Name: estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method
Uploaded: 2019-05-22T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Enstitüleri, Ulusal Kalp, akciğer ve kan Enstitüsü (R01HL107632) tarafından kısmen destekleniyordu.

Aşağıda listelenen sarf malzemeleri ve reaktifler, tek bir fareyle tüm böbrek netron numarasının belirlenmesi için, yani iki böbrek. Sıçan için asit maserasyon yönteminin kullanımı için değişiklikler yıldız ile tanımlanır. Tüm deneysel protokoller, Laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Ulusal Sağlık Kılavuzu Enstitüleri 'ne konmuştur ve Mississippi Tıp Merkezi Üniversitesi 'nde kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır.
<p class="jove...

<ol>
	<li>Hall, J. E., Guyton, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Guyton and Hall Textbook of Medical Physiology. , (2016).</li><li>Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+hypertension,+and+CKD:+physiological+and+genetic+insight+from+humans+and+animal+models.">Nephron number, hypertension, and CKD: physiological and genetic insight from humans and animal models.</a> Physiological Genomics. 49 (3), 180-192 (2017).</li><li>Didion, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+genetic+model+to+explore+the+Brenner+hypothesis:+Linking+nephron+endowment+and+number+with+hypertension.">A novel genetic model to explore the Brenner hypothesis: Linking nephron endowment and number with hypertension.</a> Medical Hypotheses. 106, 6-9 (2017).</li><li>Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+adaptation+to+renal+injury+or+ablation.">Nephron adaptation to renal injury or ablation.</a> American Journal of Physiology. 249 (3 Pt 2), F324-F337 (1985).</li><li>Didion, S. P., Wang, X., Garrett, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+correlation+between+blood+pressure+and+nephron+endowment+in+a+genetic+model+of+hypertension.">Direct correlation between blood pressure and nephron endowment in a genetic model of hypertension.</a> Hypertension. 68, A052 (2016).</li><li>Luyckx, V. A., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+clinical+importance+of+nephron+mass.">The clinical importance of nephron mass.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 21 (6), 898-910 (2010).</li><li>Mackenzie, H. S., Brenner, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fewer+nephrons+at+birth:+a+missing+link+in+the+etiology+of+essential+hypertension?.">Fewer nephrons at birth: a missing link in the etiology of essential hypertension?.</a> American Journal of Kidney Diseases. 26 (1), 91-98 (1995).</li><li>Nyengaard, J. R., Bendtsen, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+in+relation+to+age,+kidney+weight,+and+body+surface+in+normal+man.">Glomerular number and size in relation to age, kidney weight, and body surface in normal man.</a> The Anatomical Record. 232 (2), 194-201 (1992).</li><li>Denic, A., Glassock, R. J., Rule, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+changes+with+the+aging+kidney.">Structural and functional changes with the aging kidney.</a> Advances in Chronic Kidney Disease. 23 (1), 19-28 (2016).</li><li>Denic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+substantial+loss+of+nephrons+in+healthy+human+kidneys+with+aging.">The substantial loss of nephrons in healthy human kidneys with aging.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 28 (1), 313-320 (2016).</li><li>Keller, G., Zimmer, G., Mall, G., Ritz, E., Amann, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number+in+patients+with+primary+hypertension.">Nephron number in patients with primary hypertension.</a> The New England Journal of Medicine. 348 (2), 101-108 (2003).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+glomerular+volume,+renal+disease+and+hypertension.">Nephron number, glomerular volume, renal disease and hypertension.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 17 (3), 258-265 (2008).</li><li>Hoy, W. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+volumes+of+individual+glomeruli+in+kidneys+at+autopsy:+association+with+age,+nephron+number,+birth+weight+and+body+mass+index.">Distribution of volumes of individual glomeruli in kidneys at autopsy: association with age, nephron number, birth weight and body mass index.</a> Clinical Nephrology. 74 (Suppl 1), S105-S122 (2010).</li><li>Hughson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension,+glomerular+hypertrophy+and+nephrosclerosis:+the+effect+of+race.">Hypertension, glomerular hypertrophy and nephrosclerosis: the effect of race.</a> Nephrology Dialysis Transplantation. 29 (7), 1399-1409 (2014).</li><li>Puelles, V. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomerular+number+and+size+variability+and+risk+for+kidney+disease.">Glomerular number and size variability and risk for kidney disease.</a> Current Opinion in Nephrology and Hypertension. 20 (1), 7-15 (2010).</li><li>Brenner, B. M., Garcia, D. L., Anderson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glomeruli+and+blood+pressure.+Less+of+one,+more+of+the+other?.">Glomeruli and blood pressure. Less of one, more of the other?.</a> American Journal of Hypertension. 1 (4 Pt 1), 335-347 (1988).</li><li>Clark, A. T., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulation+of+nephron+endowment.">Molecular regulation of nephron endowment.</a> American Journal of Physiology. 276 (4 Pt 2), F485-F497 (1999).