Name: bovine mammary gland biopsy techniques
Uploaded: 2018-12-23T13:00:00
Duration: 14 min 53 s
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この研究は、国立動物栄養プログラムとバージニア工科大学によって支持されました。さんタラ Pilonero、博士ジュリー Settlage、博士 Izabelle ・ テイシェイラのテクニカル サポートは感謝し。

記載されているすべてのメソッドは、バージニア技術機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) によって承認されました。
1. 人事
<ol><li>手術と牛取り扱いの経験を持つ、少なくとも 2 つのアシスタントを持っています。</li>
	<li>すべてのアシスタントを可能であれば生きている動物上でこのプロトコルに関連付けられている手順を実行する前に、死体の素材を使用して、少なくとも 3 回列車します。 注: トレーニングされたインストラクターによって行われるべき以前訓練し、手法を実施します。</li>
	<li>薬剤管理の手の大動物獣医師を持っているし、イベント緊急治療がプロシージャの間に必要となります。この手順中に発生する可能性のある緊急事態が含まれますに限定されない: 出血、α 2 アゴニストの過剰摂取と肺浮腫、逆流と食材、痛み、およびさらに鎮静を必要とする患者の抵抗の吸引。</li>
</ol>2. 手術器具、消耗品、設備の準備
<ol><li>インベントリし、すべての機器および消耗品 (材料の表を参照) を購入します。</li>
	<li>きれいなオートクレーブ手術用ドレープ、生検機器、メス ホルダー、手術用タオル、鉗子。</li>
	<li>適切なサイズの圧搾シュートと頭の牛を抑制するゲートがあります。</li>
	<li>圧搾シュートに近いテーブルで作業スペースを確立します。</li>
	<li>作業領域がきれい、牛を通してトラフィックを制限していることを確認します。</li>
	<li>簡単にアクセスできる作業スペースの設備・備品を整理します。</li>
	<li>作業スペース内の適切な照明を持っています。</li>
</ol>3. 動物の準備
<ol><li>1 日スケジュールされた生検前に洗うし、スクラブで動物、特に肥料と汚された材料を削除する乳房。</li>
	<li>牛の安全かつ人道的な拘束の手順に従います。</li>
	<li>生検前と生検の時にもう一度、健康、体調と動物の行動を評価します。 注: 最小試験には提案された手術サイトまたは細菌感染の他の領域で皮膚炎の検査と同様、温度、パルスと呼吸速度が含まれます。各四半期からの牛乳のサンプルを収集し、乳房をチェックします。</li>
	<li>健康な牛だけを使用します。</li>
	<li>完全に牛をミルクします。</li>
	<li>理想的には搾乳ミルク腺の存在を最小限に抑えるための 2 h 以内の圧搾シュートに動物を移動します。</li>
	<li>ゲートの頭の動物を抑制します。</li>
</ol>4. 鎮痛と鎮静
<ol><li>後方を防ぎ動きを前方に牛の頭の上には、ロープのホールターを配置します。</li>
	<li>1 つの側面に動物の頭を引き、場所で頭を保持するクイック リリースの結び目を使用して圧搾シュートにロープを結ぶ。</li>
	<li>70% イソプロピル アルコール綿棒で注入部をきれいおよび生検に 15 〜 20 分事前の頸静脈を介して静脈内フルニキシン (1.1 に 2.2 mg/kg 体重) を管理します。 注: 抗炎症薬が研究結果に影響しない場合は、非ステロイド性抗炎症薬を生検後管理、一部のプロトコル。<ol>
<li>頚静脈を探します。</li>
		<li>頸溝の底部の圧力の適用によって頸静脈を上げます。</li>
		<li>シリンジ内に気泡がないことを確認してください。</li>
		<li>調達の頚静脈に針を挿入し、注射器に血の 0.5 mL を 2 回描画し、内容ミックスします。注射器で血を示さない、針の再配置します。針が静脈に居住の場合は、内容を挿入します。</li>
		<li>針を慎重に取り外します。</li>
		<li>出血を防ぐために注入部位にガーゼに穏やかな圧力を適用されます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>キシラジン塩酸塩を静脈内投与管理 (0.01 〜 0.05 mg/kg 体重) 尾の容器で約 5-10 分前に鎮静の確立のための十分な時間を許可するために生検。 注意: は、肺水腫の兆候のための動物を確認します。肺浮腫の臨床症状は、呼吸困難、呼吸困難、呼吸困難、咳、泡状痰、青舌に含まれます。肺水腫の兆候が認められた場合は、キシラジンの影響を逆にする tolazine (2、4 mg/kg 体重) を使用することをお勧めします。
	<ol>
<li>尾を上げ、70% イソプロピル アルコール綿棒で注入の部分をきれいにします。</li>
		<li>シリンジ内に気泡がないことを確認してください。</li>
		<li>尻尾の血管に針を挿入、注射器に血の 0.2 mL を描画して針が血管に居住を確保するための内容でミックスします。針が血管に居住場合、は、注射器の内容を挿入します。</li>
		<li>針を慎重に取り外します。</li>
		<li>注射部位にガーゼに穏やかな圧力を適用されます。</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. 生検サイトの準備
<ol><li>プロシージャの尾を結ぶ助手を持っています。</li>
	<li>(通常は上部領域結合組織のコレクションを最小限に抑えるため、腺の貯水タンクは、図 1に侵入を防ぐ)、乳房に生検を選択し、選択した生検から汚された材料や肥料を削除します。</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig1v2.jpg"> 図 1.牛の乳房生検を示すイメージ。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig1large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。 
<ol start="3"><li>観察し、生検中にこれらの船を避けるために任意の大きな皮下血管を識別するために特別な注意を払って皮膚を触診します。</li>
	<li>15 cm × 15 cm の周辺生検から髪をクリップします。</li>
	<li>ポビドン ヨード (0.75% の利用可能なヨウ素) やクロルヘキシジン ・ グルコン酸・ スクラブで生検領域を準備します。すべての可視・不可視の残骸を削除する、少なくとも 3 回を 70% イソプロピル アルコールを代替します。無菌スクラブソリューションとインサイド アウト アプローチを使用して円動きでイソプロピル アルコールを適用します。消毒剤スクラブの解決は少なくとも 5 分間皮膚に接触に残ることを確認します。</li>
	<li>行のブロックを作成するのにには、切開サイトで 2% リドカイン塩酸 6 mL を皮下に入金するのに蝶注入 18 G の針を設定を使用します。深部組織に浸透しません。 注: リドカイン投与 3 と 8 mL 間で異なります。</li>
	<li>拡散 3 に 5 分スクラブソリューションと切開する前にアルコールの別の繰り返しを実行するために局所麻酔薬を許可します。待っている間、生検器具を準備します。</li>
</ol>6. 生検の手順
<ol><li>生検ツールを処理するときや切開は、無菌テクニックを使用します。</li>
	<li>すべての目に見える汚染を除去し、無菌の手術用手袋に手を洗います。</li>
	<li>使用の順序で無菌領域に手術器具を配置します。数 10 メス、滅菌ガーゼ、組織生検装置、滅菌タオル止血用があります。 メモ: は、コア生検を実施する手順 1 または手順 2 針生検を実施するに従ってください。
</li>
</ol><img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig2.jpg"> 図 2.アセンブリおよび v. c. ファー、らによって記述されたコア生検ツールのセットアップの略図9スケール バーは 1 cm.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<ol start="4"><li>コア生検機器 (ファーら9)<ol>
<li>滅菌手袋 (図 2) を使用してコア生検機器を組み立てます。<ol>
<li>滅菌ドレープ (図 2 a) に 7 の生殖不能の作品を配置します。</li>
			<li>作品 2 (図 2 b ) にドッキング システムに刃 (1 枚) を挿入します。 注意: ブレード ラインに直接指を置かないでください。
</li>
			<li>作品 3 作品 2 (図 2) の上にドッキング ステーションが配置されますを確保するを挿入します。 注: は、作品 4 (図 2 D) の内壁のドッキング システムを確認します。</li>
			<li>作品 4 (図 2 D) のドッキング システムに刃 (1 枚) の最終的な端に従事します。</li>
			<li>作品 4 を推進し、作品 4 作品 3 (図 2 e) の横にあるかどうかを確認します。</li>
			<li>5 デバイス (ブレード + 2 個) で (図 2 f) を挿入します。</li>
			<li>ドッキング ステーションが整列されていることを確認 (図 2)。</li>
