Name: orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad
Uploaded: 2019-01-20T13:00:00
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저자는 국립 자연 과학 재단의 중국 (보조금 번호 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), 감사 하 고 싶습니다 베이징 자연 과학 재단 (보조금 번호 7172095, 7162084, 7162083), 및의 베이징 병원의 쑤 쌰 재단 전통 중국의 술 (아니, 부여 xx201701). 우리 실험 연구 센터, 중국 과학원 중국 의료, 발광 이미지에서 교수 장 젠 리 우 감사합니다.

동물 실험 규정 및 일반적인 추천 중국 실험 동물 관리 입법의 실시 했다와 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 주요한 의학 대학에 의해 승인 되었다 (Ref 없습니다. AEEI-2014-052). 6 ~ 8 주 세 여성 Balb/c 마우스 사용 되었다.
1입니다. 세포와 동물의 준비
<ol><li>작업을 하기 전에 1 일 운영 영역을 폭로 4 번째 유 두 주위에 머리를 면도.<ol>
<li>한 손으로 사용 하 여 밀접 하 게 되도록 ?...

<ol>
	<li>Torre, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics.">Global cancer statistics.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).</li><li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies.">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism &amp; Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li><li>Wagner, K. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).</li></ol>

이 연구에 사용 된 셀은 4T1-luc2, murine 트리플 부정적인 유방암 세포 luciferase 라벨와 그들의 매우 침략 적 자연2,19 때문 마약의 antitumor 및 antimetastatic 효과 투자를 위한 유용한 도구입니다. . Luciferases, 차세대 셀에 안정적인 생활 종양을 나타내는 데 사용 됩니다 세포, 유 방 동맥에서 및 다른 먼 장기20. 경우에 따라 저 산소 증 및 발광 신?...