</li><li>Benz, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+glomerular+alterations+in+genetically+determined+low+nephron+number.">Early glomerular alterations in genetically determined low nephron number.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (2), F521-F530 (2011).</li><li>Zhao, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+fibroblast+growth+factor+receptors+1+and+2+in+the+ureteric+bud.">Role of fibroblast growth factor receptors 1 and 2 in the ureteric bud.</a> Developmental Biology. 276 (2), 403-415 (2004).</li><li>Sims-Lucas, S., Caruana, G., Dowling, J., Kett, M. M., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Augmented+and+accelerated+nephrogenesis+in+TGF-beta2+heterozygous+mutant+mice.">Augmented and accelerated nephrogenesis in TGF-beta2 heterozygous mutant mice.</a> Pediatric Research. 63 (6), 607-612 (2008).</li><li>Cullen-McEwen, L. A., Kett, M. M., Dowling, J., Anderson, W. P., Bertram, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+number,+renal+function,+and+arterial+pressure+in+aged+GDNF+heterozygous+mice.">Nephron number, renal function, and arterial pressure in aged GDNF heterozygous mice.</a> Hypertension. 41 (2), 335-340 (2003).</li><li>Stelloh, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prematurity+in+mice+leads+to+reduction+in+nephron+number,+hypertension+and+proteinuria.">Prematurity in mice leads to reduction in nephron number, hypertension and proteinuria.</a> Translational Research. 159 (2), 80-89 (2012).</li><li>Galinsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intra-amniotic+lipopolysaccharide+on+nephron+number+in+preterm+fetal+sheep.">Effect of intra-amniotic lipopolysaccharide on nephron number in preterm fetal sheep.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 301 (2), F280-F285 (2011).</li><li>Bertam, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Why+and+how+we+determine+nephron+number.">Why and how we determine nephron number.</a> Pediatric Nephrology. 29 (4), 575-580 (2014).</li><li>Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereologic+methods+and+their+application+in+kidney+research.">Stereologic methods and their application in kidney research.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 10 (5), 1100-1123 (1999).</li><li>Beeman, S. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+glomerular+number+and+size+in+perfused+kidneys+using+MRI.">Measuring glomerular number and size in perfused kidneys using MRI.</a> American Journal of Physiology Renal Physiology. 300 (6), F1454-F1457 (2011).</li><li>Damadian, R. V., Shawayri, E., Bricker, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+existence+of+non-urine+forming+nephrons+in+the+diseased+kidney+of+the+dog.">On the existence of non-urine forming nephrons in the diseased kidney of the dog.</a> Journal of Laboratory and Clinical Medicine. 65, 26-39 (1965).</li><li>Bonvalet, J. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Number+of+glomeruli+in+normal+and+hypertrophied+kidneys+of+mice+and+guinea-pigs.">Number of glomeruli in normal and hypertrophied kidneys of mice and guinea-pigs.</a> The Journal of Physiology. 269 (3), 627-641 (1977).</li><li>Bains, R. K., Sibbons, P. D., Murray, R. D., Howard, C. V., Van Velzen, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stereological+estimation+of+the+absolute+number+of+glomeruli+in+the+kidneys+of+lambs.">Stereological estimation of the absolute number of glomeruli in the kidneys of lambs.</a> Research in Veterinary Science. 60 (2), 122-125 (1996).</li><li>Assmann, K. J., van Son, J. P., Koene, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+method+for+the+isolation+of+mouse+glomeruli.">Improved method for the isolation of mouse glomeruli.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 2 (4), 944-946 (1991).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nephron+deficiency+and+predisposition+to+renal+injury+in+a+novel+one-kidney+genetic+model.">Nephron deficiency and predisposition to renal injury in a novel one-kidney genetic model.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1634-1646 (2015).</li><li>Lodrup, A. B., Karstoft, K., Dissing, T. H., Pedersen, M., Nyengaard, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kidney+biopsies+can+be+used+for+estimations+of+glomerular+number+and+volume:+a+pig+study.">Kidney biopsies can be used for estimations of glomerular number and volume: a pig study.</a> Virchows Archiv. 452 (4), 393-403 (2008).</li><li>Fassi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Progressive+glomerular+injury+in+the+MWF+rat+is+predicted+by+inborn+nephron+deficit.">Progressive glomerular injury in the MWF rat is predicted by inborn nephron deficit.</a> Journal of the American Society of Nephrology. 9 (8), 1399-1406 (1998).</li><li>Wintour, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduced+nephron+number+in+adult+sheep,+hypertensive+as+a+result+of+prenatal+glucocorticoid+treatment.">Reduced nephron number in adult sheep, hypertensive as a result of prenatal glucocorticoid treatment.</a> The Journal of Physiology. 549 (Pt 3), 929-935 (2003).</li><li>Van Vuuren, S. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compensatory+growth+of+congenital+solitary+kidneys+in+pigs+reflects+increased+nephron+numbers+rather+than+hypertrophy.">Compensatory growth of congenital solitary kidneys in pigs reflects increased nephron numbers rather than hypertrophy.</a> PLoS One. 7 (11), e49735 (2012).</li></ol>

