Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Dette arbeidet ble støttet delvis av National Institutes of Health, National Heart, Lung, og Blood Institute (R01HL107632).

Forsyninger og reagenser listet nedenfor er for fastsettelse av hele nyre nephron tall i én mus, det vil si to nyrer. Modifiseringer for bruken av syren maserasjon metoden for rotten er kjennemerke med stjernene. Alle eksperimentelle protokoller likedannet til National Institutes of Health guide for omsorg og bruk av laboratorium dyr og ble godkjent av den institusjonelle Animal Care og use Committee ved University of Mississippi Medical Center.
1. nyre isolasjons prosedyre
<ol><li>Veie mus...

<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

Med god eksperimentell teknikk, er syre maserasjon metoden ideelt for å estimere nephron tall i hele nyrene. Selv om nyrene er oppløst i syre, glomeruli fortsatt i stor grad intakt og er lett identifiserbare, slik at telling av individuelle glomeruli relativt enkel og grei. Syren maserasjon teknikk er spesielt fordelaktig av flere grunner. For det første er syre maserasjon metoden en rask og praktisk metode som krever relativt lite i forhold til regning og fysisk anstrengelse. Alle reagenser og forbruksvarer som kreve...

Nephron er både grunnleggende strukturelle og funksjonell enhet av nyre1. Strukturelt, består nephron av glomerulus (blodkar og podocytes) ligger innenfor Bowman ' s kapsel og renal tubule, bestående av proksimale tubule, loopen av Henles, og den fremre tubule som opphører i samlerøret. Funksjonelt, er rollen til nephron filtrering og reabsorpsjon av vann og elektrolytter og utskillelsen av avfall. Generelt, nephrogenesis er fullført på 36 uker av svangerskapet hos mennesker og kort tid etter fødselen i flere arter som musen og rotte2. Nephron legat refererer til det totale antall nephrons som en person er født med, mens Nephron tall er det totale antall nephrons målt til enhver tid etter fødselen3. Termen nephron nummer og glomerulær nummer brukes ofte om hverandre. Fordi det bare er én glomerulus per nephron, er vurderingen av glomeruli nummer et viktig surrogat for estimering av nephron nummer.
Vurderingen av nephron legat og nephron tall er av klinisk interesse som studier har vist en assosiasjon mellom nephron legat og reduserte nephron tall med en økt forekomst av kardiovaskulær sykdom4,5 ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. basert på funn i nyrer ved obduksjon, observerte brenner at hypertensive individer presentert med et lavere antall nephrons enn normotensive individer individer16. Brenner hypotetisk gjennomsnitt derfor at det er en invers sammenheng mellom nephron tall og risikoen for å utvikle hypertensjon senere i livet. Brenner også hypotetisk gjennomsnitt at en reduksjon i nephron tall ble kompensert for av nephrons som forble. For å opprettholde den normale filtrerings hastigheten i nyrene, vil resterende nephrons kompensere ved å øke deres glomerulær overflateareal (glomerulær hypertrofi), og dermed arbeide for å dempe enhver negativ effekt av nephron tap på nyrefunksjon4 ,16.
Mens beskyttende på kort sikt, glomerulær hypertrofi, på lang sikt, fører til økt natrium og væskeretensjon, økt ekstracellulære væske volum, og økninger i arteriell blodtrykk, fører til en ond sirkel av ytterligere økninger i glomerulær kapillær trykk, glomerulær hyperfiltration, og nephron arrdannelse (sklerose) og skade4,16.
Innhenting av estimater eller tellinger av nephron tall tilbyr et par eksperimentelle fordeler: 1) det gir informasjon om prosessen med nephrogenesis, som deretter kan knyttes til spesifikke gener eller faktorer i det embryo eller mors-fosterets miljø, og 2) Det er en sammenslutning av nephron tall med kardiovaskulær sykdom, og dermed er det mulig at estimater av nephron tall kan brukes til å forutsi fremtidig kardiovaskulær risiko2,17,18, 19 andre priser , 20 priser og , 21 priser og , 22. i tillegg til mors-fosterets miljø, flere sykdommer direkte innvirkning nephron tall og nyrefunksjon, inkludert aterosklerose, diabetes, hypertensjon, og til og med normal aldring2,9, 10,11,12,22,23. Dermed er vurdering av hele nyre nephron tall viktig å forstå både genetiske og miljømessige faktorer som påvirker nephrogenesis (dvs.nephron legat) og nephron nummer i løpet av en persons liv og de resulterende effektene på nyrefunksjon og kardiovaskulær helse.
For tiden er det flere metoder tilgjengelig for fastsettelse og kvantifisering av nephron nummer, hver med sine egne fordeler og begrensninger24,25,26,27,28 ,29,30. Sofistikerte metoder for å bestemme hele nyre nephron tall inkluderer stereological metoder, slik som dissector/fractionator metode, og magnetisk resonans imaging25,26. Ofte betraktet som gull-standarden for å bestemme hele nyre nephron tall, dissector/fractionator metoden er både dyrt og tidkrevende. Nylige fremskritt og forbedring i magnetisk resonans imaging og prosessering har gitt verktøyene til å telle hver nephron individuelt. Imidlertid er magnetisk resonans imaging ikke bare tidkrevende, men også svært kostbart. I tillegg krever både dissector/fractionator metode og magnetisk resonans imaging avansert teknisk ekspertise, og dermed begrense bruken av slike metoder i de fleste forskningslaboratorier.
De fleste metoder for å bestemme nephron nummer gjør tellinger eller estimater basert på identifisering av glomeruli, som de er lett identifiserbare strukturelt. I dette papiret er syre maserasjon metode for å estimere nephron tall i hele nyrene beskrevet og demonstrert27. Den syre maserasjon metoden er rask, pålitelig, og betydelig rimeligere enn andre metoder, for eksempel dissector/fractionator metode og magnetisk resonans imaging. Videre gir syre maserasjon metoden svært repeterbar estimater av nephron tall som er rapportert å være innenfor rekkevidden av de som bestemmes ved hjelp av magnetisk resonans imaging26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