			<li>2 の部分の上部に 6 を挿入 (刃の側) の反対側 (図 2 H)</li>
			<li>ドッキング ステーションが整列されていることを確認 (図 2 H)。</li>
			<li>ドッキング ステーション (図 2 i) 固定ネジ (7 個入り) に挿入します。</li>
			<li>ピース ロックするネジをカバーする 3 (ブラック) を推進します。 注意: ブレード終了時に指を置かないでください。
</li>
			<li>作品 4 を推進ツールをアクティブ化、ツールの外側の刃を観察します。</li>
			<li>(使用の準備ができて) ツールに刃を収納する部分 4 を後方へ引きます。 注: ツールが生検組織内の必要な距離を浸透している場合にのみ、ブレードをアクティブ必要があります。</li>
		</ol>
</li>
		<li>牛が十分に鎮静、生検は十分に麻酔を確認します。反応がないように皮膚をつまみます。</li>
		<li>皮膚と数 10 メスによる末梢から皮下組織を 2 ~ 3 cm の縦切開を確認します。</li>
		<li>生検機器を滅菌法を用いたコードレス ドリルに取り付けます。</li>
		<li>生検ツールに対してドリルを置き、ツールはドリルにしっかりと接続されているかどうかを確認します。</li>
		<li>すべてのプロシージャの間に尾を昇格させる個人を持っていることによって適切な拘束を確認します。</li>
		<li>時計回りの回転と低速を使用してドリルを入れます。 注: ドリルは生殖不能ではなく、ドリルを使用する場合、演算子は滅菌残らない。</li>
		<li>ドリル回転フリー ダイヤル中全体生検ツール (約 7.5 cm) を切開して乳房に進出します。</li>
		<li>ドリルの電源を切り、手動で拡張ツールの 4 作品。</li>
		<li>時計回りの回転と低速を使用してドリルを入れます。</li>
		<li>乳房から組織のコアを含む機器を削除します。</li>
		<li>少なくとも 20 分滅菌タオルを使用して傷に強い圧力をすぐに適用されます。 注: は、確実に十分な圧力を適用する自分の拳を使用してこれを実行助手を持っています。</li>
		<li>ピンセットを用いた生検ツールから組織を削除します。</li>
		<li>1 x リン酸緩衝生理食塩水のサンプルをしてくださいし、組織の量を評価します。</li>
		<li>少なくとも 30 分のための生検後牛のバイタル サインごと 10 分を取る。</li>
		<li>生検の圧力の 20 分後の出血を確認します。血の滴りがある場合は引き続き追加の 5-10 分のための圧力を適用します。</li>
		<li>結局のところ出血が止まり 5 mm 間隔でステンレス製のステープルを使用して切開を閉じる。5 と 8 のステープルの間を使用します。</li>
		<li>生検領域にエアロゾル包帯を適用されます。</li>
		<li>プロシージャの後 50 分間動物を観察します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
針生検機器
	<ol>
<li>デバイスの製造元の指示に従ってください。</li>
		<li>生殖不能の技術を使用してパッケージから生検針を削除します。</li>
		<li>いかなる損害が発生した場合は、針を破棄します。</li>
		<li>針をデバイスに接続します。</li>
		<li>カバーを閉じ、デバイスをコックします。</li>
		<li>牛が十分に鎮静、生検は十分に麻酔を確認します。反応がないように皮膚をつまみます。</li>
		<li>皮膚と数 10 メスによる末梢から皮下組織を 1 〜 2 cm の縦切開を確認します。 注: 生検針機器のための切開コア生検機器よりも小さい (1-2 cm) ことができます。</li>
		<li>切開部位 (皮膚から 10 に 13 cm 前後) に生検針を挿入します。</li>
		<li>組織を収集するために生検針デバイスをアクティブにします。</li>
		<li>乳房から針を抜きます。</li>
		<li>少なくとも 20 分滅菌タオルを使用して傷に即時、強力な圧力を適用されます。</li>
		<li>組織を生検針をピンセットを使用してから削除します。</li>
		<li>1 x リン酸緩衝生理食塩水のサンプルをしてくださいし、組織の量を評価します。</li>
		<li>少なくとも 30 分のための生検後バイタル サインごと 10 分を取る。</li>
		<li>生検の圧力の 20 分後の出血を確認します。</li>
		<li>結局のところ出血が止まりステンレス ステープルを使用して切開を閉じる。</li>
		<li>生検領域にエアロゾル包帯を適用されます。</li>
		<li>プロシージャの後 50 分間動物を観察します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. 後生検動物のケア
<ol><li>動物に投与された全ての薬物を文書化します。 注: ミルクはプロシージャの後 36 h の期間中に破棄されます。肉回収された牛乳や肉の 4 d. 離脱期間が国または管轄権や使用される薬によって異なる場合があります。ローカル ルールと規制を確認してください。</li>
	<li>生検後 7 〜 10 d 用ミルクの血液の存在を確認します。</li>
	<li>その後回の搾乳で生検の四半期からストリップ血栓を手し、完全な牛乳を確保する削除が発生します。 注: 次の手順 1-3 回の搾乳の生検の四半期から血栓の存在が期待されます。牛乳に血を 1 に 6 d のため生検後なることがあります。</li>
	<li>牛乳は、収率を観察し、可能であれば、個々 の毎日の食事の摂取量を手術ホッチキスを削除するまで。</li>
	<li>外科ステープルを削除するまで 1 日 2 回、体温、呼吸、心拍数および態度の動物を監視します。</li>
	<li>外科ステープルを削除するまでは、生検のサイトを毎日二度の腫れ、圧痛と排水の兆候を確認します。これらが認められた場合、獣医に相談します。 注: は、生検を清潔に保つ、エアロゾル包帯 1 ~ 3 日おき必要に応じて再適用します。</li>
	<li>治癒率に応じて、生検後、切開サイト 10 に 14 d からホッチキスを削除します。</li>
	<li>ローカルまたは全身感染症の兆候が認められた場合、獣医に相談します。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Khatun, M., Sorensen, P., Ingvartsen, K. L., Bjerring, M., Rontved, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+combined+liver+and+udder+biopsying+on+the+acute+phase+response+of+dairy+cows+with+experimentally+induced+E.+coli+mastitis.">Effects of combined liver and udder biopsying on the acute phase response of dairy cows with experimentally induced E. coli mastitis.</a> Animal. 7 (10), 1721-1730 (2013).</li><li>Buitenhuis, B., Rontved, C. M., Edwards, S. M., Ingvartsen, K. L., Sorensen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+depth+analysis+of+genes+and+pathways+of+the+mammary+gland+involved+in+the+pathogenesis+of+bovine+Escherichia+coli-mastitis.">In depth analysis of genes and pathways of the mammary gland involved in the pathogenesis of bovine Escherichia coli-mastitis.</a> BMC Genomics. 12, 130 (2011).</li><li>Nickerson, S. C., Akers, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+Gland+|+Anatomy.">Mammary Gland | Anatomy.</a> Fuquay JW, Fox PF and McSweeney PLH (eds.), Encyclopedia of Dairy Sciences, Second Edition. 3, 328-337 (2011).</li><li>Akers, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+100-Year+Review:+Mammary+development+and+lactation.">A 100-Year Review: Mammary development and lactation.</a> Journal of Dairy Science. 100 (12), 10332-10352 (2017).</li><li>Ruegg, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+100-Year+Review:+Mastitis+detection,+management,+and+prevention1.">A 100-Year Review: Mastitis detection, management, and prevention1.