Name: orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad
Uploaded: 2019-01-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad at JoVE.com

Yazarlar Ulusal Doğa Bilimleri Foundation of China (grant No 81873111, 81673924, 81774039, 81503517), teşekkür etmek istiyorum Pekin doğal Bilim Vakfı (grant No 7172095, 7162084, 7162083) ve Pekin hastaneden Xu Xia temeli Geleneksel Çin tıbbı (Hayır, vermek xx201701). Prof. Dr. Chang-Zhen Liu, kollarındaki görüntüler için Çince Tıbbi Bilimler Akademisi deneysel araştırma merkezi, Çin teşekkür ediyoruz.

Hayvan deneyleri hüküm ve genel öneri Çin deneysel hayvan yönetim mevzuatı uyarınca gerçekleştirilmiştir ve kurum hayvan bakımı ve kullanımı Komitesi sermaye Tıp Üniversitesi tarafından onaylanmıştır (Ref yok. AEEI-2014-052). 6-8 hafta yaşlı kadın Balb/c fareler kullanıldı.
1. hücre ve hayvanlar hazırlanması
<ol><li>Bir gün işleminden önce çalışma alanı ortaya çıkarmak için dördüncü meme etrafında saç tıraş.<ol>
<li>Bir yandan fare fare değil ser...

