Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Detta arbete stöddes delvis av nationella institut för hälsa, nationella hjärta, lung och Blood Institute (R01HL107632).

Tillförsel och reagenser som anges nedan är för bestämning av hela njuren nefronen nummer i en mus, det vill, två njurar. Ändringar för användning av syran maceration metod för råtta identifieras med asterisker. Alla experimentella protokoll har kon centrer at till National Institute of Health Guide för skötsel och användning av försöks djur och godkändes av den institutionella djur omsorg och användning kommittén vid University of Mississippi Medical Center.
1. förfarande fö...

<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

Med god experimentell teknik, är syran maceration metod idealisk för att uppskatta nefronen nummer i hela njuren. Även om njuren löses i syra förblir glomeruli i stort sett intakt och är lätt att identifiera, vilket gör det relativt enkelt och okomplicerat att räkna enskilda glomeruli. Syran maceration teknik är särskilt fördelaktigt av flera skäl. För det första är syran maceration metoden en snabb och bekväm metod som kräver relativt lite när det gäller bekostnad och fysisk ansträngning. Alla reage...

Den nefronen är både den grundläggande strukturella och funktionell enhet i njuren1. Strukturellt, den nefronen består av glomerulus (kapillärer och podocyter) ligger inom Bowman ' s kapsel och njurtubuli, bestående av proximala tubuli, loop of Henle, och distala tubuli som slutar i uppsamlings kanalen. Funktionellt, är den roll som nefronen filtrering och reabsorption av vatten och elektrolyter och utsöndringen av avfall. I allmänhet, nekan är avslutad vid 36 graviditets vecka hos människor och strax efter födseln i flera arter som mus och råtta2. Nefronen begåvning hänvisar till det totala antalet nephrons som en individ föds med, medan nefronen nummer är det totala antalet nephrons mätt när som helst efter födseln3. Termen nefrontal och glomerulär tal används ofta omväxlande. Eftersom det finns bara en glomerulus per nefronen, är bedömningen av glomeruli nummer en viktig surrogat för att uppskatta nefronen nummer.
Bedömningen av nefronen begåvning och nefronen nummer är av kliniskt intresse eftersom studier har visat ett samband mellan nefronen begåvning och minskat nefronen nummer med en ökad förekomst av hjärt-kärlsjukdom4,5 ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. baserat på fynd i njurar vid obduktion, Brenner observerade att hypertensiva individer presenteras med ett lägre totalt antal nephrons än normotensiva individer16. Således, Brenner hypotesen att det finns ett omvänt förhållande mellan nefronen antal och risken att utveckla hypertoni senare i livet. Brenner en hypotes om att en minskning av nefronen antal kompenserades av nephrons som återstod. För att bibehålla den normala filtrerings hastigheten i njuren, kompenserar resterande nephrons genom att öka deras glomerulär yta (glomerulär hypertrofi), och arbetar därmed för att lindra eventuella negativa effekter av neyloförlust på njur funktion4 ,16.
Medan skyddande på kort sikt, glomerulär hypertrofi, på lång sikt, leder till ökad natrium-och vätskeretention, ökad extracellulär vätske volym, och ökningar av arteriellt blod tryck, vilket leder till en ond cirkel av ytterligare ökningar i glomerulär kapillärtryck, glomerulär hyperfiltration och nefrorärr (skleros) och skada4,16.
Att få uppskattningar eller räkningar av nefronen nummer erbjuder ett par experimentella fördelar: 1) det ger information om processen för neolgenesis, som sedan kan kopplas till specifika gener eller faktorer i embryot eller maternell-fetal miljö, och 2) Det finns en sammanslutning av nefronen nummer med hjärt-kärlsjukdom och därmed finns det potential att uppskattningar av nefronen antal kan användas för att förutsäga framtida kardiovaskulär risk2,17,18, den 19 , 20 och andra , 21 för att , 22. Förutom moderns-fetal miljö, flera sjukdomar direkt inverkan nefronen antal och njur funktion, inklusive åder förkalkning, diabetes, hypertoni, och även normalt åldrande2,9, 10,11,12,22,23. Således, bedömning av hela njure nefronen antal är viktigt att förstå både genetiska och miljömässiga faktorer som påverkar nedegenes (dvs.neger begåvning) och nefronen nummer under loppet av en persons liv och de resulterande effekterna njur funktion och kardiovaskulär hälsa.
För närvarande finns det flera metoder som är tillgängliga för bestämning och kvantifiering av nefronen nummer, var och en med sina egna fördelar och begränsningar24,25,26,27,28 ,29,30. Sofistikerade metoder för bestämning av hela njure nefronen antal inkluderar stereologiska metoder, såsom dissector/fraktionator metod, och magnetisk resonanstomografi25,26. Ofta anses vara guld-standard för att bestämma hela njure nefronen nummer, dissector/fraktionator metoden är både dyrt och tids krävande. Senaste framstegen och förbättring av magnetisk resonanstomografi och bearbetning har gett verktyg för att räkna varje nefronen individuellt. Magnetisk resonanstomografi är dock inte bara tids krävande utan också extremt dyrt. Dessutom kräver både dissector/fraktionator-metoden och magnetisk resonanstomografi avancerad teknisk expertis, vilket begränsar användningen av sådana metoder i de flesta forsknings laboratorier.
De flesta metoder för att fastställa nefronen antal göra räknas eller uppskattningar baserade på identifiering av glomeruli, eftersom de är lätt identifierbara strukturellt. I detta dokument, den syra maceration metod för att uppskatta nefronen nummer i hela njuren beskrivs och visas27. Syran maceration metoden är snabb, pålitlig, och betydligt billigare än andra metoder, såsom dissector/fraktionator metod och magnetisk resonanstomografi. Dessutom ger syran maceration metod mycket repeterbara uppskattningar av nefronen nummer som har rapporter ATS vara inom intervallet för dem som bestäms med hjälp av magnetisk resonanstomografi26.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

