Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Dit werk werd gesteund voor een deel door de nationale instituten van gezondheid, nationaal hart, Long, en het Instituut van het bloed (R01HL107632).

Leveringen en reagentia hieronder vermeld zijn voor de bepaling van de hele nier nephron nummer in een muis, dat is, twee nieren. Wijzigingen voor het gebruik van de zure methode voor de moedermaceraat worden geïdentificeerd met sterretjes. Alle experimentele protocollen die aan de nationale instituten van de gids van de gezondheid voor de zorg en het gebruik van proefdieren worden voldeden en werden goedgekeurd door de institutionele Commissie van de Dierenzorg en van het gebruik bij het medische centrum van de Univers...

<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

Met een goede experimentele techniek, de zure methode is ideaal voor het schatten van nephron aantal in hele nieren. Hoewel de nier in zuur wordt opgelost, blijft glomeruli grotendeels intact en is gemakkelijk identificeerbaar, makend het tellen van individuele glomeruli vrij gemakkelijk en ongecompliceerd. De zure snijtechniek is om verschillende redenen bijzonder voordelig. Ten eerste, de zure methode is een snelle en handige methode die relatief weinig in termen van kosten en fysieke inspanning vereist. Alle reagentia...

Nephron is zowel de fundamentele structurele als functionele eenheid van nier1. Structureel, de nephron bestaat uit de kluwen (capillairen en podocytes) gelegen binnen de Bowman de capsule en de renale tubulus, bestaande uit de proximale tubulus, de lus van Henle, en de distale tubulus die eindigt in de verzamelbuis. Functioneel, de rol van de nephron is de filtratie en heropname van water en elektrolyten en de secretie van afval. In het algemeen, nephrogenesis is voltooid op 36 weken van de dracht bij de mens en kort na de geboorte in verschillende soorten, zoals de muis en de rat2. Nephron schenking verwijst naar het totale aantal nephrons dat een individu is geboren met, terwijl Nephron aantal is het totale aantal nephrons gemeten op elk moment na de geboorte3. De term nephron nummer en glomerulaire nummer worden vaak door elkaar gebruikt. Omdat er slechts een kluwen per nephron, de beoordeling van glomeruli nummer is een belangrijke surrogaat voor het schatten van nephron nummer.
De beoordeling van nephron schenking en nephron aantal is van klinisch belang aangezien de studies een vereniging tussen nephron schenking en verminderde nephron aantallen met een verhoogde weerslag van cardiovasculaire ziekte4,5 hebben aangetoond ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. op basis van bevindingen in de nieren bij autopsie, Brenner merkte op dat hypertensieve personen gepresenteerd met een lager totaal aantal nephrons dan normotensive individuen16. Zo, Brenner hypothetische dat er een omgekeerde relatie tussen nephron aantal en het risico op het ontwikkelen van hypertensie later in het leven. Brenner ook hypothetische dat een vermindering van nephron aantal werd gecompenseerd door de nephrons dat bleef. Met het oog op de normale filtratietarief in de nieren te handhaven, residuele nephrons compenseren door het verhogen van hun glomerulaire oppervlak (glomerulaire hypertrofie), waardoor het werken aan een nadelig effect van nephron verlies op de nierfunctie te verzachten4 ,16.
Terwijl de bescherming op de korte termijn, glomerulaire hypertrofie, op de lange termijn, leidt tot een verhoogde natrium-en vochtretentie, verhoogde extracellulaire vloeistof volume, en verhogingen van de arteriële bloeddruk, wat leidt tot een vicieuze cirkel van verdere stijgingen in glomerulaire capillaire druk, glomerulaire hyperfiltratie, en nephron littekens (sclerose) en verwonding4,16.
Het verkrijgen van schattingen of tellingen van nephron nummer bieden een paar experimentele voordelen: 1) het geeft informatie over het proces van nephrogenesis, die vervolgens kan worden gekoppeld aan specifieke genen of factoren in het embryo of de moeder-foetale omgeving, en 2) Er is een vereniging van nephron nummer met hart-en vaatziekten en, dus is er het potentieel dat de ramingen van nephron nummer kan worden gebruikt om toekomstige cardiovasculaire risico te voorspellen2,17,18, 19 , 20 , 21 , 22. in aanvulling op de moeder-foetale omgeving, verschillende ziekten rechtstreeks effect nephron aantal en nierfunctie, met inbegrip van atherosclerose, diabetes, hypertensie, en zelfs normale veroudering2,9, 10,11,12,22,23. Aldus, is de beoordeling van het gehele nephron aantal van de nier belangrijk om zowel de genetische als milieufactoren te begrijpen die nephrogenesis (d.w.z., nephron schenking) en nephron aantal over de cursus van het leven van een persoon en de resulterende gevolgen beïnvloeden op de nierfunctie en de cardiovasculaire gezondheid.
Momenteel zijn er verschillende methoden beschikbaar voor de bepaling en kwantificering van nephron nummer, elk met zijn eigen voordelen en beperkingen24,25,26,27,28 ,29,30. Geavanceerde methoden voor het bepalen van hele nier nephron nummer omvatten stereological methoden, zoals de Dissector/fractionator methode, en Magnetic Resonance Imaging25,26. Vaak beschouwd als de goud-standaard voor het bepalen van hele nier nephron nummer, de Dissector/fractionator methode is zowel duur en tijdrovend. De recente vooruitgang en de verbetering van Magnetic Resonance Imaging en verwerking hebben de hulpmiddelen verstrekt om elk nephron individueel te tellen. Echter, Magnetic Resonance Imaging is niet alleen tijdrovend, maar ook extreem duur. Bovendien vereist zowel de Dissector/fractionator methode als de Magnetic Resonance Imaging geavanceerde technische expertise, waardoor het gebruik van dergelijke methoden in het merendeel van de onderzoekslaboratoria wordt beperkt.
De meeste methodes om nephron aantal te bepalen maken tellingen of ramingen die op de identificatie van glomeruli worden gebaseerd, aangezien zij gemakkelijk identificeerbaar structureel zijn. In deze paper, de zure methode voor het schatten van nephron aantal in hele nieren wordt beschreven en aangetoond27. De zure methode is snel, betrouwbaar en beduidend minder duur dan andere methoden, zoals de Dissector/fractionator methode en Magnetic Resonance Imaging. Bovendien, de zure methode biedt zeer herhaalbare schattingen van nephron nummer dat zijn gemeld te worden binnen het bereik van die bepaald met behulp van Magnetic Resonance Imaging26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