</a> Journal of Dairy Science. 100 (12), 10381-10397 (2017).</li><li>Zhao, X., Lacasse, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mammary+tissue+damage+during+bovine+mastitis:+Causes+and+control.">Mammary tissue damage during bovine mastitis: Causes and control.</a> Journal of Animal Science. 86 (13), 57-65 (2008).</li><li>Knight, C. H., Hillerton, J. E., Teverson, R. M., Winter, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biopsy+of+the+bovine+mammary+gland.">Biopsy of the bovine mammary gland.</a> British Veterinary Journal. 148 (2), 129-132 (1992).</li><li>Lima, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+bovine+mammary+gland+biopsy+and+increased+milking+frequency+on+post-procedure+udder+health,+histology,+and+milk+yield.">Effects of bovine mammary gland biopsy and increased milking frequency on post-procedure udder health, histology, and milk yield.</a> Animal. 10 (5), 838-846 (2016).</li><li>Farr, V. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+method+for+the+routine+biopsy+of+bovine+mammary+tissue.">An improved method for the routine biopsy of bovine mammary tissue.</a> Journal of Dairy Science. 79 (4), 543-549 (1996).</li><li>Weng, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short+communication:+Repeated+mammary+tissue+collections+during+lactation+do+not+alter+subsequent+milk+yield+or+composition.">Short communication: Repeated mammary tissue collections during lactation do not alter subsequent milk yield or composition.</a> Journal of Dairy Science. 100 (10), 8422-8425 (2017).</li><li>Peterson, D. G., Matitashvili, E. A., Bauman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diet-induced+milk+fat+depression+in+dairy+cows+results+in+increased+trans-10,+cis-12+CLA+in+milk+fat+and+coordinate+suppression+of+mRNA+abundance+for+mammary+enzymes+involved+in+milk+fat+synthesis.">Diet-induced milk fat depression in dairy cows results in increased trans-10, cis-12 CLA in milk fat and coordinate suppression of mRNA abundance for mammary enzymes involved in milk fat synthesis.</a> Journal of Nutrition. 133 (10), 3098-3102 (2003).</li><li>Baumgard, L. H., Matitashvili, E., Corl, B. A., Dwyer, D. A., Bauman, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=trans-10,+cis-12+conjugated+linoleic+acid+decreases+lipogenic+rates+and+expression+of+genes+involved+in+milk+lipid+synthesis+in+dairy+cows.">trans-10, cis-12 conjugated linoleic acid decreases lipogenic rates and expression of genes involved in milk lipid synthesis in dairy cows.</a> Journal of Dairy Science. 85 (9), 2155-2163 (2002).</li><li>Kasraeian, S., Allison, D. C., Ahlmann, E. R., Fedenko, A. N., Menendez, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparison+of+fine-needle+aspiration,+core+biopsy,+and+surgical+biopsy+in+the+diagnosis+of+extremity+soft+tissue+masses.">A comparison of fine-needle aspiration, core biopsy, and surgical biopsy in the diagnosis of extremity soft tissue masses.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 468 (11), 2992-3002 (2010).</li><li>de Lima, L. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+technique+for+repeated+biopsies+of+the+mammary+gland+in+dairy+cows+allotted+to+Latin-square+design+studies.">A new technique for repeated biopsies of the mammary gland in dairy cows allotted to Latin-square design studies.</a> Canadian Journal of Veterinary Research-Revue Canadienne De Recherche Veterinaire. 80 (3), 225-229 (2016).</li><li>Ollier, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole+intact+rapeseeds+or+sunflower+oil+in+high-forage+or+high-concentrate+diets+affects+milk+yield,+milk+composition,+and+mammary+gene+expression+profile+in+goats.">Whole intact rapeseeds or sunflower oil in high-forage or high-concentrate diets affects milk yield, milk composition, and mammary gene expression profile in goats.</a> Journal of Dairy Science. 92 (11), 5544-5560 (2009).</li><li>Soberon, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+increased+milking+frequency+on+metabolism+and+mammary+cell+proliferation+in+Holstein+dairy+cows.">Effects of increased milking frequency on metabolism and mammary cell proliferation in Holstein dairy cows.</a> Journal of Dairy Science. 93 (2), 565-573 (2010).</li></ol>

