Name: bovine mammary gland biopsy techniques
Uploaded: 2018-12-23T13:00:00
Duration: 14 min 53 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques at JoVE.com

هذا البحث يدعمه البرنامج الوطني للتغذية الحيوانية وجامعة فرجينيا للتكنولوجيا. المساعدة التقنية من السيدة تارا بيلونيرو، والدكتورة جولي سيتلاجي، والدكتور إيزابيل تيكسيرا العرفان.

<ol>
	<li>Khatun, M., Sorensen, P., Ingvartsen, K. L., Bjerring, M., Rontved, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+combined+liver+and+udder+biopsying+on+the+acute+phase+response+of+dairy+cows+with+experimentally+induced+E.+coli+mastitis.">Effects of combined liver and udder biopsying on the acute phase response of dairy cows with experimentally induced E. coli mastitis.</a> Animal. 7 (10), 1721-1730 (2013).</li><li>Buitenhuis, B., Rontved, C. M., Edwards, S. M., Ingvartsen, K. L., Sorensen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+depth+analysis+of+genes+and+pathways+of+the+mammary+gland+involved+in+the+pathogenesis+of+bovine+Escherichia+coli-mastitis.">In depth analysis of genes and pathways of the mammary gland involved in the pathogenesis of bovine Escherichia coli-mastitis.</a> BMC Genomics. 12, 130 (2011).</li><li>Nickerson, S. C., Akers, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+Gland+|+Anatomy.">Mammary Gland | Anatomy.</a> Fuquay JW, Fox PF and McSweeney PLH (eds.), Encyclopedia of Dairy Sciences, Second Edition. 3, 328-337 (2011).</li><li>Akers, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+100-Year+Review:+Mammary+development+and+lactation.">A 100-Year Review: Mammary development and lactation.</a> Journal of Dairy Science. 100 (12), 10332-10352 (2017).</li><li>Ruegg, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+100-Year+Review:+Mastitis+detection,+management,+and+prevention1.">A 100-Year Review: Mastitis detection, management, and prevention1.</a> Journal of Dairy Science. 100 (12), 10381-10397 (2017).</li><li>Zhao, X., Lacasse, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+tissue+damage+during+bovine+mastitis:+Causes+and+control.">Mammary tissue damage during bovine mastitis: Causes and control.</a> Journal of Animal Science. 86 (13), 57-65 (2008).</li><li>Knight, C. H., Hillerton, J. E., Teverson, R. M., Winter, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopsy+of+the+bovine+mammary+gland.">Biopsy of the bovine mammary gland.</a> British Veterinary Journal. 148 (2), 129-132 (1992).</li><li>Lima, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+bovine+mammary+gland+biopsy+and+increased+milking+frequency+on+post-procedure+udder+health,+histology,+and+milk+yield.">Effects of bovine mammary gland biopsy and increased milking frequency on post-procedure udder health, histology, and milk yield.</a> Animal. 10 (5), 838-846 (2016).</li><li>Farr, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+the+routine+biopsy+of+bovine+mammary+tissue.">An improved method for the routine biopsy of bovine mammary tissue.</a> Journal of Dairy Science. 79 (4), 543-549 (1996).</li><li>Weng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+communication:+Repeated+mammary+tissue+collections+during+lactation+do+not+alter+subsequent+milk+yield+or+composition.">Short communication: Repeated mammary tissue collections during lactation do not alter subsequent milk yield or composition.</a> Journal of Dairy Science. 100 (10), 8422-8425 (2017).</li><li>Peterson, D. G., Matitashvili, E. A., Bauman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+milk+fat+depression+in+dairy+cows+results+in+increased+trans-10,+cis-12+CLA+in+milk+fat+and+coordinate+suppression+of+mRNA+abundance+for+mammary+enzymes+involved+in+milk+fat+synthesis.">Diet-induced milk fat depression in dairy cows results in increased trans-10, cis-12 CLA in milk fat and coordinate suppression of mRNA abundance for mammary enzymes involved in milk fat synthesis.</a> Journal of Nutrition. 133 (10), 3098-3102 (2003).</li><li>Baumgard, L. H., Matitashvili, E., Corl, B. A., Dwyer, D. A., Bauman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=trans-10,+cis-12+conjugated+linoleic+acid+decreases+lipogenic+rates+and+expression+of+genes+involved+in+milk+lipid+synthesis+in+dairy+cows.">trans-10, cis-12 conjugated linoleic acid decreases lipogenic rates and expression of genes involved in milk lipid synthesis in dairy cows.</a> Journal of Dairy Science. 85 (9), 2155-2163 (2002).</li><li>Kasraeian, S., Allison, D. C., Ahlmann, E. R., Fedenko, A. N., Menendez, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+fine-needle+aspiration,+core+biopsy,+and+surgical+biopsy+in+the+diagnosis+of+extremity+soft+tissue+masses.">A comparison of fine-needle aspiration, core biopsy, and surgical biopsy in the diagnosis of extremity soft tissue masses.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 468 (11), 2992-3002 (2010).</li><li>de Lima, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technique+for+repeated+biopsies+of+the+mammary+gland+in+dairy+cows+allotted+to+Latin-square+design+studies.">A new technique for repeated biopsies of the mammary gland in dairy cows allotted to Latin-square design studies.</a> Canadian Journal of Veterinary Research-Revue Canadienne De Recherche Veterinaire. 80 (3), 225-229 (2016).</li><li>Ollier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+intact+rapeseeds+or+sunflower+oil+in+high-forage+or+high-concentrate+diets+affects+milk+yield,+milk+composition,+and+mammary+gene+expression+profile+in+goats.">Whole intact rapeseeds or sunflower oil in high-forage or high-concentrate diets affects milk yield, milk composition, and mammary gene expression profile in goats.</a> Journal of Dairy Science. 92 (11), 5544-5560 (2009).</li><li>Soberon, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+increased+milking+frequency+on+metabolism+and+mammary+cell+proliferation+in+Holstein+dairy+cows.">Effects of increased milking frequency on metabolism and mammary cell proliferation in Holstein dairy cows.</a> Journal of Dairy Science. 93 (2), 565-573 (2010).</li></ol>

الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.

