Name: photobleaching enables super-resolution imaging of the ftsz ring in the cyanobacterium prochlorococcus
Uploaded: 2018-11-06T15:00:00
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Die Autoren danken für ihre technische Unterstützung und kommentiert das Manuskript Daiying Xu. Diese Studie stützt sich auf Zuschüsse aus der National Natural Science Foundation of China (Projektnummer 41476147) und der Forschung gewährt Rat von der Hong Kong Special Administrative Region, China (Projekt-Nummern 689813 und 16103414).

1. Probieren Sie Vorbereitung und Fixierung
<ol><li>1 mL axenic Prochlorococcus MED4 bis 5 mL des Meerwasser-basierte Pro99 mittlere12zu impfen. Wachsen Sie Prochlorococcus Kulturen bei 23 ° C unter dem Licht mit einer Intensität von 35 µmol Photonen/m2s. fünf Tage später, sammeln Sie 1 mL der Kultur in einer 1,5-mL-Tube. Hinweis: Fünf Tage nach der Inokulation, Prochlorococcus MED4 erreichen die späten Log-Phase mit etwa 108 Zellen/mL, ...

<ol>
	<li>Huang, B., Babcock, H., Zhuang, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breaking+the+diffraction+barrier:+Super-resolution+imaging+of+cells.">Breaking the diffraction barrier: Super-resolution imaging of cells.</a> Cell. 143 (7), 1047-1058 (2010).</li><li>Toomre, D., Bewersdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+New+Wave+of+Cellular+Imaging.">A New Wave of Cellular Imaging.</a> Annual Review of Cell and Developmental Biology. 26 (1), 285-314 (2010).</li><li>Rust, M. 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In diesem Protokoll beschrieben wir ein Verfahren um die Autofluoreszenz des Cyanobacterium Prochlorococcus (Abbildung 3) deutlich zu reduzieren und dann Immunostain der Proteine in den Zellen, die ermöglicht, Sturm um die 3-d-FtsZ studieren nutzen Ring-Morphologien in Prochlorococcus (Abbildung 4). Dieses Protokoll könnte für Super-Resolution Imaging in anderen photosynthetischen Organismen verabschiedet werden.
...

