression of proteasome subunits and triggers anti-multiple myeloma activity.</a> Leukemia. , (2018).</li><li>Highleyman, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+approves+fomivirsen,+famciclovir,+and+Thalidomide.+Food+and+Drug+Administration.">FDA approves fomivirsen, famciclovir, and Thalidomide. Food and Drug Administration.</a> BETA. 5, (1998).</li><li>Smith, R. J., Hiatt, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+new+drugs+for+homozygous+familial+hypercholesterolemia:+managing+benefits+and+risks+in+a+rare+disorder.">Two new drugs for homozygous familial hypercholesterolemia: managing benefits and risks in a rare disorder.</a> JAMA Internal Medicine. 173 (16), 1491-1492 (2013).</li><li>Aartsma-Rus, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval+of+Nusinersen+for+Spinal+Muscular+Atrophy+Makes+2016+the+Year+of+Splice+Modulating+Oligonucleotides.">FDA Approval of Nusinersen for Spinal Muscular Atrophy Makes 2016 the Year of Splice Modulating Oligonucleotides.</a> Nucleic Acid Therapeutics. 27 (2), 67-69 (2017).</li><li>Nelson, S. F., Miceli, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FDA+Approval+of+Eteplirsen+for+Muscular+Dystrophy.">FDA Approval of Eteplirsen for Muscular Dystrophy.</a> The Journal of the American Medical Association. 317 (14), 1480 (2017).</li><li>Liu, Z., Sun, X., Nakayama-Ratchford, N., Dai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supramolecular+chemistry+on+water-soluble+carbon+nanotubes+for+drug+loading+and+delivery.">Supramolecular chemistry on water-soluble carbon nanotubes for drug loading and delivery.</a> American Chemical Society Nano. 1 (1), 50-56 (2007).</li><li>Ali-Boucetta, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiwalled+carbon+nanotube-doxorubicin+supramolecular+complexes+for+cancer+therapeutics.">Multiwalled carbon nanotube-doxorubicin supramolecular complexes for cancer therapeutics.</a> Chemical communications (Cambridge). (4), 459-461 (2008).</li><li>Bianco, A., Kostarelos, K., Partidos, C. D., Prato, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomedical+applications+of+functionalised+carbon+nanotubes.">Biomedical applications of functionalised carbon nanotubes.</a> Chemical communications. (5), 571-577 (2005).</li><li>Hadidi, N., Kobarfard, F., Nafissi-Varcheh, N., Aboofazeli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+single-walled+carbon+nanotube+solubility+by+noncovalent+PEGylation+using+experimental+design+methods.">Optimization of single-walled carbon nanotube solubility by noncovalent PEGylation using experimental design methods.</a> International Journal of Nanomedicine. 6, 737-746 (2011).</li><li>Padilla-Parra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+imaging+of+endosome+acidification+and+single+retrovirus+fusion+with+distinct+pools+of+early+endosomes.">Quantitative imaging of endosome acidification and single retrovirus fusion with distinct pools of early endosomes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (43), 17627-17632 (2012).</li><li>Wu, H., Zhu, L., Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH-sensitive+poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG+co-polymer+micelles+for+cytosolic+drug+delivery.">pH-sensitive poly(histidine)-PEG/DSPE-PEG co-polymer micelles for cytosolic drug delivery.