Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Эта работа была поддержана в части национальными институтами здоровья, национальное сердце, Лунг, и институт крови (R01HL107632).

Материалы и реагенты, перечисленные ниже, предназначены для определения целой почки нефрона в одной мыши, то есть две почки. Модификации для применения метода кислотного мацерации для крыс отождествляется со звездочками. Все экспериментальные протоколы соответствовали национальным ?...

<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

При хорошей экспериментальной технике метод кислотного мацерации идеален для оценки количества нефрона в целой почке. Хотя почка растворяется в кислоте, клубочков остаются в значительной степени нетронутыми и легко поддаются идентификации, что делает подсчет индивидуальных клубочк?...

Нефрон является как основной структурной, так и функциональной единицей почки1. Структурно нефрон состоит из клубочек (капилляров и додокитов), расположенных в пределах боуменовой капсулы и почечной трубочки, состоящей из проксимальной трубочки, петли Хенле и дистальной трубочки, которая прекращается в собирающий проток. Функционально, роль нефрона заключается в фильтрации и реабсорбции воды и электролитов и секреции отходов. В целом, нефрогенез завершается в 36 недель гестации у людей и вскоре после рождения в нескольких видах, таких как мышь и крыса2. Облечение нефрона относится к общему количеству нефронов, с которыми рождается индивидуум, в то время как число нефрона составляет общее количество нефронов, измеряемых в любое время после рождения3. Термин «нефрон» и номер клубочковой часто используются как взаимозаменяемые. Поскольку существует только один клубочек на нефрон, оценка клубочков числа является важным суррогатом для оценки числа нефрон.
Оценка фонда нефрона и числа нефрона представляет клинический интерес, поскольку исследования продемонстрировали связь между одаренностью нефрона и сокращениями нефрона с увеличением заболеваемости сердечно-сосудистыми заболеваниями4,5 ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. Основываясь на результатах в почках при вскрытии, Бреннер заметил, что гипертензивные особи представлены с меньшим общим числом нефронов, чем нормотенсивные особи16. Таким образом, Бреннер предположил, что существует обратная зависимость между числом нефрона и риском развития гипертонии в дальнейшей жизни. Бреннер также предположил, что сокращение числа нефрона компенсируется нефронами, которые остались. Для того чтобы поддерживать нормальный тариф фильтрации в почках, остаточные нефроны компенсируют путем увеличивать их клубочковой поверхностную OBLASTь (гипертрофия клубочковой), таким образом работая для того чтобы уменьшить любое неблагоприятное влияние потери нефрона на функции почек4 ,16.
Хотя защитные в краткосрочной перспективе, клубочковой гипертрофия, в долгосрочной перспективе, приводит к увеличению натрия и жидкости удержания, увеличение объема внеклеточного жидкости, и увеличение артериального давления, что приводит к порочный круг дальнейшего увеличения клубочковой капилляра давление, клубочковой гиперфильтрации, и нефрон рубцов (склероз) и травмы4,16.
Получение оценок или отсчетов нефрона предлагают несколько экспериментальных преимуществ: 1) он предоставляет информацию о процессе нефрогенеза, которые затем могут быть связаны с конкретными генами или факторами в эмбрионе или матери и плода окружающей среды, и 2) существует Ассоциация номера нефрона с сердечно-сосудистыми заболеваниями, и, таким образом, существует вероятность того, что оценки числа нефрона могут быть использованы для прогнозирования будущих сердечно-сосудистых рисков2,17,18, в 19 , 20 , 21 год , 22. в дополнение к окружающей среде матери и плода, некоторые заболевания оказывают непосредственное влияние на число нефрона и функции почек, включая атеросклероз, диабет, гипертонию и даже нормальное старение2,9, 10,11,12,22,23. Таким образом, оценка числа ненефрона в целом почки имеет важное значение для понимания как генетических, так и экологических факторов, влияющих на нефрогенез (например, облечение нефрон) и числа нефрона в течение жизни человека и результирующий эффект на функции почек и сердечно-сосудистой системы.
В настоящее время существует несколько методов определения и количественной оценки числа нефрон, каждый из которых имеет свои преимущества и ограничения24,25,26,27,28 ,29,30. Изощренные методы для определения целого ряда почек нефрона включают стереологических методов, таких как метод дезсектора/фракционитор, и магнитно-резонансная томография25,26. Часто считается золотым стандартом для определения всей почечной число нефрон, диссектор/фракционитор метод является дорогостоящим и трудоемким. Недавние достижения и совершенствование магнитно-резонансной томографии и обработки предоставили инструменты для подсчета каждого нефрона индивидуально. Однако магнитно-резонансная томография является не только трудоемкой, но и чрезвычайно дорогостоящей. Кроме того, метод дезсектора/фракционирующих и магнитно-резонансной томографии требует наличия передовых технических знаний, что ограничивает использование таких методов в большинстве исследовательских лабораторий.
Большинство методов определения количества нефрона делают подсчет или оценку на основе идентификации клубочков, поскольку они легко идентифицируемые структурно. В данной статье описан и продемонстрирован27метод кислотного мацерации для расчета числа нефрона в целом почках. Метод кислотного мацерации быстр, надежен и значительно дешевле, чем другие методы, такие как метод дезсектора/фракционификатора и магнитно-резонансная томография. Кроме того, метод кислотного мацерации обеспечивает высоковоспроизводимые оценки числа нефрона, которые, как сообщалось, находятся в диапазоне тех, которые определяются с помощью магнитно-резонансной томографии26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