유방암은 전세계 여성 사망의 주요 원인. 점차적으로 증가 발생률, 유방암 공중 보건1에 대 한 심각한 도전 되고있다. 암 murine 모델은 전 임상 및 임상 연구, 사이 좋은 교량 그리고 좋은 모방 murine 질병 모델 질병 및 의학 연구의 정확도 증가 합니다.
기본 종양 성장 전이 및 합병증은 죽음 및 가난한 생활 질 대부분의 암 환자에서의 주요 원인은 악성 질환의 진행을 시작 합니다. 여러 murine 모델은 인간 유 방 암2,,34의 병 리를 모방 하는 데 사용 됩니다. 이 종이 식 모델은 널리 사용 화면 약물을 병 적인 캐릭터를 이해 하는 암 연구에 대 한 안전과 효능5,,67. 유전자 조작된 생쥐 (보석) 특정 oncogenes 또는 종양 억제기 유전자8대상으로 인간의 유방암을 모방 하기 위해 생성 됩니다. 보석 암 진행; 유전자의 역할을 이해 하는 비교적 간단 하 고 제복을 입은 배경을 그러나, 인공 환경 및 배경 조사 전이 병 리 제한 됩니다 및 관련 요법9. 인간의 암 세포, 비록 인간의 병 적인 특징으로, 수만 이식 면역 결핍 생쥐에서 그리고 종양 호스트 면역 상호 작용의 부족 편견된 결과10으로 이어질 수 있습니다.
단단한 종양 시작 질병11,,1213의 생물 학적 및 병 적인 캐릭터에 직접적인 영향이 있다. 암 진행 종양 세포, stromal 세포, 면역 세포, 염증 세포, 성장 요인, 및 프로 테아 제 간 상호 작용의 복잡 한 결과 이기 때문에, 1 차 종양 이식 제자리에 것입니다 더 나은 통찰력을 제공 하 고 모방은 화학 약품 또는 종양의 피하 주입에 의해 유도 된 종양 보다 더 정확 하 게 세포 암의 과정. 종양을 유발 하는 데 사용 하는 화학 약품 연구자와 환경에 해로울 수 있습니다 하 고 심지어 일부 국가에서 금지 된다. 유 방 지방 패드 환경의 부재로 인해 실제 유방암 환자에 그 암 발생 및 유 방 지방 패드에서 그만두지 피하 주사의 진행 하는 병 적인 상황으로 달라질 수 있습니다. 피하 주사의 단점은 orthotopic 종양 성장 연구 모델의 사용을 권장 합니다. 이전 연구에서 높은 전이성 MDA-MB-231 종양, 7 orthotopic 간이식 후 개발 주입 위치14의 중요성을 표시. 최근, 수술과 유 방 지방 패드에 유방암 세포의 orthotopic 주입 보고15,16이었다. 유 방 패드 환경, 종양의 성장 및 병 적 관련 사이트에서 유방암의 먼 장기 커버 전체 과정으로 마이그레이션는 인간 질병의 진행의 미니어처 모델이 게 합니다. 그러나, 수술 후, 피부는 자동으로 자체는 정상적인 유 방 암 개시 방해의 잠재적인 위험을가지고 있으며 결과 편견을 치료 하려고 시도 합니다.
우리 일부 유 방 암 모델을 비교 하 고 유 방 암 진행17,18에 약물의 잠재적인 효과 조사 하는 최소 침 습 orthotopic 모델 설립. 이 연구에서 orthotopically 하는 방법에 비디오 프로토콜, 간단한 유 방 지방 패드 유방암 세포 주입, 더 적은 침략 적인 방법 제시. 수술 없이이 orthotopic 주입 방법 많은 방법으로 유리 하다. 먼저, 작업은 간단 하 고 빠른, 마우스 당 약 1 분. 둘째, 기본 종양 foci 바로 병 적인 사이트에서와 전체 tumorigenic 과정을 공부 하기 위한 좋은 실험 동물 모델을 제공 하는 다른 장기 전이 종양의 성장에서 유 방 암 진행의 커버는 종양 세포와 종양 microenvironment의 상호 작용입니다. 게다가, 그것은 유방암의 모든 단계에서 치료 효과 예측 하는 중요 한 모델을 수 있습니다. 이 방법의 목표는 maximumly 모방 인간의 유방암 암 진행 하는 동물 모델을 제공 하는입니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:652px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">anesthesia machine</td>
			<td style="width:235px;">Midmark Corporation, Dayton, OH, USA</td>
			<td style="width:96px;">Matrx VMS</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:149px;">In-Vivo Imaging System</td>
			<td style="width:235px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:96px;">IVIS Spectrum</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:149px;">&#160;isoflurane</td>
			<td style="width:235px;">Hebei yipin chemical reagents&#160; company</td>
			<td style="width:96px;">O21400</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:235px;">Becton,Dickinson and&#160; Company</td>
			<td style="width:96px;">A257</td>
			<td style="width:172px;">cell injection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">digital caliper</td>
			<td style="width:235px;">Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">S-H</td>
			<td style="width:172px;">volume measurement</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">tramadol</td>
			<td style="width:235px;">Mundipharma company</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">pain killer</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">D-luciferin</td>
			<td style="width:235px;">Gold Biotechnology Inc.</td>
			<td style="width:96px;">LUCK-1G</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:52px;width:149px;">The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31</td>
			<td style="width:235px;">Abcam</td>
			<td style="width:96px;">&#160;ab28364</td>
			<td style="width:172px;">used for MVD detection</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:67px;width:149px;">hematoxylin and eosin staining kit</td>
			<td style="width:235px;">&#160;Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">ZLI-9615</td>
			<td style="width:172px;">histology&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">hair removal cream</td>
			<td style="width:235px;">Veet</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">hair removal cream</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:149px;">Carbomer Eye Gel</td>
			<td style="width:235px;">Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">ophthalmic ointment</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;">sewing needle</td>
			<td style="width:235px;">Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd.&#160;</td>
			<td>17U0302J</td>
			<td style="width:172px;">suture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad

적절 한 동물 모델은 질병의 더 나은 이해를 위해 중요 합니다. 동물 모델 설립 (피하 주사, xenografts, 유전자 조작, 화학 시 약 유도, 등) 다른 방법으로 다양 한 병리학 자 및의 특정 측면을 조사 하 고 있는 중요 한 역할 질병입니다. 비록 아무 모형도 없다 완전히 전체 인간의 질병의 진행을 모방 수 있습니다, 적절 한 stromal 환경 orthotopic 장기 질병 모델 한 역할 대신할 질병을 이해 하 고 잠재적인 약물에 대 한 심사. 이 문서에서는, 우리는 간단 하 고, 더 적은 침략, 그리고 쉽게 처리 방법에서에서 유 방 지방 패드에 유방암 세포를 이식 하 여 먼 장기에 전이 수행 방법을 설명 합니다. 기본 종양 성장, 유 방 및 젖꼭지 병 적인 변화에의 적절 한 기능 및 다른 장기의 전이의 높은 발생, maximumly이 모델 인간의 유방암 암 진행을 모방합니다. 기본 종양 성장에서 제자리에서긴-먼 전이, 그리고 유방암의 종양 microenvironment이이 모델을 사용 하 여 조사 될 수 있다.