İyi deneysel teknikle, asit maserasyon yöntemi tüm böbreklerde netron numarasını tahmin etmek için idealdir. Böbrek asit içinde çözünmüş olsa da, glomerül büyük ölçüde bozulmamış kalır ve kolayca tanımlanabilir, bireysel glomerül sayımı nispeten kolay ve basit hale. Asit maserasyon tekniği özellikle çeşitli nedenlerle avantajlıdır. İlk olarak, asit maserasyon yöntemi gider ve fiziksel çaba açısından nispeten az gerektiren hızlı ve kullanışlı bir yöntemdir. Asit maserasyon yön...

Netron hem temel yapısal hem de böbrek1' in fonksiyonel birimidir. Yapısal olarak, netron Bowman kapsülü içinde bulunan glomerülden (kapiller ve podositler) ve böbrek tübülü oluşur, proksimal tübül oluşan, Henle döngü, ve toplama kanalına sona erer distal tubüs. Fonksiyonel olarak, netron rolü su ve elektrolit filtrasyon ve reemilimi ve atıkların salgılanmasını olduğunu. Genel olarak, nefrogenis tamamlanan 36 gebelik hafta insanlarda ve kısa bir süre sonra fare ve sıçan2gibi çeşitli türler doğumdan sonra. Nefron bağış, bir bireyin doğduğu toplam nefron sayısını ifade eder, zira netron sayısı her zaman Doğum sonrası3olarak ölçülen nefron toplam sayısıdır. Netron numarası ve glomerüler sayı terimi sıklıkla birbirinin yerine kullanılır. Çünkü netron başına sadece bir glomerülden vardır, glomerül numarasının değerlendirilmesi ne, sayısı tahmin için önemli bir vekil olduğunu.
Netron bağış ve netron sayısının değerlendirilmesi, klinik ilginin değerlendirilmesinin netron bağış ve azalmış netron numaraları arasında bir ilişki gösterdiği gibi kardiyovasküler hastalığın daha fazla görülme sıklığı4,5 ,6,7,8,9,10,11,12,13,14, 15. otopsi sırasında böbreklerdeki bulgulara dayanarak, Brenner hipertansif bireylerin normotensif bireyler16daha düşük toplam nefron sayısı ile sunulan görüldü. Böylece, Brenner ne, sayısı ve daha sonra yaşam içinde hipertansiyon gelişimi riski arasında ters bir ilişki olduğunu hipotez. Brenner aynı zamanda, netron sayısında bir azalma olan nöfrisi tarafından telafi edildiğini hipotez. Böbrek normal filtrasyon hızını korumak için, kalıntı nefron onların glomerüler yüzey alanını artırarak telafi (glomerüler hipertrofisi), böylece Renal fonksiyon netron kaybı herhangi bir olumsuz etkisini azaltmak için çalışıyor4 ,16.
Kısa vadede koruyucu iken, glomerüler hipertrofisi, uzun vadede, artan sodyum ve sıvı tutma yol açar, artan ekstrellüler sıvı hacmi, ve arter kan basıncında artar, daha fazla artan bir kısır döngüye yol glomerüler kapiller basıncı, glomerüler Hiperfiltrasyon ve netron skarlık (skleroz) ve yaralanma4,16.
Tahminlerin veya netron numarasının sayılarının alınması, birkaç deneysel avantaj sunar: 1) nefrogenit süreci ile ilgili bilgi sağlar, bu da embriyo veya maternal-fetal ortamda belirli genler veya faktörlerle bağlantılı olabilir ve 2) kalp-damar hastalığı olan bir ne, sayısı ilişkisi vardır ve böylece, ne, sayısının tahminlerinin gelecekteki kardiyovasküler riski tahmin etmek için kullanılabileceği potansiyeli vardır2,17,18, 19 , 20 tane , 21 , 22. maternal-fetal çevreye ek olarak, çeşitli hastalıklar doğrudan netron numarası ve böbrek fonksiyonunu etkiler, ateroskleroz dahil, diyabet, hipertansiyon, ve hatta normal yaşlanma2,9, 10,11,12,22,23. Bu nedenle, tüm böbrek netron sayısının değerlendirilmesi, bir kişinin hayatı boyunca nefrogeninin (i.e.netron Endowment) ve netron numarasını etkileyen genetik ve çevresel faktörleri ve ortaya çıkan etkileri anlamak önemlidir böbrek fonksiyonu ve kardiyovasküler sağlık üzerinde.
Şu anda, her biri kendi avantajları ve sınırlamaları24,25,26,27,28 olan netron numarasının belirlenmesi ve ölçülmesine yönelik çeşitli yöntemler mevcuttur ,29,30. Tüm böbrek netron sayısını belirlemek için sofistike Yöntemler, disloji/fraksiyoncu yöntemi ve manyetik rezonans görüntüleme25,26gibi stereolojik yöntemler içerir. Genellikle tüm böbrek ne, sayısını belirlemek için altın standardı olarak kabul, disasyon/fraksiyoncu yöntemi hem pahalı hem de zaman alıcı. Manyetik rezonans görüntüleme ve işlemede son gelişmeler ve iyileştirme, her netron bireysel olarak saymak için Araçlar sağladı. Ancak, manyetik rezonans görüntüleme sadece zaman alıcı değil, aynı zamanda son derece pahalıdır. Buna ek olarak, hem disasyon/fraksiyoncu yöntemi hem de manyetik rezonans görüntüleme, gelişmiş teknik uzmanlık gerektirir, böylece araştırma laboratuvarlarının çoğunda bu tür yöntemlerin kullanımını kısıtlamaktadır.