Super-Resolution Microscopies können brechen die Beugungsgrenze des Lichts und Bilder innerhalb Sub Beugung Auflösungen (< 200 nm). Sie haben in vielen Organismen verbreitet, um Protein-Lokalisierung und subzelluläre Strukturen zu studieren. Großen Höchstauflösung Mikroskopieverfahren umfassen strukturierte Beleuchtung Mikroskopie (SIM), stimulierte Emission Depletion Mikroskopie (STED), Sturm und photoaktiviert Lokalisierung Mikroskopie (PALM). Die Mechanismen und Anwendungen diese Super-Resolution Mikroskope wurden überprüft an anderer Stelle1,2.
Sturm erreichen eine Auflösung bis zu 10 nm durch räumliche Trennung3,4. Für Sturm nur ein Molekül in einer Beugung begrenzte Region ("on") aktiviert ist und der Rest der Moleküle sind inaktivierte ("off") gehalten. Durch eine Anhäufung der schnellen ein- und - Ausschalten einzelner Moleküle kann ein "Beugung-unlimited" Bild generierten3sein. Inzwischen sind viele Arten von organischen Farbstoffen und fluoreszierende Proteine anwendbar im Sturm, so dass ein einfaches Upgrade von regelmäßigen Fluoreszenzmikroskopie hochauflösender Mikroskopie5,6.
Sturm ist nicht weit in den photosynthetischen Zellen, wie z. B. Cyanobakterien, Algen, angewendet und pflanzlichen Zellen mit Chloroplasten7,8, die aufgrund der Tatsache, dass Sturm ist erfordert hohe Laserintensität auf Laufwerk Photoswitching. Hochintensive Laser ungünstig reizt stark Autofluoreszenz Hintergrund in photosynthetischen Zellen und stört die Einzelmolekül-Lokalisierung in der Sturm-Bildgebung. Um mit Sturm der subzellulären Strukturen oder Protein-Interaktionen in photosynthetischen Zellen untersuchen, entwickelten wir ein Immunofluoreszenz-Protokoll, um den Hintergrund Autofluoreszenz Signale9zu stillen. In eine Routine immunofluorescent Färbeverfahren sind Exemplare weißes Licht von hoher Intensität während der Blockierungsschritt ausgesetzt, die die Autofluoreszenz des photosynthetischen Zellen zu den Anforderungen für Sturm senkt. So, dieses Protokoll macht es möglich, pigmentierte Organismen mit Sturm zu untersuchen.
Hier beschreiben wir das Protokoll Sturm zu verwenden, um die FtsZ Ring-Organisation in der einzelligen Picocyanobacterium ProchlorococcusBild. FtsZ ist ein hoch konservierte Tubulin-ähnliche Zellskelett Protein die polymerisiert um eine Ringstruktur (Z-Ring) um den Umfang einer Zelle10 zu bilden und ist wichtig für die Zellteilung11. Erhalten Prochlorococcus Zellen sind die ersten Photobleached zur Verringerung der Autofluorescent Hintergrund und Immunostained mit einem primären Anti-FtsZ Antikörper, und dann eine Sekundärantikörper Anti-Kaninchen-IgG (H + L) ist mit einem Fluorophor konjugiert (z.B. , Alexa Fluor 750). Schließlich wird Sturm verwendet, um die detaillierte FtsZ Ring Organisationen in Prochlorococcus in verschiedenen Zellzyklus Phasen zu beobachten.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Polystyrene particles</td>
			<td>Spherotech</td>
			<td>PP-20-10</td>
			<td>2.0-2.4 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Marienfeld</td>
			<td>0111580</td>
			<td>18 mm &#8709;, Thickness No. 1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Scharlau</td>
			<td>ET00021000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly-L-lysine hydrobromide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9155</td>
			<td>mol wt 70,000-150,000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde solution, 50%</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>340855</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3813</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA Disodium Salt, 2-hydrate</td>
			<td>Gold biotechnology</td>
			<td>E-210-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trizma base</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T1503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lysozyme</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L6876</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-Anabaena FtsZ antibody</td>
			<td>Agrisera</td>
			<td>AS07217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Cross-Adsorbed Secondary Antibody</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-21039</td>
			<td>conjugated with Alexa Fluor 750</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Glucose Anhydrous</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>D16-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic Acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methyl Viologen</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>856177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyclooctatetraene</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>138924</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>tris(2-carboxyethyl)phosphine (TCEP)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>646547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose Oxidase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G2133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Catalase</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C9322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XD-300 Xenon light source</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>250 W</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>STORM microscope</td>
			<td>NBI</td>
			<td>SRiS microscope</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rohdea</td>
			<td>NBI</td>
			<td>SRiS 3.0</td>
			<td>software for imaging acquisition</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna</td>
			<td>NBI</td>
			<td>SRiS 3.0</td>
			<td>software for drifting correction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QuickPALM</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://code.google.com/archive/p/quickpalm/wikis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3D Viewer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>http://132.187.25.13/ij3d/?page=Home&#38;category=Home</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

photobleaching enables super-resolution imaging of the ftsz ring in the cyanobacterium prochlorococcus

Höchstauflösung Mikroskopie hat am meisten benutzt, um Protein-Interaktionen und subzelluläre Strukturen in vielen Organismen zu studieren. In photosynthetischen Organismen ist die laterale Auflösung des Super-Auflösung jedoch nur ~ 100 nm. Die geringe Auflösung ist vor allem aufgrund des hohen Autofluoreszenz Hintergrundes der photosynthetischen Zellen verursacht durch hochintensive Laser, die für die Super-Resolution Imaging, wie stochastische optische Rekonstruktion Mikroskopie (Sturm) erforderlich sind. Hier beschreiben wir eine Immunofluoreszenz-gestützte Sturm Methode, die entwickelt wurde vor kurzem für die marine Picocyanobacterium Prochlorococcusimaging. Nach Immunofluoreszenz, die Autofluoreszenz Prochlorococcus wird effektiv reduziert, sodass dieser Sturm mit einer lateralen Auflösung von ~ 10 erfolgen kann nm. Mit dieser Methode wir die Organisation in Vivo dreidimensionale (3D), der das Protein FtsZ erwerben und vier verschiedene FtsZ Ring Morphologien während des Zellzyklus Prochlorococcuscharakterisieren. Die Methode, die wir hier beschreiben könnte für die Super-Resolution Imaging anderer photosynthetischen Organismen verabschiedet werden.

Sturm erreicht Höchstauflösung Bildgebung durch Aktivierung einzelner photoschaltbare Fluorophore stochastisch. Die Position des jeden Fluorophor aufgezeichnet und ein super-Resolution-Bild wird dann basierend auf diesen Standorten4konstruiert. Daher ist die Genauigkeit des Standortes Fluorophor wichtig für die Höchstauflösung Bildrekonstruktion. Die Absorptionsspektren von Prochlorococcus peak bei 447 nm und 680 nm,und Prochlorococcus hat ei...