وقد وصف الطرق خزعة الأساسية وابرة في هذا البروتوكول9،16. تقييم مفصل للصحة الحيوانية والإصابة بالتهاب الضرع14 قبل الخزعة مطلوب لكلا الإجراءين. لأغراض البحث، وينبغي تجنب أداء التقنية في الحيوانات مع علامات واضحة من الالتهابات أو الأمراض المعدية. هذا سوف يقلل من خطر حدوث مضاعفات أثناء وبعد خزعة. ينبغي أن تكون جميع الصكوك خزعة وأجهزة نظيفة وتطهير وتعقيم لتجنب تلوث الموقع خزعة. قبل الإجراء، من الضروري تقليل الإصابات الجراحية الموقع (مباحث أمن الدولة). وبصفة عامة، يرتبط مباحث أمن الدولة مع الأمراض الحيوانية والأداء المفقودة، وارتفاع تكاليف الإنتاج في الأبقار الحلوب. وأفادت الدراسات سابقا أساليب لمنع مباحث أمن الدولة بسبب خزعة بما في ذلك قطع الشعر حول موقع شق، غسل منطقة خزعة لإزالة تلوث9،14، واستخدام وكلاء مطهر (الكحول 70%، اليود الجراحية فرك9، 2% الكلورهيكسيدين خلات الحل14، 10% بوفيدون8) لإعداد الجلد. في بعض الدراسات، اعتمدت الإدارة من المضادات الحيوية خلال7 أو فورا بعد خزعة9؛ ومع ذلك، الاتقاء بالمضادات الحيوية لم تستخدم في العمل الحالي، ولم يلاحظ أي عدوى لموقع خزعة. لمنع تلوث خزعة الجرح، ينبغي تأمين الذيل لمنع الاتصال مع موقع خزعة حتى تم تطبيق ضمادة الهباء الجوي. في هذا البروتوكول، تتم إزالة المواد الغذائية حوالي 10 إلى 14 د بعد الخزعة.
قبل خزعة أساسية، فمن المهم بشكل صحيح إعداد الأداة وإرفاقه بالحفر؛ اختر سرعة دوران بطيئة وحدد التناوب إلى الأمام، ولا تستخدم وضع عكس الحفر. أثناء الإجراء، من المهم استخدام ضغط رقمي على كلا الجانبين من الشق للحفاظ على حواف الجلد عن بعضها وشق طويل بما يكفي للسماح بإدخال أداة دون الاتصال بالجلد أو النسيج الضام. إذا لم يتم هذا الإجراء، قد تحدث عبئا على حواف الشق أثناء التناوب الصك خزعة الأساسية وتسبب الصدمات الأنسجة الجلد إضافية التي سوف تزيد من خطر العدوى وقد يؤدي إلى تأخير التئام الجروح. أجريت خزعة هذه الإجراءات الموصوفة في هذا البروتوكول بجراح مؤهل في حيوانات كبيرة. الإجراءات التي تم تنفيذها بنجاح (الشكل 5). كلا التقنيات نسبيا سهلة وسريعة لإجراء مقارنة بإجراء الاستئصال الجراحي.
شائعة النزيف من موقع خزعة بعد مغ خزعة في الأبقار الحلوب8،9،،من1014. في هذا البروتوكول، والنزيف ولاحظ كان الحد الأدنى (الشكل 4)، الذي قد يكون بسبب تطبيق كاف (ضغط) على الجرح مباشرة بعد الإجراء. مطلوب ضغط قوي لمدة 20 دقيقة على الأقل، وأنه قد يكون مطلوباً لأكثر من 30 دقيقة في بعض الحالات. إذا كان من الملاحظ معتدلة إلى نزيف حاد بعد تطبيق الضغط على الموقع خزعة، يوصي بمواصلة الضغط، والاتصال فورا بطبيب بيطري.
كما الأرقاء عامل مهم للحد من الاعتلال البقر، دراسة واحدة معبأة منصات مرقئ في الموقع خزعة لمراقبة النزيف9. ومع ذلك، قد استخدام منصات مرقئ بهذه طريقة مخاطر محتملة عالية للتلوث الميكروبيولوجي في بيئة مزرعة الألبان. آخر دراسة14 تطبيق الضغط اليدوي للموقع خزعة بين الخزعات المتكررة، وبعد إغلاق خزعة والجلد، والجليد على الموقع على الأقل 2 ح عقب الخزعة. في هذا البروتوكول، قوي الضغط المطبقة على الموقع خزعة لمدة 20 إلى 25 دقيقة كانت كافية للتحكم في النزيف.
تقنية خزعة ناجحة ينبغي أن يسفر عن الحد الأدنى من الدم في الحليب التي استمرت لفترة قصيرة من الوقت بعد هذا الإجراء. لتجنب انقطاع لإفراز الحليب خلال العدوى خيبة أمل والتهاب الضرع اللبن، يجب إزالة الجلطات الدموية إينتراماماري يد تجريد من الربع فحص10،14. ولوحظ في هذا البروتوكول، الدم في الحليب تصل إلى 48 ساعة بعد الخزعة. بيد في دراسة التي تستخدم عددا أكبر من الحيوانات، لوحظ الدم في اللبن في معظم الأبقار لمدة تقل عن 6 أيام. وأظهر عدد قليل من الحيوانات الدم في اللبن بعد 6 أيام8. ولهذا السبب، المراقبة اليومية لظهور الحليب اللازمة لمد 6 بعد هذا الإجراء. الحيوانات لا يحمل أية علامات على الإصابة بالتهاب الضرع عند عينة كبيرة من أنسجة وحصل على14. بيد أن البحوث السابقة التي يؤديها خزعات متكررة على نفس الحيوان باستخدام إبرة وجد أن حالات الإصابة بالتهاب الضرع وكان ما يقرب من 12% بعد إجراء8. في هذا البروتوكول، قد لا الحيوان علامات مرئية من الإصابة بالتهاب الضرع السريري بعد الإجراء. وهناك أيضا طفيف فرصة أن الموقع شق قد يصاب بعد الخزعة.
تولازوليني هيدروكلوريد، دواء الذي عكس آثار التخدير، ينبغي أن تكون متاحة في حالة جرعة زائدة من إكسيلازيني. جرعة مفرطة من إكسيلازيني قد يسبب وذمة الرئة. وتشمل الأعراض الإكلينيكية لذمة رئوية الضائقة التنفسية وضيق التنفس الحاد وصعوبات في التنفس، وسعال والبلغم بروذرز. إذا لوحظت علامات على ذمة رئوية، من المستحسن استخدام تولازيني (من 2 إلى 4 مغ/كغ وزن الجسم) لعكس آثار إكسيلازيني.
ويصف هذا البروتوكول تقنية لإجراء خزعة الإبرة وخزعة الأساسية على حد سواء. بشكل عام، هو الاستفادة من خزعة الأساسية مقارنة بإبرة خزعة عينة (0.75 إلى 1 ز) الأنسجة أكبر9 مع الحد الأدنى من تأثير سلبي على الصحة ضرع. خزعة الإبرة أسلوب أقل الغازية من صك خزعة الأساسية. غير أن محاولات متعددة خزعة للحصول على كمية أكبر من الأنسجة باستخدام إجراء خزعة إبرة قد تزيد من خطر النزيف الرئيسية بعد الإجراء، فضلا عن تجلط الدم في الحليب. كلتا الطريقتين تسبب الاعتلال البقر الحد الأدنى وتحققت بسهولة مع قدر ضئيل من التدريب لموظفي العمليات الجراحية. من المتوقع تغيير قصيرة الأجل في إنتاج الحليب اليومي (انخفاض نسبة 8 إلى 10 في المائة) وتكوين9 و تخفيض كمية العلف14 بعد الخزعات الأساسية وابرة، على التوالي. القيود المفروضة على الإجراء خزعة الإبرة هي صغر حجم الأنسجة إزالة مع الإبرة. الصك الذي يحتاج إلى تفعيلها فقط عند الإبرة داخل الأنسجة يتم فحص ومحاولات متعددة غالباً ما تكون ضرورية للحصول على كميات كافية من الأنسجة، مما يزيد من الخطر الدم في الحليب والتهاب الضرع بعد الإجراء. القيود المفروضة على خزعة الأساسية تشمل ارتفاع خطر الإصابة بنزيف بعد هذا الإجراء إذا كانت كمية كبيرة من الأنسجة (> 200 ملغ) يتم الحصول عليها. وبالإضافة إلى ذلك، الأداة خزعة من الصعب تجميع تتطلب التدريب الكافي قبل الاستخدام.

