Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
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Diese Arbeit wurde zum Teil von den National Institutes of Health, National Heart, Lung, and Blood Institute (R01HL107632) unterstützt.

Nachschub und Reagenzien sind für die Bestimmung der gesamten Nierennummer in einer Maus, also zwei Nieren. Modifikationen für die Verwendung der Säuremerationsmethode für Ratte werden mit Sternchen identifiziert. Alle experimentellen Protokolle, die den National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals entsprechen und vom Institutional Animal Care and Use Committee der University of Mississippi Medical Center genehmigt wurden.
1. Nierenisolierungsverfahren
<...

<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

Mit guter experimenteller Technik ist die Säure-Mazerationsmethode ideal für die Abschätzung der Neffonzahl in der ganzen Niere. Obwohl sich die Niere in Säure aufgelöst hat, bleiben Glomeruli weitgehend intakt und leicht erkennbar, was die Zählung einzelner Glomeruli relativ einfach und unkompliziert macht. Die Säuremerationstechnik ist aus mehreren Gründen besonders vorteilhaft. Erstens ist die Methode der Säure eine schnelle und bequeme Methode, die relativ wenig an Kosten und körperlicher Anstrengung erford...

Der Nphron ist sowohl die strukturelle Grund-als auch die funktionelle Einheit der Niere 1. Strukturell besteht das Nphron aus dem Glomerulus (Kapillaren und Pokdozyten), der sich in der Kapsel des Bowman befindet, und der Nierenröhre, bestehend aus der proximalen Röhre, der Schleife von Henle, und der distalen Röhre, die sich in den Sammelkanal auslotet. Funktionell ist die Rolle des Nphrons die Filtration und Wiederabsorption von Wasser und Elektrolyten und die Abscheidung von Abfällen. In der Regel wird die Nierenkunde mit 36 Wochen der Schwangerschaft beim Menschen und kurz nach der Geburt bei mehreren Arten wie der Maus und der Ratte2abgeschlossen. Die Neffon-Stiftung bezieht sich auf die Gesamtzahl der Nätze, mit denen ein Individuum geboren wird, während die Neff-Zahl die Gesamtzahl der zu jeder Zeit nach der Geburt gemessenen Nphronen ist. Der Begriff nephron Nummer und die glomeruläre Zahl werden oft austauschbar verwendet. Da es nur einen Glomerulus pro Neffon gibt, ist die Bewertung der Glomeruli-Zahl ein wichtiger Ersatz für die Schätzung der nephronenlichen Zahl.
Die Bewertung der NPhron-Stimausbeweidung und der Nphron-Zahl ist von klinischem Interesse, da Studien einen Zusammenhang zwischen der Nphron-Ausstattung und der Verringerung der Nphron-Zahlen mit einer erhöhten Häufigkeitvon Herz-Kreislauf-Erkrankungen 4, 5 gezeigthaben. ,6, 7,8,9, 10,11, 12,13,14, 15. Auf der Grundlage von Befunden in Nieren bei der Autopsie beobachtete Brenner, dass hypertensive Individuen mit einer geringeren Gesamtzahl von Npresphronen als normotensive Individuen 16dargestelltwurden. So vermutete Brenner, dass es einen umgekehrten Zusammenhang zwischen der nephronen Zahl und dem Risiko, später im Leben zu Bluthochdruck zu entwickeln, gibt. Brenner vermutete auch, dass eine Reduzierung der Nphron-Zahl durch die verbliebenen Neffen kompensiert wurde. Um die normale Filtrationsrate in der Niere zu erhalten, kompensieren Restnephronen durch die Erhöhung ihrer glomerulären Oberfläche (glomeruläre Hypertrophie) und arbeiten so daran, die negativen Auswirkungen des Nuppressionsverlustes auf die Nierenfunktion abzumildern 4 ,16.