</a> Biomaterials. 34 (4), 1213-1222 (2013).</li><li>Oishi, M., Nagatsugi, F., Sasaki, S., Nagasaki, Y., Kataoka, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Smart+polyion+complex+micelles+for+targeted+intracellular+delivery+of+PEGylated+antisense+oligonucleotides+containing+acid-labile+linkages.">Smart polyion complex micelles for targeted intracellular delivery of PEGylated antisense oligonucleotides containing acid-labile linkages.</a> Chembiochem. 6 (4), 718-725 (2005).</li><li>Dong, H., Ding, L., Yan, F., Ji, H., Ju, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+polyethylenimine-grafted+graphene+nanoribbon+for+cellular+delivery+of+locked+nucleic+acid+modified+molecular+beacon+for+recognition+of+microRNA.">The use of polyethylenimine-grafted graphene nanoribbon for cellular delivery of locked nucleic acid modified molecular beacon for recognition of microRNA.</a> Biomaterials. 32 (15), 3875-3882 (2011).</li><li>Arunachalam, B., Phan, U. T., Geuze, H. J., Cresswell, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+reduction+of+disulfide+bonds+in+lysosomes:+characterization+of+a+gamma-interferon-inducible+lysosomal+thiol+reductase+(GILT).">Enzymatic reduction of disulfide bonds in lysosomes: characterization of a gamma-interferon-inducible lysosomal thiol reductase (GILT).</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97 (2), 745-750 (2000).</li><li>Lelimousin, M., Sansom, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+perturbation+by+carbon+nanotube+insertion:+pathways+to+internalization.">Membrane perturbation by carbon nanotube insertion: pathways to internalization.</a> Small. 9 (21), 3639-3646 (2013).</li><li>Thomas, M., Enciso, M., Hilder, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertion+mechanism+and+stability+of+boron+nitride+nanotubes+in+lipid+bilayers.">Insertion mechanism and stability of boron nitride nanotubes in lipid bilayers.</a> J Phys Chem B. 119 (15), 4929-4936 (2015).</li><li>Jin, H., Heller, D. A., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-particle+tracking+of+endocytosis+and+exocytosis+of+single-walled+carbon+nanotubes+in+NIH-3T3+cells.">Single-particle tracking of endocytosis and exocytosis of single-walled carbon nanotubes in NIH-3T3 cells.</a> Nano Letters. 8 (6), 1577-1585 (2008).</li><li>Jin, H., Heller, D. A., Sharma, R., Strano, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size-dependent+cellular+uptake+and+expulsion+of+single-walled+carbon+nanotubes:+single+particle+tracking+and+a+generic+uptake+model+for+nanoparticles.">Size-dependent cellular uptake and expulsion of single-walled carbon nanotubes: single particle tracking and a generic uptake model for nanoparticles.</a> American Chemical Society Nano. 3 (1), 149-158 (2009).</li><li>Ruggiero, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paradoxical+glomerular+filtration+of+carbon+nanotubes.">Paradoxical glomerular filtration of carbon nanotubes.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (27), 12369-12374 (2010).</li></ol>