Nephron legat refererer til det totale antall nephrons en person er født med, som nephrogenesis hos mennesker er fullført innen 36 uker av svangerskapet og ingen nye nephrons dannes etter fødselen. Nephron nummer refererer til det totale antallet nephrons målt på et hvilket som helst tidspunkt etter fødselen. Både genetiske og miljømessige faktorer påvirker både nephron begavelse og antall. Forstå hvordan spesifikke gener eller faktorer påvirker prosessen med nephrogenesis og nephron tap eller død er viktig som individer med lavere nephron legat eller antall antas å være på en høyere risiko for å utvikle nyre-eller hjerte-og karsykdommer. Forstå hvordan miljømessige eksponeringer i løpet av en persons levetid påvirker nephron tall vil også være avgjørende for å bestemme fremtidig sykdomsrisiko. Dermed er evnen til å vurdere hele nyre nephron nummer raskt og pålitelig en grunnleggende eksperimentell krav til bedre å forstå mekanismer som bidrar til eller fremme nephrogenesis eller nephron tap. Her beskriver vi syre maserasjon metode for estimering av hele nyre nephron tall basert på prosedyren beskrevet av Damadian, Shawayri, og Bricker, med små modifikasjoner. Den syre maserasjon metoden gir raske og pålitelige estimater av nephron tall (som vurdert ved å telle glomeruli) som er innenfor 5% av de som bestemmes ved hjelp av mer avanserte, om enn dyrt, metoder som magnetisk resonans imaging. Videre er syre maserasjon metoden en utmerket høy gjennomstrømming metode for å vurdere nephron tall i et stort antall prøver eller eksperimentelle forhold.