著者が明らかに何もありません。

コア針生検の方法はこのプロトコル9,16で記述されていた。動物の健康と乳房炎14生検前に発病の詳細な評価は、両方の手順に必要です。研究のために、炎症や感染症の明らかな兆候を持つ動物のテクニックを実行することは避けてください。これは生検後合併症のリスクを軽減します。すべての生検機器および装置、消毒、清潔で生検の汚染を避けるために殺菌をする必要があります。施術前に手術部位感染 (SSI) を最小限に抑えるために必要です。一般に、SSI は動物の罹患率、低下した性能と乳牛の高い生産コストに関連付けられます。以前に報告した汚染9,14を削除する生検領域を洗浄して防腐剤 (70% アルコール、ヨウ素手術切開部位周囲の髪の毛をクリッピングを含む生検により SSI を防止する方法9, 2% クロルヘキシジン酢酸ソリューション14, 10% ポビドン ヨード8スクラブ) 皮膚の準備のため。7中または直後に生検9; いくつかの研究では、抗生物質の投与が採択されましたただし、予防的抗生物質投与は現在の仕事では使用されませんでした、生検の感染は認められなかった。生検の傷の汚染を防ぐためには、尾はエアロゾル包帯が適用されるまで、生検との接触を防ぐために保護されなければなりません。このプロトコルではステープルが生検後約 14 に 10 d を削除されます。
コア生検前にツールを設定、ドリル; を付けることが重要です。低速回転速度を選択、前方回転を選択し、ドリルのリバース モードを使用しないでください。中には、皮膚や結合組織に連絡せずツール エントリを許可するように十分な長さの切開をして皮膚の端を離れて保つために切開部の両側にデジタル圧力を使用することが重要です。この手順を行わないと、コア生検機器の回転中の切開端をドラッグ可能性があります発生し、感染症のリスクが増加し、創傷治癒を遅らせる可能性があります追加の皮膚組織の外傷を引き起こします。このプロトコルで記述されている現在の穿刺は、大型動物専門医によって行われました。手順が正常に実行された (図 5)。両方の方法が比較的容易であり、外科的切除のプロシージャと比較して実行する高速です。
乳牛8,9,10,14MG 生検後、生検部位から出血が共通しています。この議定書は、観察された出血は最小限 (図 4)、処理の直後に傷口に十分な (強い) 圧力の適用のためであります。少なくとも 20 分強い圧力が必要といくつかのケースで 30 分以上必要なことがあります。生検への圧力の適用後中等度から重度の出血が見られる場合は、圧力を継続し、すぐに獣医師に連絡することをお勧めします。
止血は、牛の罹患率を減らすための重要な要因は、1 つの研究は9の出血のコントロールに生検に止血パッドを詰め込んだ。ただし、このような方法で止血パッドの使用では、酪農環境の微生物汚染の潜在的なリスクが高いがあります。別の研究14生検生検と皮膚閉鎖後と繰り返し生検間に手動圧力を適用し、生検の後、少なくとも 2 時間サイトに氷を適用します。この議定書は、20 に 25 分の生検に適用される強力な圧力だった出血を制御する適切です。
成功生検法は、手順の後の時間の短い期間に続く牛乳で最小の血になります。ミルクの降下および乳房炎の感染症の中にミルクの分泌の中断を避けるためには、生検の四半期10,14からストリッピング手で乳房の血液凝固を削除必要があります。この議定書は、血は生検後 48 h までミルクで観察されました。ただし、動物の大きい数を使用する研究では、牛乳に血は、牛の大半で 6 日未満の観察されました。ほとんどの動物は、6 日間8後、牛乳に血を示しませんでした。このため、牛乳外観の毎日の観察は、手順の後 6 d 必要です。大きな組織サンプルは14を得られたとき、動物は乳房炎の感染の兆候を表わさなかった。しかし、針を使用して同じ動物に繰り返し生検を行う前の研究は、その乳房の感染症発生率は約 12% 次の手順8を発見しました。この議定書は、どちらも動物は術後後乳房感染の視覚的な徴候を持っていた。わずかな、また生検後、切開部位が感染のチャンスします。
鎮静の効果を逆に薬トラゾリン塩酸キシラジンから過剰摂取の場合利用できます。キシラジンの過剰な投与は肺浮腫を引き起こす可能性があります。肺浮腫の臨床症状は、呼吸困難、呼吸困難、呼吸困難、咳、泡状痰に含まれます。肺水腫の兆候が認められた場合は、キシラジンの影響を逆にする tolazine (2、4 mg/kg 体重) を使用することをお勧めします。
この議定書では、針生検と生検の両方を実行するための技術について説明します。一般に、コア生検針生検に比べての利点は乳房の健康にマイナスの影響を最小と大きい組織サンプル (0.75 に 1 g)9です。針生検は、コア生検器械より低侵襲の方法です。ただし、複数の生検組織を用いた針生検の手順は手順としてミルクの血栓後主要な出血のリスクを高める可能性がありますの量を大きくを取得しようとします。両者は最小限牛罹患率を引き起こされ、術者の最小限のトレーニングであることがわかった。毎日乳 (8 ~ 10% 減少) とコンポジション9飼料摂取量削減14の短期的な変化は、それぞれコアと針生検後期待されます。針生検の手順の制限は、組織を針で除去の少量です。計測器は、針生検組織で、複数の試みは多くの場合術後後ミルクと乳房の血液のリスクが増加、組織の十分な量を取得する必要がときにのみアクティブにする必要があります。コア生検の制限を含める場合大量ティッシュの術後後出血のリスクが高い (> 200 mg) が得られます。また、生検ツールより組み立ては難しい使用する前に適切な訓練を必要とします。