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Photobleaching Enables Super-resolution Imaging of the FtsZ Ring in the Cyanobacterium Prochlorococcus

Hier beschreiben wir eine Immunofluoreszenz-Methode, um die Autofluoreszenz der Cyanobakterien zu reduzieren. Nach Immunofluoreszenz wird stochastische optische Rekonstruktion Mikroskopie verwendet, um dreidimensionale Höchstauflösung Bilder der Cyanobakterien FtsZ Ring zu erhalten.

Immunofluoreszenz ermöglicht Höchstauflösung Bildgebung des FtsZ Ring in Cyanobacterium Prochlorococcus

Super-resolution microscopy has been widely used to study protein interactions and subcellular structures in many organisms. In photosynthetic organisms, ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen zur Proteinlokalisierung und der Dynamik in photosynthetischen Organismen zu beantworten. Durch die Kombination der Photobleichmethode mit dem hochauflösenden Mikroskop sind wir in der Lage, die Proteindynamik von photosynthetischen Organismen in einem bemerkenswerten Detail zu erkennen. Diese Methode gibt nicht nur Einblick in die Proteindynamik von Prochlorococcus.Es kann auch auf viele andere Organismen angewendet werden, die Radio-Re-Dop-Sing und Bacteriochlorophyll enthalten. Demonstriert wird dieses Verfahren von Yanxin Liu, einem Doktoranden aus meinem Labor. Zunächst fügen Sie fünf Milliliter Pro99-Medium auf Seewasserbasis zu einem Kulturkolben hinzu und impfen Sie ihn mit einem Milliliter Prochlorococcus MED4.Wachsen Sie die Prochlorococcus bei 23 Grad Celsius unter einem Licht mit einer Intensität von 35 Mikromol-Photonen pro Quadratmeter. Nach fünf Tagen einen Milliliter der Kultur in eine 1,5-Milliliter-Röhre sammeln. Fügen Sie 100 Mikroliter frisch zubereitetes Formaldehyd in die Röhre, um die Kultur zu fixieren.Inkubieren Sie im Dunkeln bei Raumtemperatur für 20 Minuten. Drehen Sie dann die Probe bei 13, 500 mal G für eine Minute. Entfernen Sie den Überstand und setzen Sie die Zellen in 100 Mikroliter Pro99 Medium wieder aus.Bewahren Sie die Probe bei vier Grad Celsius im Dunkeln auf, bis sie bereit ist, eine Immunfärbung durchzuführen. Zuerst wirbeln die Durchstechflasche mit Polystyrolperlen. Mit 50% Ethanol eine Ein-zu-20.000 Verdünnung als Arbeitsschlämme zubereiten.Schalten Sie die Kochplatte ein und stellen Sie die Temperatur auf 120 Grad Celsius ein. Als nächstes legen Sie die Deckel auf die Kochplatte. 100 Mikroliter der Arbeitsschlämme auf jeden Deckelschlupf laden und 10 Minuten lang die Deckel auf die Kochplatte inkubieren.Dann die Abdeckungen vorsichtig auf Petri-Schalen Perlenseite nach oben für die Lagerung bei Raumtemperatur übertragen. Wenn Sie bereit sind, die Abdeckungen zu beschichten, rufen Sie eine ab, um sicherzustellen, dass sie perlenseitig nach oben ist. Fügen Sie 100 Mikroliter einer Poly-L-Lysin-Lösung mit einem Milligramm pro Milliliter in die Mitte des Deckels und lassen Sie ihn 30 Minuten bei Raumtemperatur sitzen.Danach verwenden Sie eine Pipette, um unbefestigtes Poly-L-Lysin sorgfältig zu saugen und in ein 1,5-Milliliter-Rohr zu übertragen. Bewahren Sie dieses Poly-L-Lysin bei vier Grad Celsius für die spätere Verwendung auf. Spülen Sie den Deckelrutsch mit 10 Milliliterultralitern ultragefiltertem Wasser in einer 60-Millimeter-Petrischale und trocknen Sie ihn dann kurz mit einem Papiertuch.Übertragen Sie den beschichteten Deckel auf eine neue Petrischale mit Parafilm an der Unterseite, die als Färbeschale verwendet wird. 100 Mikroliter der festen Probe auf den Deckelschlupf laden und 30 Minuten sitzen lassen, um eine Zellbefestigung zu ermöglichen. Als nächstes verwenden Sie ein Papiertuch, um die restliche Lösung zu absorbieren und dann den Deckelinin in eine 12-Well-Platte zum Waschen auf einen Brunnen zu übertragen.Fügen Sie einen Milliliter PBS-Puffer in den Brunnen, um den Deckelzuschlag zu waschen. Entfernen Sie dann die PBS und fügen Sie einen Milliliter frische PBS, um den Deckel ein zweites Mal zu waschen. Verwenden Sie eine Pipette, um die PBS zu entfernen und ersetzen Sie sie durch einen Milliliter frisch zubereiteten Permeabilisationspuffer.Die Waschschale bei 37 Grad Celsius 20 Minuten bebrüten. Entfernen Sie dann den Permeabilisierungspuffer. Beginnen Sie den Waschvorgang, indem Sie einen Milliliter frischen PBS-Puffer hinzufügen.Legen Sie die Waschschale auf einen Shaker, um die Schale für fünf Minuten sanft zu rühren. Entfernen Sie danach die PBS und wiederholen Sie den Waschvorgang dreimal. Den gewaschenen Deckelaufschub in die Färbeschale geben.Fügen Sie 50 Mikroliter Sperrpuffer oben auf dem Coverslip hinzu. Legen Sie die gesamte Färbeschale auf Eis und bewegen Sie sie dann mindestens 60 Minuten unter die Xenon-Lichtquelle zum Photobleichen. Nach dem Photobleichen und Blockieren verwenden Sie den Rand eines Papiertuchs, um den Sperrpuffer zu entfernen.Verdünnen Sie zunächst einen Mikroliter Anti-FtsZ-Antikörper in 99 Mikroliter Blockierpuffer. 