Name: orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad
Uploaded: 2019-01-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad at JoVE.com

الكتاب أود أن أشكر مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية (المنحة رقم 81873111، 81673924، 81774039، 81503517)، مؤسسة العلوم الطبيعية بكين (المنحة رقم 7172095، 7162084، 7162083)، ومؤسسة شيا شو في مستشفى بكين من الطب الصيني التقليدي (منح لا، xx201701). ونحن نشكر الأستاذ ليو تشن تشانغ، من مركز الأبحاث التجريبية، الصين أكاديمية العلوم الطبية الصينية، لصور طرحه.

التجارب على الحيوانات وأجريت وفقا للحكم والتوصية العامة للتشريع إدارة الحيوانات التجريبية الصيني ووافقت عليها مؤسسة رعاية الحيوان واستخدام اللجنة للعاصمة الطبية جامعة (Ref لا. AEEI-2014-052). واستخدمت النساء بالب/ج الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين 6 إلى 8 أسابيع.
1. إعداد الخلايا وا?...

<ol>
	<li>Torre, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics.">Global cancer statistics.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).</li><li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies.">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism &amp; Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li><li>Wagner, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+breast+cancer:+quo+vadis,+animal+modeling.">Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling.</a> Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).</li><li>Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+breast+cancer+metastasis+to+bone:+opportunities+and+limitations.">Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations.</a> Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).</li><li>Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research.">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumour+xenografts+for+breast+cancer+drug+discovery.">Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery.</a> Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).</li><li>Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+using+genetically+engineered+mice.">Modeling cancer using genetically engineered mice.</a> Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).</li><li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer.">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+contributions+to+the+carcinogenic+process.">Stromal contributions to the carcinogenic process.</a> Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).</li><li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+metastasis.">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Yano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-targeting+adenovirus+OBP-401+inhibits+primary+and+metastatic+tumor+growth+of+triple-negative+breast+cancer+in+orthotopic+nude-mouse+models.">Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models.</a> Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).</li><li>Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+less+invasive+method+for+orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mouse+mammary+gland.">A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland.</a> Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+murine+breast+tumor+model+by+subcutaneous+or+orthotopic+implantation.">Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation.</a> Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gubenyiliu+II+Inhibits+Breast+Tumor+Growth+and+Metastasis+Associated+with+Decreased+Heparanase+Expression+and+Phosphorylation+of+ERK+and+AKT+Pathways.">Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways.</a> Molecules. 22 (5), (2017).</li><li>Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppressive+effects+of+a+proton+beam+on+tumor+growth+and+lung+metastasis+through+the+inhibition+of+metastatic+gene+expression+in+4T1+orthotopic+breast+cancer+model.">Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model.</a> International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).</li><li>Kalra, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+the+use+of+a+luciferase+labeled+breast+cancer+cell+line,+MDA435LCC6,+as+a+means+to+monitor+tumor+progression+and+to+assess+the+therapeutic+activity+of+an+established+anticancer+drug,+docetaxel+(Dt)+alone+or+in+combination+with+the+ILK+inhibitor,+QLT0267.">Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).</li></ol>

الخلايا المستخدمة في هذه الدراسة هي 4T1-luc2، خلايا سرطان الثدي السلبي الثلاثي موريني بوصفها لوسيفراس، التي أداة مفيدة للاستثمار آثار انتيتومور وأنتيميتاستاتيك للمخدرات بسبب بهم الطبيعة الغازية عالية2،19 . لوسيفيراسيس، مستقرة للخلية الجيل القادم، وتستخدم لل...