Nephron schenking verwijst naar het totale aantal nephrons een individu is geboren met, als nephrogenesis bij de mens is voltooid door 36 weken van de dracht en geen nieuwe nephrons worden gevormd na de geboorte. Nephron nummer verwijst naar het totale aantal nephrons gemeten op elk punt in de tijd na de geboorte. Zowel beïnvloeden de genetische als milieufactoren zowel nephron schenking als aantal. Inzicht in hoe specifieke genen of factoren van invloed op het proces van nephrogenesis en nephron verlies of ondergang is belangrijk als individuen met een lagere nephron schenking of het aantal wordt gedacht dat een hoger risico op het ontwikkelen van renale of hart-en vaatziekten. Inzicht in hoe milieurisico's in de loop van het leven van een persoon beïnvloedt nephron aantal zal ook van vitaal belang bij het bepalen van toekomstige ziekterisico. Aldus, is de capaciteit om geheel nier nephron aantal snel en betrouwbaar te beoordelen een basis experimentele vereiste om mechanismen beter te begrijpen die bijdragen tot of bevorderen nephrogenesis of nephron verlies. Hier beschrijven we de zure methode voor de schatting van de hele nier nephron nummer op basis van de procedure beschreven door Damadian, Shawayri, en Bricker, met lichte wijzigingen. De zure methode zorgt voor snelle en betrouwbare schattingen van het aantal nephron (zoals beoordeeld door het tellen van glomeruli) die binnen 5% van die bepaald met behulp van meer geavanceerde, zij het duur, methoden zoals Magnetic Resonance Imaging. Bovendien is de methode van de zure verwerking een uitstekende high-throughput methode om nephron aantal in grote aantallen steekproeven of experimentele voorwaarden te beoordelen.