生検は、医療の課題や研究目的から組織のコア部を収穫するための手順です。治療に対する組織の応答の解析または興味の他の要因をように安楽死1の代替として組織を収集するために低侵襲と広く使われている技法です。ウシ乳腺 (MG) 組織のサンプルが酪農研究遺伝子および蛋白質の表現、組織学、細胞細胞器官、シグナル伝達経路および管理の変化に対応した代謝プロセスを組織するために必要または環境。さらに、診断および細菌感染2によるウシ乳房炎等の特定の感染症を研究する MG のティッシュが必要です。
牛の乳房は 4 つの独立した腺を含み、各腺には実質と総称される独立したミルクの分泌システムが含まれています。肺胞、ダクト、および結合組織は乳腺の実質であります。肺胞は (内腔) の内部の表面の上皮細胞から成る顕微鏡の球状中空構造であり、特殊な筋上皮細胞 (基底) の外部の表面に。肺胞は、ミルクの合成と分泌します。各グループは小3と呼ばれ、実質内に線維性の結合組織は、肺胞の他のグループから肺胞のグループを分離できます。いくつかの要因は、開発と MG 動物生理学、栄養、管理、遺伝学、環境4などの機能に影響を与えます。乳房炎はまた MG 関数と牛乳品質5に否定的影響を与える重要な要因です。乳房炎の病原体によってリリース毒素肺胞への損傷が発生し、MG 組織6の生化学的および組織学的変更を伴う壊死を誘導します。したがって、組織や各肺胞または MG の小葉の代謝過程が他人から大幅に異なる場合があります。そのため、全体の乳腺の代表的なサンプルは、生検が望ましいです。小さな生検だけ単一の標本または結果の科学的または診断情報の制限、個々 の肺胞をキャプチャ可能性があります。研究目的のため乳腺生検組織の特性の 'スナップショット' を提供しますが、生検出来合計乳腺の見積もりの不在で合計乳腺機能で十分に認識する必要がある大量。
いくつかの生検のツールは、人間の使用のための最後の 30 年にわたって開発されています。現在、これらの商品の適応が動物で使用できます。乳牛、MG のティッシュのサンプルは、外科的切除 (鈍的切離)7生検針1,8、コア生検機器9,10などさまざまな技術を使用して取得されています。したがって、泌乳牛における MG 生検する方法 1992年7立って鎮静9、コア生検のコレクションで電気焼灼止血を使用して手術の郭清を伴うリカンベント鎮静を使用して手順から移行します。 10、11,12。外科的生検は侵襲的高価になることができる血腫などの合併症の発症率が高いと、傷の問題、腫瘍転移13。現在、コア生検、針生検 (トゥルー カット生検とも呼ばれる) が広く採用されて外科的生検に代わるものとして。外科的生検と比較してコアと針生検の利点があります: 手順は、低侵襲です。主な合併症はまれです。全身麻酔は必要ありません。手順は relativley 急速です;回復時間が短いです。乳房の健康に負の影響を最小限とミルク収量および組成8,9,10にのみ短期的な影響があります。コストより少ない外科的生検13。
1996 年に記述されている 1 つのコア生検の手順がなく全身麻酔9,10,11 ウシ MG から組織の代表的な量を削除するのに取り外し可能な引き込み式の刃を持つ滅菌、ステンレス製カニューレを使用 ,12。中には、楽器は低速、ツールが組織に高度な組織のコアをきれいにカットする回転を作成するコードレス ドリルに添付されました。利点はより大きい組織 (70 mm × 約 0.75 に 1 g、直径 4 mm) 9のサンプルします。最近研究10示した V. C. ファーらによって記述された生検の手順9は、泌乳牛のパフォーマンスと乳房の健康に悪影響を及ぼすことがなく繰り返される MG 組織コレクションを実行する使用できます。研究14が乳牛 (31 cm 長く、外側直径 9.5 mm、内径 8 mm) より大きいトロカール内部ステンレス カニューレに適用される真空を用いた生検を収集する MG の繰り返し生検を評価するために行われた最も最近では、.このメソッドは、(キシラジン) の鎮静と局所麻酔 (2% リドカイン塩酸塩) を使用しました。
針生検は乳腺組織を収集する別の手法です。いくつかの研究は、この手法を採用しています。1 つの研究1の手順で (デトミジン) の鎮静と局所麻酔薬 (1% リドカイン) を使用しました。生検後は、牛は予防的抗生物質治療を受けた。乳腺は、搾乳の前後に手動でもんだ。牛乳に血も生検後 84 h まで認めた。量と、牛乳の組成は、時間の短い期間の影響を受けた。最近では、乳牛8繰り返される MG の生検を行うに生検針を用いた。(1% アセプロマジン、筋肉) の鎮静と局所麻酔 (2% リドカイン塩酸、皮下) を動物に投与します。プロシージャの前後に動物が乳房の薬や抗生物質の受信しませんでしたし、手術後の期間の間に生検部位の感染の兆候があった。この研究では、繰り返されるウシ MG 生検針を使用しては、乳牛の牛乳生産と乳房の健康にマイナーな負の影響を持っていた。一般的に、針生検はコア生検器械より低侵襲の方法であるようです。ただし、前述のとおり、生検手法 MG 組織の代表的なサンプルを収穫するために不可欠です。ウシ MG 組織量が少ないが (約 20 に 25 mg) を得られることは針生検の制限8,15。
生検針や大きなコアを介してかどうか、ほぼ全ての研究は α 2 アゴニストの鎮静と局所麻酔薬8,9,10の組み合わせを使用しました。ウシ MG でほとんどの神経終末が皮膚に関連付けられます。実質組織への神経支配はスパース タイプの伸張受容器を介して主手術の激痛を検出する神経線維です。その結果、MG の手術操作による痛みの生理学的メカニズムは、皮膚や皮下組織3実質組織などない深い組織を介してです。したがって、生検の手順については、必要があるだけローカル麻酔皮膚と皮下組織を深部組織に局所麻酔薬の浸潤が手術の痛みを大幅に削減しないと生検領域の適切な準備の後動物の不快感は、主に、拘束に関連付けられています。
コアの大きなサンプルのコレクション血腫の形成を増加し、MG 実質内感染のリスクを高めます。したがって、周術期のプロトコルはしばしば普遍8ではありませんが注射用抗菌剤7の管理を含めます。止血も牛の罹患率を減らすための重要な要因です。前述の研究で生検サイトに適用された大規模なコア生検器14、手動圧力を使用してと牛ブラだった手順に従って少なくとも 2 時間の傷に氷を適用するために使用します。にもかかわらず、大量収穫された組織の飼料摂取量と乳量のわずかな減少が認められ, と手順は、乳牛の健康状態に悪影響を及ぼすことがなく 3 週間ごとを繰り返していた。
乳牛の MG 生検を行う研究者は結果の生検の診断や分析の品質、技術、および牛罹患率の容易さを考慮する必要があります。正確かつ事前に計画された手技は、これらの目標を達成するために不可欠であります。日には、MG 生検研究自体、生検手法を記述するのではなく、生検の結果を記述するのに焦点を当てているし、不足のレプリケーションを許可するように十分な細部が泌乳牛の説明。したがって、この作業の目的は、針生検と牛の MG 生検の安全かつ人道的なレプリケーションを許可する十分な詳細に大きなコア生検する方法の両方を記述するためだった。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1122px;" width="1120">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">70% Isopropyl alcohol&#160;</td>
			<td style="width:242px;">Walmart&#160;</td>
			<td style="width:123px;">565106257</td>
			<td style="width:306px;">1 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Aerosol spray to kill and repel flies</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td>14339</td>
			<td>1 bottle (if necessary)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Biopsy needles, 12 G &#215; 16 cm</td>
			<td style="width:242px;">C. R. Bard</td>
			<td style="width:123px;">MN1216</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Butterfly infusion set (18 G needle)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-258087</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell culture dishes</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">08-772E</td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Cordless drill (low speed)</td>
			<td style="width:242px;">Hitachi&#160;</td>
			<td style="width:123px;">&#160;DS10DFL&#160;</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Core biopsy instrument, Farr et al. (1996)</td>
			<td style="width:242px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>2, custom metal fabrication. To request the tool contact the authors.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Cows</td>
			<td style="width:242px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>cattle healthy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Flunixin meglumine</td>
			<td style="width:242px;">MWI/VetOne</td>
			<td style="width:123px;">501018</td>
			<td>1.1 to 2.2 mg/kg of body weight</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Folding table&#160;&#160;</td>
			<td style="width:242px;">Amazon</td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Forceps</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">09-753-50</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Gloves non-sterile&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">17-200-845</td>
			<td>9, size dependent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Hard brush&#160;</td>
			<td style="width:242px;">Sullivan Supply</td>
			<td style="width:123px;">18270</td>
			<td>1, to wash the cows</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Head gate&#160;</td>
			<td style="width:242px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td>1, customized for dairy cows</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Lidocaine hydrochloride 2% injectable&#160;</td>
			<td style="width:242px;">MWI/VetOne</td>
			<td style="width:123px;">510212</td>
			<td>6 mL was used,&#160; from 3 to 8 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Livestock body wash</td>
			<td style="width:242px;">eZall Technologies</td>
			<td style="width:123px;">39384</td>
			<td>1, to wash the cows</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Needle 18 G&#160; (1 to 1/5&#8220;)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-821-15A</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Needle 20 G (1 to 1/5&#8220;)</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">14-815-526</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Phosphate buffered saline (0.9%)</td>
			<td style="width:242px;">Fisher</td>
			<td style="width:123px;">20-012-043</td>
			<td>1 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Povidone Iodine ointment</td>
			<td style="width:242px;">Jeffers</td>
			<td>#VED1A</td>
			<td>500 g (if necessary)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Povidone iodine scrub solution (0.75% iodine)</td>
			<td style="width:242px;">MWI/VetOne</td>
			<td style="width:123px;">510094</td>
			<td>1 L</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Reusable biopsy instrument&#160;</td>
			<td style="width:242px;">C. R. Bard</td>
			<td style="width:123px;">MG1522</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Rope halter</td>
			<td style="width:242px;">Nasco farm and ranch</td>
			<td style="width:123px;">C10852</td>
			<td>2, cow size</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Scalpel blades (#10)</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">033870</td>
			<td>2</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Scalpel holders (#3)</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">602008</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Self seal autoclave pouch 10 x 5.5 in.</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">19-130-0038</td>
			<td>1 case of 800</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Sterile cotton gauze sponges</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">22-037-986</td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Sterile gauze pads</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">19-090-735</td>
			<td>4</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Sterile surgical gloves&#160;</td>
			<td style="width:242px;">Surgical gloves</td>
			<td style="width:123px;">19-166-679</td>
			<td>3,&#160; size dependent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Sterile surgical towels</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">50-118-0339</td>
			<td>6</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Stethoscope</td>
			<td style="width:242px;">Littmann Master Classic II</td>
			<td style="width:123px;">1392</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Surgical clipper</td>
			<td style="width:242px;">Oster A5</td>
			<td style="width:123px;">078005-010-003</td>
			<td>1, preparation of the animal for biopsy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Surgical clipper blades (#40 )</td>
			<td style="width:242px;">Oster&#160;</td>
			<td style="width:123px;">78919-016</td>
			<td>1, preparation of the animal for biopsy</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Surgical staple remover</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">541</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Surgical stapler pre-loaded</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">17713</td>
			<td>5</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Syringes of 10 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>14-823-224</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Syringes of 2 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-028854</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Syringes of 20 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-034507</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Syringes of 5 mL</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>22-028855</td>
			<td>3</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Thermometer</td>
			<td style="width:242px;">Agri-Pro Enterprises Inc</td>
			<td style="width:123px;">72000</td>
			<td>1</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Tolazine hydrochloride</td>
			<td style="width:242px;">Akorn Animal Health</td>
			<td style="width:123px;">61311-486-10</td>
			<td>2 to 4 mg/kg of body weight (if necessary)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tweezer&#160;</td>
			<td>Fisher</td>
			<td style="width:123px;">14-955-025</td>
			<td>1, for handle the tissue sample</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Water hose</td>
			<td style="width:242px;">Miracle-Gro, Walmart</td>
			<td style="width:123px;">554990501</td>
			<td>1, to wash the cows</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:451px;">Water-resistant aerosol bandage (aluminum powder 40 mg)</td>
			<td style="width:242px;">MWI</td>
			<td style="width:123px;">010728</td>
			<td>1 bottle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Xylazine hydrochloride</td>
			<td style="width:242px;">MWI/VetOne</td>
			<td style="width:123px;">510650</td>
			<td>0.01 to 0.05 mg/kg of body weight</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bovine mammary gland biopsy techniques