Доказательств показал, что lncRNAs принимают участие в регуляции многочисленных физиологические и патофизиологические процедур в раках, включая мм7,8,9; они имеют потенциал, чтобы быть направлены для лечения рака, которые могут быть реализ...

ОУНТ является роман Наноматериал, которые могут доставить различные виды наркотиков, таких как белки, малые молекулы и нуклеиновые кислоты, стабильно и эффективно с идеальной переносимость и минимальная токсичность в пробирке1 и в естественных условиях2. Функционализированных ОУНТ имеет большой биосовместимость и растворимость в воде, может использоваться как трансфер для небольших молекул и может нести их проникнуть в клеточной мембраны3,4,5.
lncRNAs-группа РНК (> 200 nt), трансляции из генома к мРНК, но не могут быть переведены с белками. Увеличения доказательств показал, что lncRNAs участвуют в регуляции генов выражение6 и участвуют в инициации и прогрессирования большинства видов рака, включая мм7,8,9. MALAT1 это-обогащенный некодирующей Стенограмма 2 (NEAT2) и весьма сохранены lncRNA10. MALAT1 первоначально отражаются в метастатических не небольшие клеток легких рака легкого (НМРЛ)11, но был оверэкспрессировали в многочисленных опухолей5,12,13; Это один из наиболее сильно выраженным lncRNAs и коррелирует с плохим прогнозом в мм8,14. Уровень экспрессии MALAT1 значительно выше в роковой курс интрамедуллярный мм пациентов по сравнению с теми только диагнозом15мм.
В предыдущем исследовании, мы подтвердили, что анти MALAT1 oligos энергично привести к повреждение ДНК и апоптоз в16 мм с помощью gapmer антисмысловых олигонуклеотидов ДНК ориентации MALAT1 (анти MALAT1) в клетках мм. Gapmer ДНК состоит из антисмысловых ДНК и соединены 2'-OMe-РНК, которые могли бы побудить MALAT1 расщепление H РНКазы раз связана деятельность17. В естественных условиях доставки эффективность антисмысловых oligos по-прежнему ограничивает его клинического использования.
Чтобы проверить доставку эффект ОУНТ для анти MALAT1 gapmer oligos, gapmer анти MALAT1, что ДНК конъюгированных с DSPE-PEG2000-Амин функционализированных ОУНТ. ОУНТ анти MALAT1 затем вводят внутривенно в модель распространения мыши мм; поразительное ингибирование наблюдается после четырех сеансов.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1168px;" width="1167">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:324px;">SWCNTs</td>
			<td style="width:199px;">Millipore-Sigma</td>
			<td style="width:209px;">704113</td>
			<td style="width:436px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DSPE-PEG2000-Amine</td>
			<td>Avanti Polar Lipids</td>
			<td>880128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">bath sonicator</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97043-992</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">4 mL centrifugal filter</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>Z740208-8EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">UV/VIS spectrometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>accuSkan GO UV/Vis Microplate Spectrophotometer</td>
			<td>extinction coefficient of 0.0465 L/mg/cm at 808 nm</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Sulfo-LC-SPDP</td>
			<td>ProteoChem</td>
			<td>c1118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">DTT solution</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>43815</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NAP-5 column</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0853-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">in vivo imaging system</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">NOD.CB17-Prkdcscid/J mice</td>
			<td>Charles River lab</td>
			<td>250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Flow cytometer</td>
			<td>Becton Dickinso</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Lipofectamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11668019</td>
			<td>Lipofectamine2000</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10437-028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RMPI-1640 medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11875-093</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MALAT1-QF:</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td>5&#8217;- GTTCTGATCCCGCTGCTATT - 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">MALAT1-QR:</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td>5&#8217;- TCCTCAACACTCAGCCTTTATC - 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GAPDH-QF:</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td>5&#8217;- CAAGAGCACAAGAGGAAGAGAG - 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">GAPDH-QR:</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td>5&#8217;- CTACATGGCAACTGTGAGGAG - 3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Quantitative PCR using SYBR Green PCR master mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A25780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">RevertAid first-stand cDNA synthesis kit</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>K1621</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">anti-MALAT1</td>
			<td>synthesized by IDT Company</td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;-mC*mG*mA*mA*mA*C*A*T*T 
			*G*G*C*A*C*A*mC*mA*mG*mC*mA-3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Viability Assay Kit</td>
			<td>Promega Corporation</td>
			<td>G7570</td>
			<td>CellTiter-GloLuminescent Cell Viability Assay Kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">accuSkan GO UV/Vis Microplate Spectrophotometer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">centrifugal filter</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>UFC910008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPSS software</td>
			<td>IBM</td>
			<td>version 24.0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">D-Luciferin</td>
			<td>Millipore-Sigma</td>
			<td>L9504</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

repression of multiple myeloma cell growth in vivo by single-wall carbon nanotube (swcnt)-delivered malat1 antisense oligos