Nedenfor er representative anslag over hele nyre nephron tall fra en etablert mus modell av hypertensjon og en genetisk rotte modell av alder-relaterte kroniske nyresykdom. Nøkkel identifiserende kjennetegn ved glomeruli, slik som en sfærisk struktur med eller uten vedlagt pre-eller post-arterioler eller rørformede strukturer, er uthevet for de som er nye til syre maserasjon metode (figur 1).
I d...

Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Estimering av Nephron nummer i hele nyrene ved hjelp av acid maserasjon Method

Estimater av hele nyre nephron tall er viktige klinisk og eksperimentelt, som det er en invers assosiasjon mellom nephron tall og en økt risiko for nyre-og hjerte-og karsykdommer. Heri, bruk av syre maserasjon metoden, som gir raske og pålitelige estimater av hele nyre nephron tall, er demonstrert.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Syremacerasjonsmetoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål om nyrene og hvordan spesifikke gener bidrar til eller påvirker nefhron-utviklingen, samt hvordan spesifikke forhold, som diabetes eller hypertensjon, påvirker nephron-nummeret. Dette er viktig som et totalt antall nephrons en person født med bestemmes under fosterutvikling og tap av nephrons har vært forbundet med nyrepatologi. De viktigste fordelene med syre maceration metoden er at det er raskere, mer reproduserbar, billig, og mindre tidkrevende enn andre nephron tellemetoder, som magnetisk resonans imaging.Denne teknikken letter korrelasjonen av virkningen i nephron nummer på nyrefunksjon, noe som er viktig for å fremme vår forståelse av hvordan spesifikke gener påvirker nephron funksjon og utvikling. Studien av gener eller faktorer som påvirker det totale nephron-nummeret vil være medvirkende i utviklingen av farmakologiske eller genetiske tilnærminger designet for å begrense sykdomsrelatert nefhron tap. Med god eksperimentell teknikk og praksis bør personer som er nye på denne metoden lett få mestring av syremacerasjonsmetoden, slik at pålitelige og reproduserbare estimater av hele nyrenefrontall.Begynn med å bruke fin kirurgisk saks for å åpne musehulen langs midtlinjen. Skift forsiktig tarmene og reproduktive fett til høyre side av dyret. Ved hjelp av grov disseksjon, isolere venstre nyre og kutte venstre nyrearterie og vene for å forsiktig fjerne nyrene plassere orgelet i en passende merket veie båt av PBS.Samle høyre nyre på samme måte og plasser begge nyrene på en kirurgisk gasbind pre-fuktet med PBS. Fjern raskt eventuelle tilslutninger av ikke-nyrevev og nyrekapsler. Deretter vekt hver nyre individuelt registrere vekten av venstre og høyre organ separat.Etter veiing, plasser hver nyre tilbake i en passende merket veiebåt uten PBS og bruk et rent barberblad til å kutte hvert organ i to på langs. Legg hver nyre halv kutt side ned og kutt hver halvdel i to millimeter eller mindre stykker. Bruk samme barberblad, overfør forsiktig de hakkede nyrebitene til et passende merket 15 milliliter konisk rør.I en godt ventilert røykhette, tilsett fem milliliter seks molarsyre til hvert rør. Deretter agiterer du forsiktig nyresyreblandingene før du plasserer rørene i et 37 graders Celsius vannbad i 90 minutter. På slutten av syremacerasjonen fester du en 18 gauge kanyle til en fem milliliter sprøyte per nyre og fjern forsiktig sprøytestempelene.Legg sprøytene i individuelle 50 milliliter koniske rør i røykhetten og hell nyreløsningene i den åpne enden av hver sprøyte som setter de tomme rørene til side i et reagensrørstativ. Deretter må du forsiktig erstatte stempelene for langsom ekstrudering av hver oppløsning gjennom nålene inn i de 50 mlene. Vask de 15 milliliter koniske rørene med fem milliliter PBS-løsning per rør som virvler PBS for å løse eventuell gjenværende nyrevev.Ekstruder vaskeinnholdet i det passende 50 milliliter røret som nettopp demonstrert. Etter å ha ekstrudert den