Hieronder zijn representatieve schattingen van de hele nier nephron nummer van een gevestigde muismodel van hypertensie en een genetische rat model van leeftijdsgebonden chronische nierziekte. De belangrijkste kenmerken van glomeruli, zoals een sferische structuur met of zonder bijgevoegde pre-of post-arteriolaire of buisvormige constructies, worden gemarkeerd voor de nieuwe methoden van de zure snij methode (Figuur 1).
<p class="jove_content" fo:keep-tog...

Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Schatting van het Nephron aantal in hele nieren met behulp van de zure methode

Schattingen van de hele nier nephron nummer zijn belangrijk klinisch en experimenteel, want er is een omgekeerde associatie tussen nephron aantal en een verhoogd risico op nier-en hart-en vaatziekten. Hierin, wordt het gebruik van de zure methode van de vergisting, die snelle en betrouwbare ramingen van het gehele nephron aantal van de nier verstrekt, aangetoond.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

De zure maceratiemethode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen over de nier en hoe specifieke genen bijdragen aan of de ontwikkeling van nefrijnen beïnvloeden en hoe specifieke aandoeningen, zoals diabetes of hypertensie, het nefrronnummer beïnvloeden. Dit is belangrijk omdat een totaal aantal nefrons waarmee een persoon geboren is, wordt bepaald tijdens de foetale ontwikkeling en het verlies van nefrons is geassocieerd met nierpathologie. De belangrijkste voordelen van de zure maceratie methode zijn dat het sneller, meer reproduceerbaar, goedkoop, en minder tijdrovend dan andere nephron tellen methoden, zoals magnetische resonantie beeldvorming.Deze techniek vergemakkelijkt de correlatie van de impact in nefrofreetal op de nierfunctie, wat belangrijk is om ons begrip van hoe specifieke genen de functie en ontwikkeling van Nephron beïnvloeden verder te bevorderen. De studie van genen of factoren die het totale aantal nefroden beïnvloeden, zal een belangrijke rol spelen bij de ontwikkeling van farmacologische of genetische benaderingen die zijn ontworpen om het geassocieerde nefroleverlies van ziekten te beperken. Met een goede experimentele techniek en praktijk, individuen nieuw op deze methode moet gemakkelijk krijgen beheersing van de zure maceratie methode waardoor betrouwbare en reproduceerbare schattingen van de hele nier nefrofische nummers.Begin met het gebruik van fijne chirurgische schaar om de muis buikholte te openen langs de middellijn. Verplaats de darmen en het voortplantingsvet voorzichtig naar de rechterkant van het dier. Met behulp van grove dissectie, isoleren van de linker nier en snijd de linker nierslagader en ader om zorgvuldig te verwijderen van de nier het plaatsen van het orgaan in een passend gelabeld woog boot van PBS.Verzamel de juiste nier op dezelfde manier en plaats beide nieren op een chirurgisch gaas voorbevocht met PBS. Verwijder snel elk aanhangend niet-nierweefsel en de niercapsules. Dan gewicht elke nier individueel het opnemen van het gewicht van de linker en rechter orgaan afzonderlijk.Na het wegen, plaats elke nier terug in een passend gelabelde weegboot zonder PBS en gebruik een schoon scheermesje om elk orgaan in de lengte doormidden te snijden. Plaats elke nier half gesneden kant naar beneden en snijd elk half in twee millimeter of kleinere stukken. Breng met hetzelfde scheermesje de gehakte nierstukken voorzichtig over in een op de juiste manier gelabelde conische buis van 15 milliliter.Voeg in een goed geventileerde rookkap vijf milliliter van zes molair zoutzuur toe aan elke buis. Vervolgens, zachtjes roeren de nierzuur mengsels voor het plaatsen van de buizen in een 37 graden Celsius waterbad gedurende 90 minuten. Bevestig aan het einde van de zure maceratie een 18-meterige naald aan één vijf milliliter spuit per nier en verwijder voorzichtig de spuit plungers.Plaats de spuiten in individuele 50 milliliter conische buizen in de rookkap en giet de nieroplossingen in het open uiteinde van elke spuit en zet de lege buizen opzij in een reageerbuisrek. Vervang vervolgens voorzichtig de zuigers voor de langzame extrusie van elke oplossing door de naalden in de 50 milliliter buizen. Was de 15 milliliter conische buizen met vijf milliliter PBS-oplossing per buis die de PBS wervelt om het resterende nierweefsel op te stropen.Extrudeer de wasinhoud in de juiste 50 milliliter buis zoals net aangetoond. Na het extruderen van de derde was, rust elke