خزعة إجراء لحصاد قسم أساسية من الأنسجة من المواضيع الطبية أو لأغراض البحث. وأسلوب كسبها والمستخدمة على نطاق واسع لجمع الأنسجة كبديل للقتل الرحيم1 للسماح بتحليل الردود الأنسجة للعلاج أو غيرها من العوامل ذات الأهمية. عينات أنسجة الغدة الثديية البقري (MG) ضرورية لبحوث الألبان لدراسة التعبير الجيني والبروتين، علم الأنسجة، ومنظمة العضيات الخلوية ومسارات الإشارات وعمليات الأيض في الاستجابة للتغييرات في الإدارة أو البيئة. بالإضافة إلى ذلك، يلزم الأنسجة مغ لتشخيص وبحوث بعض الأمراض المعدية، مثل التهاب الضرع البقري الناجمة عن العدوى البكتيرية2.
ضرع الماشية على أربع غدد منفصلة وكل غدة تحتوي على نظام افرازي حليب مستقلة تسمى مجتمعة حمة. الحويصلات الهوائية، والقنوات، والنسيج الضام موجودة في حمة الثديية. الحويصلات الهوائية المجهرية هياكل جوفاء كروية تتكون من الخلايا الظهارية في السطح الداخلي (لومينال) والخلايا myoepithelial المتخصصة على السطح الخارجي (القاعدية). الحويصلات الهوائية المسؤولة عن تجميع وإفراز الحليب. يمكن فصل النسيج الضام الليفي في حمة مجموعة من الحويصلات الهوائية من مجموعات أخرى من الحويصلات الهوائية، وكل مجموعة تسمى الفصيص3. عدة عوامل يمكن أن تؤثر على التنمية والدالة ملغ بما في ذلك فسيولوجيا الحيوان والتغذية، وإدارة، وعلم الوراثة و البيئة4. التهاب الضرع هو أيضا أحد عوامل حاسمة التي تؤثر تأثيراً سلبيا على مغ الدالة والحليب نوعية5. يمكن أن تتسبب في الأضرار بالحويصلات الهوائية السموم الصادرة عن مسببات الأمراض ماستيتيك وحمل نخر أسفرت التغيرات البيوكيميائية وغذائها في الأنسجة ملغ6. وهكذا، قد يكون علم الأنسجة والعمليات الأيضية لكل الحويصلات الهوائية أو الفصيص في ملغ تختلف اختلافاً كبيرا عن الآخرين. على هذا النحو، والخزعات التي عينات تمثيلية من الغدة الثديية كامل من المستصوب. يمكن فقط التقاط الخزعات الصغيرة الفصيص واحد أو سنخ الفردية، يحد من المعلومات العلمية أو التشخيصية الناتجة. لأغراض البحث، من الضروري أن تكون على علم أن يوفر خزعة الثديية 'لقطة' من خصائص الأنسجة ولكن خزعة لا تميز على نحو كاف مجموع الدالة الثديية في غياب تقديرات إجمالي الغدة الثديية الشامل.
وقد وضعت العديد من أدوات خزعة على مدى السنوات ال 30 الماضية للاستخدام البشري. حاليا عمليات التكييف هذه الصكوك المتوفرة للاستخدام مع الحيوانات. للأبقار الحلوب، أخذت عينات أنسجة مغ استخدام تقنيات مختلفة بما في ذلك الاستئصال الجراحي (تشريح كليلة)7وخزعة الإبر1،8الأساسية خزعة الصكوك9،10. وهكذا، قد انتقلت تقنيات خزعة مغ في الأبقار الألبان من الإجراءات باستخدام التخدير راقد مع التشريح الجراحي باستخدام electrocautery الأرقاء في 19927 إلى مجموعة من الخزعات الأساسية تحت التخدير الدائمة9، 10،،من1112. خزعة جراحية هو الجرح طريقة الغازية، والتي يمكن أن تكون مكلفة وقد نسبة أعلى من المضاعفات مثل ورم دموي، المشاكل، والورم انتشر13. في الوقت الراهن، خزعة الأساسية وابرة خزعة (يعرف أيضا باسم خزعة ترو-قص) قد اعتمدت على نطاق واسع كبدائل لخزعة جراحية. وتشمل مزايا الخزعات الأساسية وابرة خزعة جراحية بالمقارنة مع: الإجراء مينيملي؛ المضاعفات الرئيسية نادرة؛ التخدير العام غير مطلوب؛ هذا الإجراء هو relativley السريع؛ الوقت الانتعاش القصير؛ هناك الحد الأدنى من الآثار السلبية على الصحة ضرع، والآثار القصيرة الأجل فقط على الحليب الغلة وتكوين8،،من910؛ والتكلفة خزعة جراحية أقل من13.
إجراء خزعة الأساسية الموصوفة في عام 1996 استخدام قنية فولاذ المقاوم للصدأ عقيمة، مع شفرة قابل الإزالة لإزالة كمية ممثل من الأنسجة من مغ الأبقار دون تخدير9،10،11 ،12. أثناء الإجراء، علقت الصك مثقاب لخلق بسرعة منخفضة، اقتراح التناوب الذي قطع أنسجة أساسية نظيفة كما كانت متقدمة الأداة في الأنسجة. صالح كان نسيج أكبر عينة (70 مم × 4 مم في القطر، وحوالي 0.75 إلى 1 ز) 9. دراسة الأخيرة10 أظهرت أن الإجراء خزعة الموصوفة بفار جيم خامساet al. 9 يمكن استخدامها لأداء مجموعات الأنسجة مغ المتكررة دون تأثير سلبي على صحة الأداء وضرع الأبقار الألبان. وفي الآونة الأخيرة، أجريت دراسة14 في الأبقار الحلوب لتقييم الخزعات المتكررة ملغ استخدام تروكار أكبر (القطر 31 سم طويلة، الخارجي 9.5 مم والقطر الداخلي من 8 مم) مع فراغ المطبقة على قنية فولاذ المقاوم للصدأ داخلية جمع خزعة . هذا الأسلوب يستخدم التخدير (إكسيلازيني) والتخدير الموضعي (2% ليدوكائين هيدروكلوريد).
خزعة الإبرة أسلوب آخر لجمع الأنسجة الثديية. وقد اعتمدت عدة دراسات هذا الأسلوب. واحد الدراسة1 استخدام التخدير (ديتوميديني) ومخدر موضعي (ليدوكائين 1%) في الإجراء. بعد الخزعة، تلقي الأبقار علاج بالمضادات الحيوية الاتقائية. وكان مدلك الغدة الثديية يدوياً قبل وبعد في حلب. لوحظ الدم في الحليب ليصل إلى 84 ح بعد الخزعة. وتأثرت بالمبلغ وتكوين الحليب لفترة قصيرة من الزمن. في الآونة الأخيرة، دراسة استخدام إبرة خزعة لتنفيذ المتكررة ملغ خزعات في الأبقار الحلوب8. التخدير (1% أسيبرومازيني، العضلي) وكانت تدار التخدير الموضعي (2% ليدوكائين هيدروكلوريد، تحت الجلد) للحيوانات. الحيوانات لم يتلق الأدوية إينتراماماري أو المضادات الحيوية قبل أو بعد العملية، وكانت هناك أي علامات على الإصابة في موقع خزعة خلال فترة ما بعد العمليات الجراحية. في هذه الدراسة، كان خزعات مغ الأبقار المتكررة باستخدام إبرة طفيفة أثر سلبي على صحة الإنتاج وضرع الحليب من الأبقار الحلوب. وبوجه عام، يبدو خزعة الإبرة أسلوب أقل الغازية من الصك خزعة الأساسية. ومع ذلك، كما ذكر سابقا، من الضروري تقنية خزعة لحصاد عينة تمثيلية من الأنسجة مغ. الحد من خزعة الإبرة هو الحصول على كمية صغيرة من الأبقار مغ الأنسجة (حوالي 20 إلى 25 ملغ)8،15.
تقريبا جميع الدراسات استخدمت مجموعة من التخدير مؤثر α-2 ومخدر موضعي8،،من910، عما إذا كان الخزعة عن طريق إبرة أو نواة أكبر. في مغ البقري، ترتبط معظم النهايات العصبية بالجلد. تعصيب للأنسجة متني هو إلى حد كبير عن طريق مستقبلات التمدد مع نوع متفرق ألياف العصبية للكشف عن الألم الجراحي الحاد. نتيجة لذلك الآليات الفيزيولوجية من الألم بسبب المعالجة الجراحية ملغ عن طريق الجلد والأنسجة تحت الجلد3 ولا عميق الأنسجة مثل الأنسجة متني. ولذلك، إجراءات خزعة، من الضروري إلا محلياً تخدير الجلد والأنسجة تحت الجلد، كما تسلل مخدر موضعي إلى أنسجة أعمق لا تقلل إلى حد كبير الألم الجراحي. بعد إعداد مناسبة من منطقة خزعة، عدم الراحة الحيوانية، في المقام الأول، المرتبطة بضبط النفس.
قد جمع العينات الأساسية أكبر زيادة تشكيل ورم دموي وتزيد من خطر العدوى داخل حمة ملغ. ولذلك، كثيرا ما تتضمن البروتوكولات التعاونية القريبة الإدارة من المضادات الحيوية حقنا7، على الرغم من أن هذا ليس المسلمات8. تحقيق الأرقاء أيضا عامل مهم للحد من الاعتلال البقر. في الدراسة المذكورة آنفا استخدام الأساسية الكبيرة خزعة صك14، وضغط يدوي تم تطبيقها على الموقع خزعة واستخدمت الصدرية بقرة لتطبيق الثلج على الجروح على الأقل 2 ح في الإجراء التالي. وعلى الرغم من كمية كبيرة من الأنسجة المقطوع، انخفاضات طفيفة فقط في تغذية العائد المتحصل والحليب، والإجراء وتكرر كل ثلاثة أسابيع دون آثار سلبية على صحة البقرة.
الباحثين إجراء خزعة مغ في الأبقار الحلوب تحتاج إلى النظر في نوعية خزعة الناتجة عن التشخيص أو التحليلية، وسهولة الأسلوب، والاعتلال البقر. التقنيات الجراحية الدقيقة ومخططة مسبقاً لا غنى عنه لتحقيق هذه الأهداف. وحتى الآن، مغ خزعة الدراسات ركزت على وصف نتائج خزعة، بدلاً من وصف خزعة التقنية ذاتها، وأوصاف للأبقار الحلوب المرضعات تفتقر إلى التفاصيل الكافية للسماح للنسخ المتماثل. وهكذا، كان الهدف من هذا العمل لوصف خزعة الإبرة وتقنيات خزعة الأساسية أكبر بتفصيل كاف للسماح للنسخ المتماثل آمنة وإنسانية من خزعة مغ من الماشية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1122px;" width="1120">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">70% Isopropyl alcohol&#160;</td>
			<td style="width:242px;">Walmart&#160;</td>
			<td style="width:123px;">565106257</td>
			<td style="width:306px;">1 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Aerosol spray to kill and repel flies</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td>14339</td>
			<td>1 bottle (if necessary)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Biopsy needles, 12 G &#215; 16 cm</td>