Одностенные углеродные нанотрубки (ОУНТ) является новый тип наночастиц, который был использован для доставки нескольких видов наркотиков в клетки, такие как белки, олигонуклеотиды и синтетических наркотиков мелкомолекулярных. ОУНТ имеет настраиваемые размеры, большой поверхностный площади и можно гибко привязать с наркотиками через различные модификации на его поверхности; Таким образом это идеальная система для транспортировки наркотиков в клетки. Длиной некодирующих РНК (lncRNAs) являются кластер некодирующей РНК больше чем 200 nt, который нельзя преобразовать в белок, но играют важную роль в биологических и патофизиологических процессов. Стенограмма аденокарциномы легкого с метастазами связанные 1 (MALAT1) является весьма сохраняется lncRNA. Было продемонстрировано, что более высокие уровни MALAT1 связаны с плохим прогнозом различные виды рака, в том числе множественной миеломы (мм). Мы показали, что MALAT1 регулирует ДНК клеток и ремонт смерти в мм; Таким образом MALAT1 может рассматриваться как терапевтические мишенью для мм. Однако эффективной доставки антисмысловых oligo подавляют/нокдаун MALAT1 в естественных условиях по-прежнему является проблемой. В этом исследовании мы изменить ОУНТ с ПЭГ-2000 и спряжения oligo анти MALAT1 к нему, проверить доставку этого соединения в пробирке, вставляют его внутривенно распространение модель мыши мм и наблюдать значительное торможение прогрессирования мм, который указывает что ОУНТ является идеальным доставки Трансфер для анти MALAT1 gapmer ДНК.

Чтобы продемонстрировать эффект ингибирования анти MALAT1 gapmer ДНК в мм, мы постучал вниз выражение MALAT1 и использовал его в H929 и MM.1S клеток. Сорок восемь часов спустя, клетки были собраны для анализа эффективности нокдауна и статус апоптоз в клетках transfected с анти MALAT1 gapmer или...

Watch this Scientific Journal Video about Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube SWCNT-delivered MALAT1 Antisense Oligos at JoVE.com

Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube SWCNT-delivered MALAT1 Antisense Oligos

Эта рукопись описывает синтез одностенных углеродных нанотрубок (ОУНТ)-конъюгированных MALAT1 антисмысловых gapmer ДНК олигонуклеотида (ОУНТ анти MALAT1), который демонстрирует надежную доставку ОУНТ и мощный терапевтический эффект анти MALAT1 в vitro и in vivo. Методы, используемые для синтеза, модификация, спряжение, и описаны инъекции ОУНТ анти MALAT1.

Подавление роста клетки множественной миеломы в Vivo, одностенные углеродные нанотрубки (ОУНТ)-доставлены антисмысловых Oligos MALAT1

The single-wall carbon nanotube (SWCNT) is a new type of nanoparticle, which has been used to deliver multiple kinds of drugs into cells, such as ...