Während die schützende in der kurzfristigen, glomerulären Hypertrophie, auf lange Sicht, führt zu einer erhöhten Natrium-und Flüssigkeitsansammlung, erhöhte extrazelluläre Flüssigkeitsvolumen, und erhöht den arteriellen Blutdruck, was zu einem Teufelskreis von weiteren Anstieg in Glomerulärer Kapillardruck, glomerulare Hyperfiltration, und Neff-Narbenbildung (Sklerose) und Verletzung4,16.
Die Einholung von Schätzungen oder Zählungen der nephron-Zahl bietet ein paar experimentelle Vorteile: 1) sie liefert Informationen über den Prozess der Nierenentstehung, die dann mit bestimmten Genen oder Faktoren in der Embryonen-oder mütterlich-fetalen Umgebung verknüpft werden können, und 2) Es gibt einen Zusammenhang von nephron Zahl mit Herz-Kreislauf-Erkrankungen, und so gibt es das Potenzial, dass Schätzungen der nephron Zahl verwendet werden könnten, um zukünftige Herz-Kreislauf-Risiko2,17,18vorherzusagen, 19 , 20 , 21 , 22. Neben der mütterlich-fetalen Umgebung wirken mehrere Krankheiten direkt auf die Nphron-Zahl und Nierenfunktion, darunter Atherosklerose, Diabetes, Bluthochdruck undsogar normales Altern 2,9, 10,11,12,22,23. Daher ist es wichtig, dass die Beurteilung der gesamten Nierennephron-Zahl sowohl die genetischen als auch die Umweltfaktoren, die die Nierenentzündung beeinflussen (d.h.die Nephon-Stiftung), und die Nphron-Zahl im Laufe des Lebens einer Person und die daraus resultierenden Auswirkungen verstehen. Auf Nierenfunktion und Herz-Kreislauf-Gesundheit.
Derzeit gibt es mehrere Methoden zur Bestimmung und Quantifizierung der nephron-Zahl, die jeweils ihre eigenen Vorteile und Einschränkungen 24, 25, 26,27,28 ,29,30. Zu den ausgeklügelten Methoden zur Bestimmung der gesamten Nierennephron-Zahl gehören stereologische Methoden, wie die Dissektor/Fractionator-Methode und die Magnetresonanztomographie 25,26. Die Dissektor/Fractionator-Methode wird oft als Gold-Standard für die Bestimmung der gesamten Nierennachzahl betrachtet und ist sowohl teuer als auch zeitaufwendig. Die jüngsten Fortschritte und Verbesserungen in der Magnetresonanztomographie und-verarbeitung haben die Werkzeuge zur Verfügung gestellt, um jeden einzelnen Neffon einzeln zu zählen. Die Magnetresonanztomographie ist aber nicht nur zeitaufwendig, sondern auch extrem teuer. Darüber hinaus erfordert sowohl die Dissektor/Fractionator-Methode als auch die Magnetresonanztomographie ein fortgeschrittenes technisches Know-how, wodurch der Einsatz solcher Methoden in den meisten Forschungslabors begrenzt wird.
Die meisten Methoden zur Bestimmung der nephron-Zahl machen auf der Grundlage der Identifizierung von Glomeruli Zählungen oder Schätzungen, da sie leicht strukturell erkennbar sind. In diesem Beitrag wird die Säure-Mazerationsmethode zur Abschätzung der Neffonzahl in der ganzen Niere beschriebenund gezeigt 27. Die Säure-Mazerationsmethode ist schnell, zuverlässig und deutlich günstiger als andere Methoden, wie die Dissektor/Fractionator-Methode und die Magnetresonanztomographie. Darüber hinaus liefert die Säure-Mazerationsmethode sehr wiederholbare Schätzungen der Nphron-Zahl, die Berichten zufolge im Bereich der Magnetresonanztomographie 26 liegen.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

