Name: orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad
Uploaded: 2019-01-20T13:00:00
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Die Autoren möchte der National Natural Science Foundation of China (Grant Nr. 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), der Beijing Natural Science Foundation (Grant Nr. 7172095, 7162084, 7162083), und Xu Xia Stiftung des Beijing Hospital of Traditionelle chinesische Medizin (gewähren, Nein, xx201701). Wir danken Prof. Chang-Zhen Liu, Experimental Research Center, China Academy of Chinese Medical Sciences für Biolumineszenz Bilder.

Tierversuche wurden im Einklang mit der Bereitstellung und allgemeine Empfehlung der chinesischen experimentelle Tier Verwaltung Gesetzgebung und durch die Einrichtung von Animal Care und Nutzung Ausschuss der Hauptstadt Medical University angenommen wurden (Ref keine. AEEI-2014-052). Weibliche Balb/c Mäusen im Alter von 6 bis 8 Wochen dienten.
1. Vorbereitung der Zellen und Tieren
<ol><li>Rasieren Sie einen Tag vor der Operation die Haare rund um die vierte Brustwarzen, im OP-Bereich verf?...

<ol>
	<li>Torre, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics.">Global cancer statistics.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).</li><li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies.">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism &amp; Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li><li>Wagner, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+breast+cancer:+quo+vadis,+animal+modeling.">Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling.</a> Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).</li><li>Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+breast+cancer+metastasis+to+bone:+opportunities+and+limitations.">Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations.</a> Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).</li><li>Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research.">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumour+xenografts+for+breast+cancer+drug+discovery.">Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery.</a> Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).</li><li>Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+using+genetically+engineered+mice.">Modeling cancer using genetically engineered mice.</a> Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).</li><li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer.">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+contributions+to+the+carcinogenic+process.">Stromal contributions to the carcinogenic process.</a> Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).</li><li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+metastasis.">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Yano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-targeting+adenovirus+OBP-401+inhibits+primary+and+metastatic+tumor+growth+of+triple-negative+breast+cancer+in+orthotopic+nude-mouse+models.">Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models.</a> Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).</li><li>Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+less+invasive+method+for+orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mouse+mammary+gland.">A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland.</a> Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+murine+breast+tumor+model+by+subcutaneous+or+orthotopic+implantation.">Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation.</a> Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gubenyiliu+II+Inhibits+Breast+Tumor+Growth+and+Metastasis+Associated+with+Decreased+Heparanase+Expression+and+Phosphorylation+of+ERK+and+AKT+Pathways.">Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways.</a> Molecules. 22 (5), (2017).</li><li>Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppressive+effects+of+a+proton+beam+on+tumor+growth+and+lung+metastasis+through+the+inhibition+of+metastatic+gene+expression+in+4T1+orthotopic+breast+cancer+model.">Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model.</a> International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).</li><li>Kalra, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+the+use+of+a+luciferase+labeled+breast+cancer+cell+line,+MDA435LCC6,+as+a+means+to+monitor+tumor+progression+and+to+assess+the+therapeutic+activity+of+an+established+anticancer+drug,+docetaxel+(Dt)+alone+or+in+combination+with+the+ILK+inhibitor,+QLT0267.">Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).</li></ol>

In dieser Studie verwendeten Zellen sind 4T1-luc2, murine Triple-negativem Brustkrebs-Zellen mit Luciferase zu beschriften, sind ein nützliches Werkzeug für die Investierung Antitumor- und antimetastatic Wirkungen von Medikamenten aufgrund ihrer sehr invasive Natur2,19 . Luciferases, stabil, um die nächste Zellgeneration werden verwendet, um den lebenden Tumor zeigen Zellen, sowohl bei der Brustdrüse und bei anderen entfernten Organen20</sup...

