Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

وقد تم دعم هذا العمل جزئيا من قبل المعاهد الوطنية للصحة والقلب الوطني والرئة ومعهد الدم (R01HL107632).

اللوازم والكاشفات المذكورة أدناه هي لتحديد الكلي كامل عدد neفرون في الماوس واحد ، وهذا هو ، اثنين من الكلي. يتم تحديد التعديلات لاستخدام طريقه النقع الحمضية للفئران مع العلامات النجميه. وتتفق جميع البروتوكولات التجريبية مع الدليل الوطني للمعاهد الصحية لرعاية واستخدام المختبرات الحيواني?...

<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

مع تقنيه تجريبية جيده ، وطريقه النقع حمض مثاليه لتقدير عدد النيفرون في الكلي كله. علي الرغم من ان الكلي يذوب في الحمض ، لا تزال الكبيبات سليمه إلى حد كبير ويمكن التعرف عليها بسهوله ، مما يجعل عد الكبيبات الفردية سهلا ومباشرا نسبيا. تقنيه النقع الحمضية مفيده بشكل خاص لعده أسباب. أولا ، طريقه ...

ال [نفرون] علي حد سواء الاساسيه انشائيه والوحدة وظيفية من الكلية1. هيكليا ، يتكون النيفرون من الكبيبه (الشعيرات الدموية و podocytes) الموجودة داخل كبسوله بومان والبولية الكلوية ، التي تتكون من الأنابيب القريبة ، حلقه Henle ، والبولي البعيد الذي ينتهي في قناه جمع. وظيفيا ، دور النيفرون هو الترشيح وأعاده امتصاص المياه والشوارد وإفراز النفايات. بشكل عام ، يكتمل تكوين الكلي في 36 أسابيع من الحمل في البشر وبعد فتره وجيزة من الولادة في عده أنواع مثل الفار والجرذ2. تشير الأوقاف إلى العدد الإجمالي للنيفرون الذي يولده الفرد ، في حين ان عدد النيفرون هو العدد الإجمالي للنيفرون الذي يقاس في اي وقت بعد الولادة3. وغالبا ما تستخدم مصطلح neفرون عدد وعدد الكبيبي بالتبادل. لان هناك واحد فقط الكبيبولوس في نيفرون ، وتقييم عدد الكبيبات هو بديل مهم لتقدير عدد النيفرون.
التقييم من [نفرون] هبه و [نفرون] رقم من فائده سريريه بما ان دراسات قد برهنوا علاقة بين [نفرون] هبه وقلل [نفرون] أرقام مع يزاد حدوث من امراض قلبي وعائي4,5 ،6،7،8،9،10،11،12،13،14، 15. استنادا إلى النتائج في الكلي في تشريح الجثة, لاحظ برينر ان الافراد ارتفاع ضغط الدم المقدمة مع عدد اقل من الإجمالي من النورموتينسيفي الافراد16. وهكذا ، افترض برينر ان هناك علاقة عكسية بين عدد نيفرون وخطر الاصابه بارتفاع ضغط الدم في وقت لاحق في الحياة. [برينر] افترض أيضا ان تخفيض في [نفرون] رقم كان عوضت ب ال [نيفرون] ان بقي. من أجل الحفاظ علي معدل الترشيح العادي في الكلي ، نفرون المتبقية تعويض عن طريق زيادة مساحة السطح الكبيبي (تضخم الكبيبي) ، التالي العمل علي تخفيف اي تاثير سلبي من فقدان neفرون علي وظيفة الكلي4 ،16.