<ol>
	<li>Torre, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Global+cancer+statistics.">Global cancer statistics.</a> CA: A Cancer Journal for Clinicians. 65 (2), 87-108 (2012).</li><li>Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+exploring+the+pharmacokinetics+of+breast+cancer+therapies.">Animal models for exploring the pharmacokinetics of breast cancer therapies.</a> Expert Opinion on Drug Metabolism &amp; Toxicology. 11 (2), 221-230 (2015).</li><li>Wagner, K. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+breast+cancer:+quo+vadis,+animal+modeling.">Models of breast cancer: quo vadis, animal modeling.</a> Breast Cancer Research. 6 (1), 31-38 (2004).</li><li>Horas, K., Zheng, Y., Zhou, H., Seibel, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+breast+cancer+metastasis+to+bone:+opportunities+and+limitations.">Animal models for breast cancer metastasis to bone: opportunities and limitations.</a> Cancer Investigation. 33 (9), 459-468 (2015).</li><li>Kawaguchi, T., Foster, B. A., Young, J., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Update+of+Patient-Derived+Xenograft+Model+for+Translational+Breast+Cancer+Research.">Current Update of Patient-Derived Xenograft Model for Translational Breast Cancer Research.</a> Journal of Mammary Gland Biology and Neoplasia. 22 (2), 131-139 (2017).</li><li>Wright, L. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+breast+cancer+bone+metastasis.">Murine models of breast cancer bone metastasis.</a> BoneKEy Reports. 5, 804 (2016).</li><li>Cassidy, J. W., Batra, A. S., Greenwood, W., Bruna, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+tumour+xenografts+for+breast+cancer+drug+discovery.">Patient-derived tumour xenografts for breast cancer drug discovery.</a> Endocrine-Related Cancer. 23 (12), T259-T270 (2016).</li><li>Stiedl, P., Grabner, B., Zboray, K., Bogner, E., Casanova, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+cancer+using+genetically+engineered+mice.">Modeling cancer using genetically engineered mice.</a> Methods in Molecular Biology. 1267, 3-18 (2015).</li><li>Menezes, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mice+as+experimental+tools+to+dissect+the+critical+events+in+breast+cancer.">Genetically engineered mice as experimental tools to dissect the critical events in breast cancer.</a> Advances in Cancer Research. 121, 331-382 (2014).</li><li>Talmadge, J. E., Singh, R. K., Fidler, I. J., Raz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+to+evaluate+novel+and+conventional+therapeutic+strategies+for+cancer.">Murine models to evaluate novel and conventional therapeutic strategies for cancer.</a> The American Journal of Pathology. 170 (3), 793-804 (2007).</li><li>Spaw, M., Anant, S., Thomas, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stromal+contributions+to+the+carcinogenic+process.">Stromal contributions to the carcinogenic process.</a> Molecular Carcinogenesis. 56 (4), 1199-1213 (2017).</li><li>Joyce, J. A., Pollard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microenvironmental+regulation+of+metastasis.">Microenvironmental regulation of metastasis.</a> Nature Reviews Cancer. 9 (4), 239-252 (2009).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144 (5), 646-674 (2011).</li><li>Yano, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor-targeting+adenovirus+OBP-401+inhibits+primary+and+metastatic+tumor+growth+of+triple-negative+breast+cancer+in+orthotopic+nude-mouse+models.">Tumor-targeting adenovirus OBP-401 inhibits primary and metastatic tumor growth of triple-negative breast cancer in orthotopic nude-mouse models.</a> Oncotarget. 7 (51), 85273-85282 (2016).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).</li><li>Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+less+invasive+method+for+orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mouse+mammary+gland.">A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland.</a> Lab Animal. 51 (1), 85-88 (2017).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+a+murine+breast+tumor+model+by+subcutaneous+or+orthotopic+implantation.">Establishment of a murine breast tumor model by subcutaneous or orthotopic implantation.</a> Oncology Letters. 15 (5), 6233-6240 (2018).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gubenyiliu+II+Inhibits+Breast+Tumor+Growth+and+Metastasis+Associated+with+Decreased+Heparanase+Expression+and+Phosphorylation+of+ERK+and+AKT+Pathways.">Gubenyiliu II Inhibits Breast Tumor Growth and Metastasis Associated with Decreased Heparanase Expression and Phosphorylation of ERK and AKT Pathways.</a> Molecules. 22 (5), (2017).</li><li>Kwon, Y. S., Lee, K. S., Chun, S. Y., Jang, T. J., Nam, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppressive+effects+of+a+proton+beam+on+tumor+growth+and+lung+metastasis+through+the+inhibition+of+metastatic+gene+expression+in+4T1+orthotopic+breast+cancer+model.">Suppressive effects of a proton beam on tumor growth and lung metastasis through the inhibition of metastatic gene expression in 4T1 orthotopic breast cancer model.</a> International Journal of Oncology. 49 (1), 336-342 (2016).</li><li>Kalra, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validating+the+use+of+a+luciferase+labeled+breast+cancer+cell+line,+MDA435LCC6,+as+a+means+to+monitor+tumor+progression+and+to+assess+the+therapeutic+activity+of+an+established+anticancer+drug,+docetaxel+(Dt)+alone+or+in+combination+with+the+ILK+inhibitor,+QLT0267.">Validating the use of a luciferase labeled breast cancer cell line, MDA435LCC6, as a means to monitor tumor progression and to assess the therapeutic activity of an established anticancer drug, docetaxel (Dt) alone or in combination with the ILK inhibitor, QLT0267.</a> Cancer Biology &amp; Therapy. 11 (9), 826-838 (2011).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+metastatic+mouse+models+for+anticancer+drug+discovery+and+evaluation:+a+bridge+to+the+clinic.">Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic.</a> Investigational New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).</li><li>Hoffman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patient-derived+orthotopic+xenografts:+better+mimic+of+metastasis+than+subcutaneous+xenografts.">Patient-derived orthotopic xenografts: better mimic of metastasis than subcutaneous xenografts.</a> Nature Reviews Cancer. 15, 451 (2015).</li></ol>

Bu çalışmada kullanılan hücre 4T1-luc2, onların son derece invaziv doğa2,19 nedeniyle ilaçların antitümör ve antimetastatic etkileri yatırım için yararlı bir araç olan luciferase etiketleme ile fare üç kez negatif meme kanseri hücreleri vardır . Luciferases, hücre nesil için kararlı yaşam tümör göstermek için kullanılır hücreleri, her iki meme bezi ve diğer uzak organlara20. Bazı durumlarda, hipoksi ve koll...