乳腺生検は、遺伝子発現、シグナル伝達経路とタンパク質翻訳の組織学的解析を含む細胞生物学を研究する組織サンプルを収集するために研究者を許可します。この記事では、乳腺 (MG) の生検のための 2 つの手法について説明します。3 健康なホルスタイン種乳牛が被験者。腎生検の前に牛は搾乳され牛シュートでその後拘束されました。鎮痛剤 (フルニキシン、2.2 へ 1.1 mg/kg 体重) を生検する静脈 [IV] 注射 15 〜 20 分前に頸静脈を介して投与。立っている鎮静、キシラジン塩酸の (0.01 0.05 mg/体重 kg) 尾骨血管を介して注入された手順の前に 5-10 分。十分に鎮静、一度生検された無菌調製し、皮下注射を介して 2% リドカイン塩酸 6 mL でローカル麻酔。無菌技術を使用すると、2 〜 3 cm の縦切開を行った数 10 メスを使用してコアと針生検のツールを使用しました。コア生検ツールはコードレス ドリルに接続され、時計回りのドリル アクションを使用して切開 MG 組織に挿入します。針生検ツールは、切開サイトに手動で挿入されました。術後すぐにアシスタントは滅菌タオルを使用して止血を達成する 20 に 25 分切開部位に圧力をかけ。ステンレス外科ステープルは、皮膚切開を反対する使用されました。ステープルはあった削除された 10 日後プロシージャです。コアと針生検の主な利点は、両方のアプローチは健康で安全に行うことが低侵襲であるということです。生検の後乳量は影響を受ける。これらの手順は、短い回復時間を必要とし、合併症のリスクが少ない結果します。特定の制限は、生検と生検の感染後の出血などがあります。これらの技術のアプリケーションには、臨床診断と一次電池文化などの研究目的のための組織のコレクションが含まれます。

針生検生検につき 10 〜 30 mg のサンプルを生成されるこの議定書は、コア生検技法 200-600 mg の組織サンプル生産。動物は、手順の後 10 d のため 1 日 2 回を認められました。プロシージャの間にまたは正常範囲の内に残る牛の重要なパラメーターで、術後の合併症は認めなかった (平均呼吸率 31.4 ± 7.04 (SD) を = 平均心拍数、分あたり呼吸 = 1 分、平均 75.9 ± 8.9 ビート体温 38.2 ± 0.68 ° C、図 3を =)。
止血 (約 25 分) を達成するために生検地への手動圧力は、次の開いた傷は最小限の出血 (図 4) を示した。牛は、アドリブ、同じ食事を与えられた、動物は術後の期間中に同一の住宅施設で保たれました。動物は生検のサイトで感染の兆候を示さなかった。痛み、出血、腫れ、排水、または高温 (図 5) はありませんでした。生検 (図 5) の 8 と 10 d 内に傷が癒されます。
1 つの動物は、術後後 8 日目をこすり傷による軽度の皮膚刺激を開発しました。この牛は、ポビドン ヨード溶液および 70% イソプロピル アルコールを使用して生検をクリーニングによって扱われました。ステンレス製ステープル排水を許可する除去し、ポビドン ヨード軟膏 (1%) は 2 に 3 d のため生検で 1 日 2 回を適用しました。皮膚の炎症はポビドン ヨード軟膏の適用後 2 d を消失し、さらに合併症と傷治癒します。
血の塊は、ストリッピング マシン搾乳前に生検の四半期からミルクの手によって削除されました。この議定書は、生検後 3 回の搾乳 (約 36 時間) のミルクで血栓の存在が観察されました。血液汚染ミルクの生検後 48 h に観察されました。牛乳の中の血液の量を基準にしてコアと針生検の間観察視覚的な違いはありませんでした。動物 (図 6) の手順の後は、乳量の大幅な減少を示さなかった。平均乳成分は 4.37% の脂肪、3.34% 蛋白質、乳糖 4.64% だった平均乳体細胞数 (SCC) は、1 mL あたり未満 200,000 セルでした。
得られる MG 組織は、一次電池文化 (図 7) などのさまざまな研究目的に使用できます。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig3.jpg"> 図 3.動物の健康指標の評価ウシ乳腺生検後。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。 
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig4v2.jpg"> 図 4.後生検サイト外観手動圧力は止血を達成するために生検領域に適用されます.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig5.jpg"> 図 5.生検サイト写真。(A) 生検.のプロシージャの後の 3 d のサイト(B) 生検術後. 6 d のサイトします。(C) 生検の傷が治癒された適切に示す手順の後 10 d サイトします。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig6.jpg"> 図 6.毎日の牛乳生産を前に、乳腺生検後 (n = 3 の牛).線形モデルの推定、生検前に 10 日間動物 23.35 kg 一日のミルクの生産します。乳量が大幅に変化しなかった (P > 0.05) から生検後 10 日前に 10 日間のわずかな増加が乳量が観測された (生検前に、10 日から毎日牛乳の 0.0005 kg/d の増加)。3 つの動物は、このプロトコルで使用されていた1 つの動物の生検 2 回 (動物 1: コア生検乳房の左側と右側乳房の生検針) と 2 つの動物はかつて生検 (動物 2 と 3: コアまたは針のプロシージャを使用して乳房の右側だけ)。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58602/58602fig7.jpg"> 図 7.主なウシ乳腺上皮細胞文化の代表的なイメージです。スケール バーは 100 μ m.<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58602/58602fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください</a>。

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Bovine Mammary Gland Biopsy Techniques

乳腺生検する方法

この記事は、コアおよび針生検を使って乳腺生検を示します。収穫された組織は、細胞培養や乳腺生理学、遺伝子発現、蛋白質の表現、蛋白質の修正、免疫組織化学、代謝物濃度を含む代謝を評価するために使用できます。

Bovine mammary gland biopsies allow researchers to collect tissue samples to study cell biology including gene expression, histological analysis, ...