Die Gabelstiftung bezieht sich auf die Gesamtzahl der Neffen, mit denen ein Individuum geboren wird, da die Nierenbildung beim Menschen durch 36 Wochen der Schwangerschaft abgeschlossen wird und keine neuen Neffen nach der Geburt gebildet werden. Die Nepthron-Zahl bezieht sich auf die Gesamtzahl der zu jedem Zeitpunkt nach der Geburt gemessenen Nphronen. Sowohl genetische als auch ökologische Faktoren beeinflussen sowohl die Nphronausstattung als auch die Anzahl. Zu verstehen, wie bestimmte Gene oder Faktoren den Prozess der Nieren-und Nierenverlust oder des Niedergangs beeinflussen, ist wichtig, da Menschen mit geringerer Neffon-Stiftung oder-zahl ein höheres Risiko für die Entwicklung von Nieren-oder Herz-Kreislauf-Erkrankungen haben. Zu verstehen, wie sich Umweltbelastungen im Laufe der Lebenszeit auf die Nphron-Zahl auswirken, wird auch entscheidend sein, um das zukünftige Krankheitsrisiko zu ermitteln. So ist die Fähigkeit, die ganze Nieren-Nphron-Zahl schnell und zuverlässig zu beurteilen, eine grundlegende experimentelle Anforderung, um Mechanismen besser zu verstehen, die zur Nierenentzündung oder zum Nefftverlust beitragen oder sie fördern. Hier beschreiben wir die Säure-Mazerationsmethode zur Abschätzung der gesamten Nierennephron-Nummer, die auf dem von Damadian, Shawayri und Bricker beschriebenen Verfahren basiert, mit leichten Änderungen. Die Methode der Säuremeration bietet schnelle und zuverlässige Schätzungen der Neffonenzahl (wie sie durch Zählen von Glomeruli bewertet wird), die innerhalb von 5% der mit fortgeschritteneren, wenn auch teuren Methoden wie Magnetresonanztomographie bestimmt werden. Darüber hinaus ist die Säure-Mazerationsmethode eine ausgezeichnete Methode, um die Neffonzahl in einer großen Anzahl von Proben oder experimentellen Bedingungen zu bewerten.

Im Folgenden finden Sie repräsentative Schätzungen der gesamten Nierennephron-Zahl aus einem etablierten Mausmodell der Hypertonie und einem genetischen Rattenmodell der altersbedingten chronischen Nierenerkrankungen. Für diejenigen, die neu in der Säuremasisierungsmethode sind (Abbildung1), werden wesentliche Identifikationsmerkmale von Glomeruli hervorgehoben, wie zum Beispiel eine kugelförmige Struktur mit oder ohne angebrachte Vor-oder Nach-oder Rohr...

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Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Schätzung der Nephron-Zahl in Ganznierstein mit der Acid-Maeration-Methode