spuit uit met een 21-meter naald. Extrudeer de inhoud van de 50 milliliter buizen in een tweede set van 50 milliliter buizen door de kleinere boring naald wassen en extruderen van de eerste 50 milliliter buis inhoud drie keer met verse PBS zoals aangetoond.Na de derde was- en extrusie, breng het totale volume in elke buis tot 50 milliliter met extra PBS en plaats de buizen in een rek op een tuimelplaat op vier graden Celsius 's nachts. Binnen vijf dagen na verwerking plaatst u een raster met 16 afzonderlijke secties op de bodem van zes putten van een 12 putplaat. Draai de buisjes van de nieroplossing meerdere malen voorzichtig om om de pelleted weefsels opnieuw op te geven.Voeg voorzichtig drie 500 microliter aliquots van elke gehomogeniseerde oplossing per nier toe aan elk van de drie putten van de 12 putplaat. Verdun de inhoud van elke put met een gelijk volume PBS. Plaats de plaat op het podium van een omgekeerde microscoop.Identificeer de glomeruli aan de sferische structuur, roodachtige tint en de voor- of naslagaders die aan de lichamen van individuele glomeruli zijn bevestigd. Tel het aantal glomeruli per elke roostersectie om de telling per raster op te tellen voor de berekening van het totale aantal glomeruli per put. Vermenigvuldig vervolgens het aantal glomeruli per goed maal 100 om het gemiddelde aantal glomeruli per nier te verkrijgen.In dit representatieve experiment, het totale nefrennummer in muizen doordrenkt met voertuig voor 14 dagen was ongeveer 12, 500 nefrons per nier. Angiotensin twee infusie echter, verhoogde de atriumdruk met ongeveer 40 millimeter kwik en werd geassocieerd met een aanzienlijke bijna 26%-vermindering van het totale aantal nephrons. In dit genetische model van ratten niergeneese, dieren geboren met twee nieren werden berekend op ongeveer 27,00 nefrons per nier bevatten na zure maceratie zoals aangetoond, terwijl ratten geboren met een eenzame nier bleken te hebben aanzienlijk lagere totale nefren aantallen.Schattingen van beide experimenten kwamen overeen met de eerder gemelde bereiken bij ratten. De zure maceratiemethode is ideaal voor het schatten van nefronsnummers in hele nieren, vooral in laboratoria die niet zijn uitgerust met meer arbeidsintensieve en kostenondre technieken voor het tellen van nefrons, zoals de disectorse fractionatormethode of magnetische resonantiebeeldvorming. Deze methode maakt een hoge doorvoer, efficiënte en reproduceerbare schatting van de hele nier nefron nummer dat binnen 5% van de nummers bepaald door magnetische resonantie beeldvorming.De beoordeling van het aantal nefroens is van klinisch belang omdat verminderde nefroennummers gepaard zijn gegaan met een verhoogd risico op hart- en vaatziekten, zoals chronische nierziekten. Vergeet niet dat het werken met zoutzuur zeer gevaarlijk kan zijn en dat voorzorgsmaatregelen moeten worden genomen, zoals het dragen van handschoenen, beschermende brillen en een laboratoriumjas.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Een methode voor Murine Islet Isolatie en subcapsulaire Niertransplantatie

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

Methode voor het nieuwe anti-kanker medicijn ontwikkeling met behulp van Tumor Explantaten van Chirurgische Specimens


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

De α-test: Rapid Celvrije CD4 Enumeration met hele Speeksel

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Muis Niertransplantatie: Modellen van transplantaatafstoting

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normotherme<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Nier Perfusie voor het Behoud van de Nier transplantaten voorafgaand aan de transplantatie

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

Intravasculaire Levering van Biologics aan de Rat Kidney

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

Een methode voor het kwantificeren van de bovenste ledematen optreden in het dagelijks leven gebruik maakt van versnellingsmeters

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Hele lichaam en regionale kwantificering van actieve mens bruin vetweefsel met 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Bloedplaatjes gebaseerde detectie van stikstofmonoxide in bloed door het meten van VASP fosforylatie

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

Een High-Throughput In Situ Methode voor schatting van Hepatocyte Nucleaire Ploidy in muizen

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...