Name: orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad
Uploaded: 2019-01-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad at JoVE.com

המחברים רוצה להודות את נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (גרנט מס 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), קרן מדעי הטבע בייג'ינג (גרנט מס 7172095, 7162084, 7162083), והוא יסוד שיה שו ח בייג'ינג של רפואה סינית מסורתית (גרנט לא, xx201701). אנו מודים פרופסור ליו צ'אנג-ג'ן, ממרכז מחקר נסיוני, סין האקדמיה למדעי הרפואה הסינית, לתמונות זוהרים.

ניסויים בבעלי חיים נערכו על פי הוראה של ההמלצה הכללית החקיקה הסינית ממשל ניסיוני בעלי חיים ואושרו על ידי מוסד של בעלי חיים טיפול ועל שימוש הוועדה של ההון האוניברסיטה הרפואית (Ref. לא. AEEI-2014-052). עכברים Balb/c הנשית בגילאי 6 עד 8 שבועות שימשו.
1. הכנה של תאים בעלי חיים
<ol><li>יום אחד לפנ?...

<ol>
	<li>Torre, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics.">Global cancer statistics.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).</li><li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies.">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism &amp; Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li><li>Wagner, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+breast+cancer:+quo+vadis,+animal+modeling.">Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling.</a> Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).</li><li>Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+breast+cancer+metastasis+to+bone:+opportunities+and+limitations.">Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations.</a> Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).</li><li>Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research.">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumour+xenografts+for+breast+cancer+drug+discovery.">Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery.</a> Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).</li><li>Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+using+genetically+engineered+mice.">Modeling cancer using genetically engineered mice.</a> Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).</li><li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer.">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+contributions+to+the+carcinogenic+process.">Stromal contributions to the carcinogenic process.</a> Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).</li><li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+metastasis.">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Yano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-targeting+adenovirus+OBP-401+inhibits+primary+and+metastatic+tumor+growth+of+triple-negative+breast+cancer+in+orthotopic+nude-mouse+models.">Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models.</a> Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).</li><li>Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+less+invasive+method+for+orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mouse+mammary+gland.">A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland.</a> Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+murine+breast+tumor+model+by+subcutaneous+or+orthotopic+implantation.">Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation.</a> Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gubenyiliu+II+Inhibits+Breast+Tumor+Growth+and+Metastasis+Associated+with+Decreased+Heparanase+Expression+and+Phosphorylation+of+ERK+and+AKT+Pathways.">Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways.</a> Molecules. 22 (5), (2017).</li><li>Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppressive+effects+of+a+proton+beam+on+tumor+growth+and+lung+metastasis+through+the+inhibition+of+metastatic+gene+expression+in+4T1+orthotopic+breast+cancer+model.">Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model.</a> International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).</li><li>Kalra, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+the+use+of+a+luciferase+labeled+breast+cancer+cell+line,+MDA435LCC6,+as+a+means+to+monitor+tumor+progression+and+to+assess+the+therapeutic+activity+of+an+established+anticancer+drug,+docetaxel+(Dt)+alone+or+in+combination+with+the+ILK+inhibitor,+QLT0267.">Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).</li></ol>

התאים השתמשו במחקר זה הם 4T1-luc2, תאים סרטניים בשד טריפל-שלילי מאתר עם לוציפראז תיוג, אשר הם כלי שימושי עבור משקיעה antitumor ואפקטים antimetastatic של תרופות בשל שלהם מאוד החודרני2,19 . Luciferases, יציב לדור הסלולרי הבא, משמשים כדי לציין את הגידול חי תאים, שניהם את בלוטת חלב ועל ?...