Brustkrebs ist die häufigste Ursache für weibliche Sterblichkeit weltweit. Mit seiner progressiv steigender Inzidenz ist Brustkrebs eine ernste Herausforderung für die öffentliche Gesundheit1geworden. Murine Krebs Modelle sind gute Brücken zwischen präklinischen und klinischen Studien, und eine gute mimische murinen Krankheitsmodell erhöhen die Genauigkeit der Forschung zur Krankheit und Medizin.
Primärtumor Wachstum beginnt den Fortschritt der malignen Erkrankungen, Metastasen und Komplikationen die Hauptursachen des Todes und der Armen Lebensqualitäten in den meisten Krebspatienten sind. Mehrere murinen Modelle werden verwendet, um die Pathologie der menschlichen Brust Krebs2,3,4zu imitieren. Xenograft-Modelle sind für Krebs-Studie, die pathologischen Zeichen zu verstehen und zu Bildschirm Drogen für die Sicherheit und Wirksamkeit5,6,7verbreitet. Gentechnisch veränderte Mäuse (GEM) werden generiert, um menschlichen Brustkrebs zu imitieren, indem Sie auf bestimmte Onkogene oder Tumor-Suppressor-Gene-8. GEM haben einen relativ einfachen und uniformierten Hintergrund zu verstehen, die Rolle der Gene Krebs Fortschritte; künstlichen Umwelt und Hintergrund sind jedoch begrenzt, die Metastasen Pathologie zu untersuchen und verwandte Therapien9. Menschlichen Krebszellen, wobei menschliche pathologische Züge können nur implantiert werden in immundefiziente Mäuse, und die Unzulänglichkeit der Tumor-Host immun Interaktion zu verzerrten Ergebnissen10führen kann.
Wo die soliden Tumoren initiiert hat einen direkten Einfluss auf die biologische und pathologischen Zeichen der Krankheit11,12,13. Da Krebs Fortschritte der komplizierten Interaktionen zwischen Tumorzellen, stromale Zellen, Zellen der Immunologie, Entzündungszellen, Wachstumsfaktoren und Proteasen ergibt sich, Primärtumoren implantiert in Situ besseren Einblick und imitieren die kanzerösen Prozess Zellen genauer als Tumoren induziert durch chemische Mittel oder eine subkutane Injektion des Tumors. Chemische Mittel verwendet, um Tumore zu induzieren, Forscher und Umwelt schädlich sein können und sind in einigen Ländern sogar verboten. Wegen des Fehlens einer Mamma Fettlappen Umgebung kann der pathologische Fortschritt eine subkutane Injektion mit unterscheiden sich in echten Brustkrebs-Patientinnen, deren Krebs stammt und von der Mamma Fettlappen reizt. Die Nachteile des subkutanen Injektionen Heranziehung die orthotopen Modelle Tumorwachstum zu studieren. In früheren Untersuchungen angegeben hoch metastatische Tumoren der MDA-MB-231, entwickelt nach sieben orthotopen Transplantationen, die Bedeutung der Injektion Lage14. Vor kurzem war die orthotopen Implantation von Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster mit Chirurgie gemeldeten15,16. Mit der Mamma Pad-Umwelt, das Tumorwachstum und die Migration in entfernte Organe decken den gesamten Prozess von Brustkrebs bei pathologisch relevanten Websites wodurch dieses Modell eine Miniatur des Fortschritts der menschlichen Krankheiten. Allerdings versucht die Haut nach der Operation automatisch zur Selbstheilung, die bringen des potenziellen Risikos einer Störung der normalen Brust-Krebs-Entstehung und die Ergebnisse beeinflussen können.
Wir haben einige Brust-Krebs-Modelle verglichen und gründete eine minimalinvasive orthotopen Modell zur Untersuchung der Auswirkungen der Medikamente auf Brust Krebs Fortschreiten17,18. In dieser Studie ein video Protokoll zum Orthotopically injizieren Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasive Weise präsentiert. Diese orthotopen Injektion Methode ohne Operation ist in vielerlei Hinsicht vorteilhaft. Zuerst, die Bedienung ist einfach und schnell, ca. 1 Minute pro Maus. Zweitens mit Primärtumor Herde direkt pathologischen Websites ab, es deckt den ganzen tumorigenic Prozess der Brust Tumorprogression aus dem Wachstum des Tumors in anderen Organen Metastasen, bietet eine gute experimentellen Tiermodell für das Studium der Zusammenspiel von Tumorzellen und Tumor Mikroumgebung. Es kann außerdem ein wertvolles Modell, die Behandlungseffekte in allen Stadien von Brustkrebs zu schätzen. Das Ziel dieser Methode ist zu einem Tiermodell zu maximumly mimischen menschlichen Brust Krebs fortschreiten.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:652px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">anesthesia machine</td>
			<td style="width:235px;">Midmark Corporation, Dayton, OH, USA</td>
			<td style="width:96px;">Matrx VMS</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:149px;">In-Vivo Imaging System</td>
			<td style="width:235px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:96px;">IVIS Spectrum</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:149px;">&#160;isoflurane</td>
			<td style="width:235px;">Hebei yipin chemical reagents&#160; company</td>
			<td style="width:96px;">O21400</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:235px;">Becton,Dickinson and&#160; Company</td>
			<td style="width:96px;">A257</td>
			<td style="width:172px;">cell injection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">digital caliper</td>
			<td style="width:235px;">Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">S-H</td>
			<td style="width:172px;">volume measurement</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">tramadol</td>
			<td style="width:235px;">Mundipharma company</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">pain killer</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">D-luciferin</td>
			<td style="width:235px;">Gold Biotechnology Inc.</td>
			<td style="width:96px;">LUCK-1G</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:52px;width:149px;">The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31</td>
			<td style="width:235px;">Abcam</td>
			<td style="width:96px;">&#160;ab28364</td>
			<td style="width:172px;">used for MVD detection</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:67px;width:149px;">hematoxylin and eosin staining kit</td>
			<td style="width:235px;">&#160;Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">ZLI-9615</td>
			<td style="width:172px;">histology&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">hair removal cream</td>
			<td style="width:235px;">Veet</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">hair removal cream</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:149px;">Carbomer Eye Gel</td>
			<td style="width:235px;">Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">ophthalmic ointment</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;">sewing needle</td>
			<td style="width:235px;">Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd.&#160;</td>
			<td>17U0302J</td>
			<td style="width:172px;">suture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad

Eine ordnungsgemäße Tiermodell ist entscheidend für ein besseres Verständnis der Krankheiten. Animal Modelle hergestellt durch verschiedene Methoden (subkutane Injektionen, Xenotransplantate, Genmanipulation, chemische Reagenzien Induktion, etc.) haben verschiedene pathologische Charaktere und spielen eine wichtige Rolle bei der Untersuchung bestimmte Aspekte der Krankheiten. Obwohl kein einheitliches Modell der ganzen menschlichen Krankheitsverlauf völlig nachahmen kann, spielen orthotopen Organe Krankheitsmodelle mit geeigneten Stromazellen Rahmenbedingungen eine unersetzliche Rolle bei Krankheiten zu verstehen und mögliche Drogen-screening. In diesem Artikel beschreiben wir, wie zu implantieren Brustkrebszellen in Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasiv und einfach zu handhabende Weg und folgen der Metastasierung zu entfernten Organen. Mit den richtigen Funktionen Primärtumor Wachstum, Brust und Brustwarze pathologischen Veränderungen, und ein hohes Auftreten von anderen Organen Metastasen ahmt dieses Modell maximumly menschlichen Brust Krebs fortschreiten. Primärtumor Wachstum in Situ, lang-Fernmetastasen und der Tumor Mikroumgebung von Brustkrebs können durch die Verwendung dieses Modells untersucht werden.

Nach einer erfolgreichen Injektion, eine weiße transparente flache Kugel mit der Brustwarze als die out-Oberfläche hindurch Zentrum beobachtet werden (Abbildung 1). Wachstum des primären Tumors kann gemessen werden Tumorvolumen und lebendigen Tumor Zelle Biolumineszenz (Abbildung 2). Das Tumorvolumen und den Gesamtfluss erhöht während des Experiments vor Resektion. In einem frühen Stadium kann nicht Metastasen gefunden werd...

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Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zur Brustkrebs-Zellen in der Mamma Fettpolster in einer einfachen, weniger invasiv und einfach zu handhabende Möglichkeit, einzupflanzen und dieses orthotopen Brust Krebs Mausmodell mit einer richtigen Mamma Fettlappen Umgebung kann verwendet werden, um verschiedene Aspekte zu untersuchen Krebs.