بينما واقيه في المدى القصير ، تضخم الكبيبي ، علي المدى الطويل ، يؤدي إلى زيادة احتباس الصوديوم والسوائل ، وزيادة حجم السوائل خارج الخلية ، وزيادات في ضغط الدم الشرياني ، مما يؤدي إلى حلقه مفرغه من زيادات أخرى في الضغط الشعري الكبيبي ، فرط الترشيح الكبيبي ، وتندب النيفرون (التصلب) والاصابه4،16.
الحصول علي تقديرات أو حسابات من عدد نيفرون تقدم اثنين من المزايا التجريبية: 1) انه يوفر معلومات بشان عمليه نشاه الكلي ، والتي يمكن بعد ذلك ان تكون مرتبطة بجينات محدده أو عوامل في الجنين أو بيئة الام والجنين ، و 2) هناك جمعيه من عدد نيفرون مع امراض القلب والاوعيه الدموية ، التالي ، هناك احتمال ان يتم استخدام تقديرات عدد نيفرون للتنبؤ مخاطر القلب والاوعيه الدموية في المستقبل2،17،18، 19 , 20 , 21 , 22. بالاضافه إلى بيئة الام والجنين, العديد من الامراض تؤثر بشكل مباشر علي عدد نيفرون ووظائف الكلي, بما في ذلك تصلب الشرايين, مرض السكري, ارتفاع ضغط الدم, وحتى الشيخوخة العادية2,9, 10،11،12،22،23. التالي ، فان التقييم الكلي لعدد النيفرون الكلية مهم لفهم كل من العوامل الوراثية والبيئية التي تؤثر علي نشاه الكلي (ايالهبات النيفرون) وعدد النيفرون علي مدي حياه الشخص والآثار الناتجة علي وظيفة الكلي وصحة القلب والاوعيه الدموية.
حاليا ، هناك العديد من الطرق المتاحة لتحديد والتقدير الكمي لعدد نيفرون ، لكل منها مزاياه الخاصة والقيود24،25،26،27،28 و29و30. وتشمل الأساليب المتطورة لتحديد الكلي بأكمله عدد neفرون الطرق الفراغية ، مثل طريقه dissector/مجزا ، والتصوير بالرنين المغناطيسي25،26. في كثير من الأحيان تعتبر الذهب القياسية لتحديد كامل الكلي عدد neفرون ، وأسلوب dissector/مجزا علي حد سواء مكلفه وتستغرق وقتا طويلا. وقد وفرت التطورات الاخيره والتحسن في التصوير بالرنين المغناطيسي وتجهيز الاداات اللازمة لحساب كل neفرون كل علي حده. ومع ذلك ، التصوير بالرنين المغناطيسي ليس فقط مضيعه للوقت ولكن أيضا مكلفه للغاية. الاضافه إلى ذلك ، فان كلا من أسلوب التفكيك/التجزئة والتصوير بالرنين المغناطيسي يتطلب خبره تقنيه متقدمة ، مما يحد من استخدام هذه الأساليب في غالبيه مختبرات البحوث.
معظم طرق تحديد عدد نيفرون جعل التهم أو التقديرات علي أساس تحديد الكبيبات ، كما انها يسهل التعرف عليها هيكليا. في هذه الورقة ، يتم وصف طريقه النقع الحمضية لتقدير عدد النيفرون في الكلي كله وأظهرت27. طريقه النقع الحمضية سريعة وموثوق بها ، واقل تكلفه بكثير من الطرق الأخرى ، مثل طريقه التفكيك/التجزئة والتصوير بالرنين المغناطيسي. وعلاوة علي ذلك ، فان طريقه النقع الحمضية توفر تقديرات قابله للتكرار للغاية من عدد النيفرون التي تم الإبلاغ عنها ضمن نطاق تلك التي تم تحديدها باستخدام التصوير بالرنين المغناطيسي26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