			<td style="width:242px;">C. R. Bard</td>
			<td style="width:123px;">MN1216</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Butterfly infusion set (18 G needle)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-258087</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture dishes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">08-772E</td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Cordless drill (low speed)</td>
			<td style="width:242px;">Hitachi&#160;</td>
			<td style="width:123px;">&#160;DS10DFL&#160;</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Core biopsy instrument, Farr et al. (1996)</td>
			<td style="width:242px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>2, custom metal fabrication. To request the tool contact the authors.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Cows</td>
			<td style="width:242px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>cattle healthy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flunixin meglumine</td>
			<td style="width:242px;">MWI/VetOne</td>
			<td style="width:123px;">501018</td>
			<td>1.1 to 2.2 mg/kg of body weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Folding table&#160;&#160;</td>
			<td style="width:242px;">Amazon</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">09-753-50</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Gloves non-sterile&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">17-200-845</td>
			<td>9, size dependent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Hard brush&#160;</td>
			<td style="width:242px;">Sullivan Supply</td>
			<td style="width:123px;">18270</td>
			<td>1, to wash the cows</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Head gate&#160;</td>
			<td style="width:242px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>1, customized for dairy cows</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Lidocaine hydrochloride 2% injectable&#160;</td>
			<td style="width:242px;">MWI/VetOne</td>
			<td style="width:123px;">510212</td>
			<td>6 mL was used,&#160; from 3 to 8 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Livestock body wash</td>
			<td style="width:242px;">eZall Technologies</td>
			<td style="width:123px;">39384</td>
			<td>1, to wash the cows</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Needle 18 G&#160; (1 to 1/5&#8220;)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-821-15A</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Needle 20 G (1 to 1/5&#8220;)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">14-815-526</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffered saline (0.9%)</td>
			<td style="width:242px;">Fisher</td>
			<td style="width:123px;">20-012-043</td>
			<td>1 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Povidone Iodine ointment</td>
			<td style="width:242px;">Jeffers</td>
			<td>#VED1A</td>
			<td>500 g (if necessary)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Povidone iodine scrub solution (0.75% iodine)</td>
			<td style="width:242px;">MWI/VetOne</td>
			<td style="width:123px;">510094</td>
			<td>1 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Reusable biopsy instrument&#160;</td>
			<td style="width:242px;">C. R. Bard</td>
			<td style="width:123px;">MG1522</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Rope halter</td>
			<td style="width:242px;">Nasco farm and ranch</td>
			<td style="width:123px;">C10852</td>
			<td>2, cow size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Scalpel blades (#10)</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">033870</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Scalpel holders (#3)</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">602008</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Self seal autoclave pouch 10 x 5.5 in.</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">19-130-0038</td>
			<td>1 case of 800</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Sterile cotton gauze sponges</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">22-037-986</td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Sterile gauze pads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">19-090-735</td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Sterile surgical gloves&#160;</td>
			<td style="width:242px;">Surgical gloves</td>
			<td style="width:123px;">19-166-679</td>
			<td>3,&#160; size dependent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Sterile surgical towels</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">50-118-0339</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Stethoscope</td>
			<td style="width:242px;">Littmann Master Classic II</td>
			<td style="width:123px;">1392</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Surgical clipper</td>
			<td style="width:242px;">Oster A5</td>
			<td style="width:123px;">078005-010-003</td>
			<td>1, preparation of the animal for biopsy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Surgical clipper blades (#40 )</td>
			<td style="width:242px;">Oster&#160;</td>
			<td style="width:123px;">78919-016</td>
			<td>1, preparation of the animal for biopsy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Surgical staple remover</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">541</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Surgical stapler pre-loaded</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">17713</td>
			<td>5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Syringes of 10 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-224</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Syringes of 2 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-028854</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Syringes of 20 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-034507</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Syringes of 5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-028855</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Thermometer</td>
			<td style="width:242px;">Agri-Pro Enterprises Inc</td>
			<td style="width:123px;">72000</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Tolazine hydrochloride</td>
			<td style="width:242px;">Akorn Animal Health</td>
			<td style="width:123px;">61311-486-10</td>
			<td>2 to 4 mg/kg of body weight (if necessary)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tweezer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">14-955-025</td>
			<td>1, for handle the tissue sample</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Water hose</td>
			<td style="width:242px;">Miracle-Gro, Walmart</td>
			<td style="width:123px;">554990501</td>
			<td>1, to wash the cows</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Water-resistant aerosol bandage (aluminum powder 40 mg)</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">010728</td>
			<td>1 bottle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine hydrochloride</td>
			<td style="width:242px;">MWI/VetOne</td>
			<td style="width:123px;">510650</td>
			<td>0.01 to 0.05 mg/kg of body weight</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bovine mammary gland biopsy techniques

