Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Dette arbejde blev delvist støttet af National Institutes of Health, national Heart, Lung og Blood Institute (R01HL107632).

Forsyninger og reagenser, der er anført nedenfor, er til bestemmelse af hele nyre Neron nummer i en mus, det vil altså to nyrer. Ændringer for anvendelse af syre udblødning metode til rotte er identificeret med asterisker. Alle eksperimentelle protokoller er i overensstemmelse med de nationale Institut for sundhed guide til pleje og brug af forsøgsdyr og blev godkendt af den institutionelle Animal Care og brug Udvalget på University of Mississippi Medical Center.
1. nyre isolation procedur...

<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

Med god eksperimentel teknik, syre udblødning metode er ideel til at estimere Neron nummer i hele nyrerne. Selv om nyrerne er opløst i syre, glomeruli forbliver stort set intakt og er let identificerbare, hvilket gør optællingen af individuelle glomeruli relativt let og ligetil. Den syremace ration teknik er særlig fordelagtig af flere grunde. For det første er syre udblødning metode en hurtig og bekvem metode, der kræver relativt lidt i form af udgifter og fysisk anstrengelse. Alle reagenser og forbrugsstoffer, ...

Den Neron er både den grundlæggende strukturelle og funktionelle enhed af nyrerne1. Strukturelt, Neron består af glomerulus (kapillærer og podocytter), der ligger inden for Bowmans kapsel og den renale tubulære, der består af den proksimale tubulære, loop af Henle, og den distale tubulære, der slutter ind i opsamlings kanalen. Funktionelt, den rolle, som Neron er filtrering og reabsorption af vand og elektrolytter og udskillelsen af affald. I almindelighed, nefrogenese er afsluttet på 36 uger af drægtighedsperioden hos mennesker og kort efter fødslen i flere arter som mus og rotte2. Nephron begavelse refererer til det samlede antal nefronov, som en person er født med, mens Neron nummer er det samlede antal nefronov målt på ethvert tidspunkt efter fødslen3. Betegnelsen Neron nummer og glomerulære tal bruges ofte i flæng. Fordi der kun er en glomerulus pr. Neron, vurderingen af glomeruli tal er en vigtig surrogat for estimering af Neron nummer.
Vurderingen af nephron-begavelsen og nephron-nummeret er af klinisk interesse, da undersøgelser har påvist en sammenhæng mellem nephron-begavelsen og reducerede Neron-tal med en øget forekomst af kardiovaskulær sygdom4,5 ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. baseret på fund i nyrerne ved obduktion bemærkede Brenner, at hypertensive individer havde et lavere samlet antal nephroner end Normotensive individer16. Således Brenner hypotese, at der er et omvendt forhold mellem Neron nummer og risikoen for at udvikle hypertension senere i livet. Brenner havde også en hypotese om, at der blev kompenseret for en reduktion i antallet af Neron-numre ved de tilbageholdt nephroner. For at opretholde den normale filtreringshastighed i nyrerne kompenserer residualnephroner ved at øge deres glomerulære overfladeareal (glomerulær hypertrofi), hvorved der arbejdes på at afbøde eventuelle negative virkninger af nefrotab på nyrefunktionen4 ,16.
Mens beskyttende på kort sigt, glomerulær hypertrofi, på lang sigt, fører til øget natrium-og væskeretention, øget ekstracellulærvæske volumen, og stigninger i arteriel blodtryk, hvilket fører til en ond cirkel af yderligere stigninger i glomerulær kapillartryk, glomerulær hyperfiltrering og Neron ardannelse (sklerose) og skade4,16.
Opnåelse af estimater eller antal af Neron nummer tilbyder et par eksperimentelle fordele: 1) det giver oplysninger om processen med nefrogenese, som derefter kan knyttes til specifikke gener eller faktorer i embryo eller maternel-føtale miljø, og 2) der er en sammenslutning af nephron nummer med hjerte-kar-sygdom, og derfor er der potentiale for, at estimater af Neron nummer kan bruges til at forudsige fremtidige kardiovaskulære risiko2,17,18, 19 ud af , 20 ud af , 21 ud af , 22. ud over moderdyret-føtale miljø, flere sygdomme direkte indvirkning Neron nummer og nyrefunktion, herunder åreforkalkning, diabetes, hypertension, og selv normal aldring2,9, 10,11,12,22,23. Således vurdering af hele nyre Neron nummer er vigtigt at forstå både de genetiske og miljømæssige faktorer, der påvirker nefrogenese (dvs., nephron begavelse) og nephron nummer i løbet af en persons liv og de resulterende virkninger nyrefunktion og hjerte-kar-sundhed.
I øjeblikket er der flere metoder til rådighed til bestemmelse og kvantificering af Neron nummer, hver med sine egne fordele og begrænsninger24,25,26,27,28 ,29,30. Sofistikerede metoder til bestemmelse af hele nyre Neron nummer omfatter stereologiske metoder, såsom dissector/Fractionator metode, og magnetisk resonans imaging25,26. Ofte betragtes som guld-standard til bestemmelse af hele nyre Neron nummer, den dissector/Fractionator metode er både dyrt og tidskrævende. Nylige fremskridt og forbedringer i magnetisk resonans scanning og behandling har givet værktøjerne til at tælle hver eneste nephron individuelt. Men, magnetisk resonans imaging er ikke kun tidskrævende, men også ekstremt dyrt. Desuden, både dissector/fraktionator metode og magnetisk resonans imaging kræver avanceret teknisk ekspertise, og dermed begrænse brugen af sådanne metoder i de fleste af forskningslaboratorier.
De fleste metoder til bestemmelse af Neron nummer gøre tæller eller estimater baseret på identifikation af glomeruli, da de er let identificerbare strukturelt. I dette papir er syre udblødning metode til estimering af Neron nummer i hele nyrerne beskrevet og demonstreret27. Den sure maceration metode er hurtig, pålidelig, og betydeligt billigere end andre metoder, såsom dissector/Fractionator metode og magnetisk resonans imaging. Desuden giver syre udblødning metode meget gentagelige estimater af Neron nummer, der er blevet rapporteret at være inden for intervallet af dem, der er bestemt ved hjælp af magnetisk resonans imaging26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

