Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
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Questo lavoro è stato sostenuto in parte dagli istituti nazionali di salute, cuore nazionale, polmone, e Blood Institute (R01HL107632).

Le forniture e i reagenti elencati di seguito sono per la determinazione del numero di nefrone renale intero in un topo, cioè due reni. Le modifiche per l'uso del metodo di macerazione acida per ratto sono identificate con asterischi. Tutti i protocolli sperimentali sono conformi alla guida nazionale degli istituti di salute per la cura e l'uso degli animali da laboratorio e sono stati approvati dal Comitato istituzionale per la cura e l'uso degli animali presso l'Università del Mississippi Medical Center.
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<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

Con una buona tecnica sperimentale, il metodo di macerazione acida è ideale per stimare il numero di nefrone in rene intero. Anche se il rene viene sciolto in acido, i glomeruli rimangono in gran parte integri e sono facilmente identificabili, rendendo il conteggio dei singoli glomeruli relativamente facile e diretto. La tecnica di macerazione acida è particolarmente vantaggiosa per diversi motivi. In primo luogo, il metodo di macerazione acida è un metodo rapido e conveniente che richiede relativamente poco in termin...

Il nefrone è sia la struttura di base che l'unità funzionale del rene1. Strutturalmente, il nefrone è costituito dal glomerulo (capillari e podociti) che si trova all'interno della capsula del Bowman e del tubulo renale, costituito dal tubulo prossimale, dal loop di Henle e dal tubulo distale che termina nel condotto di raccolta. Funzionalmente, il ruolo del nefrone è la filtrazione e il riassorbimento di acqua ed elettroliti e la secrezione di rifiuti. In generale, la nefrogenesi è completata a 36 settimane di gestazione negli esseri umani e poco dopo la nascita in diverse specie come il topo e il ratto2. L'investitura di nefrone si riferisce al numero totale di nefroni con cui è nato un individuo, mentre il numero di nevi è il numero totale di nefroni misurati in qualsiasi momento dopo la nascita3. Il termine numero di nefrone e il numero glomerulare sono spesso usati in modo intercambiabile. Poiché c'è solo un glomerulo per nefrone, la valutazione del numero di glomeruli è un surrogato importante per stimare il numero di nefrone.
La valutazione della dotazione di nefrone e del numero di nefrone è di interesse clinico, in quanto gli studi hanno dimostrato un'associazione tra la dotazione di nefrone e i numeri di nefrone ridotti con un aumento dell'incidenza di malattie cardiovascolari4,5 ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. sulla base dei risultati nei reni all'autopsia, Brenner ha osservato che gli individui ipertesi presentavano un numero totale inferiore di nefroni rispetto agli individui normotensivi16. Così, Brenner ipotizzò che vi è una relazione inversa tra il numero di nefrone e il rischio di sviluppare ipertensione più tardi nella vita. Brenner ipotizzò anche che una riduzione del numero dei nefroni fosse compensata dai nefroni rimasti. Al fine di mantenere il normale tasso di filtrazione nel rene, i nefroni residui compensano aumentando la loro superficie glomerulare (ipertrofia glomerulare), lavorando così per mitigare qualsiasi effetto avverso della perdita di nefrone sulla funzione renale4 ,16.
Mentre protettivo nell'ipertrofia glomerulare a breve termine, a lungo termine, porta ad un aumento della ritenzione di sodio e liquidi, un aumento del volume del fluido extracellulare e aumenti della pressione arteriosa, portando a un circolo vizioso di ulteriori aumenti in pressione capillare glomerulare, iperfiltrazione glomerulare e cicatrizzazione del nefrone (sclerosi) e lesione4,16.
Ottenere stime o conteggi di numero di nefrone offre un paio di vantaggi sperimentali: 1) fornisce informazioni sul processo di nefrogenesi, che può quindi essere collegato a specifici geni o fattori nell'embrione o nell'ambiente materno-fetale, e 2) C'è un'associazione di numero di nefrone con malattia cardiovascolare e, quindi, c'è il potenziale che le stime del numero di nefrone potrebbero essere utilizzate per predire il rischio cardiovascolare futuro2,17,18, 19 anni di , 20 il , 21 anni di , 22. oltre all'ambiente materno-fetale, diverse malattie influenzano direttamente il numero di nevi e la funzione renale, tra cui l'aterosclerosi, il diabete, l'ipertensione e anche l'invecchiamento normale2,9, 10,11,12,22,23. Pertanto, la valutazione del numero di nefrone del rene intero è importante per comprendere sia i fattori genetici che quelli ambientali che influenzano la nefrogenesi (valea dire, l'investitura del nefrone) e il numero di nefrone nel corso della vita di una persona e gli effetti risultanti sulla funzionalità renale e sulla salute cardiovascolare.
Attualmente, ci sono diversi metodi disponibili per la determinazione e la quantificazione del numero di nefrone, ciascuno con i propri vantaggi e limitazioni24,25,26,27,28 ,29,30. Metodi sofisticati per determinare il numero di nefratti renali interi includono metodi stereologici, come il metodo dissettore/frazionata e risonanza magnetica25,26. Spesso considerato il gold-standard per la determinazione del numero di nefrone rene intero, il metodo dissector/fratore è sia costoso e dispendioso in termini di tempo. I recenti progressi e il miglioramento dell'imaging e della lavorazione a risonanza magnetica hanno fornito gli strumenti per contare singolarmente ogni nefrone. Tuttavia, l'imaging a risonanza magnetica non è solo dispendioso in termini di tempo, ma anche estremamente costoso. Inoltre, sia il metodo dissettore/fratore che la risonanza magnetica richiedono competenze tecniche avanzate, limitando così l'uso di tali metodi nella maggior parte dei laboratori di ricerca.
La maggior parte dei metodi per determinare il numero di nefrone fa conteggi o stime in base all'identificazione dei glomeruli, in quanto sono facilmente identificabili strutturalmente. In questo documento, il metodo di macerazione acida per stimare il numero di nefrone in rene intero è descritto e dimostrato27. Il metodo di macerazione acida è veloce, affidabile e significativamente meno costoso rispetto ad altri metodi, come il metodo del dissettore/fratore e l'imaging a risonanza magnetica. Inoltre, il metodo di macerazione acida fornisce stime altamente ripetibili del numero di nevi che sono stati segnalati all'interno della gamma di quelli determinati utilizzando la risonanza magnetica Imaging26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