סרטן השד הוא הגורם המוביל של תמותת נשים ברחבי העולם. שכיחותה הגוברת בהדרגה, סרטן השד הפכה אתגר רציני לבריאות הציבור1. סרטן מאתר מודלים טובים גשרים בין קליניים וקליניים, מודל טוב מחקים מחלות מאתר יגדיל את הדיוק של מחקר על מחלות ותרופות.
הגידול העיקרי מתחיל את ההתקדמות של מחלות ממאירות, ואילו גרורות וסיבוכים הם הגורמים העיקריים למוות איכויות החיים המסכן אצל רוב חולי סרטן. מספר מודלים מאתר משמשים כדי לחקות את הפתולוגיה של השד אנושי סרטן2,3,4. מודלים xenograft נמצאים בשימוש נרחב למחקר סרטן להבין את הדמויות פתולוגי, מסך תרופות יעילות5,6,7ובטיחות. עכברים מהונדסים גנטית (פנינה) נוצרים כדי לחקות את סרטן השד אנושי על ידי מיקוד oncogenes או גידול משתיק קול גנים8מסוימים. פנינה יש רקע פשוטה יחסית, במדים כדי להבין את התפקיד של הגנים בתהליך סרטני; עם זאת, הסביבה מלאכותי ועל רקע מוגבלות כדי לחקור את הפתולוגיה גרורות הקשורים טיפולים9. תאים סרטניים אנושיים, אך עם תכונות פתולוגיים האנושית, יכול רק להיות קטנטנים בעכברים חיסונית לקויה, וזה אי ספיקה של הגידול-פונדקאי החיסון אינטראקציה עשוי להוביל מוטה תוצאות10.
איפה הגידול מוצק יוזם יש השפעה ישירה על הדמויות ביולוגיים ופתולוגיים של המחלה11,12,13. כיוון התקדמות סרטני הוא התוצאה מסובך של אינטראקציות בין תאים סרטניים סטרומה תאים, התאים אימונולוגיה, תאים דלקתיים, גורמי גדילה, פרוטאזות, ראשי גידולים מושתל בחיי עיר לספק תובנה טובה יותר ומחקים תהליך סרטני באופן מדויק יותר מאשר גידולים המושרה על ידי חומרים כימיים או זריקה תת עורית של גידול תאים. ריאקטורים המשמש לזירוז גידולים עשויים להיות מזיקים חוקרים וסביבה, אסור אפילו במדינות מסוימות. בהעדר סביבה כרית שומן החלב, ההתקדמות פתולוגי של זריקה תת עורית עשויות להשתנות עם חולי סרטן השד האמיתי, סרטן אשר מקורו וזה מעצבן מהמקלדת שומן החלב. החסרונות של זריקות תת עורית לעודד את השימוש של מודלים orthotopic ללמוד את צמיחת הגידול. במחקרים קודמים, גידולים גרורות מאוד מד א-MB-231, פיתחה לאחר השתלות orthotopic שבע, ציינו את החשיבות של מיקום ההזרקה14. לאחרונה, orthotopic ההשתלה של תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב עם הניתוח היה דיווח15,16. עם הסביבה pad החלב, את הגידול, ההעברה לתוך איברים רחוקים לכסות כל התהליך של סרטן השד באתרים רלוונטיים באופן פתולוגי, מה שהופך את המודל מיניאטורה של ההתקדמות של מחלות האדם הזה. עם זאת, לאחר הניתוח, העור באופן אוטומטי מנסה לרפא את עצמו, אשר עשויים להביא את הסיכון הפוטנציאלי של הפרעה המקור סרטן השד רגיל, הטיה את התוצאות.
יש דגמים של סרטן השד בהשוואה ואנו הקימה מודל orthotopic פולשנית לחקור את ההשפעה הפוטנציאלי של סמים על השד סרטן התקדמות17,18. במחקר זה, פרוטוקול וידאו על איך orthotopically מזריקים תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב פשוטה, מוצג בצורה פחות פולשנית. זו שיטת הזרקת orthotopic ללא ניתוח היא יתרון מבחינות רבות. ראשית, הפעולה היא פשוטה ומהירה, בערך 1 בדקה העכבר. שנית, עם הגידול העיקרי מוקדים החל באתרים ממש פתולוגי, זה מכסה התהליך כולו tumorigenic של התקדמות סרטן השד מן הגידול כדי אחרים גרורה איברים, אשר מספק מודל ניסויי בבעלי חיים ללמוד האינטראקציה של תאים סרטניים, גידול microenvironment. חוץ מזה, זה יכול להיות מודל חשוב להעריך את ההשפעות של טיפול בכל שלבי סרטן השד. מטרת שיטה זו היא לספק מודל חיה כדי התקדמות סרטן השד אנושי מחקים maximumly.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:652px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">anesthesia machine</td>
			<td style="width:235px;">Midmark Corporation, Dayton, OH, USA</td>
			<td style="width:96px;">Matrx VMS</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:149px;">In-Vivo Imaging System</td>
			<td style="width:235px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:96px;">IVIS Spectrum</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:149px;">&#160;isoflurane</td>
			<td style="width:235px;">Hebei yipin chemical reagents&#160; company</td>
			<td style="width:96px;">O21400</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:235px;">Becton,Dickinson and&#160; Company</td>
			<td style="width:96px;">A257</td>
			<td style="width:172px;">cell injection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">digital caliper</td>
			<td style="width:235px;">Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">S-H</td>
			<td style="width:172px;">volume measurement</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">tramadol</td>
			<td style="width:235px;">Mundipharma company</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">pain killer</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">D-luciferin</td>
			<td style="width:235px;">Gold Biotechnology Inc.</td>
			<td style="width:96px;">LUCK-1G</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:52px;width:149px;">The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31</td>
			<td style="width:235px;">Abcam</td>
			<td style="width:96px;">&#160;ab28364</td>
			<td style="width:172px;">used for MVD detection</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:67px;width:149px;">hematoxylin and eosin staining kit</td>
			<td style="width:235px;">&#160;Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">ZLI-9615</td>
			<td style="width:172px;">histology&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">hair removal cream</td>
			<td style="width:235px;">Veet</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">hair removal cream</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:149px;">Carbomer Eye Gel</td>
			<td style="width:235px;">Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">ophthalmic ointment</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;">sewing needle</td>
			<td style="width:235px;">Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd.&#160;</td>
			<td>17U0302J</td>
			<td style="width:172px;">suture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad

דגם בעל חיים ראוי חיוני לצורך הבנה טובה יותר של מחלות. בעלי חיים שהוקם על ידי שיטות שונות (זריקות תת עורית, xenografts, הנדסה גנטית, אינדוקציה ריאקטיבים כימיים, וכו ') יש תווים פתולוגיים שונים ומודלים תפקיד חשוב בחקירת היבטים מסוימים של מחלות. למרות שאין דגם אחד לגמרי לחקות את התקדמות המחלה האנושי כולו, orthotopic האיברים המחלה דגמים עם סביבה סטרומה ראוי לשחק תפקיד מיוחד במינו להבנת מחלות, הקרנת עבור תרופות. במאמר זה, אנו מסבירים כיצד ניתן להשתיל תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב פשוטה, דרך פחות פולשנית, אחיזה נוחה, ובצע את גרורות לאיברים מרוחקים. עם התכונות נאותה של הגידול העיקרי, השד הפטמה שינויים פתולוגיים, מופע גבוהה גרורה של איברים אחרים, מודל זה maximumly מחקה התקדמות סרטן השד אנושי. הגידול העיקרי לצמיחה בחיי עירגרורות לונג-מרוחק, את microenvironment הגידול של סרטן השד יכול ייחקרו על ידי שימוש במודל זה.

לאחר זריקה מוצלחת, אחד כדור שטוח לבן שקוף עם הפטמה כמו יותר לפני השטח סביב מרכז יכול להיות שנצפו (איור 1). הגידול העיקרי יכול להימדד על-ידי הגידול ונפח החי סרטניים תא ביולומינסנציה (איור 2). אמצעי האחסון הגידול והן את השטף הכולל גדל במהלך הניס...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad at JoVE.com 

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad (Video) | JoVE 

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשתיל תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב פשוטה, פחות פולשנית, אחיזה נוחה בדרך, והוא מודל סרטן השד זה העכבר orthotopic עם סביבה נאותה כרית שומן החלב יכול לשמש כדי לחקור היבטים שונים של סרטן.