Метод, который мы используем здесь, может помочь упаковать олигонуклеотид с одностенной углеродной нанотрубкой, которая является новым типом наночастиц для доставки лекарств. Основным преимуществом этого метода является более эффективная доставка олигонуклеотидных препаратов в клетки in vivo. Последствия этого метода распространяются на исследования множественной миеломы, потому что она введена наночастицы для улучшения доставки олигонуклеотидных препаратов.С помощью этого метода может обеспечить понимание лечения множественной миеломы. Он также может быть применен к другим заболеваниям и спрягаться с другими грузами, такими как белки и мелкие молекулы. Во-первых, смешать один миллиграмм одностенных углеродных нанотрубок, пять миллиграммов амина DSPE-PEG 2000 и пять миллилитров стерилизованной нуклеазной воды в 20-миллилитровом стеклянном сцинтилляционном флаконе.Sonicate флакон в водяной бане sonicator на уровне мощности 90 Вт в течение одного часа при комнатной температуре. После соникации центрифугают флакон в 24 000 раз г в течение шести часов. Затем соберите супернатантное решение.Добавьте один миллилитр одностенного раствора углеродных нанотрубок в 100-килодальтонное молекулярное устройство для центробежного фильтра отсечения, за которым последуют четыре миллилитров стерилизованной воды без нуклеазы. Центрифуга в течение 10 минут при 4000 раз г при комнатной температуре, чтобы удалить избыток амина. Добавьте 0,5 миллиграмма Sulfo-LC-SPDP к 450 микролитров нанотрубки углерода, функционализированной из амина.Затем добавьте 50 микролитров 10x PBS и инкубировать в течение двух часов при комнатной температуре. Затем добавьте реакционной смеси в 100-килодальтонный молекулярный вес устройства центробежного фильтра, за которым последуют четыре миллилитров воды без нуклеазы. Центрифуга образца в течение 10 минут при температуре 4 000 г при комнатной температуре, чтобы удалить избыток Сульфо-LC-SPDP.Соберите обработанный Сульфо-LC-SPDP раствор амина из углерода, оставленный в фильтре, и разбавьте его 500 микролитров ранее подготовленного раствора анти-МАЛАТ1-Cy3. Затем инкубировать образец при четырех градусах по Цельсию в одночасье. Для достижения наилучших результатов сравнения, случайным образом организовать 14 мышей в пробных или контрольных групп с семью в каждой группе, и с тем же соотношением мужчины к женщине в каждой группе.Затем очистите скамейку и стерилизовать ее 70% этилового спирта. Используйте лампу для обогрева одной из мышей, чтобы помочь хвостовой вене появиться. Сдерживайте мышь должным образом с помощью хеверщика для впрыска хвоста.Ввилите MM.1S-luc/mCherry клетки в 50 микролитров PBS через хвостовую вену. Нажмите на место инъекции спиртового тампона в течение 30 секунд. Затем отметите впрыснутую мышь и верните ее в чистую клетку.На седьмой день, после инъекции клеток MM1S, ввимите 50 микролитров PBS, содержащих одностенный углеродный нанотрубок анти-MALAT1 в хвостовую вену мыши. Затем нажмите на место инъекции спиртовой мазок в течение 30 секунд. Наблюдайте за локальным кровотечением на хвосте и общим поведением мыши в течение одной минуты, а затем верните его в чистую клетку.Наблюдайте все введенные мыши снова перед возвращающ клеткой к стойке для того чтобы убеждаться что впрыски допущены наилучшим образом. Взвесить каждую мышь перед вскрытием. Соберите периферическую кровь из сердца для полного анализа крови, выполняемого банкоматом счетчика клеток крови.Затем соберите ткани костного мозга, селезенки, лимфатических узлов, почек и тканей с видимыми метастазами. Извлекайте РНК и белок из образцов костного мозга. Исправить все оставшиеся ткани в формалин.После 24 часов фиксации, погрузите образцы костей в 0,5-молярный раствор ЭДТА в течение пяти дней для декалькации. Затем погрузите все образцы в 75%-ный этиловый спирт для длительного хранения. Результаты ПЦР ПО показали, что анти-МАЛАТ1 gapmeR ДНК сбил выражение MALAT1 и индуцированных апоптоза значительно в H929 и MM.1S клеток.Одностенный углеродный нанотрубок anti-MALAT1-Cy3 был доставлен в ядро клеток ММ и значительно подавлял эндогенный уровень MALAT1 как в клетках H929, так и в MM.1S. Жизнеспособность клетки BMEC-1 не имеет существенной разницы после обработки одностенных углеродных нанотрубок анти-MALAT1-Cy3 или контроля в различных дозах и точках времени. Это указывает на то, что токсичность одностенной углеродной нанотрубки anti-MALAT1-Cy3 имеет ограниченную и приемлемую токсичность для нормальных клеток в высокой дозировке.Для оценки воздействия одностенной углеродной нанотрубки anti-MALAT1 in vivo была создана модель мыши, распространяемая человеком MM. Люциферон сигналы мышей в одностенной углеродной нанотрубки анти-MALAT1 группы лечения были удивительно ниже по сравнению с контролем после 21 дней лечения. Из этих результатов был сделан вывод, что одностенный углеродный нанотрубок анти-MALAT1 лечения с помощью внутривенных инъекций может доставить анти-MALAT1 олиго в опухолевые клетки эффективно.Никаких существенных побочных эффектов лечения не наблюдалось, что свидетельствует о том, что одностенный углеродный нанотрубок анти-MALAT1 инъекции является безопасным лечением для мышей. При попытке этой процедуры, важно помнить, что состав молекулы клетки будет влиять на доставку, эффективность и терапевтический эффект олигонуклеотидных препаратов. После этой процедуры, другие методы, такие как спряжение белков или малых молекул могут быть выполнены для того, чтобы ответить на дополнительные вопросы.Например, использование одностенных углеродных нанотрубок для доставки других лекарств.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Repression of Multiple Myeloma Cell Growth In Vivo by Single-wall Carbon Nanotube (SWCNT)-delivered MALAT1 Antisense Oligos