[نفرون] يشير هبه إلى الرقم إجماليه [نيفرون] [بورن] فرده مع, بما ان [كليجنسيس] في أناس يكون أتمت ب 36 أسابيع الحمل وما من [نيوفرون] جديده يكون شكلت [بوست-بيرث]. يشير عدد النيفرون إلى العدد الإجمالي للنيفرون المقيسة في اي وقت بعد الولادة. وتؤثر كل من العوامل الوراثية والبيئية علي كل من الوقف والعدد. فهم كيف الجينات أو العوامل محدده تؤثر علي عمليه نشاه الكلي وفقدان neفرون أو زوال أمر مهم كافراد مع انخفاض الهبات neفرون أو عدد يعتقد ان تكون في خطر اعلي من تطوير امراض الكلي أو القلب والاوعيه الدموية. سيكون فهم كيفيه تاثير التعرض البيئي علي مدي حياه الشخص علي عدد النيفرون أيضا أمرا حيويا في تحديد مخاطر المرض في المستقبل. التالي ، فان القدرة علي تقييم الكلي كامل neفرون عدد بسرعة وبشكل موثوق هو شرط التجريبية الاساسيه لفهم أفضل أليات التي تسهم في أو تعزيز نشاه الكلي أو فقدان neفرون. هنا ، ونحن وصف طريقه النقع الحمضية لتقدير الكلي كامل عدد neفرون علي أساس الاجراء الموصوف من قبل Damadian ، الشوايري ، و Bricker ، مع تعديلات طفيفه. طريقه النقع حمض يوفر تقديرات سريعة وموثوق بها من عدد نيفرون (كما تقييمها من قبل العد الكبيبات) التي هي في حدود 5 ٪ من تلك التي حددت باستخدام أكثر تقدما ، وان كانت مكلفه ، وأساليب مثل التصوير بالرنين المغناطيسي. وعلاوة علي ذلك ، فان طريقه النقع الحمضية هي طريقه ممتازة عاليه الانتاجيه لتقييم عدد النيفرون في اعداد كبيره من العينات أو الظروف التجريبية.

وفيما يلي التقديرات التمثيلية للعدد الكلي neفرون الكلية من نموذج الماوس المعمول بها من ارتفاع ضغط الدم ونموذج الفئران الوراثية لمرض الكلي المزمن المرتبط بالسن. يتم تسليط الضوء علي الخصائص الرئيسية لتحديد الكبيبات ، مثل الهيكل الكروي مع أو بدون الهياكل المرفقة قبل أو بعد...

Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

تقدير عدد النيفرون في الكلي الكامل باستخدام طريقه النقع الحمضي

تقديرات كامله عدد neفرون الكلي هي مهمة سريريا وتجريبيا, كما ان هناك علاقة عكسية بين عدد النيفرون وزيادة خطر الاصابه بامراض الكلي والقلب والاوعيه الدموية. هنا ، يتم التدليل علي استخدام طريقه النقع الحمضية ، والتي توفر تقديرات سريعة وموثوقه للعدد الكلي من النيفرون.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