Ne, sayısının belirlenmesinde çoğu Yöntem, glomerüllerin tanımlanmasını temel alarak sayar veya tahminler yapar, böylece yapısal olarak kolayca tanımlanabilir. Bu yazıda tüm böbreklerde ne, sayısını tahmin etmek için asit maserasyon yöntemi tarif edilir ve27' dir. Asit maserasyon yöntemi hızlı, güvenilir ve diğer yöntemlerden daha az pahalıdır, örneğin disik/fraksiyoncu yöntemi ve manyetik rezonans görüntüleme gibi. Dahası, asit maserasyon yöntemi, manyetik rezonans görüntüleme26kullanılarak belirlenen aralıktaki içinde olduğu bildirilmiştir netron numarasının son derece tekrarlanabilir tahminler sağlar.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:873px;" width="872">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:353px;">Isoflurane anesthesia</td>
			<td style="width:239px;">Abbott Laboratories</td>
			<td style="width:191px;">05260-05</td>
			<td style="width:91px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isoflurane vaporizor system &#38; flow gauge</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td>VP I</td>
			<td>Include medical grade oxygen supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leica Inverted Microscope DMIL LED</td>
			<td>Leica Microsystems</td>
			<td>DMIL LED</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Digital water bath</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td align="right">2239</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">ToughCut Fine surgical scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14058-11</td>
			<td>25 mm cutting edge, 11.5 cm length; Tips: sharp-sharp; Tip shape: straight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Micro dissecting forceps 4 1/4 in.</td>
			<td>Biomed Res Instruments, Inc</td>
			<td>10-1760</td>
			<td>Curved tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Plexiglass board 5 in. x 7 in.</td>
			<td>any source suitable</td>
			<td>n/a</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hexagonal polystyrene weighing dish</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>02-2002-100</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Razor blades</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td>Single edge carbon steel 0.009</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Gauze sponges 4 x 4 in. 8 ply</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>MSD-1400250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">10x concentrate phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5493-4L</td>
			<td>Dilute to 1x&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">6 N Hydrocholric acid solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>3750-32</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">15 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-70C</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">50 mL conical centrifuge tube</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-959-49A</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Disposable 5 mL syringe</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>EW-07944-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">18G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5D</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">21G1.5 disposable needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-826-5B</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">12-well multiple-well cell culture plates with lid</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#FW-01959-06</td>
			<td>Any make also suitable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polypropylene modular test tube rack</td>
			<td>Cole Palmer</td>
			<td>#EW-06733-00</td>
			<td>Capable of accommodating 15 and 50 mL conical tubes; any make also suitable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