L'investitura di nephron si riferisce al numero totale di nefroni a cui è nato un individuo, poiché la nefrogenesi nell'uomo è completata da 36 settimane di gestazione e non si formano nuovi nefroni dopo la nascita. Il numero di nephron si riferisce al numero totale di nefroni misurati in qualsiasi momento post-parto. Sia i fattori genetici che quelli ambientali influenzano sia il numero che l'investitura dei nevi. Comprendere come i geni o i fattori specifici influenzano il processo di perdita o scomparsa di nefrogenesi e di nefrone è importante in quanto gli individui con una dotazione o un numero di nefrone inferiore sono pensati per essere ad un rischio maggiore di sviluppare malattie renali o cardiovascolari. Comprendere come le esposizioni ambientali nel corso della vita di una persona influisce sul numero di nefrone sarà anche vitale per determinare il rischio di malattia futuro. Pertanto, la capacità di valutare in modo rapido e affidabile il numero di nefratti renali interi è un requisito sperimentale di base per comprendere meglio i meccanismi che contribuiscono o promuovono la perdita di nefrogenesi o di nefrone. Qui, descriviamo il metodo di macerazione acida per la stima del numero di nefrone renale intero in base alla procedura descritta da Damadian, Shawayri e Bricker, con lievi modifiche. Il metodo di macerazione acida fornisce stime rapide e affidabili del numero di nefratti (valutati dal conteggio dei glomeruli) che sono entro il 5% di quelli determinati utilizzando metodi più avanzati, seppur costosi, come l'imaging a risonanza magnetica. Inoltre, il metodo di macerazione acida è un ottimo metodo ad alto rendimento per valutare il numero di nefrini in un gran quantità di campioni o condizioni sperimentali.