Облечение нефрона относится к общему количеству нефронов, с которыми рождается человек, поскольку нефрогенез у человека завершается 36 неделями гестации, и после родов не образуются новые нефроны. Число нефрона относится к общему количеству нефраонов, измеряемых в любой момент после родов. Как генетические, так и экологические факторы влияют на одаренность нефрона и их количество. Понимание того, как конкретные гены или факторы, влияющие на процесс нефрогенеза и потери нефрон или кончины важно, как лиц с меньшим облечения нефрона или числа, как полагают, на более высокий риск развития почечной или сердечно-сосудистых заболеваний. Понимание того, как воздействие на окружающую среду в течение жизни человека влияет на число нефрон также будет иметь жизненно важное значение в определении будущего риска заболевания. Таким образом, способность оценивать быстро и надежно количество всей почки нефрона является базовым экспериментальным требованием для лучшего понимания механизмов, способствующих или способствующих нефрологенезу или потере нефрона. Здесь мы описываем метод кислотного мацерации для оценки количества почек нефррона, основанного на процедуре, описанной Дамадкой, Шавайри и Брикер, с небольшими изменениями. Метод кислотного мацерации обеспечивает быструю и надежную оценку числа нефрона (оцениваемых путем подсчета клубочков), которые находятся в пределах 5% от тех, которые определяются с использованием более продвинутых, хотя и дорогостоящих, методов, таких как магнитно-резонансная томография. Кроме того, метод кислотного мацерации является отличным методом высокой пропускной способности для оценки номера нефрона в большом количестве образцов или экспериментальных условиях.

Ниже приведены репрезентативные оценки по целому количеству почек нефрона от установленной модели мыши гипертонии и генетической модели крыс возрастных хронических заболеваний почек. Ключевые идентификационные характеристики клубочков, такие как сферическая стру...

Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Оценка числа нефрона в целом почки использованием кислоты метод мацерации