Nephron begavelse refererer til det samlede antal nefronov en person er født med, som nefrogenese hos mennesker er afsluttet ved 36 uger af drægtighedsperioden og ingen nye nefronov dannes efter fødslen. Neron nummer refererer til det samlede antal nefronov målt på ethvert tidspunkt efter fødslen. Både genetiske og miljømæssige faktorer påvirker både nephron begavelse og antal. Forstå, hvordan specifikke gener eller faktorer påvirker processen med nefrogenese og nephron tab eller død er vigtig, da personer med lavere nephron begavelse eller tal menes at være i en højere risiko for at udvikle nyre-eller hjerte-kar-sygdom. Forstå, hvordan miljømæssige eksponeringer i løbet af en persons levetid påvirker Neron nummer vil også være afgørende for at afgøre fremtidige sygdomsrisiko. Således, evnen til at vurdere hele nyre Neron nummer hurtigt og pålideligt er en grundlæggende eksperimentelle krav til bedre at forstå mekanismer, der bidrager til eller fremme nefrogenese eller nephron tab. Her beskriver vi den sure maceration metode til vurdering af hele nyre Neron nummer baseret på den procedure, der er beskrevet af Damadian, Shawayri, og Bricker, med små ændringer. Den sure udblødning metode giver hurtige og pålidelige estimater af Neron nummer (vurderet ved at tælle glomeruli), der er inden for 5% af dem bestemmes ved hjælp af mere avancerede, omend dyre, metoder såsom magnetisk resonans imaging. Desuden er syre udblødning metode en fremragende høj-gennemløb metode til at vurdere Neron nummer i et stort antal prøver eller eksperimentelle betingelser.