Meme kanseri kadın ölüm dünya çapında önde gelen nedenidir. Onun giderek artan insidansı ile meme kanseri halk sağlığı1için ciddi bir sorun haline gelmiştir. Fare kanser modelleri preklinik ve klinik çalışmalar arasında iyi köprüler, ve iyi taklit fare hastalık manken hastalığı ve Tıp araştırma doğruluğunu artırmak.
Metastaz ve komplikasyonlar ana nedenleri ölüm ve zavallı yaşam nitelikleri çoğu kanser hastalarında ise birincil tümör büyüme malign hastalığı ilerlemesini başlatır. Birkaç fare modelleri patoloji insan meme kanseri2,3,4taklit etmek için kullanılır. Xenograft modelleri güvenliği ve etkinliği5,6,7için patolojik karakterleri anlamak kanser çalışma ve ekran uyuşturucu için yaygın olarak kullanılır. Genetik fareler (GEM) belirli oncogenes veya tümör baskılayıcı genler8hedefleyerek insan meme kanseri taklit etmek için oluşturulur. GEM kanserli devam eden genlerin rolünü anlamak için oldukça basit ve üniformalı bir arka plan var; Ancak, yapay çevre ve arka plan metastaz patoloji araştırmak için sınırlıdır ve ilgili tedaviler9. İnsan kanser hücrelerinin, insan patolojik özellikleri olsa da, sadece bağışıklık eksikliği farelerde implante olması ve tümör-host bağışıklık etkileşim yetmezligi önyargılı sonuçları10' a yol açabilir.
Nerede solid tümör başlatır hastalığı11,12,13biyolojik ve patolojik karakteri doğrudan bir etkisi vardır. Kanserli ilerleme tümör hücreleri, stromal hücreler, immünoloji hücreleri, inflamatuar hücreler, büyüme faktörleri ve proteaz arasındaki etkileşimler karmaşık sonucu olduğundan, birincil tümörleri implante in situ daha iyi hakkında bilgi sağlayan ve taklit kanserli işlem kimyasal maddeler veya subkutan enjeksiyon tümör tarafından indüklenen tümörler daha doğru bir şekilde hücreleri. Kimyasal ajanlar tümör ikna etmek için kullanılan araştırmacılar ve çevre için zararlı olabilir ve hatta bazı ülkelerde yasaklanmıştır. Gerçek meme kanseri hastalarda, kanser kaynaklanan ve meme yağ yastığı rahatsız bir meme yağ yastığı ortamı olmaması nedeniyle, ile Subkutan Enjeksiyon patolojik ilerlemesini farklı olabilir. Subkutan Enjeksiyon dezavantajları tümör büyüme çalışmaya orthotopic modelleri kullanımını teşvik etmek. Daha önceki araştırmalarda, yedi orthotopic nakillerine sonra geliştirilen son derece metastatik MDA-MB-231 tümörler enjeksiyon yeri14önemini belirtti. Son zamanlarda, meme kanseri hücrelerinin orthotopic implantasyonu ameliyatı ile meme yağ yastığı içine bildirilen15,16yaşındaydım. Meme pad çevre, tümör büyüme ve uzak organlara kapak tüm süreci içine geçiş patolojik olarak ilgili sitelerdeki meme kanserinin, hangi bu insan hastalıkları ilerlemenin bir minyatür modeli yapar. Ancak, ameliyattan sonra cilt otomatik olarak normal meme kanseri köken ile müdahale potansiyel riskini getirmek ve sonuçları önyargı kendini iyileştirmeye çalışır.
Biz bazı meme kanser modelleri karşılaştırıldığında ve minimal invaziv orthotopic manken meme kanseri ilerleme17,18potansiyel etkisi ilaç araştırmak için kuruldu. Bu çalışmada orthotopically için nasıl bir video iletişim kuralı basit meme yağ yastığı içine meme kanseri hücreleri enjekte, daha az invazif şekilde sunulmuştur. Orthotopic ekleme Buyöntem ameliyat olmadan birçok yönden avantajlı olduğunu. İlk olarak, işlemi basit ve hızlı, fare başına yaklaşık 1 dakika eder. İkincisi, şu patolojik sitelerinde başlayan