50 Mikroliter des verdünnten Primärantikörpers auf den Deckelschlupf legen und 30 Minuten lang bei Raumtemperatur inkubieren. Übertragen Sie den Deckelaufschlag auf einen Brunnen der Waschschüssel.Um mit dem Waschen zu beginnen, fügen Sie einen Milliliter PBS hinzu. Dann die Waschschale auf einen Shaker geben und fünf Minuten lang vorsichtig schütteln. Entfernen Sie die PBS und wiederholen Sie den gesamten Waschvorgang dreimal.Als nächstes übertragen Sie den Deckelaufschub auf die Färbeschale. 50 Mikroliter des verdünnten Sekundärantikörpers auf den Deckelschlupf legen und 30 Minuten lang im Dunkeln und bei Raumtemperatur bebrüten. Den Deckelrutsch zurück auf die Waschschüssel geben.Um mit dem Waschen zu beginnen, fügen Sie einen Milliliter PBS hinzu. Wickeln Sie die Waschschale in Aluminiumfolie, um sie vor Licht zu schützen. Übertragen Sie die Platte auf den Shaker und schütteln Sie sie vorsichtig für fünf Minuten.Entfernen Sie die PBS und wiederholen Sie den gesamten Waschvorgang dreimal. Bereiten Sie unmittelbar vor der STORM-Bildgebung einen Milliliter Bildgebungspuffer vor, wie im Textprotokoll beschrieben. Legen Sie den Deckelinlegin in die Ladekammer ein.Fügen Sie den frisch vorbereiteten bildgebenden Puffer hinzu, der sanft ist, um das Abwaschen der cyanobakteriellen Zellen zu vermeiden. Legen Sie anschließend einen rechteckigen Deckelschlupf auf den Bildgebungspuffer, um zu verhindern, dass er mit dem Sauerstoff in der Luft reagiert. Schalten Sie die Kamera, das LED-Licht und den Laser ein, und öffnen Sie die STORM-Software.Fügen Sie einen halben Tropfen Tauchöl auf die Linse. Laden Sie die Kammer, um sicherzustellen, dass die Objektivlinse mit dem Deckelinin in Kontakt kommt. Und untersuchen Sie das Signal mit einem 750-Nanometer-Laser.Identifizieren Sie einen Stichprobenbereich, der sowohl Zellen als auch Treuhandmarker enthält. Starten Sie dann die Software für die Probendriftkorrektur. Erfassen Sie ein breit gelegtes Bild als Referenz, wobei die Kameraelektronenmultiplikation bei 300 und einer Belichtungszeit von 30 Millisekunden liegt.Erhöhen Sie die Anregungslaserintensität von 750 Nanometern auf ca. 4,5 Kilowatt pro Quadratzentimeter. Sobald die Fluorophore in ein spärliches Blinkenmuster übergegangen sind, erhalten Sie ein Superauflösungsbild, indem Sie 10.000 Bilder bei 33 Hertz sammeln. Rekonstruieren Sie dann die Bilder mit Superauflösung aus den Rohdaten, wie im Textprotokoll beschrieben.In dieser Studie wird STORM verwendet, um eine hochauflösende Bildgebung zu erreichen, indem einzelne fotoschaltbare Fluorophore stochastisch aktiviert werden. Die Position jedes Fluorophors wird aufgezeichnet, und auf der Grundlage dieser Standorte wird dann ein Bild mit super Auflösung erstellt. Während die Absorptionsspektren von Prochlorococcus bei 447 und 680 Nanometern liegen und eine minimale Absorption von mehr als 700 Nanometern aufweisen, emittieren Prochlorococcus MED4-Zellen immer noch eine hohe Autofluoreszenz, wenn sie einer extrem hohen Intensität des 750-Nanometer-Lasers ausgesetzt sind, die für die STORM-Bildgebung erforderlich ist.Nach der Hier beschriebenen Photobleichmethode für 30 Minuten nimmt die Autofluoreszenz der Zellen ab, obwohl mehrere Zellen mit Autofluoreszenz noch nachgewiesen werden. Die Dehnung der Photobleiche auf 60 Minuten führt dazu, dass die Mehrheit der Zellen ihre Autofluoreszenz verliert. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass die entwickelte Photobleichmethode in der Lage ist, die Autofluoreszenz photosynthetischer Organismen stark zu reduzieren.Nach dem Photobleichen wird STORM verwendet, um das Zellteilungsprotein FtsZ in den Zellen zu visualisieren. Mit STORM wird eine detaillierte Morphologie des FtsZ-Rings aufgedeckt. Durch Drehen der 3D STORM-Bilder wurden vier verschiedene Arten von Morphologien identifiziert, Cluster, ein unvollständiger Ring, ein kompletter Ring und Doppelringe.Es ist wichtig, sich daran zu erinnern, dass die Lichtintensität und Dauer der Photobleichmittel für verschiedene Organismen unterschiedlich sein kann. Nach ihrer Entwicklung ebnet diese Methode den Weg für Forscher, die die Proteinorganisation und die potenzielle Funktion in photosynthetischen Zellen im Detail untersuchen wollen.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Photobleaching Enables Super-resolution Imaging of the FtsZ Ring in the Cyanobacterium Prochlorococcus