Nephron begåvning hänvisar till det totala antalet nephrons en individ föds med, som necygenes hos människor avslutas med 36 graviditets veckor och inga nya nephrons bildas efter födseln. Nephron nummer avser det totala antalet nephrons mätt vid varje tidpunkt efter födseln. Både genetiska och miljömässiga faktorer påverkar både nefronen begåvning och antal. Förstå hur specifika gener eller faktorer påverkar processen för nekan och nefronen förlust eller död är viktigt som individer med lägre nefronen begåvning eller antal tros vara en högre risk att utveckla njur-eller hjärt-kärlsjukdom. Att förstå hur miljö exponeringar under loppet av en persons livstid påverkar nefronen antal kommer också att vara avgörande för att fastställa framtida sjukdoms risk. Således, förmågan att bedöma hela njure nefronen nummer snabbt och tillförlitligt är ett grundläggande experimentellt krav för att bättre förstå mekanismer som bidrar till eller främja neuringenes eller nefronförlust. Här beskriver vi syran maceration metod för uppskattning av hela njure nefronen nummer baserat på det förfarande som beskrivs av Damadian, shawayri, och Bricker, med smärre modifieringar. Syran maceration metoden ger snabba och pålitliga uppskattningar av nefronen antal (bedömt genom att räkna Glomeruli) som ligger inom 5% av dem som bestäms med hjälp av mer avancerade, om än dyra, metoder såsom magnetisk resonanstomografi. Dessutom är syran maceration metoden en utmärkt hög genom strömning metod för att bedöma nefronen nummer i ett stort antal prover eller experimentella tillstånd.

Nedan är representativa uppskattningar av hela njure nefronen nummer från en etablerad mus modell av hypertoni och en genetisk råtta modell av åldersrelaterade kronisk njur sjukdom. Viktiga identifierande egenskaper hos glomeruli, såsom en sfärisk struktur med eller utan bifogade pre-eller post-arteriolära eller tubulära strukturer, är markerade för de som är nya för syra maceration metoden (figur 1).
<p class="jove_content" fo:keep-together.w...

Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Uppskattning av Nephron antal i hela njuren med hjälp av Acid maceration metod

Uppskattningar av hela njure nefronen antal är viktiga kliniskt och experimentellt, eftersom det finns ett omvänt samband mellan nefronen antal och en ökad risk för njur-och hjärt-kärlsjukdom. Häri, är användningen av syran maceration metod, som ger snabba och pålitliga uppskattningar av hela njure nefronen nummer, demonstreras.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Syramakonationsmetoden kan hjälpa till att besvara viktiga frågor om njuren och hur specifika gener bidrar till eller påverkar nefronas utveckling samt hur specifika tillstånd, såsom diabetes eller hypertoni, påverkar nefronettal. Detta är viktigt som ett totalt antal nefroner en individer födda med bestäms under fostrets utveckling och förlust av nefroner har associerats med njurmedicinska patologi. De viktigaste fördelarna med syra maceration metoden är att det är snabbare, mer reproducerbara, billig, och mindre tidskrävande än andra nephron räkna metoder, som magnetisk resonanstomografi.Denna teknik underlättar korrelationen av påverkan i nefrontal på njurfunktionen, vilket är viktigt för att främja vår förståelse av hur specifika gener påverkar nefronets funktion och utveckling. Studien av gener eller faktorer som påverkar övergripande nefron nummer kommer att vara avgörande för utvecklingen av farmakologiska eller genetiska metoder för att begränsa sjukdoms förknippad nefronförlust. Med god experimentell teknik och praxis, individer nya till denna metod bör lätt få behärsk av syra maceration metod möjliggör tillförlitliga och reproducerbara uppskattningar av hela njure nephron nummer.Börja med att använda fina kirurgiska saxar för att öppna musen bukhålan längs mittlinjen. För försiktigt tarmarna och reproduktiva fett till höger sida av djuret. Använda grov dissekering, isolera den vänstra njuren och skär den vänstra njurartären och venen för att försiktigt ta bort njuren placera organet i en lämpligt märkt väga båt pbs.Samla in rätt njure på samma sätt och placera båda njurarna på en kirurgisk gasväv pre-fuktad med PBS. Snabbt ta bort eventuella vidhäftande icke-njurvävnad och njurkapslarna. Sedan vikt varje njure individuellt registrera vikten av vänster och höger orgel separat.Efter vägning, placera varje njure tillbaka till en lämpligt märkt väga båt utan PBS och använda ett rent rakblad för att skära varje organ i halv på längden. Placera varje njure halv skär sidan ner och skär varje halv i två millimeter eller mindre bitar. Med samma rakblad överför du noggrant de hackade njurbitarna till ett lämpligt märkt koniskt rör på 15 milliliter.I en väl ventilerad rökhuv, tillsätt fem milliliter av sex molar saltsyra till varje rör. Därefter agitera försiktigt njursyrablandningarna innan du placerar rören i ett 37 graders Celsius vattenbad i 90 minuter. I slutet av syramakarationen fäster du en 18 gauge-nål på en fem milliliterspruta per njure och avlägsna försiktigt sprutkolvarna.Placera sprutorna i individuella koniska 50 milliliterrör i draghuven och häll njurlösningarna i den öppna änden av varje spruta som sätter de tomma rören åt sidan i ett provrörsställ. Sedan försiktigt byta ut plungers för den långsamma extrudering av varje lösning genom nålarna i 50 milliliter rör. Tvätta de koniska 15 milliliterrören med fem milliliter PBS-lösning per rör som virvlar runt PBS för att solubilisera eventuell kvarvarande njurvävnad.Extrudera tvättinnehållet i den lämpliga 50 milliliter röret som just visat. Efter extrudering av tredje tvätt, utrusta varje spruta med en 21 gauge nål. Extrudera innehållet i 50 milliliterrören i en andra uppsättning av 50 milliliter rör genom mindre borrhålstvätt och extrudera den första 50 milliliter röret innehållet tre gånger med färska PBS som visas.Efter den tredje tvätten och strängpressningen, för den totala volymen