سرطان الثدي هو السبب الرئيسي لوفيات الإناث في جميع أنحاء العالم. مع أن تزايد تدريجيا، أصبح سرطان الثدي يشكل تحديا خطيرا للصحة العامة1. نماذج سرطان مورين جسور جيدة بين الدراسات السريرية والاكلينيكية، ونموذج مرض مورين تقليد جيد سيتم زيادة دقة البحوث المتعلقة بالمرض والطب.
نمو الورم الابتدائي يبدأ تقدم الأمراض الخبيثة، بينما ورم خبيث والمضاعفات هي الأسباب الرئيسية للوفاة والصفات حياة الفقراء في معظم مرضى السرطان. وتستخدم عدة نماذج مورين لتقليد علم الأمراض البشرية الثدي السرطان2،،من34. نماذج إكسينوجرافت تستخدم على نطاق واسع لدراسة السرطان لفهم الشخصيات المرضية والأدوية الشاشة لسلامة وكفاءة5،،من67. الفئران المهندسة وراثيا (GEM) يتم إنشاؤها لتقليد سرطان الثدي البشرية باستهداف بعض المسرطنة أو ورم المكثف الجينات8. جوهره لديهم خلفية بسيطة نسبيا ويرتدون الزي الرسمي لفهم دور الجينات في التقدم سرطانية؛ غير أن البيئة الاصطناعية والخلفية تقتصر على التحقيق في علم الأمراض خبيث والمتعلقة بالعلاجات9. الخلايا السرطانية البشرية، على الرغم من أن مع السمات المرضية البشرية، يمكن إلا يكون مزروع في الفئران التي تفتقر إلى المناعة، وعدم كفاية التفاعل المناعي المضيف الورم قد يؤدي إلى نتائج متحيزة10.
حيث يبدأ الورم الصلبة له تأثير مباشر على الأحرف البيولوجية والمرضية للمرض11،،من1213. نظراً للتقدم سرطانية نتيجة معقدة من التفاعلات بين الخلايا السرطانية والخلايا اللحمية وخلايا المناعة، والخلايا الملتهبة، وعوامل النمو والبروتياز، الأورام الأولية مزروع في الموقع سوف توفر رؤية أفضل وتقليد الخلايا السرطانية عملية أكثر دقة من الأورام الناجمة عن المواد الكيميائية أو حقن تحت الجلد للورم. العوامل الكيميائية المستخدمة للحث على أورام قد تكون ضارة بالبيئة والباحثين وممنوعة حتى في بعض البلدان. التقدم المرضية الحقن تحت الجلد بسبب غياب بيئة وسادة الدهون الثديية، قد تختلف مع أن السرطان الذي ينشأ في مرضى سرطان الثدي حقيقية، ويزعج من لوحة الدهون الثديية. عيوب الحقن تحت الجلد تشجيع استخدام نماذج أورثوتوبيك لدراسة نمو الورم. في البحوث السابقة، أورام MDA-ميغابايت-231 المنتشر جداً، وضعت بعد سبعة أورثوتوبيك الزرع، أشار إلى أهمية موقع حقن14. في الآونة الأخيرة، كان أورثوتوبيك زرع خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية مع جراحة عنها15،16. مع البيئة لوح الثديية ونمو الورم وهجرة إلى الأجهزة البعيدة تغطية العملية برمتها من سرطان الثدي في المواقع ذات الصلة مرضية، الأمر الذي يجعل هذا نموذج مصغر للتقدم المحرز في الأمراض التي تصيب الإنسان. ومع ذلك، بعد الجراحة، الجلد تلقائياً يحاول شفاء نفسه، التي قد تجلب المخاطر المحتملة للتدخل مع نشأة سرطان الثدي العادي والتحيز في النتائج.
وقد مقارنة بعض نماذج سرطان الثدي وأنشأنا نموذج أورثوتوبيك مينيملي للتحقيق في تأثير الأدوية المحتملة في الثدي سرطان التقدم17،18. في هذه الدراسة، بروتوكول فيديو حول كيفية أورثوتوبيكالي بحقن خلايا سرطان الثدي لوح الدهون الثديية في بسيطة، ويقدم طريقة أقل الغازية. هذا الأسلوب أورثوتوبيك الحقن بدون جراحة مفيد في نواح كثيرة. أولاً، العملية بسيطة وسريعة، حوالي 1 دقيقة للماوس. ثانيا، مع البؤر الورم الرئيسي بدءاً من المواقع حق المرضية، وهو يغطي ورمي كل عملية تطور سرطان الثدي من نمو الورم إلى ورم خبيث الأجهزة الأخرى، الذي يقدم نموذجا جيدا من حيوانات تجريبية لدراسة التفاعل بين الخلايا السرطانية وورم المكروية. وإلى جانب ذلك، يمكن أن يكون نموذجا قيماً لتقدير آثار العلاج في جميع مراحل الإصابة بسرطان الثدي. والهدف من هذا الأسلوب تقديم نموذج حيوان لتطور سرطان الثدي البشرية تقليد مجانية.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:652px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">anesthesia machine</td>
			<td style="width:235px;">Midmark Corporation, Dayton, OH, USA</td>
			<td style="width:96px;">Matrx VMS</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:149px;">In-Vivo Imaging System</td>
			<td style="width:235px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:96px;">IVIS Spectrum</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:149px;">&#160;isoflurane</td>
			<td style="width:235px;">Hebei yipin chemical reagents&#160; company</td>
			<td style="width:96px;">O21400</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:235px;">Becton,Dickinson and&#160; Company</td>
			<td style="width:96px;">A257</td>
			<td style="width:172px;">cell injection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">digital caliper</td>
			<td style="width:235px;">Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">S-H</td>
			<td style="width:172px;">volume measurement</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">tramadol</td>
			<td style="width:235px;">Mundipharma company</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">pain killer</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">D-luciferin</td>
			<td style="width:235px;">Gold Biotechnology Inc.</td>
			<td style="width:96px;">LUCK-1G</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:52px;width:149px;">The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31</td>
			<td style="width:235px;">Abcam</td>
			<td style="width:96px;">&#160;ab28364</td>
			<td style="width:172px;">used for MVD detection</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:67px;width:149px;">hematoxylin and eosin staining kit</td>
			<td style="width:235px;">&#160;Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">ZLI-9615</td>
			<td style="width:172px;">histology&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">hair removal cream</td>
			<td style="width:235px;">Veet</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">hair removal cream</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:149px;">Carbomer Eye Gel</td>
			<td style="width:235px;">Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">ophthalmic ointment</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;">sewing needle</td>
			<td style="width:235px;">Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd.&#160;</td>
			<td>17U0302J</td>
			<td style="width:172px;">suture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad

نموذج حيوان سليم أمر حاسم لفهم أفضل للأمراض. الحيوان نماذج المنشأة بطرق مختلفة (الحقن تحت الجلد، وتكثيفها، والتلاعب بالجينات، وتحريض الكواشف الكيميائية، إلخ) بمختلف الشخصيات المرضية وتلعب أدواراً هامة في التحقيق في جوانب معينة من الأمراض. على الرغم من أنه لا يوجد نموذج وحيد تماما محاكاة تطور المرض البشري برمته، نماذج المرض أجهزة أورثوتوبيك مع بيئة stromal مناسبة تلعب دوراً لا غنى عنه في فهم الأمراض وفحص للمخدرات المحتملة. في هذه المقالة، نحن تصف كيفية زرع خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية في بسيطة وأقل طريقة الغازية، وسهولة التعامل، واتبع ورم خبيث على الأجهزة البعيدة. مع ميزات السليم نمو الورم الرئيسي، وسرطان الثدي والحلمة التغيرات المرضية، وحدوث ارتفاع لورم خبيث الأجهزة الأخرى، يحاكي هذا النموذج مجانية تقدم سرطان الثدي البشرية. يمكن أن يحقق الورم الرئيسي النمو في الموقعوورم خبيث طويلة بعيدة وورم المكروية من سرطان الثدي باستخدام هذا النموذج.

بعد حقنه ناجح، واحد المجال مسطح شفاف أبيض مع الحلمة كالسطح خارج مدار مركز يمكن ملاحظتها (الشكل 1). نمو الورم الرئيسي يمكن أن يقاس بحجم الورم والورم المعيشة الخلية الإضاءة الحيوية (الشكل 2). زيادة حجم الورم والتدفق الإجمالي خلال التجربة قبل ب...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad at JoVE.com 

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad (Video) | JoVE 

هنا، نقدم بروتوكولا لزرع خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية في بسيطة وأقل طريقة الغازية، وسهل التعامل، ويمكن استخدام هذا النموذج سرطان الثدي أورثوتوبيك الماوس مع بيئة سليمة وسادة الدهون الثديية للتحقيق في مختلف جوانب السرطان.