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

In-vivo-Imaging von transgenen Leishmania Parasiten in einer Live-Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

Forschung

Immunologie und Infektion

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Mit Bioluminescent Imaging, um Synergie von Untersuchen Streptococcus pneumoniae Und Influenza A Virus in Infant Mäuse

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Real-time Live Imaging of T-cell Signaling Complex Formation

Echtzeit-Live-Imaging von T-Zell-Signaling Complex Formation

Protection against infectious diseases is mediated by the immune system 1,2. T lymphocytes are the master coordinators of the immune system, regulating ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Überwachung dendritische Zellen mit Migration<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Magnetic Resonance Imaging

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

Super-resolution Imaging of the Natural Killer Cell Immunological Synapse on a Glass-supported Planar Lipid Bilayer

Super-Resolution Imaging der natürlichen Killerzell Immunologische Synapse auf einem Glas-gestützten Planar Lipiddoppelschicht

The glass-supported planar lipid bilayer system has been utilized in a variety of disciplines. One of the most useful applications of this technique has ...

Imaging CD4 T Cell Interstitial Migration in the Inflamed Dermis

Imaging CD4 T-Zell-Interstitial Migration in den entzündeten Dermis

The ability of CD4 T cells to carry out effector functions is dependent upon the rapid and efficient migration of these cells in inflamed peripheral ...

Qualitative and Quantitative Analysis of the Immune Synapse in the Human System Using Imaging Flow Cytometry

Qualitative und Quantitative Analyse der immun Synapse im menschlichen System mit Hilfe von Imaging Durchflusszytometrie

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins ...

Highly Multiplexed, Super-resolution Imaging of T Cells Using madSTORM

Hochmultiplexed, Super-Auflösung Bildgebung von T-Zellen mit madSTORM

Imaging heterogeneous cellular structures using single molecule localization microscopy has been hindered by inadequate localization precision and ...

High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells

Hochdurchsatz-Messung der Plasmamembran Wiederverschließen Effizienz in Säugerzellen

In their physiological environment, mammalian cells are often subjected to mechanical and biochemical stresses that result in plasma membrane damage. In ...

Evaluation of Host-Pathogen Responses and Vaccine Efficacy in Mice

Bewertung der Wirt-Pathogen-Antworten und Wirksamkeit des Impfstoffes bei Mäusen

Vaccines are a 20th century medical marvel. They have dramatically reduced the morbidity and mortality caused by infectious diseases and contributed to a ...