estimation of nephron number in whole kidney using the acid maceration method

Nephron bağış bir bireyin doğduğu toplam nefron sayısını ifade eder, insanlarda nefrogenit gebelik 36 hafta tarafından tamamlanmış ve yeni nefron Doğum sonrası oluşturulur. Netron numarası, Doğum sonrası zaman içinde herhangi bir noktada ölçülen nefron toplam sayısını ifade eder. Hem genetik hem de çevresel faktörler hem netron bağış hem de sayıyı etkiler. Daha düşük netron tedavisi veya sayısına sahip bireyler böbrek veya kardiyovasküler hastalık gelişimi açısından daha yüksek bir risk altında olduğu düşünülmektedir gibi belirli genler veya faktörlerin nefrogenik ve netron kaybı veya ölümü sürecini nasıl etkilediğini anlamak önemlidir. Bir kişinin ömür boyu boyunca çevresel pozlarının netron numarasını nasıl etkilediğini anlamak, gelecekteki hastalık riskinin belirlenmesinde de hayati önem taşır. Böylece, tüm böbrek netron numarasını hızlı ve güvenilir bir şekilde değerlendirmek yeteneği, nefrogenit veya netron kaybına katkı sağlayan veya teşvik eden mekanizmaları daha iyi anlamak için temel bir deneysel gerekliliktir. Burada, Damadian, Shawayri ve Bricker tarafından açıklanan prosedüre göre tüm böbrek netron numarasının tahmin edilmesi için asit maserasyon yöntemini tarif ediyoruz, hafif modifikasyonlar ile. Asit maserasyon yöntemi, daha gelişmiş, pahalı olsa da, manyetik rezonans görüntüleme gibi yöntemler kullanılarak Belirlenenlerin% 5 ' i içinde olan netron sayısının hızlı ve güvenilir tahminler (glomeruli sayma tarafından değerlendirilir) sağlar. Dahası, asit maserasyon yöntemi çok sayıda numune veya deneysel koşullarda ne, sayısını değerlendirmek için mükemmel bir yüksek verimlilik yöntemidir.