Orthotopen Injektion von Brustkrebs-Zellen in den Mäusen Mamma Fettlappen

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Krebsbereich zu beantworten, wie die Mikroumgebung das Tumorwachstum unterstützt oder ob ein bestimmtes Medikament die Brustkrebsprogression wirksam hemmen kann. Die Hauptvorteile der Tumorinduktionstechnik sind, dass keine Operation erforderlich ist und es eine weniger invasive Art und Weise ist, um Brustkrebs vor Ort zu etablieren. Mit dieser Technik wachsen die Tumorzellen innerhalb des Brustfettpolsters, in der entsprechenden Gewebeumgebung, und imitieren die Fortschreiten des menschlichen Brustkrebses enger als subkutane Injektion oder Xenograft in Mäusezellen.Ke-Xin Cao, unser Techniker, und ich werden Gan-Lin Zhang bei der Demonstration dieses Verfahrens unterstützen. Am Tag vor der Operation, halten Sie die Empfängermaus manuell zurück und drehen Sie die Tierbauchseite auf das Fell, um sich um die vierten Brustwarzen rasiert zu werden. Wischen Sie das Fell mit einer dünnen Schicht Enthaarungscreme ab.Verwenden Sie destilliertes Wasser, um die Creme nach 30 bis 60 Sekunden zu entfernen und die Maus mit weichen Papiertüchern zu trocknen. Verdünnen Sie am Tag der Operation die murine Brustkrebszellsuspension auf zwei mal zehn bis fünf Milliliter PBS-Konzentration in einem sterilen Mikrozentrifugenrohr auf Eis. Laden Sie vor jeder Injektion eine Milliliterspritze mit einer 45 mal 16 Nadel mit 50 Mikroliter Zellen pro Maus.Und bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifung in jedem sedierten Tier. Tragen Sie Salbe auf die Augen des Tieres auf und verwenden Sie eine Pinzette, um die Haut um die vierte Brustwarze der ersten Maus zu zelten, um einen Tunnel für die Spritze zu schaffen. Halten Sie die Spritze mit der Abschrägung nach oben und subkutan in die Haut mit fünf bis zehn Millimetern von der Brustwarze, folgen Sie dem Tunnel, bis die Nadelspitze fast die Brustwarze erreicht.Mit einer Pinzette, um die Haut um die erste Brustwarze zu zelten, wird ein Tunnel für die Spritze erstellt. Die Nadel sollte zwischen den Pinzettspitzen eingegeben werden und aufsteigen, anstatt in das Gewebe zu deprimieren. Bewegen Sie die Nadel vorsichtig in das Brustfettpad, bis sich die Abschrägung unter der Brustwarze befindet, und lassen Sie das Hautzelt los, um eine langsame Injektion der Krebszellen zu ermöglichen.Beim Einsetzen die Nadelspitze vorsichtig in das Brustfettpad bewegen, bis sich die Abschrägung unter der Brustwarze befindet. Und Sie werden Widerstand spüren, um die Lieferung der Zellen an den richtigen Ort zu gewährleisten. Wenn alle Zellen injiziert wurden, drehen Sie die Nadel leicht zur Seite und ziehen Sie die Spritze langsam zurück.Verwenden Sie einen Wattestäbchen, um Druck auf die Nadelwunde für 10 bis 20 Sekunden anzuwenden, um zu machen, dass es keine Flüssigkeitsickerung gibt. Die injizierte Brustwarze sollte als transparente, weiße, flache Kugel erscheinen, mit der Brustwarze in der Mitte. Um das Tumorvolumen zu bestimmen, halten Sie die Bauchseite der Maus nach oben und verwenden Sie einen Bremssattel, um die Tumorlänge und -breite zu messen.Um die Tumorbiolumineszenz zu erfassen, 10 Minuten vor der Bildgebung injizieren 150 Milligramm pro Kilogramm D-Luciferin in den Nacken der Maus. Und erfassen Sie Biolumineszenzbilder des Primärtumors und Metastasen unter den entsprechenden Biolumineszenz-Bildgebungsparametern. Verwenden Sie zum entsprechenden experimentellen Zeitpunkt eine Schere, um den Tumor von der Haut zu ernten.Und wenden Sie die schmerzstillenden Lösungen auf die chirurgische Stelle an, um postoperative Schmerzen zu lindern. Dann schließen Sie die Haut mit chirurgischen Nähten nach Standardprotokollen. Lassen Sie das Tier unter einer Wärmelampe mit Überwachung bis zur vollständigen Genesung erholen.Verwenden Sie ein Skalpell, um den Primärtumor in zwei gleiche Stücke zu schneiden. Lagern Sie die Hälfte des Gewebes in 4%Paraformaldehyd für die nachfolgende Hämatoxylin- und Eosinfärbung und Immunhistochemie. Die andere Hälfte in flüssigem Stickstoff für western blotting oder RNAi Isolation einfrieren.Am entsprechenden experimentellen Endpunkt ernten Sie die Lunge nach Standard-Sezierprotokollen und waschen Sie das Organ in PBS. Dann fixieren Sie die Lunge in 4%Paraformaldehyd, um Metastasen durch Hämatoxylin und Eosinfärbung zu verifizieren. Das primäre Tumorwachstum kann anhand des Tumorvolumens und der lebenden Tumorzellbiolumineszenz gemessen werden, wie gezeigt.Metastasen werden in den frühen Stadien der Impfung nicht beobachtet, da entweder kein sekundärer Tumor festgestellt wurde oder die starken biolumineszierenden Signale des Primärtumors den Nachweis kleiner metastasierender Brennpunkte mit schwachen Signalen behindern. Nach der Resektion kann das Biolumineszenzsignal aus den metastasierenden Brennpunkten entfernter Organe erkannt und analysiert werden. Die Analyse der Morphologie sowohl des primären Brusttumors als auch der Lungenabschnitte durch Hämatoxylin- und Eosinfärbung zeigt eine erhöhte Angiogenese in der Tumorzelle geimpfte Tiere, wie die Anti-CD31-Mikrogefäß-Markerfärbung belegt.Beim Versuch dieses Verfahrens ist es wichtig, sich vor der Übergabe der Tumorzellen daran zu erinnern, dass sich die Nadelspitze an der richtigen Stelle befindet. Nach diesem Verfahren können Zerstäuber, wie Tier-Ultraschall, durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen über Blasensupplementierung des primären Tumors in vivo zu beantworten. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der Tumorigenese und der Arzneimittelentwicklung bei der Erforschung der Schlüsselfaktoren und Wege, die an der Tumorigenese und den Mechanismen von Krebsmedikamenten in murinen Tiermodellen beteiligt sind.Vergessen Sie nicht, dass die Arbeit mit Isofluran oder anderen Gasanästhesie extrem schwer zu dosieren sein kann und dass Vorsichtsmaßnahmen wie die Verwendung einer Aktivkohlemaske immer während der Durchführung dieses Verfahrens getroffen werden sollten.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures (Video) | JoVE 