성공적인 주입으로 젖꼭지를 한 백색 투명 플랫 영역 후에 둥근 표면 밖으로 센터 (그림 1) 관찰 될 수 있다. 기본 종양 성장 종양 볼륨 및 생활 종양에 의해 측정 될 수 있다 세포 생물 발광 (그림 2). 종양 크기와 총 속 절제 하기 전에 실험 기간 동안 증가 했다. 초기 단계에서 전이 없는 2 차 종양 발생 했습니다 또는 기본 종양의...

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Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad (Video) | JoVE 

여기, 우리는 간단 하 고, 침략, 그리고 쉽게 처리 방법, 더 적은에서 유 방 지방 패드에 유방암 세포를 이식 하는 프로토콜을 제시 하 고이 마우스 orthotopic 유 방 암 모델 적절 한 유 방 지방 패드 환경으로 사용할 수 있습니다의 다양 한 측면을 조사 하 암입니다.

Orthotopic 쥐 유 방 지방 패드 유방암 세포의 주입

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

이 방법은 마이크로 환경이 종양 성장을 지원하는 방법 또는 특정 약물이 유방암 진행을 효과적으로 억제 할 수 있는지 여부에 대한 암 분야의 주요 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 종양 유도 기술의 주요 장점은 수술이 필요하지 않으며 그 안에 유방암을 확립하는 덜 침습적 인 방식이라는 것입니다. 이 기술을 사용하여, 종양 세포는 마우스 세포에 피하 주사 또는 xenograft 보다는 인간 유방암 진행을 더 밀접하게 모방하는 적당한 조직 환경에서, 유방 지방 패드 내, 마우스 세포에 피하 주사 또는 xenograft보다는 더 밀접하게 성장합니다.케신 카오, 우리의 기술자, 그리고 나는, 이 절차를 시연에 간 린 장 도움이 될 것입니다. 수술 전날, 수취인 마우스를 수동으로 제지하고 동물 배면을 털로 돌려 네 번째 젖꼭지 주위에 면도합니다. 탈모 크림의 얇은 층으로 모피를 닦아.증류수를 사용하여 30~60초 후에 크림을 제거하고 부드러운 종이 타월로 마우스를 건조시다. 수술 당일, 뮤린 유방암 세포 현탁액을 PBS 농도의 밀리리터 당 5분의 1에 2배, 얼음상에 멸균 된 미세원심분리기 튜브로 희석한다. 각 주입 전에, 마우스 당 세포의 50 마이크로 리터와 함께 45 x 16 바늘을 장착 한 밀리리터 주사기를 로드합니다.그리고 각 진정 된 동물에 발가락 핀치에 대한 반응의 부족을 확인합니다. 동물의 눈에 연고를 바르고 핀셋을 사용하여 첫 번째 마우스의 네 번째 젖꼭지 주위에 피부를 텐트로 사용하여 주사기를 위한 터널을 만듭니다. 주사기를 위쪽으로 향하는 주사기를 잡고 바늘 끝이 젖꼭지에 거의 도달할 때까지 터널을 따라 젖꼭지에서 5~10mm의 피부에 피하로 들어가게 됩니다.핀셋을 사용하여 첫 번째 젖꼭지 주위의 피부를 텐트로 사용하면 주사기가 따라갈 수있는 터널이 만들어집니다. 바늘은 트위저 팁 사이에 입력해야하며 조직에 우울대신 제기해야합니다. 조심스럽게 벨이 젖꼭지 아래에있을 때까지 유방 지방 패드로 바늘 팁을 이동하고 암세포의 느린 주입을 허용하기 위해 피부 텐트를 해제합니다.삽입 시 바늘 끝을 유방 지방 패드로 조심스럽게 움직인다. 그리고 당신은 올바른 위치에 세포의 전달을 보장하기 위해 저항을 느낄 것이다. 모든 세포가 주입되면 바늘을 옆으로 살짝 돌리고 주사기를 천천히 철회하십시오.면 봉면을 사용하여 바늘 상처에 압력을 10~20초 동안 가가하여 유체 가시가 없는지 확인합니다. 주입된 젖꼭지는 중앙에 젖꼭지가 있는 투명하고 흰색, 평평한 구로 나타나야 합니다. 종양 부피를 확립하기 위해 마우스 배면을 위로 억제하고 캘리퍼를 사용하여 종양 길이와 폭을 측정합니다.종양 생물 발광을 포착하기 위하여는, 화상 진찰 의 앞에 10 분 마우스의 목의 뒤쪽에 D-luciferin의 킬로그램 당 150 밀리그램을 주입합니다. 그리고 적절한 생물 발광 이미징 매개 변수하에서 1 차 종양 및 전이의 생물 발광 이미지를 캡처합니다. 적절한 실험 시점에서 가위를 사용하여 피부에서 종양을 수확하십시오.그리고 수술 후 통증을 완화하기 위해 수술 부위에 진통 솔루션을 적용하십시오. 그런 다음 표준 프로토콜에 따라 외과 봉합사로 피부를 닫습니다. 동물이 완전한 회복될 때까지 모니터링하여 온난화 램프 아래에서 회복하도록 허용합니다.메스를 사용하여 1차 종양을 두 개의 동일한 조각으로 자른다. 후속 헤마톡시린과 에신 염색 및 면역 조직 화학을 위해 조직의 절반을 4% 파라포름데히드에 저장합니다. 서쪽 블로팅 또는 RNAi 절연을 위한 액체 질소에 있는 나머지 반을 동결합니다.적절한 실험 종점에서 표준 해부 프로토콜에 따라 폐를 수확하고 PBS에서 장기를 세척합니다. 그런 다음 폐를 4% 파라포름알데히드로 고정하여 헤마톡클린과 에오신 염색에 의한 전이를 확인합니다. 1 차적인 종양 성장은 입증된 바와 같이 종양 부피 및 살아있는 종양 세포 생물 발광에 의해 측정될 수 있습니다.전이는 접종의 초기 단계에서 이차 종양이 확립되지 않았거나, 1차 종양의 강력한 생체 발광 신호가 약한 신호로 작은 전이성 초점의 검출을 방해하기 때문에 관찰되지 않는다. 절제 후, 먼 장기의 전이성 초점으로부터의 생체 발광 신호를 검출하고 분석할 수 있다. 헤마톡시린과 에오신 염색에 의한 1차 유방종양 및 폐 단면의 형태학을 분석한 결과, 항 CD31 마이크로용기 마커 염색에 의해 입증된 바와 같이 종양 세포 접종 동물의 혈관신생이 증가하는 것으로 나타났습니다.이 절차를 시도할 때, 바늘 끝이 종양 세포를 전달하기 전에 정확한 위치에 있는지 확인하는 것이 중요합니다. 이 절차에 따라, 동물 초음파 와 같은 분무기는 생체 내 1 차 종양의 방광 보충에 대한 추가 질문에 대답하기 위해 수행 될 수 있습니다. 개발 후, 이 기술은 종양 발생 및 종양 발생에 관련 된 주요 요인 및 경로 와 뮤린 동물 모델에서 항 암 약물의 메커니즘을 탐구에 있는 약물 개발의 분야에서 연구원을 위한 길을 열었습니다.이소플루란 이나 다른 가스 마취와 함께 작업 하는 것은 복용량을 매우 어려울 수 있습니다 그리고 활성화 된 탄 마스크를 사용 하 여 같은 예방 조치를 취 해야 하는 것을 잊지 마세요, 항상이 절차를 수행 하는 동안 취해야 한다.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures (Video) | JoVE 