birincil tümör foci ile meme kanseri ilerleme tümör büyüme eğitimi için iyi bir deneysel hayvan modeli sağlar diğer organlara metastaz bütün tumorigenic sürecini kapsar tümör hücreleri ve tümör microenvironment etkileşim. Ayrıca, tedavisinin etkileri meme kanseri her aşamasında tahmin etmek için değerli bir model olabilir. Bu yöntem maximumly kopyalama insan meme kanseri ilerleme için Hayvansal bir modeli sağlamak için hedeftir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:652px;" width="653">
	<tbody>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">anesthesia machine</td>
			<td style="width:235px;">Midmark Corporation, Dayton, OH, USA</td>
			<td style="width:96px;">Matrx VMS</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:149px;">In-Vivo Imaging System</td>
			<td style="width:235px;">PerkinElmer</td>
			<td style="width:96px;">IVIS Spectrum</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:43px;width:149px;">&#160;isoflurane</td>
			<td style="width:235px;">Hebei yipin chemical reagents&#160; company</td>
			<td style="width:96px;">O21400</td>
			<td style="width:172px;">anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">1 ml syringe</td>
			<td style="width:235px;">Becton,Dickinson and&#160; Company</td>
			<td style="width:96px;">A257</td>
			<td style="width:172px;">cell injection</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:49px;width:149px;">digital caliper</td>
			<td style="width:235px;">Shang Hai Shen Han Measuring Tools Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">S-H</td>
			<td style="width:172px;">volume measurement</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">tramadol</td>
			<td style="width:235px;">Mundipharma company</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">pain killer</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">D-luciferin</td>
			<td style="width:235px;">Gold Biotechnology Inc.</td>
			<td style="width:96px;">LUCK-1G</td>
			<td style="width:172px;">used for bioluminescence detecion</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:52px;width:149px;">The primary antibody against cluster of differentiation (CD) 31</td>
			<td style="width:235px;">Abcam</td>
			<td style="width:96px;">&#160;ab28364</td>
			<td style="width:172px;">used for MVD detection</td>
		</tr>
		<tr height="66">
			<td height="66" style="height:67px;width:149px;">hematoxylin and eosin staining kit</td>
			<td style="width:235px;">&#160;Beijing Zhong Shan Jinqiao Biotechnology Co., Ltd.</td>
			<td style="width:96px;">ZLI-9615</td>
			<td style="width:172px;">histology&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:149px;">hair removal cream</td>
			<td style="width:235px;">Veet</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">hair removal cream</td>
		</tr>
		<tr height="46">
			<td height="46" style="height:47px;width:149px;">Carbomer Eye Gel</td>
			<td style="width:235px;">Dr.GerhardMannChem-Pharm.FabrikGmbH</td>
			<td style="width:96px;">-</td>
			<td style="width:172px;">ophthalmic ointment</td>
		</tr>
		<tr height="59">
			<td height="59" style="height:59px;">sewing needle</td>
			<td style="width:235px;">Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd.&#160;</td>
			<td>17U0302J</td>
			<td style="width:172px;">suture</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