Aşağıda hipertansiyon kurulan bir fare modeli ve yaş ile ilgili kronik böbrek hastalığı bir genetik sıçan modeli tüm böbrek netron numarasının temsili tahminleri vardır. Glomerüllerin anahtar tanımlayıcı özellikleri, örneğin ön veya post-arteriolar veya tübüler yapıları ile veya bağlı olmayan küresel bir yapı gibi, asit maserasyon yöntemine yeni olanlar için vurgulanır (Şekil 1).
<p class="jove_content" fo:keep-together....

Watch this Scientific Journal Video about Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method at JoVE.com

Estimation of Nephron Number in Whole Kidney using the Acid Maceration Method

Asit maserasyon yöntemini kullanarak tüm böbrek netron numarasının tahmini

Bütün böbrek netron sayısının tahminleri klinik ve deneysel olarak önemli olup, ne, sayısı ile böbrek ve kardiyovasküler hastalık riski arasında ters bir ilişki olduğu için. Burada, tüm böbrek netron sayısının hızlı ve güvenilir tahminlerini sağlayan asit maserasyon yönteminin kullanımı gösterilmiştir.

Nephron endowment refers to the total number of nephrons an individual is born with, as nephrogenesis in humans is completed by 36 weeks of gestation and ...

Asit maceration yöntemi böbrek hakkında anahtar sorulara cevap yardımcı olabilir ve nasıl belirli genler katkıda bulunmak veya nefron gelişimini etkilemek yanı sıra nasıl belirli koşullar, diyabet veya hipertansiyon gibi, nefron sayısını etkiler. Fetal gelişim sırasında doğan bir bireyin toplam nefron sayısı belirlendiği ve nefron kaybının böbrek patolojisi ile ilişkili olduğu için bu önemlidir. Asit maceration yönteminin başlıca avantajları manyetik rezonans görüntüleme gibi diğer nefron sayma yöntemlerine göre daha hızlı, daha fazla tekrarlanabilir, ucuz ve daha az zaman alıcı olmasıdır.Bu teknik, nefron sayısındaki etkinin böbrek fonksiyonu üzerindeki etkisini niçin daha iyi anlamamızı kolaylaştırıyor, bu da belirli genlerin nefron fonksiyonunu ve gelişimini nasıl etkilediğini daha iyi anlamamız için önemlidir. Genel nefron sayısını etkileyen genlerin veya faktörlerin incelenmesi, hastalıkla ilişkili nefron kaybını sınırlamak için tasarlanmış farmakolojik veya genetik yaklaşımların geliştirilmesinde etkili olacaktır. İyi deneysel teknik ve uygulama ile, bu yönteme yeni bireyler kolayca tüm böbrek nefron numaraları güvenilir ve tekrarlanabilir tahminler sağlayan asit maceration yöntemi ustalık kazanmalıdır.Orta hat boyunca fare karın boşluğu açmak için ince cerrahi makas kullanarak başlayın. Dikkatle hayvanın sağ tarafına bağırsak ve üreme yağ kaydırın. Brüt diseksiyon kullanarak, sol böbrek izole ve dikkatle PBS uygun etiketli tartmak tekne içine organ yerleştirerek böbrek kaldırmak için sol böbrek arter ve damar kesti.Aynı şekilde sağ böbrek toplamak ve pbs ile önceden nemlendirilmiş bir cerrahi gazlı bez üzerine her iki böbrek yerleştirin. Hızlı bir şekilde herhangi bir yapışık olmayan böbrek dokusu ve böbrek kapsülleri kaldırın. Sonra ayrı ayrı sol ve sağ organın ağırlığı kayıt her böbrek ağırlık.Tarttıktan sonra, her böbreği pbs olmadan uygun şekilde etiketlenmiş bir tartı teknesine geri yerleştirin ve her organı yarım uzunlamasına kesmek için temiz bir jilet kullanın. Her böbrek yarım aşağı kesilmiş ve iki milimetre veya daha küçük parçalar halinde her yarım kesti yerleştirin. Aynı jilet kullanarak, dikkatlice uygun etiketli 15 mililitre konik tüp içine doğranmış böbrek parçaları aktarın.Iyi havalandırılan bir duman kaputunda, her tüpe beş mililitre altı azı dişi hidroklorik asit ekleyin. Daha sonra, 90 dakika boyunca 37 derece santigrat su banyosu içine tüpler yerleştirmeden önce yavaşça böbrek asidi karışımları ajite. Asit maceration sonunda, böbrek başına bir beş mililitreşile şırınga bir 18 gauge iğne takın ve dikkatle şırınga dalgıçlar çıkarın.