기능 유전체학에게 검사를 활용하여 암 세포 회전 타원체 문화에 잠재적으로 소설 약 표적을 식별하는

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

연구

암 연구학

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer (Video) | JoVE 

포탈 정맥 주입 모델 간 전이 유방암의 공부를

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish (Video) | JoVE 

배아 Zebrafish의 인간 유방암 세포의 침략 행동

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal (Video) | JoVE 

새로 형성 된 유방암 줄기 세포와 같은 세포 Apoptosis 반전 후 흐름 Cytometric 감지

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland (Video) | JoVE 

마우스 유방 동맥에 Cre 발현 아데노 바이러스의 경막 주사를 통해 유방암 모델링

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model (Video) | JoVE 

정형외 유방암 모델을 사용하여 삼중 음성 유방암 을 연구

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad (Video) | JoVE 

쥐 유방 상피 세포 이식에 갑피 흰 지방 패드

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer (Video) | JoVE 

유방암을 위한 전임상 모형으로 유방 종양의 정형소 이식

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells (Video) | JoVE 

염증성 유방암 세포의 꼬리 정맥 주입을 통한 뇌 전이 모델링

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research (Video) | JoVE 

유방암 연구를 위한 잠재적인 기능적인 시험관 내 모형으로 유방 상피 및 내피 세포 스페로이드

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...