خزعات الغدة الثديية البقري السماح للباحثين بجمع عينات الأنسجة لدراسة بيولوجيا الخلية بما في ذلك التعبير الجيني، التحليل النسيجي، مما يشير إلى مسارات، وترجمة البروتين. توضح هذه المقالة اثنين من التقنيات لخزعة الغدة الثديية البقري (MG). وكانت ثلاثة صحية هولشتاين الأبقار الحلوب المواضيع. قبل الخزعات، حلب الأبقار وضبط النفس في وقت لاحق المشغلة ماشية. مسكن (ميجلوميني فلونيكسين، 1.1 إلى 2.2 ملغ/كغ من وزن الجسم) تدار عن طريق الحقن [IV] عن طريق الحقن الوريدي جوجولار 15-20 دقيقة قبل أن خزعة. لتخدير الدائمة، هيدروكلوريد إكسيلازيني (0.01-0.05 مغ/كغ من وزن الجسم) تم حقن عن طريق السفن كوكسيجيل 5-10 دقيقة قبل الإجراء. مرة واحدة على نحو كاف مخدراً، الموقع خزعة أسيبتيكالي وأعد وفظاعتها محلياً مع 6 مل هيدروكلوريد ليدوكائين 2% عن طريق الحقن تحت الجلد. باستخدام تقنية معقمة، تم شق عمودي 2 إلى 3 سم من استخدام مشرط رقم 10. وقد استخدمت أدوات خزعة الأساسية والإبر. أداة خزعة الأساسية تم إرفاقه مثقاب وإدراجها في الأنسجة مغ من خلال شق استخدام إجراء حفر clock-wise. وأدرج الأداة خزعة الإبرة يدوياً في الموقع شق. مباشرة بعد هذا الإجراء، مساعد ضغطاً على موقع شق لمدة 20 إلى 25 دقيقة باستخدام منشفة عقيمة لتحقيق الأرقاء. واستخدمت الدبابيس الجراحية الفولاذ المقاوم للصدأ لمعارضة شق الجلد. السلع الأساسية تم إزالة 10 أيام بعد انتهاء الإجراء. المزايا الرئيسية الخزعات الأساسية والإبر هي أن كلا النهجين كسبها من الإجراءات التي يمكن القيام بها بأمان في الأبقار السليمة. وكان إنتاج الحليب عقب الخزعة لم تتأثر. هذه الإجراءات تتطلب وقت انتعاش قصير ويؤدي إلى مخاطر أقل من المضاعفات. قيود محددة قد تشمل النزيف بعد خزعة والإصابة في موقع خزعة. وتشمل تطبيقات هذه التقنيات جمع الأنسجة لأغراض البحث، مثل زراعة الخلايا الأولية والتشخيص السريري.