حقن أورثوتوبيك من خلايا سرطان الثدي في لوحة الدهون الثديية في الفئران

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

يمكن أن تساعد هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجال السرطان حول كيفية دعم البيئة الدقيقة لنمو الورم أو ما إذا كان دواء معين يمكن أن يمنع تطور سرطان الثدي بشكل فعال. المزايا الرئيسية لتقنية تحريض الورم هي أنه لا توجد حاجة إلى إجراء عملية جراحية وأنها طريقة أقل الغازية التي لإنشاء سرطان الثدي في الموقع. باستخدام هذه التقنية ، تنمو الخلايا السرطانية داخل وسادة الدهون الثديية ، في بيئة الأنسجة المناسبة ، وتحاكي تطور سرطان الثدي البشري بشكل أوثق من الحقن تحت الجلد أو xenograft إلى خلايا الفئران.كي شين كاو، فنينا، وأنا، سوف نساعد غان لين تشانغ في إثبات هذا الإجراء. في اليوم السابق للعملية، يدويا كبح جماح الماوس المتلقي وتحويل الجانب بطن الحيوان تصل إلى الفراء أن يحلق حول الحلمات الرابعة. امسح الفراء بطبقة رقيقة من كريم إزالة الشعر.استخدام الماء المقطر لإزالة كريم بعد 30 إلى 60 ثانية وتجفيف الماوس مع المناشف الورقية الناعمة. في يوم العملية ، تمييع تعليق خلية سرطان الثدي إلى مرتين عشر إلى الخلايا الخامسة لكل ملليلتر من تركيز PBS ، في أنبوب microcentrifuge معقمة على الجليد. قبل كل حقنة، قم بتحميل حقنة واحدة، حقنة ملليلتر واحدة مجهزة بإبرة 45 في 16، مع 50 ميكرولترات من الخلايا لكل فأرة.وتأكيد عدم وجود استجابة لقرصة إصبع في كل مخدر. تطبيق مرهم على عيون الحيوان واستخدام ملاقط خيمة الجلد حول الحلمة الرابعة من الفأرة الأولى، لإنشاء نفق للمحاقن لمتابعة. عقد الحقنة مع شطبة تواجه صعودا وتحت الجلد تدخل الجلد في خمسة إلى 10 ملليمترات من الحلمة، وبعد النفق حتى تلميح إبرة تصل تقريبا الحلمة.استخدام ملاقط خيمة الجلد حول الحلمة الأولى يخلق نفقا للمحاقن لمتابعة. يجب إدخال الإبرة بين نصائح الملاقط وينبغي أن ترفع بدلاً من الاكتئاب في الأنسجة. قم بتحريك رأس الإبرة بعناية إلى داخل وسادة الدهون الثديية حتى تصبح القشرة تحت الحلمة، وحرر خيمة الجلد للسماح بحقن بطيء للخلايا السرطانية.عند الإدراج، قم بتحريك طرف الإبرة بعناية إلى داخل وسادة الدهون الثديية حتى تكون الممشى تحت الحلمة. وسوف تشعر بمقاومة لضمان تسليم الخلايا إلى الموقع الصحيح. عندما يتم حقن جميع الخلايا، قم بتحويل الإبرة قليلاً إلى الجانب ثم سحب الحقنة ببطء.استخدام مسحة القطن لممارسة الضغط على جرح إبرة لمدة 10 إلى 20 ثانية، لجعل هناك لا تسرب السوائل. يجب أن تظهر الحلمة المحقونة كـ كرة شفافة وبيضاء ومسطحة ، مع وجود الحلمة في المركز. لإنشاء حجم الورم، كبح جماح الجانب البطن الماوس حتى واستخدام الفرجار لقياس طول الورم وعرضه.لالتقاط الورم bioluminescence، 10 دقائق قبل التصوير حقن 150 ملليغرام لكل كيلوغرام من D-لوسيفرين في الجزء الخلفي من رقبة الماوس. والتقاط الصور الناسخة بيولوجيا من الورم الأساسي و الانبثاث تحت المعلمات المناسبة التصوير الاحتياد الحيوي. عند نقطة الوقت التجريبي المناسبة، استخدم المقصات لجني الورم من الجلد.وتطبيق الحلول المسكنة على موقع الجراحة لتخفيف الألم بعد الجراحة. ثم أغلق الجلد بالخيوط الجراحية وفقًا للبروتوكولات القياسية. السماح للحيوان بالتعافي تحت مصباح الاحترار مع مراقبة حتى الشفاء التام.استخدام مشرط لخفض الورم الأساسي إلى قطعتين متساويتين. تخزين نصف الأنسجة في 4٪ شبهformaldehyde للحماة الدموية اللاحقة وويسين تلطيخ ومناعة الكيمياء. تجميد النصف الآخر في النيتروجين السائل لغربي النشاف أو العزلة RNAi.في نقطة النهاية التجريبية المناسبة حصاد الرئتين وفقا لبروتوكولات التشريح القياسية وغسل الجهاز في برنامج تلفزيوني. ثم إصلاح الرئتين في 4٪ paraformaldehyde للتحقق من الانبثاث بواسطة الهماتوسلين وتلطيخ إيوسين. يمكن قياس نمو الورم الأساسي من خلال حجم الورم والتخمين الحيوي للخلايا السرطانية الحية ، كما هو موضح.لا يتم ملاحظة الانبثاث خلال المراحل المبكرة من التطعيم حيث لم يتم تحديد أي ورم ثانوي ، أو أن الإشارات الإنارة الحيوية القوية للورم الأساسي تعرقل اكتشاف بؤرة انبثاثية صغيرة مع إشارات ضعيفة. بعد استئصال، يمكن الكشف عن إشارة التخمة الحيوية من بؤر النقيلي للأعضاء البعيدة وتحليلها. تحليل مورفولوجيا كل من ورم الثدي الأولية وأقسام الرئة من قبل الهماتوسلين وتلطيخ إيوسين يكشف زيادة تولد الأوعية في الخلايا السرطانية تلقيح الحيوانات كما يتضح من مضادة للأقراص CD31 تلطيخ علامة microvessel.عند محاولة هذا الإجراء، من المهم أن تتذكر أن تتأكد من أن طرف الإبرة في الموقع الصحيح قبل تسليم الخلايا السرطانية. بعد هذا الإجراء, يمكن إجراء المرذاذ, مثل الموجات فوق الصوتية الحيوانية, للإجابة على أسئلة إضافية حول مكملات المثانة من الورم الأساسي في الجسم الحي. بعد تطورها ، مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال الأورام وتطوير الدواء في استكشاف العوامل الرئيسية والمسارات التي تشارك في الأورام وآليات الدواء المضاد للسرطان في نماذج المورين.لا ننسى أن العمل مع ايزوفلوران أو غيرها من التخدير الغاز يمكن أن يكون من الصعب للغاية للجرعة وأن الاحتياطات مثل استخدام قناع الكربون المنشط, ينبغي دائما أن تتخذ أثناء تنفيذ هذا الإجراء.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures (Video) | JoVE 