orthotopic injection of breast cancer cells into the mice mammary fat pad

Uygun bir hayvan modeli daha iyi hastalıkları anlamak için önemlidir. Hayvan farklı Yöntemler (subkutan enjeksiyon, xenografts, genetik manipülasyon, kimyasal reaktifler indüksiyon, vb) tarafından kurulan modelleri çeşitli patolojik karakterler var ve bazı yönlerini araştırıyor içinde önemli rol oynarlar hastalıklar. Her ne kadar tek modeli tamamen bütün insan hastalık ilerleme taklit edebilen, orthotopic organları hastalık modelleri ile uygun bir stromal ortam hastalıkları anlama ve potansiyel uyuşturucu için eleme yeri doldurulamaz bir rol oynamaktadır. Bu makalede, basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine meme kanseri hücrelerinin implant ve uzak organlara metastaz izleyin nasıl açıklar. Birincil tümör büyüme, meme ve meme patolojik değişiklikler uygun özellikleri ve yüksek bir diğer organlara metastaz oluşumunu ile bu model maximumly insan meme kanseri ilerleme taklit eder. Birincil tümör büyüme in situ, uzun-uzak metastaz ve tümör microenvironment meme kanserinin bu modelini kullanarak araştırdı.

Sonra başarılı bir enjeksiyon, bir beyaz şeffaf düz küre meme başı ile dışarı yuvarlak yüzey Merkezi (Şekil 1) görülebilir. Birincil tümör büyüme tümör hacmi ve yaşam tümör tarafından ölçülebilir bioluminescence (Şekil 2) hücre. Tümör hacmi ve toplam akı deneme önce rezeksiyon sırasında arttı. Erken bir aşamada metastaz güçlü kollarındaki sinyaller birincil tümör küçük metastaz foci ...

Watch this Scientific Journal Video about Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad at JoVE.com 

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad (Video) | JoVE 

Burada, biz meme kanseri hücrelerinin basit, daha az invaziv ve ele kolay bir şekilde meme yağ yastığı içine implant için bir protokol mevcut ve bu fare orthotopic meme kanseri model uygun meme yağ yastığı yapısına sahip çeşitli yönlerini incelemek için kullanılabilir kanser.