يمكن أن تساعد طريقة التآكل الحمضي في الإجابة على الأسئلة الرئيسية حول الكلية وكيف تساهم جينات محددة في تطوير النبيرون أو تؤثر فيه وكذلك كيفية تأثير حالات محددة، مثل مرض السكري أو ارتفاع ضغط الدم، على عدد النبيرون. وهذا أمر مهم لأن العدد الإجمالي لnehrons الأفراد الذين ولدوا مع يتم تحديد أثناء نمو الجنين وفقدان nephrons وقد ارتبط مع أمراض الكلى. المزايا الرئيسية لطريقة الهضيب الحمضية هي أنها أسرع وأكثر قابلية للاستنساخ وغير مكلفة وأقل استهلاكًا للوقت من طرق عد الكلى الأخرى ، مثل التصوير بالرنين المغناطيسي.هذه التقنية تسهل الارتباط من تأثير في عدد النيفرون على وظيفة الكلى، وهو أمر مهم لتعزيز فهمنا لكيفية الجينات محددة تؤثر على وظيفة النيفرون والتنمية. دراسة الجينات أو العوامل التي تؤثر على عدد الكلي nephron سيكون له دور فعال في تطوير الطرق الدوائية أو الوراثية المصممة للحد من فقدان النيفرون المرتبطة بالأمراض. مع تقنية تجريبية جيدة والممارسة، وينبغي أن الأفراد الجدد لهذه الطريقة بسهولة الحصول على إتقان أسلوب الماكينة الحمضية السماح تقديرات موثوقة وقابلة للاستنساخ من أرقام الكلية الكلية بأكملها nephron.ابدأ باستخدام مقص جراحي جيد لفتح تجويف البطن في الماوس على طول خط الوسط. تحويل بعناية الأمعاء والdipose التناسلية إلى الجانب الأيمن من الحيوان. باستخدام التشريح الإجمالي، عزل الكلى اليسرى وقطع الشريان الكلوي الأيسر والوريد لإزالة بعناية الكلى وضع الجهاز في قارب وزن المسمى بشكل مناسب من برنامج تلفزيوني.جمع الحق في الكلى بنفس الطريقة ووضع كل من الكلى على الشاش الجراحية قبل مبللة مع برنامج تلفزيوني. إزالة بسرعة أي الأنسجة غير الكلوية وأتباعه وكبسولات الكلى. ثم وزن كل كلية تسجيل كل على حدة وزن الجهاز الأيسر والأيني على حدة.بعد وزنها، ضع كل كلية مرة أخرى إلى قارب يزن المسمى بشكل مناسب دون برنامج تلفزيوني واستخدم شفرة حلاقة نظيفة لقطع كل عضو في نصف طول. وضع كل نصف قطع الجانب كلية أسفل وقطع كل نصف إلى اثنين ملليمتر أو أصغر قطعة. باستخدام شفرة الحلاقة نفسها، قم بنقل قطع الكلى المفرومة بعناية إلى أنبوب مخروطي يحمل علامة مناسبة 15 ملليلتر.في غطاء الدخان جيدة التهوية، إضافة خمسة ملليلتر من حمض الهيدروكلوريك المولر ستة إلى كل أنبوب. بعد ذلك، يهيج بلطف خليط حمض الكلى قبل وضع الأنابيب في حمام مائي 37 درجة مئوية لمدة 90 دقيقة. في نهاية الهضيب الحمضي، قم بتوصيل إبرة قياس 18 إلى حقنة واحدة بخمس ملليلتر لكل كلية وإزالة المكبس المحاقن بعناية.ضع المحاقن في أنابيب مخروطية 50 ملليلتر فردية في غطاء الدخان وصب حلول الكلى في الطرف المفتوح لكل حقنة تضع الأنابيب الفارغة جانباً في رف أنبوب الاختبار. ثم استبدال بعناية المكبس للبثق بطيئة من كل حل من خلال الإبر في أنابيب 50 ملليلتر. غسل أنابيب مخروطية 15 ملليلتر مع خمسة ملليلتر من حل PBS لكل أنبوب يحوم برنامج تلفزيوني ل solubilize أي أنسجة الكلى المتبقية.بثق محتويات الغسيل في أنبوب 50 ملليلتر المناسبة كما أظهرت للتو. بعد البثق غسل الثالثة، وتجهيز كل حقنة مع إبرة قياس 21. بثق محتويات أنابيب 50 ملليلتر في مجموعة ثانية من أنابيب 50 ملليلتر من خلال غسل إبرة أصغر تحمل وقذف أول 50 ملليلتر محتويات أنبوب ثلاث مرات مع برنامج تلفزيوني جديد كما هو موضح.بعد الغسيل الثالث والبثق، جلب الحجم الإجمالي في كل أنبوب تصل إلى 50 ملليلتر مع برنامج تلفزيوني إضافي ووضع الأنابيب في رف على لوحة الروك في أربع درجات مئوية بين عشية وضحاها. في غضون خمسة أيام من المعالجة، ضع شبكة تحتوي على 16 قسمًا منفصلًا على الجزء السفلي من ستة آبار من 12 بئرًا. عكس بلطف أنابيب الكلى حل عدة مرات ل resuspend الأنسجة بيليه.