الاستفادة من علم الجينوم وظيفية الفرز لتحديد أهداف المخدرات رواية يحتمل في الثقافات كروي الخلية السرطانية

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer (Video) | JoVE 

والوريد البابي حقن نموذج لدراسة الكبد الانبثاث من سرطان الثدي

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish (Video) | JoVE 

السلوك الغازية من خلايا سرطان الثدي البشرية في الجنينية الزرد

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal (Video) | JoVE 

تدفق سيتوميتريك الكشف عن خلايا شبيهة بالخلايا الجذعية سرطان الثدي التي شكلت حديثا بعد عكس المبرمج

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland (Video) | JoVE 

نمذجة سرطان الثدي عن طريق حقن داخل القناة من فيروس الغدة الدرقية التعبير عن Cre في الغدة الثديية الماوس

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model (Video) | JoVE 

دراسة ثلاثية سلبية سرطان الثدي باستخدام نموذج سرطان الثدي Orthotopic

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad (Video) | JoVE 

الجرذ ماماري زرع الخلايا الظهارية في وسادة الدهون البيضاء Interscapular

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer (Video) | JoVE 

زرع العظام لأورام الثدي كنماذج ما قبل السريرية لسرطان الثدي

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells (Video) | JoVE 

نمذجة ورم خبيث في الدماغ عن طريق حقن الوريد الخلفي لخلايا سرطان الثدي الالتهابية

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research (Video) | JoVE 

ماماري الظهارية والبطانية الخلايا كرويدات كنموذج وظيفي محتمل في المختبر لأبحاث سرطان الثدي

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...