生検は、私はあなたが知っていると思うように、関心のある臓器から組織のビットを除去し、この場合、それは乳腺です。生検サンプルは、遺伝子発現解析などを行う場合、組織の一部を採取して組織学的分析を行う場合、乳腺の顕微鏡レベルで構造を見る場合に非常に有用であり、ホルモン作用に関連するシグナル伝達経路などを決定するのにも非常に有用です。乳腺組織サンプリングを行う際に注意する必要がある注意の1つは、本当に代表的なサンプルを採取しましたか?なぜなら、ブドウの群れのような小葉を捕獲したり、本当に正常を表さない個々の胞を捕獲したりすることがあるので、乳腺生検を行うときに持っている希望は、乳の生産を担当する機能的組織を言うだけの空想的な言葉である花座組織を収集することです。を示すサンプルです。乳腺の感覚神経終末のほとんどは皮膚に関連しているので、最初の切開を行う領域の適切な準備を行い、皮膚を麻酔するために、皮膚自体に関連する感覚神経終末の方法はほとんどないことを認識し、理解することが重要です動物が感じる不快感は、主に皮膚に関連しています。だから、この組織で行うことができる様々なことがあり、実際には、動物に供給されたものと牛乳タンパク質出力または牛乳成分の出力の応答を観察することから得られるかもしれないものと比較して、その動物がどのように機能するかについてのより多くの情報を収集することができます。記載されているすべての方法は、バージニア工科大学の施設動物ケアと使用委員会によって承認されました。予定された生検の1日前に、動物、特に乳房を洗浄してスクラブし、肥料および汚れた材料を除去する。動物の健康、体調、行動を評価します。健康な牛のみを使用してください。牛を完全に搾乳する。動物をスクイーズシュートに移し、理想的には搾乳から2時間以内に、腺でのミルクの存在を最小限に抑えます。動物をヘッドゲートで拘束する。後方および前方の動きを防ぐために、牛の頭にロープホルターを置きます。動物の頭を片側に引っ張り、クイックリリースノットを使用してロープをスクイーズシュートに結んで頭を所定の位置に保持します。70%イソプロピルアルコール綿棒で注射領域をきれいにし、生検の15〜20分前に頸静脈を介して、体重1キログラム当たり1.1〜2.2ミリグラムのフルニシンメグルミンを静脈内に投与する。頸静脈を見つけます。頸部溝の基部に圧力を加えて頸静脈を上げる。シリンジに泡がないことを確認します。上げられた頸静脈に針を挿入し、0.5ミリリットルの血液を注射器に2回引き込み、内容物と混ぜます。注射器に血液が見つからない場合は、針を移動します。針が静脈に存在する場合は、内容物を注入します。針をそっと取り出し、注射部位に優しい圧力でガーゼを塗布し、出血を防ぎます。シラジン塩酸塩を静脈内に投与し、生検の約5〜10分前に尾骨血管の体重1キログラム当たり0.01〜0.05ミリグラムを投与し、沈着の確立に十分な時間を確保する。尾を上げ、70%イソプロピルアルコール綿棒で注射の領域をきれいにします。シリンジに泡がないことを確認します。針を尾血管に挿入し、0.2ミリリットルの血液を注射器に引き込み、内容物と混ぜて針が容器に入るようにします。針が常駐している場合は、注射器の内容物を注入します。針をそっと取り出します。注射部位に穏やかな圧力でガーゼを適用します。トラゾリンのようなアルファ2の逆転を手元に持つことは本当に重要であり、これは乳牛がキシラジンの影響に敏感であり、キシラジンの過剰摂取は肺水腫を引き起こす可能性があり、乳牛にとって致命的である可能性があるため、牛に過剰沈下の兆候を見守り、適切な量のトラゾリンが与えられる可能性があるためです。私たちは、私たちの牛が手順の間に立つことを望んでいます。あまりにも多くのキシラジンは、彼らが座って引き起こす可能性があります。助手は、手順の尾を縛って、通常、結合組織の収集を最小限に抑え、腺水槽への浸透を避けるために、上部領域で、乳房上の生検部位を選択する。生検中にこれらの血管を避けるために、皮膚を観察し、特別な注意を払って触診し、皮下の大きな血管を特定します。生検部位の周りの15%15センチメートルの正方形の領域から毛髪をクリップし、ポビドンヨウ素、0.75%利用可能なヨウ素、またはクロルヘキシジングルコン酸スクラブで生検領域を準備する。70%イソプロピルアルコールを少なくとも3回交互に取り除き、目に見える破片をすべて取り除きます。無菌スクラブ溶液とイソプロピルアルコールを円形に塗布し、裏返しのアプローチを使用します。消毒スクラブ溶液が皮膚に少なくとも5分間接触していることを確認してください。18G針をセットした蝶の注入を使用して、切開部位で皮下2%のリドカイン塩酸塩の6ミリリットルを沈着し、ラインブロックを作成します。より深い組織に浸透しないでください。局所麻酔薬を3〜5分間拡散させ、切開前にスクラブ溶液とアルコールの別の繰り返しを行う。待っている間に、生検器具を準備する。鎮痛を提供するという点でやりたいことは、皮膚の感覚を落とす。なぜなら、皮膚や皮下組織に対する神経の内在が増え、気圧ではストレッチ受容体の話しかなく、皮膚や皮下組織と同じ外科的痛みを感じないというからです。実際、局所麻酔薬をパンキマに通すことになってしまうと、処置中に出血するリスクが高まる可能性があります。生検ツールを扱う際や切開に無菌技術を使用してください。目に見える汚染をすべて取り除き、無菌の外科用手袋を適用するために手を洗います。手術器具を使用順に無菌領域に配置します。数10メス、滅菌ガーゼを持ち、ホメオスタシス用の生検器具と無菌タオルを組み立てます。手順1、コア生検器具。外科用手袋を使用してコア生検器具を組み立てます。7つの無菌部分を無菌ドレープに置きます。ピース2のドッキングシステムにブレードを挿入します。ピース 2 の上に 3 個を挿入し、ドッキング ステーションが揃うようにします。ブレードの最後の端をピース4のドッキングシステムに取り入れます。4個を前方に押し出し、ピース4がピース3の隣にあるかどうかを観察します。デバイスにピース5を挿入します。ドッキング ステーションが揃っていることを確認します。ピース2の上部にピース6を挿入します。ドッキング ステーションが揃っていることを確認します。ドッキングステーションにロックネジを差し込みます。ロックねじを覆うために、ピース3を前方に押し出します。工具を起動し、4個前に押し出し、刃を工具の外側に観察します。4個戻してブレードをツールに引き込みます。牛が十分に鎮静され、生検部位が十分に麻酔されていることを確認し、反応を確実にしないように皮膚をつまむ。数10メスを使用して、皮膚および皮下組織を通して2〜3センチメートルの垂直切開を近位から遠位にします。無菌技術を使用してコードレスドリルに生検器具を取り付けます。バイオプシーツールにドリルを配置し、工具がドリルにしっかりと取り付けられているかどうかを確認します。すべての手順の間に個々の尾を高めることによって十分な拘束を保障する。時計回りの回転と低速を使用してドリルをオンにします。7.5センチメートル前後の生検ツール全体を切開部を通して乳房に進めます。ドリルをオフにし、手動でツールの4を拡張し、時計回りの回転と低速を使用してドリルをオンにし、乳房から組織コアを含む器具を取り外します。無菌タオルを使用して傷口に20分以上強い圧力をかける。カニューレを組織に挿入します。この部分を前に押してツールをアクティブにします。時計回り回転を遅くして回転します。組織サンプルはカニューレの内部に入るようになりました。ピンセットを使用して生検ツールから組織を取り除きます。サンプルを1つのXリン酸緩衝生理食塩液に入れ、組織の量を評価します。生検後10分ごとに牛のバイタルサインを少なくとも30分間服用してください。生検部位への圧力の20分後に出血がないか確認してください。血液の滴がある場合は、さらに5〜10分間圧力をかけ続けます。すべての出血が止まった後、5ミリメートル間隔でステンレス製のステープルを使用して切開を閉じます。生検領域にエアロゾル包帯を塗布する。処置後50分間動物を観察する。手順2、針生検器具。デバイスの製造元の指示に従います。滅菌技術を使用してパッケージから生検針を取り除きます。損傷が見られた場合は、針を捨てます。針をデバイスに取り付けます。カバーを閉じて、デバイスをコック。牛が十分に鎮静され、生検部位が十分に麻酔されていることを確認し、反応を確実にしないように皮膚をつまむ。10個のメスを使用して、皮膚および皮下組織を1〜2センチメートル垂直に切開します。生検針を皮膚から約10〜13センチメートルの切開部位に挿入します。生検針装置を活性化して組織を収集します。乳房から針を取り出します。少なくとも20分間、滅菌タオルを使用して傷口に即時強い圧力を加えます。針から組織を取り出した後、切開を閉じるには先に説明した手順に従う。全体のプロシージャは、動物ごとに、終了するのに約45分かかります。血栓は、生検された四半期から取り除く必要があります。また、可能であれば、牛乳の収量と食物摂取量を観察する必要があります。常に、処置の前、中、および後に動物の健康と幸福を確保する。動物に投与されたすべての薬物を文書化する。生検後7~10日間、牛乳中の血液の存在を確認します。その後の搾乳時に生検四半期から血栓を手で取り除き、完全なミルク除去が起こることを確認する。ミルクの収量を観察し、可能であれば、外科的ステープルが取り除かれるまで、個々の毎日の飼料摂取量を観察する。手術用ステープルが取り除かれるまで、体温、呼吸数と心拍数、および態度について1日2回動物を監視します。生検部位の腫脹、圧痛、および外科的ステープルが取り除かれるまで排液の兆候がないか、1日2回確認してください。これらが観察された場合は、獣医師に相談してください。治癒率に応じて、生検の10〜14日後に切開部位からステープルを取り除く。局所感染や全身感染の兆候が見られる場合は、獣医師に相談してください。だから、生検が取られるとすぐに、血液とその組織への栄養素と酸素の供給を中断したので、その組織コアを取り除き、何らかの形で組織活動を止めるのに非常に速くなければ、実験室で後で測定できる濃度は、生検時にその動物で何が起こっていたのかを本当に反映していないかもしれません。通常、我々は急速に組織を除去し、その活性を維持しようとする液体窒素でそれを凍結します。もう一つは、その組織で行うことができます, これは実際に私たちが収集した組織で行ったことです, 培養システム内のその組織に存在する細胞を単離し、成長することができます.私たちの場合、その組織内にある上皮細胞に興味を持っていますが、それらは実際に牛乳成分を合成して分泌する細胞であるため、それらの組織片の細胞は培養中に配置され、実際にはまだ現在も成長しています。動物は、処置後10日間1日2回観察した。処置中または術後期間に合併症は起こらず、牛の重要なパラメータは通常の制限内に残った。線形モデルは、生検の10日前に、動物が1日あたり23.35キログラムの牛乳を生産したことを示しています。動物は生検の10日前から10日後までの牛乳収量に有意な変化を示さなかった。牛の乳腺生検は、動物が短い回復時間を持つことを可能にする、最小限の侵襲的な手順です。したがって、この生検手順は、動物に対して繰り返し対策を講じる可能性のある多くの栄養試験やその他の試験で使用できるため、例えば、4つの異なる栄養治療を伴う4つの期間がある場合、各期間の終わりにこれらの牛を4回簡単に生検することができ、各期間の間におそらく1週間の休息時間を可能にします。動物が正常な生産に戻ることを保証する。