הזרקת Orthotopic של תאים סרטניים בשד אל תוך כרית שומן החלב עכברים

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום הסרטן על איך microenvironment תומך בצמיחת הגידול או אם תרופה ספציפית יכולה לעכב ביעילות את התקדמות סרטן השד. היתרונות העיקריים של טכניקת אינדוקציה הגידול הם כי אין צורך בניתוח וזה באופן פולשני פחות שבו להקים סרטן השד במקום. באמצעות טכניקה זו, תאי הגידול גדלים בתוך כרית השומן חלבי, בסביבת הרקמה המתאימה, מחקה את התקדמות סרטן השד האנושי קרוב יותר מאשר הזרקה תת עורית או קסנוגרפט לתאי עכברים.קה-שין-סאו, הטכנאי שלנו, ואני, נסייע לגן-לין זאנג בהדגמת ההליך הזה. ביום שלפני הניתוח, לרסן ידנית את העכבר המטופל ולהפוך את הצד בטן החיה עד הפרווה להיות מגולח סביב הפטמות הרביעי. מנגבים את הפרווה עם שכבה דקה של קרם depilatory.השתמש במים מזוקקים כדי להסיר את השמנת לאחר 30 עד 60 שניות ולייבש את העכבר עם מגבות נייר רכות. ביום הניתוח, לדלל את ההשעיה תא סרטן השד מורין פעמיים עשר לתאים החמישיים למיליליטר של ריכוז PBS, בצינור מיקרוצנטריפוגה סטרילי על קרח. לפני כל זריקה, לטעון אחד, מזרק מיליליטר אחד מצויד 45 על ידי 16 מחט, עם 50 microliters של תאים לכל עכבר.ולאשר חוסר תגובה לצביטת בוהן בכל חיה מרומם. החל משחה על העיניים של החיה ולהשתמש פינצטה כדי אוהל את העור סביב הפטמה הרביעית של העכבר הראשון, כדי ליצור מנהרה עבור המזרק לעקוב. החזק את המזרק עם שיקוע הפונה כלפי מעלה ובהת עור להיכנס לעור בחמישה עד 10 מילימטרים מהפטמה, בעקבות המנהרה עד קצה המחט כמעט מגיע הפטמה.שימוש פינצטה כדי אוהל את העור סביב הפטמה הראשונה יוצר מנהרה עבור המזרק לעקוב. המחט צריכה להיות נכנסת בין קצות פינצטה צריך להרים במקום מדכא לתוך הרקמה. בזהירות להעביר את קצה המחט לתוך כרית שומן חלבי עד שפוע הוא מתחת לפטמה, ולשחרר את אוהל העור כדי לאפשר הזרקה איטית של התאים הסרטניים.עם הכניסה, בזהירות להזיז את קצה המחט לתוך כרית שומן חלבי עד שפוע הוא מתחת לפטמה. ואתה תרגיש התנגדות כדי להבטיח את מסירת התאים למיקום הנכון. כאשר כל התאים הוזרקו, להפוך את המחט מעט לצד ולחזור את המזרק לאט.השתמש ספוגית כותנה כדי להפעיל לחץ על פצע המחט במשך 10 עד 20 שניות, כדי להפוך אין חלחול נוזל. הפטמה המוזרקת אמורה להופיע כתחום שקוף, לבן ושטוח, עם הפטמה במרכז. כדי לבסס את נפח הגידול, לרסן את הצד בטן העכבר למעלה ולהשתמש caliper כדי למדוד את אורך הגידול ורוחב.כדי ללכוד את הביולומינציה הגידולית, 10 דקות לפני הדמיה להזריק 150 מיליגרם לקילוגרם של D-luciferin לתוך החלק האחורי של צוואר העכבר. וללכוד תמונות bioluminescence של הגידול העיקרי גרורות תחת הפרמטרים המתאימים הדמיה bioluminescence. בנקודת הזמן הניסיונית המתאימה, השתמש במספריים כדי לקצור את הגידול מהעור.ולהחיל את הפתרונות משככי כאבים לאתר הניתוחי כדי להקל על הכאב שלאחר הניתוח. לאחר מכן לסגור את העור עם תפרים כירורגיים על פי פרוטוקולים סטנדרטיים. אפשרו לחיה להתאושש תחת מנורת חימום עם ניטור עד להחלמה מלאה.השתמש אזמל לחתוך את הגידול העיקרי לשתי חתיכות שוות. אחסן מחצית מהרקמות בפרפורמלדהיד של 4% עבור כתמי המטוקסילין ואאוסין ואימונוהיסטוכימיה. להקפיא את החצי השני בחנקן נוזלי עבור כתמים מערביים או בידוד RNAi.בנקודות הקצה הניסיוניות המתאימות לקצור את הריאות על פי פרוטוקולי ניתוח סטנדרטיים ולשטוף את האיבר ב- PBS. לאחר מכן לתקן את הריאות ב 4% paraformaldehyde כדי לאמת גרורות על ידי המטוקסילין וכתמי אאוסין. גידול הגידול העיקרי ניתן למדוד על ידי נפח הגידול ואת bioluminescence תא הגידול חי, כפי שהוכח.גרורות אינן נצפות בשלבים המוקדמים של החיסון מכיוון שלא הוקם גידול משני, או האותות הביולומינסנטיים החזקים של הגידול העיקרי חוסמים את הגילוי של מוקדים גרורתיים קטנים עם אותות חלשים. לאחר הניתוק, ניתן לזהות ולנתח את אות הביולומינציה מהמספואים גרורתיים של איברים רחוקים. ניתוח של המורפולוגיה של שני גידול השד העיקרי ואת חלקי הריאות על ידי מכתים hematoxylin ו אאוסין מגלה אנגיוגנזה מוגברת בתא הגידול מחוסן בעלי חיים כפי שמובהא על ידי סמן microvessel anti-CD31 מכתים.בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לוודא קצה המחט הוא במיקום הנכון לפני אספקת תאי הגידול. בעקבות הליך זה, atomizers, כמו אולטרסאונד בעלי חיים, ניתן לבצע כדי לענות על שאלות נוספות על תוספי שלפוחית השתן של הגידול העיקרי vivo. לאחר התפתחותה, טכניקה זו סללה את הדרך לחוקרים בתחום tumorigenesis ואת התפתחות התרופה בחקירת הגורמים העיקריים ואת המסלולים המעורבים tumorigenesis ואת המנגנונים של תרופה נגד סרטן במודלים בעלי חיים מורין.אל תשכח כי עבודה עם isoflurane או הרדמה גז אחר יכול להיות קשה מאוד לינון, כי אמצעי זהירות כגון שימוש במסכת פחמן פעיל, תמיד צריך להילקח בעת ביצוע הליך זה.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures (Video) | JoVE 