Оценки по целому количеству почек нефрона важны клинически и экспериментально, так как существует обратная связь между числом нефрона и повышенной опасностью почечных и сердечно-сосудистых заболеваний. При этом демонстрируется использование метода кислотного мацерации, который обеспечивает быструю и надежную оценку всего количества почек нефррона.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Метод мацеризации кислоты может помочь ответить на ключевые вопросы о почках и о том, как конкретные гены способствуют или влияют на развитие нефрона, а также как конкретные условия, такие как диабет или гипертония, влияют на число нефронов. Это важно, так как общее количество нефронов, родившихся с определяется во время развития плода и потеря нефронов была связана с почечной патологией. Основные преимущества метода мацерации кислоты в том, что он быстрее, более воспроизводимым, недорогим и менее трудоемким, чем другие методы подсчета нефрита, такие как магнитно-резонансная томография.Этот метод облегчает корреляцию влияния числа нефронов на функцию почек, что важно для дальнейшего нашего понимания того, как конкретные гены влияют на функцию и развитие нефрона. Изучение генов или факторов, влияющих на общее число нефронов, будет играть важную роль в разработке фармакологических или генетических подходов, направленных на ограничение связанных с болезнью потерь нефрона. С хорошей экспериментальной техникой и практикой, лица, новые для этого метода должны легко получить освоение метода кислотной мацерации позволяет надежные и воспроизводимые оценки целых номеров нефрона почек.Начните с помощью тонких хирургических ножниц, чтобы открыть брюшной полости мыши вдоль средней линии. Аккуратно переложите кишечник и репродуктивную жировую часть на правую сторону животного. Используя грубое вскрытие, изолировать левую почку и сократить левую почечную артерию и вену, чтобы тщательно удалить почку размещения органа в надлежащим образом помечены вес лодки PBS.Соберите правую почку таким же образом и поместите обе почки на хирургическую марлю, предварительно увлажненной PBS. Быстро удалить любые адепты не почечной ткани и почечных капсул. Затем вес каждой почки индивидуально записи веса левого и правого органа отдельно.После взвешивания, поместите каждую почку обратно в соответствующим помечены вес лодки без PBS и использовать чистый лезвие бритвы, чтобы сократить каждый орган пополам вдоль. Поместите каждую почку наполовину вырезать сторону вниз и сократить каждую половину на два миллиметра или меньше частей. Используя тот же лезвие бритвы, тщательно перенесите нарезанные кусочки почек в соответствующую 15 миллилитровую коническую трубку.В хорошо проветриваемый дымовой капот добавьте пять миллилитров шести молярной соляной кислоты в каждую трубку. Затем аккуратно агитировать смеси почечной кислоты перед размещением трубок в 37 градусов по Цельсию водяной бане в течение 90 минут. В конце кислотной мацерации прикрепите одну иглу 18 калибра к одному пятими миллилитровому шприцу на почку и тщательно удалите поршень шприца.Поместите шприцы в отдельные 50 миллилитровых конических трубок в капот дыма и залить почечные растворы в открытый конец каждого шприца, установив пустые трубки в сторону в стойке пробирки. Затем тщательно заменить поршени для медленного экструзии каждого раствора через иглы в 50 миллилитров труб. Вымойте 15 миллилитров конических трубок с пятью миллилитров раствора PBS на трубку закрученного PBS solubilize любой оставшейся ткани почек.Extrude мыть содержимое в соответствующие 50 миллилитров трубки, как только что продемонстрировали. После экструдирования третьего мытья, оборудовать каждый шприц с 21 калибровочных иглы. Экструд содержание 50 миллилитров труб во второй набор 50 миллилитров труб через меньшие скважины промывки иглы и экструдирования первых 50 миллилитров трубки содержание три раза со свежим PBS, как попродемонстрировано.После третьей стирки и экструзии, довести общий объем в каждой трубке до 50 миллилитров с дополнительными PBS и поместить трубки в стойку на рокер пластины при четырех градусах по Цельсию на ночь. В течение пяти дней после обработки поместите сетку, содержащую 16 отдельных секций, на дно шести скважин из 12 скважин. Аккуратно инвертировать трубки почечного раствора несколько раз, чтобы повторно использовать гранулы тканей.Аккуратно добавьте три 500 микролитров алицитов каждого однородного раствора на почку в каждую из трех скважин из 12 колодцев. Разбавить содержимое каждой хорошо с равным объемом PBS. Поместите пластину на сцену перевернутого микроскопа.Определите гломерули по их сферической структуре, красноватому оттенку и до- или пост артериям, прикрепленным к телам отдельных гломерули. Подсчитайте количество гломерули на каждый сетчатый раздел, чтобы суммировать количество на сетку для расчета общего количества гломерули на колодец. Затем умножьте количество гломерули на колодец раз 100, чтобы получить среднее количество гломерули на почку.В этом репрезентативном эксперименте общее число нефронов у мышей, пропитанных транспортным средством в течение 14 дней, составило около 12 500 нефронов на почку. Ангиотензин два вливания однако, увеличение предсердий давление примерно на 40 миллиметров ртутного столба и был связан со значительным почти 26%сокращение общего числа нефронов. В этой генетической модели крысы почечного агенеза, животные, родившиеся с двумя почками были рассчитаны содержать около 27500 нефронов на почку после кислотной мацерации, как попродемонстрировано, в то время как крысы, рожденные с одиночной почки было установлено, что значительно ниже общее число нефронов.Оценки обоих экспериментов соответствовали диапазонам, ранее зарегистрированным у крыс. Метод мацеризации кислоты идеально подходит для оценки нефронов в целых почках, особенно в лабораториях, не оборудованных более трудоемкими и дорогостоящими методами подсчета нефронов, такими как метод дисэкторного фракционатора или магнитно-резонансная томография. Этот метод позволяет высокую пропускную способность, эффективную и воспроизводимую оценку количества нефрона всей почки, которое находится в пределах 5% от числа, определяемого магнитно-резонансной томографией.Оценка числа нефронов имеет клиническое значение, поскольку снижение числа нефронов было связано с повышенным риском сердечно-сосудистых заболеваний, таких как хронические заболевания почек. Не забывайте, что работа с соляной кислотой может быть чрезвычайно опасной и что следует принимать меры предосторожности, такие как ношение перчаток, защитных очков и лабораторного пальто.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Метод мышей Изоляция Островок и субкапсулярной трансплантации почек

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

Метод Роман противоракового препарата развитию опухоли использованием эксплантатов хирургической Образцы


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Α-тест: Быстрая бесклеточной CD4 Перечисление Использование Всего слюны

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Мышь трансплантации почки: Модели аллотрансплантата Отказ

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Нормотермических<em&gt; Экс Vivo</em&gt; Почки перфузии по охране почки графты до трансплантации

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

Внутрисосудистая Поставка биопрепаратов в крысиной почки

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

Метод Количественная верхней конечности производительности в повседневной жизни при помощи акселерометров

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Всего тела и региональных количественного определения активного человека коричневый жировой ткани с помощью 18F-ФДГ ПЭТ/КТ

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Обнаружение на основе тромбоцитов оксида азота в крови путем измерения VASP фосфорилирование

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

Высокой пропускной способ в Ситу Метод оценки гепатоцитов ядерной плоиди у мышей

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...