إضافة بعناية ثلاثة 500 ميكرولتر aliquots من كل حل متجانس لكلية إلى كل من ثلاثة آبار من 12 بئر لوحة. تمييع محتويات كل بئر مع حجم متساو من برنامج تلفزيوني. ضع الصحن على خشبة المجهر المقلوب.تحديد الكبيات من قبل هيكلها كروية، هوى المحمر، والشريان قبل أو آخر تعلق على الهيئات من الكبيبات الفردية. حساب عدد من glomeruli لكل قسم الشبكية إلى مجموع العد لكل شبكة لحساب العدد الإجمالي من glomeruli في بئر. ثم مضاعفة عدد من glomeruli في كل مرة 100 إلى الحصول على متوسط عدد من الكبيبات لكلية.في هذه التجربة التمثيلية ، كان إجمالي عدد النبيرون في الفئران المشبعة بالمركبات لمدة 14 يومًا حوالي 12500 نيفرون لكل كلية. أنجيوتنسين ضخ اثنين ومع ذلك، زيادة الضغط الأذيني بنحو 40 ملليمتر من الزئبق وارتبطت مع انخفاض كبير ما يقرب من 26٪ في العدد الكلي النيفرون. في هذا النموذج الجيني للشيخوخة الكلوية الفئران، تم حساب الحيوانات التي ولدت مع كليتين لاحتواء حوالي 27،500 nephrons لكلية بعد الهش الحمض كما أظهرت، في حين تم العثور على الفئران التي ولدت مع كلية الانفرادي أن لديها أقل بكثير مجموع أرقام النبيرون.وكانت التقديرات المستمدة من كلتا التجربتين متسقة مع النطاقات التي تم الإبلاغ عنها سابقاً في الفئران. طريقة الهضيب الحمضية مثالية لتقدير أعداد النيفرون في الكلى الكاملة ، خاصة في المختبرات غير المجهزة بتقنيات أكثر كثافة في العمالة والتكلفة باهظة لعد النيفرون ، مثل طريقة كسور كسورية disector أو التصوير بالرنين المغناطيسي. هذه الطريقة تسمح عالية الإنتاجية، كفاءة، وتقدير استنساخ من الكلى كامل عدد nephron التي هي ضمن 5٪ من الأرقام التي يحددها التصوير بالرنين المغناطيسي.تقييم عدد النيفرون هو من أهمية سريرية كما انخفض عدد النيفرون ارتبطت مع زيادة خطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية, مثل أمراض الكلى المزمنة. لا تنس أن العمل مع حمض الهيدروكلوريك يمكن أن يكون خطيرا للغاية وأنه ينبغي اتخاذ الاحتياطات، مثل ارتداء القفازات، النظارات الواقية، ومعطف المختبر.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

وهناك طريقة لعزل جزيرة الفئران تحت المحفظة وزراعة الكلى

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

أسلوب الرواية تطوير أدوية لمكافحة السرطان باستخدام Explants ورم العينات الجراحية


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

وα الاختبار: رابيد تعداد CD4 خالية من الخلايا عن طريق اللعاب الجامعة

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

الماوس زرع الكلى: نماذج من طعم خيفي رفض

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

سوي الحرارة<em&gt; السابقين فيفو</em&gt; الإرواء الكلى للحفاظ على الكلى الطعوم قبل الزرع

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

تسليم داخل الأوعية الدموية من البيولوجيات إلى الكلى الجرذ

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

A طريقة لقياس أداء الطرف العلوي في الحياة اليومية عن طريق التسارع

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

الجسم كله والإقليمية الكمي لنشاط الإنسان براون الأنسجة الدهنية باستخدام 18وفدج PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

الكشف على أساس الصفائح الدموية من أكسيد النيتريك في الدم عن طريق قياس الفسفرة بسب

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

طريقة عالية الإنتاجية في الموقع لتقدير البليدي النووي الكبدي في الفئران

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...