Di seguito sono riportate le stime rappresentative del numero di nefrone del rene intero da un modello murino di ipertensione e un modello genetico di ratto della malattia renale cronica legata all'età. Le caratteristiche chiave di identificazione dei glomeruli, come una struttura sferica con o senza strutture pre-o post-arteriolari o tubolari collegate, sono evidenziate per quelle nuove al metodo di macerazione acida (Figura 1).
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Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Stima del numero di Nephron in rene intero utilizzando il metodo di macerazione acida

Le stime del numero di nefrone rene intero sono importanti clinicamente e sperimentalmente, in quanto vi è un'associazione inversa tra il numero di nefrone e un aumentato rischio di malattie renali e cardiovascolari. Qui è dimostrato l'uso del metodo di macerazione acida, che fornisce stime rapide e affidabili del numero di nefrone renale intero.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Il metodo di macerazione acida può aiutare a rispondere a domande chiave sul rene e su come geni specifici contribuiscono o influenzano lo sviluppo del nefro, nonché su come condizioni specifiche, come diabete o ipertensione, influenzano il numero di nefro. Questo è importante in quanto un numero totale di nefrroni con cui un individuo nato è determinato durante lo sviluppo fetale e la perdita di nefroni è stata associata a patologia renale. I principali vantaggi del metodo di macerazione acida sono che è più veloce, più riproducibile, economico e meno dispendioso in termini di tempo rispetto ad altri metodi di conteggio del nefro, come la risonanza magnetica.Questa tecnica facilita la correlazione dell'impatto nel numero di nefro sulla funzione renale, che è importante per promuovere la nostra comprensione di come geni specifici influenzano la funzione e lo sviluppo del nefro. Lo studio di geni o fattori che influenzano il numero complessivo di nefro sarà determinante nello sviluppo di approcci farmacologici o genetici progettati per limitare la perdita di nefro associata alla malattia. Con una buona tecnica e pratica sperimentale, gli individui nuovi a questo metodo dovrebbero facilmente acquisire padronanza del metodo di macerazione acida consentendo stime affidabili e riproducibili di interi numeri di nefro renale.Inizia usando forbici chirurgiche fini per aprire la cavità addominale del topo lungo la linea mediana. Spostare con cura l'intestino e l'adiposo riproduttivo sul lato destro dell'animale. Utilizzando la dissezione lorda, isolare il rene sinistro e tagliare l'arteria renale sinistra e la vena per rimuovere con cura il rene posizionando l'organo in una barca di pesatura appropriatamente etichettata di PBS.Raccogliere il rene giusto nello stesso modo e posizionare entrambi i reni su una garza chirurgica pre-inumidita con PBS. Rimuovere rapidamente qualsiasi tessuto non renale aderente e le capsule renali. Quindi pesare ogni rene registrando individualmente il peso dell'organo sinistro e destro separatamente.Dopo la pesatura, riposizionare ogni rene in una barca di pesatura adeguatamente etichettata senza PBS e utilizzare una lama di rasoio pulita per tagliare ogni organo a metà longitudinalmente. Posizionare ogni mezzo rene tagliato lateralmente e tagliare ogni metà in due millimetri o pezzi più piccoli. Utilizzando la stessa lama di rasoio, trasferire accuratamente i pezzi di rene tritati in un tubo conico da 15 millilitri opportunamente etichettato.In una cappa fumi ben ventilata, aggiungere cinque millilitri di sei acido cloridrico molare ad ogni tubo. Successivamente, agitare delicatamente le miscele di acido renale prima di posizionare i tubi in un bagno d'acqua di 37 gradi Celsius per 90 minuti. Al termine della macerazione