i varje rör upp till 50 milliliter med ytterligare PBS och placera rören i ett rack på en vippplatta vid fyra grader Celsius över natten. Inom fem dagar efter bearbetning, placera ett rutnät som innehåller 16 separata sektioner på botten av sex brunnar av en 12 brunnsplatta. Försiktigt invertera rören av njure lösning flera gånger för att återanvända de pelleterade vävnaderna.Tillsätt försiktigt tre 500 microliter alikvoter av varje homogeniserad lösning per njure till var och en av tre brunnar av 12 brunnsplattan. Späd innehållet i varje brunn med en lika stor volym PBS. Placera plattan på scenen av ett inverterat mikroskop.Identifiera glomeruli genom deras sfäriska struktur, rödaktig nyans, och pre eller post arterials knutna till kropparna av enskilda glomeruli. Räkna antalet glomeruli per varje gridded avsnitt att summera antalet per rutnät för beräkning av det totala antalet glomeruli per brunn. Multiplicera sedan antalet glomeruli per brunn gånger 100 för att få det genomsnittliga antalet glomeruli per njure.I detta representativa experiment var det totala nefronettalet hos möss infunderat med fordon i 14 dagar cirka 12, 500 nefroner per njure. Angiotensin två infusion dock ökade förmakstrycket med cirka 40 millimeter kvicksilver och var förknippad med en betydande nästan 26%minskning av det totala nefronet antalet. I denna genetiska modell av rat renal agenesis, djur födda med två njurar beräknades innehålla cirka 27, 500 nephrons per njure efter syra maceration som visat, medan råttor födda med en ensam njure befanns ha betydligt lägre totala nephron nummer.Uppskattningar från båda experimenten överensstämde med de intervall som tidigare rapporterats hos råttor. Syramakonationsmetoden är idealisk för att uppskatta nefrontal i hela njurar, särskilt i laboratorier som inte är utrustade med mer arbetsintensiva och kostnadsöverkomliga tekniker för räkning av nefroner, såsom disector-fraktioneradatormetoden eller magnetisk resonanstomografi. Denna metod gör att en hög genomströmning, effektiv och reproducerbar uppskattning av hela njure nephron nummer som ligger inom 5%av de siffror som bestäms av magnetisk resonanstomografi.Bedömningen av nefronettalet är av klinisk relevans då minskat nefrontal har associerats med en ökad risk för hjärt-kärlsjukdom, såsom kronisk njursjukdom. Glöm inte att arbeta med saltsyra kan vara extremt farligt och att försiktighetsåtgärder bör vidtas, såsom att bära handskar, skyddsglasögon, och ett laboratorium päls.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

En metod för Murine Islet Isolering och subkapsulär Kidney Transplantation

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

Metod för Novel läkemedel mot cancer utveckling med hjälp av tumör explants av kirurgiska preparat


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Den α-test: Snabb Cell-free CD4 Enumeration Använda Hela Saliva

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Mus Njurtransplantation: Modeller av allograftavstötning

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normotermisk<em&gt; Ex vivo</em&gt; Njure Perfusion för bevarandet av Njure transplantat före transplantation

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

Intravaskulär Leverans av Biologics till råttnjure

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

En metod för att kvantifiera Upper Limb Performance i det dagliga livet som använder accelerometrar

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Hela kroppen och regionala kvantifiering av aktiva mänskliga brun fettvävnad använda 18F-FDG PET/CT

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Trombocyt-baserad detektion av kväveoxid i blodet genom att mäta VASP fosforylering

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

En hög genomströmning in Situ metod för uppskattning av Hepatocyte Nuclear Ploidy hos möss

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...