في هذا البروتوكول، أنتجت تقنية خزعة الأساسية عينة الأنسجة من 200 إلى 600 ملغ بينما خزعة الإبرة أنتجت عينات من 10 إلى 30 ملغ لخزعة. ولوحظت الحيوانات مرتين يوميا لمدة 10 د بعد هذا الإجراء. لا توجد مضاعفات حدثت أثناء الإجراء أو في الفترة اللاحقة للعمليات الجراحية، مع معلمات الحيوية من الأبقار تبقى ضمن الحدود الطبيعية (متوسط معدل التنفس = 31.4 ± 7.04 (SD) نفسا في الدقيقة، متوسط معدل ضربات القلب = 75.9 ± 8.9 نبضة في دقيقة، ومتوسط درجة حرارة المستقيم = ± 38.2 0.68 درجة مئوية، الشكل 3).
بعد الضغط اليدوي على المنطقة خزعة لتحقيق الأرقاء (حوالي 25 دقيقة)، أظهرت جرح مفتوح الحد الأدنى النزيف (الشكل 4). تم تغذية الأبقار نفس النظام الغذائي ad متواصلة، وأبقى الحيوانات في مرفق الإسكان نفسه خلال الفترة اللاحقة للعمليات الجراحية. الحيوانات لم تظهر علامات الإصابة في موقع خزعة؛ لم يكن هناك الألم، والنزيف، وتورم، والصرف، أو درجة حرارة مرتفعة (الشكل 5). الجرح تلتئم في غضون 8 إلى 10 د الخزعة (الشكل 5).
وضع الحيوان واحدة تهيج الجلد البسيطة المستحقة للجرح فرك في اليوم الثامن بعد الإجراء. وعولج هذا البقر بتنظيف الموقع خزعة باستخدام حل بوفيدون وكحول الأيزوبروبيل 70%. أزيلت دبابيس الفولاذ المقاوم للصدأ للسماح بالصرف وطبق البوفيدون اليود مرهم (1%) مرتين في يوم على موقع خزعة لمد 2 إلى 3. تهيج الجلد اختفى 2 (د) بعد تطبيق مرهم بوفيدون والجرح تلتئم مع لا مضاعفات أخرى.
تم إزالة تجلط الدم من جهة تجريد من الحليب من الربع فحص قبل آلة الحلب. في هذا البروتوكول، لوحظ وجود تجلط الدم في الحليب ليصل إلى ثلاثة ميلكينجس (حوالي 36 ح) بعد الخزعة. ولوحظ تلوث الدم من الحليب ليصل إلى 48 ساعة بعد الخزعة. لم تكن هناك البصرية فروق بين الخزعات الأساسية وابرة بالنسبة لكمية الدم في الحليب. الحيوانات لم تظهر انخفاضا كبيرا في إنتاج الحليب بعد هذا الإجراء (الشكل 6). وكان تكوين الحليب متوسط 4.37 ٪ من الدهون والبروتين 3.34% اللاكتوز 4.64%. وكان العد الحليب متوسط الخلية الجسمية (SCC) 200,000 أقل من الخلايا كل مل.
يمكن استخدام مغ الأنسجة التي تم الحصول عليها لأغراض بحثية مختلفة مثل الثقافات الخلية الابتدائية (الشكل 7).
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig3.jpg"> الشكل 3 . تقييم مؤشرات الصحة الحيوانية بعد خزعة الغدة الثديية البقري. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a> 
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig4v2.jpg"> الشكل 4 . مظهر الموقع خزعة بعد تم تطبيق الضغط اليدوي إلى منطقة خزعة لتحقيق الأرقاء. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig5.jpg"> الشكل 5 . صور موقع خزعة. (A) خزعة الموقع 3 د بعد هذا الإجراء. (ب) خزعة الموقع د 6 بعد هذا الإجراء. موقع خزعة (ج) د 10 بعد الإجراءات التي توضح أن كانت تلتئم الجرح على نحو كاف. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig6.jpg"> الرقم 6 . إنتاج الحليب اليومي قبل وبعد الخزعة الغدة الثديية البقري (n = 3 الأبقار)- نموذج خطي يقدر أن 10 أيام قبل الخزعة الحيوانات المنتجة 23.35 كجم من الحليب في اليوم الواحد. إنتاج الحليب ولم تتغير كثيرا (P > 0.05) من قبل عشرة أيام إلى 10 أيام بعد الخزعة على الرغم من حدوث زيادة طفيفة في إنتاج الحليب ولوحظ (زيادة 0.0005 كجم/د من الحليب لكل يوم من 10 أيام قبل الخزعة). واستخدمت ثلاثة من الحيوانات في هذا البروتوكول؛ الحيوان واحد كان فحص مرتين (الحيوان 1: الأساسية خزعة في الجانب الأيسر من ضرع وابرة خزعة على الجانب الأيمن ضرع) واثنين من الحيوانات تم فحص مرة واحدة (الحيوان 2 و 3: فقط على الجانب الأيمن من ضرع استخدام الإجراء الأساسية أو إبرة). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig7.jpg"> الشكل 7 . صور الممثل للثقافة الأولية الخلايا الظهارية الثديية البقري. شريط الحجم هو 100 ميكرومتر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig7large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques at JoVE.com

Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques

تقنيات خزعة البقري الغدة الثديية

ويعرض هذا المقال خزعة غدة الثديية الأبقار باستخدام أدوات خزعة الأساسية والإبر. يمكن استخدام أنسجة المقطوع لثقافة الخلية أو تقييم الفيزيولوجيا الثديية والتمثيل الغذائي بما في ذلك التعبير الجيني والتعبير البروتين والبروتين التعديلات، إيمونوهيستوتشيميستري وتركيزات المستقلب.

Bovine mammary gland biopsies allow researchers to collect tissue samples to study cell biology including gene expression, histological analysis, ...

الخزعة، كما أعتقد أن معظمكم يعرف، هو إزالة قليلا من الأنسجة من الجهاز من مصلحة وفي هذه الحالة، انها الغدة الثديية. عينة الخزعة مفيدة جدا إذا كنت تنوي القيام بأشياء مثل تحليل التعبير الجيني، إذا كنت تنوي القيام بأشياء مثل اتخاذ بعض الأنسجة والقيام بتحليل النسيج، للنظر في هيكل على المستوى المجهري للغدة الثديية، وأيضا مفيدة جدا لتحديد أشياء مثل إشارات مسارات ذات الصلة بالعمل الهرموني، على سبيل المثال ، لذا فإن أحد التحذيرات التي تحتاج إلى أن تكون على علم بها عند القيام بأي نوع من عينات الأنسجة الثديية ، هل أخذت عينة تمثيلية حقًا؟ لأنه، قد يمكنك التقاط الفصيص، والتي ستكون مثل مجموعة من العنب، أو قد التقاط بعض الحويصلات الهوائية الفردية التي لا تمثل حقا العادي، لذلك، فإن الأمل الذي لديك عندما تفعل خزعة ماماري الخاص بك هو أنك تقوم بجمع الأنسجة البارينشية، والتي هي مجرد كلمة يتوهم أن أقول الأنسجة الوظيفية المسؤولة عن إنتاج الحليب ، عينة هذا هو ممثل.معظم النهايات العصبية الحسية في الغدة الثديية ترتبط مع الجلد، ولذا فمن المهم أن ندرك ونقدر أنه بمجرد الانتهاء من التحضير السليم للمنطقة حيث كنت تسير لجعل شق الأولي، ل التخدير الجلد، ثم هناك القليل جدا في الطريق من أي النهايات العصبية الحسية المرتبطة النسيج parenchymal نفسه ، وبالتالي فإن الانزعاج الذي سيشعر به الحيوان يرتبط في الغالب بالجلد. لذلك، هناك مجموعة متنوعة من الأشياء التي يمكن القيام به مع هذا النسيج، وأنه في الواقع يسمح للمرء لجمع المزيد من المعلومات حول كيفية عمل هذا الحيوان، بالمقارنة مع ما يمكن الحصول عليه من مجرد مراقبة ما تم تغذيته للحيوان والاستجابات في إنتاج بروتين الحليب أو إنتاج مكونات الحليب. تمت الموافقة على جميع الأساليب الموصوفة من قبل لجنة رعاية الحيوانات المؤسسية واستخدامها في فرجينيا للتكنولوجيا.قبل يوم واحد من خزعة المقرر، وغسل وفرك الحيوان، وخاصة، والعضم، لإزالة السماد والمواد المسخة. تقييم صحة الحيوان وحالته الجسدية وسلوكه. استخدم الأبقار الصحية فقط.حليب البقرة تماما. نقل الحيوان إلى مظلة الضغط، من الناحية المثالية في غضون ساعتين من الحلب للحد من وجود الحليب في الغدد. تقييد الحيوان مع بوابة الرأس.وضع حبل الرّاهب على رأس البقرة لمنع الحركة إلى الوراء وإلى الأمام. سحب رأس الحيوان إلى جانب واحد وربط الحبل إلى شلال الضغط باستخدام عقدة الإفراج السريع لعقد الرأس في مكان. تنظيف منطقة الحقن مع مسحة الكحول isopropyl 70٪ وإعطاء 1.1 إلى 2.2 ملليغرام من وزن الجسم في الوريد، عن طريق الوريد الوداجي، 15 إلى 20 دقيقة قبل الخزعة.حددي مكان الوريد الوداجي رفع الوريد الوداجي عن طريق تطبيق الضغط في قاعدة الأخدود الوداجي. تحقق للتأكد من عدم وجود فقاعات في الحقنة.أدخل الإبرة في الوريد الوداجي المرفوع وارسم 0.5 ملليلتر من الدم في الحقنة مرتين واخلطها مع المحتويات. إذا لم يظهر الدم في الحقنة، نقل الإبرة. إذا كانت الإبرة مقيمة في الوريد، حقن المحتويات.إزالة الإبرة بلطف، وتطبيق الشاش مع ضغط لطيف إلى موقع الحقن لمنع النزيف. إدارة هيدروكلوريد زيلازين عن طريق الوريد, 0.01 إلى 0.05 ملليغرام لكل كيلوغرام من وزن الجسم في وعاء coccygeal ما يقرب من خمس إلى 10 دقائق قبل خزعة للسماح بوقت كاف لإنشاء من المسكن. رفع الذيل وتنظيف منطقة الحقن مع 70٪ مسحة الكحول isopropyl.تحقق للتأكد من عدم وجود فقاعات في الحقنة. أدخل الإبرة في الوعاء الذيل، واسحب 0.2 ملليلتر من الدم إلى المحاقن، واخلطها مع المحتويات للتأكد من أن الإبرة مقيمة في الوعاء. إذا كانت الإبرة مقيمة، قم بحقن محتويات الحقنة.إزالة بلطف الإبرة. تطبيق الشاش مع ضغط لطيف على موقع الحقن. من المهم حقا أن يكون ألفا اثنين انعكاس في متناول اليد، مثل tolazoline، وهذا لأن الأبقار الحلوب حساسة لآثار xylazine، و جرعة زائدة من xylazine يمكن أن يسبب الوذمة الرئوية، والتي يمكن أن تكون قاتلة لعلبة الحلوب، لذلك مشاهدة بقرتك لعلامات الإفراط في مخدر وإذا كانت هذه تحدث، ثم يمكن إعطاء كمية مناسبة من tolazoline.نريد أن تقف أبقارنا أثناء إجراء العملية الكثير من الزبازين قد يسبب لهم الجلوس. يكون مساعد التعادل حتى الذيل لإجراء, حدد موقع الخزعة على الضرع, عادة في منطقة العلوي للحد من جمع النسيج الضام وتجنب الاختراق في خزان الغدة.مراقبة و Palpate الجلد مع اهتمام خاص لتحديد أي أوعية دموية تحت الجلد كبيرة من أجل تجنب هذه الأوعية أثناء الخزعة. قص الشعر من منطقة 15 في 15 سم مربع حول موقع الخزعة، وإعداد منطقة الخزعة مع بوديوني اليود، 0.75 في المئة اليود المتاحة، أو فرك غلوكونات الكلورهيكسيدين. بالتناوب 70٪ الكحول ايزوبروبيل ثلاث مرات على الأقل لإزالة جميع الحطام مرئية وغير مرئية.تطبيق محلول فرك المطهر والكحول الأيزوبروبيل في حركة دائرية، وذلك باستخدام نهج من الداخل إلى الخارج. تأكد من أن محلول فرك مطهر يبقى على اتصال مع الجلد لمدة خمس دقائق على الأقل. استخدام ضخ فراشة مع إبرة 18 G لإيداع ستة ملليلتر من اثنين في المئة ليدوكائين هيدروكلوريد تحت الجلد في موقع شق لإنشاء كتلة خط.لا تخترق الأنسجة العميقة. السماح للمخدر الموضعي لنشر لمدة ثلاث إلى خمس دقائق، وإجراء تكرار آخر من محلول فرك والكحول قبل شق. أثناء الانتظار، وإعداد أدوات الخزعة.ما تريد القيام به من حيث توفير المسكنات هو إزالة الحساسية الجلد. ذلك لأن لدينا المزيد من التعصب العصبي على الجلد والأنسجة تحت الجلد، وفي البارينتشيما، نحن نتحدث حقا فقط عن مستقبلات التمدد، وهذه لا تشعر بالألم الجراحي نفسه كما يفعل الجلد والأنسجة تحت الجلد. في الواقع، إذا كنت في نهاية المطاف وضع مخدر موضعي من خلال في parenchyma، قد تزيد من خطر النزيف أثناء العملية.استخدم تقنيات معقمة عند التعامل مع أدوات الخزعة وللشق. غسل اليدين لإزالة جميع التلوث مرئية وتطبيق قفازات جراحية معقمة. ترتيب الأدوات الجراحية في منطقة معقمة في ترتيب الاستخدام.لديك عدد 10 مشرط، الشاش العقيم، وتجميع أداة الخزعة ومنشفة معقمة للسوستاسيس. الإجراء الأول، أداة خزعة أساسية. تجميع أداة الخزعة الأساسية باستخدام قفازات جراحية.ضع القطع السبع العقيمة على ستارة معقمة. أدخل الشفرة في نظام الإرساء على القطعة الثانية. إدراج قطعة ثلاثة على رأس القطعة الثانية، وضمان أن محطة الإرساء سوف محاذاة.إشراك الحافة النهائية من النصل في نظام الإرساء من قطعة أربعة. دفع إلى الأمام قطعة أربعة ومراقبة إذا كانت القطعة الرابعة بجوار القطعة الثالثة. إدراج القطعة الخامسة على الجهاز.تأكد من محاذاة محطة الإرساء. إدراج قطعة ستة في الجزء العلوي من القطعة الثانية. تأكد من محاذاة محطة الإرساء.أدخل المسمار القفل في محطة الإرساء. دفع إلى الأمام قطعة ثلاثة لتغطية المسمار قفل. تفعيل الأداة، ودفع إلى الأمام قطعة أربعة ومراقبة شفرة خارج الأداة.