acida, attaccare un ago calibro 18 a una siringa da cinque millilitri per rene e rimuovere con cura i pistoni della siringa.Posizionare le siringhe in singoli tubi conici da 50 millilitri nella cappa dei fumi e versare le soluzioni renali all'estremità aperta di ogni siringa mettendo da parte i tubi vuoti in un rack della provetta. Quindi sostituire con cura i pistoni per la lenta estrusione di ogni soluzione attraverso gli aghi nei tubi da 50 millilitri. Lavare i tubi conici da 15 millilitri con cinque millilitri di soluzione PBS per tubo che ruota il PBS per solubilizzare qualsiasi tessuto renale rimanente.Estrudere il contenuto del lavaggio nel tubo appropriato da 50 millilitri come appena dimostrato. Dopo aver estruso il terzo lavaggio, dotare ogni siringa di un ago calibro 21. Estrudere il contenuto dei tubi da 50 millilitri in un secondo set di tubi da 50 millilitri attraverso il lavaggio dell'ago di foro più piccolo ed estrudendo il primo contenuto di tubi da 50 millilitri tre volte con PBS fresco come dimostrato.Dopo il terzo lavaggio ed estrusione, portare il volume totale in ogni tubo fino a 50 millilitri con PBS aggiuntivo e posizionare i tubi in un rack su una piastra rocker a quattro gradi Celsius durante la notte. Entro cinque giorni dall'elaborazione, posizionare una griglia contenente 16 sezioni separate sul fondo di sei pozzi di una piastra di 12 pozza. Invertire delicatamente i tubi della soluzione renale più volte per rimorsi i tessuti pelletti.Aggiungere con cura tre aliquote da 500 microliter di ogni soluzione omogeneizzata per rene a ciascuno dei tre pozzi della piastra del pozzo 12. Diluire il contenuto di ogni pozzo con un volume uguale di PBS. Posizionare la piastra sul palco di un microscopio invertito.Identificare i glomeruli per la loro struttura sferica, la tonalità rossastra e le arterie pre o post attaccate ai corpi dei singoli glomeruli. Contare il numero di glomeruli per ogni sezione grigliata per sommare il conteggio per griglia per il calcolo del numero totale di glomeruli per pozzo. Quindi moltiplicare il numero di glomeruli per pozzo per 100 per ottenere il numero medio di glomeruli per rene.In questo esperimento rappresentativo, il numero totale di nefro nei topi infusi con il veicolo per 14 giorni è stato di circa 12.500 nefroni per rene. L'angiotensina, tuttavia, ha aumentato la pressione atriale di circa 40 millimetri di mercurio ed è stata associata a una significativa riduzione di quasi il 26% del numero totale di nefro. In questo modello genetico di agenesia renale del ratto, gli animali nati con due reni sono stati calcolati per contenere circa 27.500 nefrroni per rene dopo la macerazione acida come dimostrato, mentre i ratti nati con un rene solitario hanno un numero totale di nefroni significativamente inferiore.Le stime di entrambi gli esperimenti erano coerenti con le gamme precedentemente riportate nei ratti. Il metodo di macerazione acida è ideale per stimare il numero di nefroni in reni interi, specialmente nei laboratori non dotati di tecniche più laboriose e proibitive per il conteggio dei nefroni, come il metodo del frazionatore disettore o la risonanza magnetica. Questo metodo consente una stima elevata della produttività, efficiente e riproducibile del numero intero di nefro renale che si trovano entro il 5% dei numeri determinati dalla risonanza magnetica.La valutazione del numero di nefro è di rilevanza clinica in quanto il numero ridotto di nefroni è stato associato a un aumento del rischio di malattie cardiovascolari, come la malattia renale cronica. Non dimenticare che lavorare con acido cloridrico può essere estremamente pericoloso e che devono essere prese precauzioni, come indossare guanti, occhiali protettivi e un cappotto da laboratorio.

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