Schätzungen der gesamten Nieren-NPhrafonzahl sind klinisch und experimentell wichtig, da es einen umgekehrten Zusammenhang zwischen der Nphron-Zahl und einem erhöhten Risiko für Nieren-und Herz-Kreislauf-Erkrankungen gibt. Dabei wird die Verwendung der Säure-Mazerationsmethode, die schnelle und zuverlässige Schätzungen der gesamten Nieren-NPhron-Zahl liefert, nachgewiesen.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Die Säuremazerationsmethode kann helfen, wichtige Fragen über die Niere zu beantworten und wie bestimmte Gene zur Nephronentwicklung beitragen oder beeinflussen und wie bestimmte Bedingungen wie Diabetes oder Bluthochdruck die Nephronzahl beeinflussen. Dies ist wichtig, da eine Gesamtzahl von Nephronen, mit denen ein geborener Personen während der fetalen Entwicklung und des Verlusts von Nephronen bestimmt wird, mit der Nierenpathologie in Verbindung gebracht wurde. Die Hauptvorteile der Säuremazeration Methode sind, dass es schneller, reproduzierbarer, kostengünstiger und weniger zeitaufwändig als andere Nephron-Zählmethoden, wie Magnetresonanztomographie.Diese Technik erleichtert die Korrelation der Auswirkungen in Nephronzahl auf die Nierenfunktion, was wichtig ist, um unser Verständnis darüber zu fördern, wie bestimmte Gene die Nephronfunktion und -entwicklung beeinflussen. Die Untersuchung von Genen oder Faktoren, die die Gesamtnephronzahl beeinflussen, wird bei der Entwicklung pharmakologischer oder genetischer Ansätze zur Begrenzung des krankheitsassoziierten Nephronverlustes eine entscheidende Rolle spielen. Mit guter experimenteller Technik und Praxis sollten Personen, die mit dieser Methode neu sind, leicht die Beherrschung der Säuremazerationsmethode erlangen, die zuverlässige und reproduzierbare Schätzungen ganzer Nierennephronzahlen ermöglicht.Beginnen Sie mit einer feinen chirurgischen Schere, um die Bauchhöhle der Maus entlang der Mittellinie zu öffnen. Verschieben Sie vorsichtig den Darm und reproduktive Fett auf die rechte Seite des Tieres. Mit grober Sesection, isolieren Sie die linke Niere und schneiden Sie die linke Nierenarterie und Vene, um vorsichtig die Niere zu entfernen, die das Organ in ein entsprechend gekennzeichnetes Wägeboot von PBS legt.Sammeln Sie die rechte Niere auf die gleiche Weise und legen Sie beide Nieren auf eine chirurgische Gaze vorbefeuchtet mit PBS. Entfernen Sie schnell alle anhaftenden nicht-renalen Gewebe und die Nierenkapseln. Dann gewichten Sie jede Niere einzeln das Gewicht des linken und rechten Organs separat aufzeichnen.Legen Sie nach dem Wiegen jede Niere ohne PBS wieder in ein entsprechend beschriftetes Wägeboot und schneiden Sie jedes Organ in der Längsrichtung mit einer sauberen Rasierklinge. Jede Nierenhälfte halb nach unten schneiden und jede Hälfte in zwei Millimeter oder kleinere Stücke schneiden. Mit der gleichen Rasierklinge die gehackten Nierenstücke vorsichtig in ein entsprechend beschriftetes 15 Milliliter konisches Rohr übertragen.In einer gut belüfteten Dunstabzugshaube fünf Milliliter sechs Molsalzsäure in jedes Rohr geben. Als nächstes rühren Sie die Nierensäuremischungen vorsichtig auf, bevor Sie die Schläuche 90 Minuten lang in ein 37 Grad Celsius Wasserbad geben. Am Ende der sauren Mazeration eine 18-Meter-Nadel an einer Fünf-Milliliter-Spritze pro Niere befestigen und die Spritzenkolben vorsichtig entfernen.Legen Sie die Spritzen in einzelne 50 Milliliter konische Schläuche in die Dunstabzugshaube und gießen Sie die Nierenlösungen in das offene Ende jeder Spritze, die die leeren Schläuche in einem Reagenzglasregal beiseite legt. Dann tauschen Sie die Kolben für die langsame Extrusion jeder Lösung durch die Nadeln in die 50 Milliliter Rohre sorgfältig aus. Waschen Sie die 15 Milliliter konischen Schläuche mit fünf MilliliterPBS-Lösung pro Tube, die das PBS wirbelt, um das verbleibende Nierengewebe zu löslich.Extrudieren Sie den Waschinhalt in das entsprechende 50-Milliliter-Rohr, wie soeben gezeigt. Nach dem Extrudieren der dritten Wäsche jede Spritze mit einer 21-Spur-Nadel ausstatten. Extrudieren Sie den Inhalt der 50 Milliliter-Rohre in einen zweiten Satz von 50 Milliliter-Rohren durch die kleinere Bohrung Nadel waschen und extrudieren die ersten 50 Milliliter Rohrinhalt dreimal mit frischen PBS, wie gezeigt.Nach