سحب قطعة أربعة إلى الوراء لسحب شفرة في الأداة. تأكد من أن البقرة مخدرة بما فيه الكفاية وموقع الخزعة مخدر بما فيه الكفاية ، قرصة الجلد لضمان عدم وجود رد فعل. جعل شق عمودي سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات من خلال الجلد والأنسجة تحت الجلد من القريبة إلى القاصي باستخدام مشرط رقم 10.قم بتوصيل أداة الخزعة إلى مثقاب لاسلكي باستخدام تقنيات معقمة. ضع الحفر ضد أداة الخزعة وتحقق مما إذا كانت الأداة متصلة بإحكام بالحفر. ضمان ضبط النفس كافية من خلال وجود فرد رفع الذيل خلال جميع الإجراءات.بدوره على الحفر باستخدام دوران في اتجاه عقارب الساعة وسرعة منخفضة. تقدم أداة الخزعة بأكملها حوالي 7.5 سنتيمتر في الزرع من خلال الشق أثناء تدوير الأداة. إيقاف الحفر وتمديد يدويا قطعة أربعة من الأداة، بدوره على الحفر باستخدام دوران في اتجاه عقارب الساعة وسرعة منخفضة، وإزالة الصك الذي يحتوي على نواة الأنسجة من الضرع.اِضغط الضغط القوي على الجرح على الفور باستخدام منشفة معقمة لمدة 20 دقيقة على الأقل. أدخل القنية في الأنسجة. دفع قطعة إلى الأمام لتنشيط الأداة.تدوير في دوران عقارب الساعة بطيئة. عينة الأنسجة الآن داخل القنية. إزالة الأنسجة من أداة خزعة باستخدام ملاقط.الحفاظ على العينة في واحد X الفوسفات المخزنة المالحة وتقييم كمية الأنسجة. خذ العلامات الحيوية التي تحملها البقرة كل 10 دقائق بعد الخزعة لمدة 30 دقيقة على الأقل. تحقق من وجود نزيف بعد 20 دقيقة من الضغط على موقع الخزعة.إذا كان هناك التنقيط من الدم، والاستمرار في الضغط لمدة 5 إلى 10 دقائق إضافية. أغلق الشقوق باستخدام المواد الأساسية الفولاذية غير القابلة للصدأ على فترات خمسة ملليمترات بعد توقف النزيف. ضع ضمادة الهباء الجوي على منطقة الخزعة.مراقبة الحيوان لمدة 50 دقيقة بعد العملية. الإجراء الثاني، أداة خزعة إبرة. اتبع إرشادات الشركة المصنعة للجهاز.إزالة إبرة خزعة من حزمة باستخدام تقنيات معقمة. تخلص من الإبرة إذا لوحظ أي ضرر. إرفاق الإبرة إلى الجهاز.إغلاق الغطاء وديك الجهاز. تأكد من أن البقرة مخدرة بما فيه الكفاية وموقع الخزعة مخدر بما فيه الكفاية ، قرصة الجلد لضمان عدم وجود رد فعل. جعل شق عمودي سنتيمتر واحد إلى اثنين من خلال الجلد والأنسجة تحت الجلد من القريبة إلى شطط باستخدام مشرط رقم 10.أدخل إبرة الخزعة في موقع الشق، على بعد حوالي 10 إلى 13 سنتيمترًا من الجلد. تنشيط جهاز إبرة الخزعة لجمع الأنسجة. إزالة الإبرة من الزود.تطبيق ضغط قوي فوري على الجرح باستخدام منشفة معقمة لمدة 20 دقيقة على الأقل. بعد إزالة الأنسجة من الإبرة، اتبع الإجراء الموصوف سابقًا لإغلاق الشق. الإجراء بأكمله يستغرق حوالي 45 دقيقة للانتهاء، لكل.جلطات الدم تحتاج إلى أن تُجرد من ربع خزّانات. أيضا، من الضروري مراقبة محصول الحليب وكمية الغذاء، إن أمكن. ضمان صحة ورفاهية الحيوان دائماً قبل وأثناء وبعد الإجراء.توثيق جميع الأدوية التي تعطى للحيوانات. تحقق من وجود الدم في الحليب لمدة 7 إلى 10 أيام بعد الخزعة. تُزَرُّ اليدُ جلطات الدم من الربع الخزعة في الحلب اللاحقة، وتضمن حدوث إزالة كاملة للحليب.لاحظ محصول الحليب، وإذا أمكن، فإن تناول الأعلاف اليومية الفردية حتى تتم إزالة المواد الغذائية الجراحية. مراقبة الحيوان مرتين في اليوم لدرجة حرارة الجسم، التنفس ومعدلات ضربات القلب، والسلوك، حتى تم إزالة المواد الغذائية الجراحية. تحقق من موقع الخزعة مرتين يوميًا للتأكد من وجود تورم وحنان وأي علامات على الصرف حتى يتم إزالة المواد الغذائية الجراحية.إذا لوحظت هذه، استشر طبيب بيطري. إزالة المواد الغذائية من موقع شق 10 إلى 14 يوما بعد خزعة, اعتمادا على معدل الشفاء. استشر الطبيب البيطري إذا لوحظت أي علامات على الإصابة المحلية أو الجهازية.لذا، بمجرد أخذ الخزعة، كنت قد توقفت الدم وبالتالي المواد الغذائية وإمدادات الأكسجين إلى تلك الأنسجة، وذلك إذا لم تكن سريعة جدا في إزالة هذا جوهر الأنسجة، وبطريقة أو بأخرى وقف نشاط الأنسجة، قد لا تكون التركيزات التي قد تقيسها في وقت لاحق في المختبر تعكس حقا ما كان يحدث في ذلك الحيوان في وقت الخزعة. عادة، كنا إزالة الأنسجة بسرعة، وفلاش تجميد في النيتروجين السائل في محاولة للحفاظ على هذا النشاط. الشيء الآخر الذي يمكن للمرء أن يفعله مع هذا النسيج، وهذا هو في الواقع شيء فعلناه مع الأنسجة التي جمعناها، كان يمكن للمرء أن يعزل وينمو الخلايا الموجودة في هذا النسيج في نظام الثقافة.في حالتنا، نحن مهتمون بالخلايا الظهارية التي هي داخل تلك الأنسجة، لأن تلك هي الخلايا التي تجمع وتفرز مكونات الحليب، وهكذا، تلك الخلايا من تلك القطع النسيجية وضعت في الثقافة، وفي الواقع، أنها لا تزال تنمو اليوم. تم مراقبة الحيوانات مرتين في اليوم لمدة 10 أيام بعد العملية. لم تحدث أي مضاعفات أثناء الإجراء أو في فترة ما بعد التشغيل ، مع بقاء المعلمات الحيوية للأبقار ضمن الحدود العادية.وتبين النماذج الخطية أنه قبل 10 أيام من الخزعة، أنتجت الحيوانات 23.35 كيلوغراما من الحليب يوميا. لم تظهر الحيوانات تغيرات كبيرة في محصول الحليب من 10 أيام قبل إلى 10 أيام بعد الخزعة. خزعة الغدة الثديية البقرية هي إجراء جراحي بسيط ، مما يسمح للحيوان بالحصول على وقت قصير للتعافي.لذلك، يمكن استخدام إجراء الخزعة هذا في العديد من التجارب الغذائية وأنواع أخرى من التجارب حيث قد نستخدم تدابير متكررة على الحيوانات، لذلك على سبيل المثال، إذا كان لدينا أربع فترات مع أربعة علاجات غذائية مختلفة، يمكننا بسهولة خزعة هذه الأبقار أربع مرات مختلفة في نهاية كل فترة، مما يسمح ربما بأسبوع من وقت الراحة بين كل فترة ، لضمان عودة الحيوانات إلى إنتاجها الطبيعي.

Research

JoVE Journal

Biology

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

الخلايا الظهارية الثديية شكل الماوس Mammospheres خلال التمايز المولد للبن

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

Dendra2 Photoswitching through the Mammary Imaging Window

Dendra2 Photoswitching من خلال نافذة التصوير الثديية

In the last decade, intravital microscopy of breast tumors in mice and rats at single-cell resolution1-4  has resulted in important insights into ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

زرع الثدي الداخلي طلائي

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

التغيرات في الغدة الثديية المورفولوجيا واحتمال الاصابة بسرطان الثدي في الفئران

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

تقييم التنمية وظيفة الغدة الثديية في نماذج الماوس

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

مختبر تقنيات العقيم: طرق تصفيح

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

حقن ينترادوكتال لتسليم المخدرات المترجمة إلى ماوس الغدة الثديية

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

التلاعب في الغدة الدمعية الفئران

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

المناعي غير المباشر على أقسام المجمدة من الماوس الغدة الثديية

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

عزل الغدد الثديية الماوس سليمة، وكلها لتحليل التعبير المصفوفة خارج الخلية ومورفولوجية الغدة

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...