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG)

A Protocol for Rapid Post-mortem Cell Culture of Diffuse Intrinsic Pontine Glioma DIPG

Протокол для быстрой Посмертное культуре клеток диффузной Характеристическая Понтийской глиомы (DIPG)

Diffuse Intrinsic Pontine Glioma (DIPG) is a childhood brainstem tumor that carries a universally fatal prognosis. Because surgical resection is not a ...

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

In Vivo EPR Assessment of pH, pO2, Redox Status, and Concentrations of Phosphate and Glutathione in the Tumor Microenvironment

В естественных условиях ЭПР Оценка рН, pO2, окислительно-восстановительного состояния и концентрации фосфатов и глутатиона в микроокружения опухоли

This protocol demonstrates the capability of low-field electron paramagnetic resonance (EPR)-based techniques in combination with functional paramagnetic ...

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Смешанных биолюминесцентных и позитронный выбросов томография/вычислительная томография томография множественной миеломы ксенотрасплантатов костного мозга мышей Нагель

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

Neutrophil Extracellular Traps Generated by Low Density Neutrophils Obtained from Peritoneal Lavage Fluid Mediate Tumor Cell Growth and Attachment

Нейтрофильные внеклеточного ловушки, порожденных низкой плотности нейтрофилов получены перитонеальный лаваж жидкости посредником рост опухолевых клеток и вложения

Activated neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which can capture and destroy microbes. Recent studies suggest that NETs are involved ...

Evaluation of Biomarkers in Glioma by Immunohistochemistry on Paraffin-Embedded 3D Glioma Neurosphere Cultures

Оценка биомаркеров в глиомы, иммуногистохимия на парафин врезанных 3D глиомы нейросферы культур

Analysis of protein expression in glioma is relevant for several aspects in the study of its pathology. Numerous proteins have been described as ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

В Vivo ингибирование микроРНК для уменьшения роста опухоли у мышей

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

Мышиная модель для исследования роли связанных с раком фибробластов в росте опухоли

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

An Ex Vivo Brain Slice Model to Study and Target Breast Cancer Brain Metastatic Tumor Growth

Модель среза мозга Ex Vivo для изучения и нацеливания на метастатический рост опухоли головного мозга рака молочной железы

Brain metastasis is a serious consequence of breast cancer for women as these tumors are difficult to treat and are associated with poor clinical ...

Defining Gene Functions in Tumorigenesis by Ex vivo Ablation of Floxed Alleles in Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells

Defining Gene Functions in Tumorigenesis by Ex vivo Ablation of Floxed Alleles in Malignant Peripheral Nerve Sheath Tumor Cells

Определение функций генов в опухолевом генезе путем абляции Ex vivo флоксированных аллелей в злокачественных опухолевых клетках оболочки периферических нервов

The development of new drugs that precisely target key proteins in human cancers is fundamentally altering cancer therapeutics. However, before these ...

In Vivo Immunogenicity Screening of Tumor-Derived Extracellular Vesicles by Flow Cytometry of Splenic T Cells

In Vivo Immunogenicity Screening of Tumor-Derived Extracellular Vesicles by Flow Cytometry of Splenic T Cells

В городе Виво Скрининг иммуногенности внеклеточных везикул опухолевого происхождения методом проточной цитометрии селезеночных Т-клеток

Immunogenic cell death of tumors, caused by chemotherapy or irradiation, can trigger tumor-specific T cell responses by releasing danger-associated ...