der dritten Wasch- und Extrusionsmenge das Gesamtvolumen in jedem Rohr mit zusätzlichem PBS auf 50 Milliliter bringen und die Rohre über Nacht bei vier Grad Celsius auf einer Rockerplatte in ein Rack legen. Legen Sie innerhalb von fünf Tagen nach der Verarbeitung ein Gitter mit 16 separaten Abschnitten auf den Boden von sechs Brunnen einer 12 Brunnenplatte. Um die Röhren der Nierenlösung mehrmals sanft umzukehren, um das pelletierte Gewebe wieder aufzuhängen.Fügen Sie vorsichtig drei 500 Mikroliter Aliquots jeder homogenisierten Lösung pro Niere zu jedem der drei Brunnen der 12 Brunnenplatte hinzu. Verdünnen Sie den Inhalt jedes Brunnens mit einem gleichen PBS-Volumen. Legen Sie die Platte auf die Bühne eines invertierten Mikroskops.Identifizieren Sie die Glomeruli anhand ihrer kugelförmigen Struktur, rötlichen Farbtons und der Vor- oder Nachartials, die an den Körpern einzelner Glomeruli befestigt sind. Zählen Sie die Anzahl der Glomeruli pro gerasterten Abschnitt, um die Anzahl pro Raster für die Berechnung der Gesamtzahl der Glomeruli pro Brunnen zu summieren. Dann multiplizieren Sie die Anzahl der Glomeruli pro Well mal 100, um die durchschnittliche Anzahl von Glomeruli pro Niere zu erhalten.In diesem repräsentativen Experiment betrug die Gesamtanzahl der Nephronen bei Mäusen, die 14 Tage lang mit dem Fahrzeug infundiert wurden, etwa 12 500 Nephrone pro Niere. Angiotensin zwei Infusionen erhöhten jedoch den Vorhofdruck um etwa 40 Millimeter Quecksilber und waren mit einer signifikanten Verringerung der gesamten Nephronzahl um fast 26 % verbunden. In diesem genetischen Modell der Nierenagenese der Ratte wurden Tiere, die mit zwei Nieren geboren wurden, nach der sauren Mazeration mit etwa 27 500 Nephronen pro Niere berechnet, während Ratten, die mit einer einsamen Niere geboren wurden, signifikant niedrigere Nephronzahlen insgesamt hatten.Die Schätzungen beider Experimente entsprachen den zuvor bei Ratten gemeldeten Bereichen. Die Säuremazerationsmethode ist ideal für die Schätzung von Nephronzahlen in ganzen Nieren, insbesondere in Laboratorien, die nicht mit arbeitsintensiveren und kostenintensiven Techniken zum Zählen von Nephronen ausgestattet sind, wie z. B. die Disektorfraktionatormethode oder die Magnetresonanztomographie. Diese Methode ermöglicht eine hohe Durchsatz-, effiziente und reproduzierbare Schätzung der gesamten Nieren-Nephron-Zahl, die innerhalb von 5% der Zahlen durch Magnetresonanztomographie bestimmt sind.Die Beurteilung der Nephronzahl ist von klinischer Relevanz, da reduzierte Nephronzahlen mit einem erhöhten Risiko für Herz-Kreislauf-Erkrankungen wie chronische Nierenerkrankungen in Verbindung gebracht wurden. Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Salzsäure extrem gefährlich sein kann und dass Vorsichtsmaßnahmen wie das Tragen von Handschuhen, Schutzbrillen und einem Labormantel getroffen werden sollten.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Eine Methode zur Murine Islet Isolation und subkapsulären Nierentransplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Forschung

Medizin

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

Verfahren zur Novel Anti-Cancer Drug Development mit Tumor Explantate von chirurgischen Proben


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Die α-Test: Rapid Zellfreie CD4-Zählung mit ganzen Speichel

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Maus Nierentransplantation: Modelle der Transplantatabstoßung

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermen<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Kidney Perfusion für die Erhaltung der Nierentransplantate vor der Transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

Die intravaskuläre Lieferung von Biologics zur Rattenniere

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

Ein Verfahren zur Quantifizierung der oberen Extremität Leistung im täglichen Leben Accelerometer Verwendung

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Ganzen Körper und regionale Quantifizierung der aktiven Menschen braune Fettgewebe mit 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Thrombozyten-basierte Erkennung von Stickoxid im Blut durch die Messung VASP Phosphorylierung

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...