ניצול הקרנת Genomics פונקציונלית כדי לזהות מטרות תרופה חדשנית פוטנציאלי תרבויות אליפטית תא סרטני

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer (Video) | JoVE 

מודל הזרקת Portal Vein לחקר גרור בכבד של סרטן השד

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish (Video) | JoVE 

התנהגות פולשנית של תאים סרטניים בשד אדם עוברי הזברה

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal (Video) | JoVE 

גילוי Cytometric זרימה של תאים, כמו תאי גזע סרטניים בשד החדשה לאחר היפוך אפופטוזיס

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland (Video) | JoVE 

דוגמנות סרטן השד באמצעות הזרקת הפנים של המין-אדנווירוס המבטא לתוך בלוטת החלב של העכבר

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model (Video) | JoVE 

לומדת משולשת סרטן השד שלילי באמצעות אורתובנושא שד סרטן השד מודל

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad (Video) | JoVE 

חולדה השתלת תא האפיתל לתוך משטח שומן לבן הגלימה

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer (Video) | JoVE 

השתלה אורתוטופית של גידולי שד כמודלים פרה-אקליניים לסרטן השד

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells (Video) | JoVE 

מידול גרורות במוח באמצעות הזרקת ורידים בזנב של תאי סרטן שד דלקתיים

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research (Video) | JoVE 

כדורי תא אפיתל ואנדותל של חלבי כמודל הפריה תפקודי פוטנציאלי לחקר סרטן השד

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...