Nedenfor er repræsentative estimater af hele nyre Neron nummer fra en etableret musemodel af hypertension og en genetisk rotte model af aldersrelaterede kroniske nyresygdom. Centrale identificerende karakteristika for glomeruli, såsom en sfærisk struktur med eller uden fastgjort præ-eller post-arteriolar eller rørformede strukturer, er fremhævet for dem, der er nye for syre udmnings metoden (figur 1).
<p class="jove_content" fo:keep-together.within-...

Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Estimering af Neron nummer i hele nyrerne ved hjælp af Acid maceration metode

Estimater af hele nyre Neron nummer er vigtige klinisk og eksperimentelt, da der er en omvendt sammenhæng mellem Neron nummer og en øget risiko for renal og hjerte-kar-sygdom. Heri, brugen af syre maceration metode, som giver hurtige og pålidelige estimater af hele nyre Neron nummer, er påvist.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Den syre maceration metode kan hjælpe med at besvare centrale spørgsmål om nyrerne, og hvordan specifikke gener bidrage til eller påvirke nephron udvikling samt hvordan specifikke betingelser, såsom diabetes eller hypertension, påvirke nefroron nummer. Dette er vigtigt, da et samlet antal nefroner, som en person født med bestemmes under fostrets udvikling, og tab af nefroner er blevet forbundet med nyrepatologi. De vigtigste fordele ved syre maceration metode er, at det er hurtigere, mere reproducerbare, billig, og mindre tidskrævende end andre nephron tælle metoder, ligesom magnetisk resonans imaging.Denne teknik letter sammenhængen mellem virkningen i nephron nummer på nyrefunktion, hvilket er vigtigt at fremme vores forståelse af, hvordan specifikke gener påvirker nephron funktion og udvikling. Undersøgelsen af gener eller faktorer, der påvirker det samlede nefrokronnummer, vil være medvirkende til udviklingen af farmakologiske eller genetiske tilgange, der har til formål at begrænse sygdoms associeret nefrorontab. Med god eksperimentel teknik og praksis, bør personer nye til denne metode let få beherskelse af syre maceration metode giver pålidelige og reproducerbare skøn over hele nyre nefroron numre.Begynd med at bruge en fin kirurgisk saks til at åbne musehulen langs midterlinjen. Skift forsigtigt tarmene og reproduktive fedt til højre side af dyret. Brug grov dissektion, isolere venstre nyre og skære venstre nyrearterie og vene til omhyggeligt at fjerne nyre placere organet i en passende mærket vejer båd af PBS.Saml den rigtige nyre på samme måde og placere begge nyrer på en kirurgisk gaze pre-fugtet med PBS. Fjern hurtigt enhver klæbende ikke-nyrevæv og nyrekapsler. Derefter vægt hver nyre individuelt registrering af vægten af venstre og højre organ separat.Efter vejning, placere hver nyre tilbage i en passende mærket vejer båd uden PBS og bruge en ren barberblad til at skære hvert organ i halve på langs. Placer hver nyre halvt skåret side ned og skær hver halvdel i to millimeter eller mindre stykker. Ved hjælp af det samme barberblad overføres de hakkede nyrestykker forsigtigt til et passende mærket 15 milliliter konisk rør.I en godt ventileret røghætte tilsættes fem milliliter seks molarchlorsyre til hvert rør. Dernæst forsigtigt ophidse nyresyre blandinger før du placerer rørene i en 37 grader Celsius vandbad i 90 minutter. Ved afslutningen af syre maceration, vedhæfte en 18 gauge nål til en fem milliliter sprøjte pr nyre og forsigtigt fjerne sprøjten stempler.Anlækker sprøjterne anbringes i individuelle 50 milliliterkoniske rør i røghætten, og nyreopløsningerne hældes i den åbne ende af hver sprøjte, hvor de tomme rør sættes til side i et reagensglasstativ. Derefter forsigtigt erstatte stempler for den langsomme ekstrudering af hver opløsning gennem nålene i de 50 milliliter rør. De 15 milliliter koniske rør vaskes med fem milliliter PBS-opløsning pr. rør, der hvirvler PBS, for at opløse eventuelt resterende nyrevæv.Ekstruder vaskeindholdet i det relevante 