Şırıngaları tek tek 50 mililitrelik konik tüplere duman kaputuna yerleştirin ve böbrek çözümlerini her şırınganın açık ucuna dökün ve boş tüpleri bir test tüpü rafına koyun. Daha sonra 50 mililitrelik tüpler içine iğneler aracılığıyla her çözeltinin yavaş ekstrüzyon için dikkatlice dalma değiştirin. Kalan böbrek dokusunu yatıştırmak için PBS dönen tüp başına pbs çözeltisi beş mililitre ile 15 mililitre konik tüpleryı yıkayın.Sadece gösterildiği gibi uygun 50 mililitrelik tüp içine yıkama içeriğini ekstrüzyon. Üçüncü yıkama ekstrüzyon sonra, bir 21 gauge iğne ile her şırınga donatmak. 50 mililitrelik tüplerin içeriğini, daha küçük delikli iğne yıkama ve ilk 50 mililitrelik tüpün içeriğini üç kez taze PBS ile ekstrüzyon yoluyla 50 mililitrelik tüplerin ikinci bir setine geçirin.Üçüncü yıkama ve ekstrüzyon sonra, ek PBS ile 50 mililitreye kadar her tüp toplam hacmi getirmek ve dört derece santigrat bir gecede bir rocker plaka üzerinde bir raf tüpleri yerleştirin. İşlemden sonraki beş gün içinde, 12 kuyuplakasının altı kuyunun altına 16 ayrı bölümden oluşan bir ızgara yerleştirin. Yavaşça peletli dokuları resuspend böbrek çözeltisi tüpleri birkaç kez ters.Dikkatle 12 kuyu plaka üç kuyuher böbrek başına her homojenize çözelti üç 500 mikrolitre aliquots ekleyin. Her kuyunun içeriğini eşit miktarda PBS ile seyreltin. Plakayı ters bir mikroskobun sahnesine yerleştirin.Glomeruli'yi küresel yapıları, kırmızımsı tonları ve bireysel glomeruli'nin vücutlarına bağlı arteriyalöncesi veya sonrası ile tanımlayın. Kuyu başına glomeruli toplam sayısının hesaplanması için ızgara başına sayımı toplamı için her ızgaralı bölüm başına glomeruli sayısını sayMak. Sonra böbrek başına glomeruli ortalama sayısını elde etmek için iyi kez 100 başına glomeruli sayısını çarpın.Bu temsili deneyde, 14 gün boyunca araçla aşılanmış farelerde toplam nefron sayısı böbrek başına yaklaşık 12,500 nefron idi. Anjiyotensin iki infüzyon ancak, cıva yaklaşık 40 milimetre atriyal basıncı arttı ve toplam nefron sayısında önemli bir yaklaşık% 26 azalma ile ilişkili bulundu. Sıçan böbrek agenezisi bu genetik modelde, iki böbrekle doğan hayvanların asit esinasyonu ndan sonra böbrek başına yaklaşık 27, 500 nefron içerdiği hesaplanmış, yalnız böbrekle doğan sıçanların ise toplam nefron sayılarının önemli ölçüde daha düşük olduğu saptandı.Her iki deneyden elde edilen tahminler, daha önce sıçanlarda bildirilen aralıklarla uyumludur. Asit serpme yöntemi, özellikle disector fraksiyonator yöntemi veya manyetik rezonans görüntüleme gibi nefronları saymak için daha fazla emek yoğun ve maliyet engelleyici tekniklerle donatılmış olmayan laboratuvarlarda, tüm böbreklerde nefron sayılarını tahmin etmek için idealdir. Bu yöntem, manyetik rezonans görüntüleme ile belirlenen sayıların %5'inde olan tüm böbrek nefron sayısının yüksek, verimli ve tekrarlanabilir bir şekilde tahmin edilmesine olanak sağlar.Azaltılmış nefron sayılarının kronik böbrek hastalığı gibi kardiyovasküler hastalık riski ile ilişkili olduğu için nefron sayısının değerlendirilmesi klinik bir önemi vardır. Hidroklorik asitle çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve eldiven, koruyucu gözlük ve laboratuvar paltosu gibi önlemler alınması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Medicine