Functional Genomics Screening Verwendung zur Identifizierung möglicher neuer Wirkstoff-Targets in Cancer Cell Sphäroid-Kulturen

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

Forschung

Krebsforschung

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer (Video) | JoVE 

Ein Portal Veneninjektion Modell zur Untersuchung der Leber Metastasierung von Brustkrebs

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish (Video) | JoVE 

Invasive Verhalten von menschlichen Brustkrebszellen in embryonalem Zebrabärbling

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal (Video) | JoVE 

Flow durchflusszytometrischen Erkennung von neu gebildeten Stammzellen-wie Brustkrebszellen nach Apoptose Umkehr

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland (Video) | JoVE 

Modellierung von Brustkrebs über eine intraduktive Injektion des Cre-expressingAvirus in die Maus-Mammary Drüse

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model (Video) | JoVE 

Studieren von dreifach negativem Brustkrebs mit orthotopischem Brustkrebsmodell

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad (Video) | JoVE 

Ratte Mammary Epithel Cell Transplantation in das interskapulierische weiße Fettpad

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer (Video) | JoVE 

Orthotope Transplantation von Brusttumoren als präklinische Modelle für Brustkrebs

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells (Video) | JoVE 

Modellierung der Hirnmetastasierung durch Injektion von entzündlichen Brustkrebszellen in die Schwanzvene

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research (Video) | JoVE 

Brustepithel- und Endothelzell-Sphäroide als potenzielles funktionelles In-vitro-Modell für die Brustkrebsforschung

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...