50 milliliterrør som netop påvist. Efter ekstrudering af den tredje vask udstyres hver sprøjte med en 21 gauge nål. Ekstruder indholdet af de 50 milliliterrør i et andet sæt 50 milliliterrør gennem den mindre boringsnålvaskning og ekstrudering af det første indhold af 50 milliliterrør tre gange med frisk PBS som påvist.Efter den tredje vask og ekstrudering, bringe det samlede volumen i hvert rør op til 50 milliliter med ekstra PBS og placere rørene i en rack på en rocker plade ved fire grader Celsius natten over. Inden for fem dage efter behandlingen, placere et gitter, der indeholder 16 separate sektioner på bunden af seks brønde af en 12 brønd plade. Forsigtigt vende rør af nyre opløsning flere gange for at resuspenderede pelleteret væv.Tilsæt omhyggeligt tre 500 mikroliter aliquots af hver homogeniseret opløsning pr nyre til hver af tre brønde af de 12 brøndplade. Fortynd indholdet af hver brønd med et tilsvarende volumen af PBS. Anvend pladen på scenen af et omvendt mikroskop.Identificer glomeruli ved deres sfæriske struktur, rødlig nuance, og før eller efter arterials knyttet til ligene af individuelle glomeruli. Tæl antallet af glomeruli pr. gittersektion for at sammensne antallet pr. gitter til beregning af det samlede antal glomeruli pr. brønd. Derefter gange antallet af glomeruli per godt gange 100 for at opnå det gennemsnitlige antal glomeruli per nyre.I dette repræsentative eksperiment var det samlede nefrokronnummer hos mus, der blev infunderet med køretøj i 14 dage, ca. 12, 500 nefroner pr. nyre. Angiotensin to infusion steg imidlertid atrietrykket med ca. 40 millimeter kviksølv og var forbundet med en signifikant reduktion på næsten 26 % i det samlede nephrontal. I denne genetiske model af rotte nyre agenesis, dyr født med to nyrer blev beregnet til at indeholde omkring 27, 500 nefroner per nyre efter syre maceration som påvist, mens rotter født med en ensom nyre viste sig at have betydeligt lavere samlede nefrone tal.Skøn fra begge forsøg var i overensstemmelse med de intervaller, der tidligere blev rapporteret hos rotter. Den sure maceration metode er ideel til at anslå nefroron numre i hele nyrer, især i laboratorier ikke er udstyret med mere arbejdskrævende og omkostningseffektive uoverkommelige teknikker til at tælle nefroner, såsom disector fraktionator metode eller magnetisk resonans imaging. Denne metode giver mulighed for en høj gennemløb, effektiv, og reproducerbar estimering af hele nyre nefroron nummer, der er inden for 5% af tallene bestemmes af magnetisk resonans imaging.Vurderingen af nephrontallet er klinisk relevant, da reducerede nefrorontal har været forbundet med en øget risiko for hjerte-kar-sygdom, såsom kronisk nyresygdom. Glem ikke, at arbejde med saltsyre kan være yderst farligt, og at der bør træffes forholdsregler, såsom at bære handsker, beskyttende briller, og et laboratorium pels.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Den α-test: Rapid Cellefri CD4 Optælling Anvendelse helspyt

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Mus nyretransplantation: modeller af allotransplantatafstødning

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normotermisk<em&gt; Ex vivo</em&gt; Nyre Perfusion for Bevarelse af Nyre grafts før Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

Intravaskulær Levering af Biologics til rottenyre

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

En metode til kvantificering Upper Limb Performance i min hverdag anvender accelerometre

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Hele kroppen og regionale kvantificering af aktive menneskelige brunt fedtvæv bruger 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Trombocyt-baseret detektion af nitrogenoxid i blodet ved at måle VASP fosforylering

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

En høj-throughput In Situ metode til vurdering af Hepatocyt Nuklearploidy i mus

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...