tredje vasken, utstyr hver sprøyte med en 21 gauge nål. Ekstruder innholdet i de 50 milliliter rørene i et andre sett med 50 milliliter rør gjennom den mindre bore nål vasking og ekstrudere de første 50 milliliter rørinnholdet tre ganger med frisk PBS som demonstrert.Etter den tredje vask og ekstrudering, ta det totale volumet i hvert rør opp til 50 milliliter med ekstra PBS og legg rørene i et stativ på en rockerplate ved fire grader Celsius over natten. Innen fem dager etter behandling plasserer du et rutenett som inneholder 16 separate seksjoner på bunnen av seks brønner av en 12 brønnplate. Forsiktig invertere rørene av nyreoppløsning flere ganger for å gjenopplive pelleted vev.Tilsett nøye tre 500 mikroliter aliquots av hver homogenisert løsning per nyre til hver av tre brønner av 12 brønnplaten. Fortynn innholdet i hver brønn med et likt volum PBS. Plasser platen på scenen av et omvendt mikroskop.Identifiser glomeruli ved deres sfæriske struktur, rødlig nyanse og pre eller post arterier festet til kroppene til individuelle glomeruli. Telle antall glomeruli per hver gridded seksjon for å summere antall per rutenett for beregning av totalt antall glomeruli per brønn. Deretter multipliserer du antall glomeruli per brønn ganger 100 for å oppnå gjennomsnittlig antall glomeruli per nyre.I dette representative eksperimentet var det totale nephron-nummeret hos mus fylt med kjøretøy i 14 dager ca. 12 500 nephrons per nyre. Angiotensin to infusjon økte imidlertid atrietrykket med ca. 40 millimeter kvikksølv og var forbundet med en signifikant nesten 26% reduksjon i det totale nephron-nummeret. I denne genetiske modellen av rotte nyre agenesis, dyr født med to nyrer ble beregnet til å inneholde ca 27,500 nephrons per nyre etter syre maceration som demonstrert, mens rotter født med en enslig nyre ble funnet å ha betydelig lavere totale nephron tall.Estimater fra begge eksperimentene var i samsvar med områdene som tidligere ble rapportert hos rotter. Syremacerasjonsmetoden er ideell for å estimere nephron-tall i hele nyrer, spesielt i laboratorier som ikke er utstyrt med mer arbeidsintensive og kostnadsuoverkommelige teknikker for å telle nephrons, for eksempel disectorfraksjonatormetoden eller magnetisk resonansavbildning. Denne metoden tillater en høy gjennomstrømning, effektiv og reproduserbar estimering av hele nyrenefronnummeret som er innenfor 5% av tallene bestemmes av magnetisk resonansavbildning.Vurderingen av nephron nummer er av klinisk relevans som redusert nephron tall har vært forbundet med økt risiko for hjerte-og karsykdommer, som kronisk nyresykdom. Ikke glem at arbeid med saltsyre kan være ekstremt farlig og at forholdsregler bør tas, for eksempel bruk av hansker, vernebriller og en laboratoriefrakk.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Den α-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Bruke Hele Spytt

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Mus nyretransplanterte: Modeller av allograft-avstøting

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normotermisk<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Nyre Perfusjons for Bevaring av Kidney grafts før Transplantasjon

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

Intravaskulær Levering av Biologics til Rat Nyre

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

En metode for å kvantifisere Upper Limb Performance i dagliglivet Bruke Akselerometre

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Hele kroppen og regionale kvantifisering av aktiv person brune fettvev med 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Blodplater-basert oppdagelsen av nitrogenoksid i blodet ved å måle VASP fosforylering

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

En høy-gjennomstrømning i Situ metode for estimering av hepatocytt kjernefysisk ploidy i mus

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...