A Method for Murine Islet Isolation and Subcapsular Kidney Transplantation

Murin Islet İzolasyon ve subkapsüler Böbrek Nakli Bir Yöntem

Since the early pioneering work of Ballinger and Reckard demonstrating that transplantation of islets of Langerhans into diabetic rodents could normalize ...

Method for Novel Anti-Cancer Drug Development using Tumor Explants of Surgical Specimens

Cerrahi Örneklerinin tümör eksplantlarındaki Roman Anti-Kanser İlaç Geliştirme Yöntemi


The current therapies for malignant glioma have only palliative effect. For therapeutic development, one hurdle is the discrepancy of efficacy determined ...

The &alpha;-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

The ÃƒÅ½Ã‚Â±-test: Rapid Cell-free CD4 Enumeration Using Whole Saliva

Α-testi: Tüm Tükürük Kullanarak Hızlı Hücre içermeyen CD4 sayımı

There is an urgent need for affordable CD4 enumeration to monitor HIV disease. CD4 enumeration is out of reach in resource-limited regions due to the time ...

Mouse Kidney Transplantation: Models of Allograft Rejection

Fare Böbrek Transplantasyonu: Allogreft Reddi Modelleri

Rejection of the transplanted kidney in humans is still a major cause of morbidity and mortality. The mouse model of renal transplantation closely ...

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normothermic Ex Vivo Kidney Perfusion for the Preservation of Kidney Grafts prior to Transplantation

Normotermik<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Böbrek Koruma Böbrek Nakli Perfüzyon önce greftler

Kidney transplantation has become a well-established treatment option for patients with end-stage renal failure. The persisting organ shortage remains a ...

Intravascular Delivery of Biologics to the Rat Kidney

Sıçan Böbrek için Biologies intravasküler teslim

The renal microvascular compartment plays an important role in the progression of kidney disease and hypertension, leading to the development of End Stage ...

A Method for Quantifying Upper Limb Performance in Daily Life Using Accelerometers

Ivmeölçer kullanan Günlük Yaşamda Üst Ekstremite Performans miktarının Bir Yöntem

A key reason for referral to rehabilitation services after stroke and other neurological conditions is to improve one's ability to function in daily life. ...

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

Whole Body and Regional Quantification of Active Human Brown Adipose Tissue Using 18F-FDG PET/CT

18F-FDG PET/BT kullanarak yağ dokusu kahverengi tüm vücut ve bölgesel Quantification etkin insan

In endothermic animals, brown adipose tissue (BAT) is activated to produce heat for defending body temperature in response to cold. BAT&#39;s ability to ...

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Nitrik oksit VASP fosforilasyon ölçme tarafından kan trombosit tabanlı algılama

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

A High-Throughput In Situ Method for Estimation of Hepatocyte Nuclear Ploidy in Mice

Farelerde Hepatosit Nükleer Ploidi Tahmini için Yerinde Yüksek Throughput Yöntemi

When the liver is injured, hepatocyte numbers decrease, while cell size, nuclear size and ploidy increase. The expansion of non-parenchymal cells such as ...