Research

JoVE Journal

Biology

Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation

マウス乳腺上皮細胞は乳腺刺激分化の過程でMammospheresを形成し、

A phenotypic measure commonly used to determine the degree of lactogenic differentiation in mouse mammary epithelial cell cultures is the formation of ...

Dendra2 Photoswitching through the Mammary Imaging Window

乳腺イメージングの窓からDendra2 Photoswitching

In the last decade, intravital microscopy of breast tumors in mice and rats at single-cell resolution1-4  has resulted in important insights into ...

Mammary Epithelial Transplant Procedure

乳腺上皮移植の手順

This article describes and compares the fat pad clearance procedure developed by DeOme KB et al.1 and the sparing procedure developed by Brill B et al.2, ...

Changes in Mammary Gland Morphology and Breast Cancer Risk in Rats

ラットにおける乳腺の形態と乳癌リスクの変化

Studies in rodent models of breast cancer show that exposures to dietary/hormonal factors during the in utero and pubertal periods, when the mammary gland ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

マウスモデルにおける乳腺の発達と機能の評価

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Aseptic Laboratory Techniques: Plating Methods

無菌実験技術：めっき法

Microorganisms are present on all inanimate surfaces creating ubiquitous sources of possible contamination in the laboratory. Experimental success relies ...

Intraductal Injection for Localized Drug Delivery to the Mouse Mammary Gland

マウス乳腺に局在薬物送達のための管内注入

Herein we describe a protocol to deliver various reagents to the mouse mammary gland via intraductal injections. Localized drug delivery and knock-down of ...

Manipulating the Murine Lacrimal Gland

マウス涙腺を操作する

The lacrimal gland (LG) secretes aqueous tears necessary for maintaining the structure and function of the cornea, a transparent tissue essential for ...

Indirect Immunofluorescence on Frozen Sections of Mouse Mammary Gland

マウス乳腺の凍結切片の間接免疫

Indirect immunofluorescence is used to detect and locate proteins of interest in a tissue. The protocol presented here describes a complete and simple ...

Isolation of Intact, Whole Mouse Mammary Glands for Analysis of Extracellular Matrix Expression and Gland Morphology

そのままに、全体のマウス乳腺の腺の形態と細胞外マトリックス式の分析のための分離

The goal of this procedure was to harvest the #4 abdominal mammary glands from female nulliparous mice in order to assess ECM expression and ductal ...