Fareler meme yağ yastığı içine meme kanser hücrelerinin Orthotopic enjeksiyon

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Bu yöntem, mikroçevretümör büyümesini nasıl desteklediği veya belirli bir ilacın meme kanserinin ilerlemesini etkili bir şekilde engelleyip engelleyemeyeceği konusunda kanser alanındaki anahtar soruların yanıtlatılabiliyor. Tümör indüksiyon tekniğinin en önemli avantajları hiçbir cerrahi gerekli olduğunu ve hangi yerinde meme kanseri kurmak için daha az invaziv bir şekilde olmasıdır. Bu tekniği kullanarak, tümör hücreleri meme yağ yastığı içinde büyümek, uygun doku ortamında, daha yakından deri altı enjeksiyon veya fare hücrelerine ksenogreft daha insan meme kanseri ilerlemesini taklit.Ke-Xin Cao, teknisyenimiz ve ben, Gan-Lin Zhang'a bu prosedürü göstermede yardımcı olacağız. Operasyondan bir gün önce, alıcı fareyi elle dizginle ve dördüncü meme uçlarının etrafında tıraş olmak üzere hayvanın göbek tarafını kürke çevirin. Kürkü ince bir tüy dökücü krem tabakası ile silin.30 ila 60 saniye sonra krem kaldırmak ve yumuşak kağıt havlu ile fare kuru distile su kullanın. Operasyon günü, buz üzerinde steril bir mikrosantrifüj tüp, PBS konsantrasyonu mililitre başına beş hücre iki kez on için murine meme kanseri hücre süspansiyon seyreltmek. Her enjeksiyondan önce, fare başına 50 mikrolitre hücre içeren 45'e 16 iğneile donatılmış bir mililitreşli şırınga yükleyin.Ve her uyuşturulmuş hayvanayak çimdik yanıt eksikliği onaylamak. Hayvanın gözlerine merhem uygulayın ve şırınganın takip etmesi için bir tünel oluşturmak için ilk farenin dördüncü meme ucunun etrafındaki deriyi çadırlamak için cımbız kullanın. Boyun eğdirici ile şırınga tutun yukarı bakacak ve subkutan meme beş ila 10 milimetre deri girin, iğne ucu neredeyse meme ulaşana kadar tünel aşağıdaki.İlk meme etrafında cilt çadır cımbız kullanarak şırınga takip etmek için bir tünel oluşturur. İğne cızırtıcı uçları arasına girilmeli ve dokuiçine depresif yerine yukarı kaldırılmalıdır. Dikkatle bevel meme altında olana kadar meme yağ pediçine iğne ucu yukarı hareket ettirin ve kanser hücrelerinin yavaş bir enjeksiyon sağlamak için cilt çadırı bırakın.Yerleştirimi üzerine, dikkatle bevel meme altında olana kadar meme yağ pediçine iğne ucu kadar hareket ettirin. Ve doğru yere hücrelerin teslimini sağlamak için direnç hissedeceksiniz. Tüm hücreler enjekte edildiğinde, iğneyi hafifçe yana çevirin ve şırıngayı yavaşça geri çekin.Hiçbir sıvı sızıntısı yapmak için, 10 ila 20 saniye boyunca iğne yarasına basınç uygulamak için bir pamuklu bez kullanın. Enjekte edilen meme ucu, merkezinde meme ucu ile, şeffaf, beyaz, düz küre olarak görünmelidir. Tümör hacmini belirlemek için, fare göbek tarafını dizginlemek ve tümör uzunluğu ve genişliğini ölçmek için bir kaliper kullanın.Tümörün biyolüminesansını yakalamak için, görüntülemeden 10 dakika önce farenin boynunun arkasına kilogram başına 150 miligram D-luciferin enjekte edin. Ve uygun biyolüminesans görüntüleme parametreleri altında primer tümör ve metastazbiyolüminesans görüntüleri yakalamak. Uygun deneysel zaman noktasında, deriden tümör hasat makas kullanın.Ve ameliyat sonrası ağrıyı dindirmek için cerrahi bölgeye analjezik solüsyon uygulayın. Daha sonra standart protokollere göre cerrahi dikişler ile cildi kapatın. Hayvan Tam iyileşme kadar izleme ile bir ısınma lambası altında kurtarmak için izin verin.Birincil tümörü iki eşit parçaya kesmek için neşter kullanın. Sonraki hematoksilin ve eozin boyama ve immünohistokimya için% 4 paraformaldehit dokunun doku yarısı saklayın. Batı lekeleme veya RNAi izolasyon için sıvı nitrojen diğer yarısını dondurun.Uygun deneysel uç noktada standart diseksiyon protokollerine göre akciğerleri hasat ve PBS organ yıkayın. Sonra hematoksilin ve eozin boyama ile metastazı doğrulamak için% 4 paraformaldehit akciğerleri düzeltmek. Primer tümör büyümesi tümör hacmi ve yaşayan tümör hücreli biyolüminesans ile ölçülebilir, gösterildiği gibi.Ya sekonder tümör kurulmamıştır ya da primer tümörün güçlü biyolüminesans sinyalleri zayıf sinyallerle küçük metastatik fosi saptanabilir. Rezeksiyondan sonra uzak organların metastatik focisinden gelen biyolüminesans sinyali tespit edilip analiz edilebilir. Hem primer meme tümörü hem de akciğer kesitlerinin hem atokoksilin hem de eozin boyama ile morfolojisinin analizi, tümör hücresi aşılanmış hayvanlarda anti-CD31 mikrodamar belirteci boyama ile kanıtlandıkça artmış anjiyogenezin ortaya çıkar.Bu işlemi denerken, tümör hücrelerini teslim etmeden önce iğne ucunun doğru yerde olduğundan emin olmak önemlidir. Bu prosedürü takiben, atomizers, hayvan ultrason gibi, in vivo primer tümörün mesane takviyesi hakkında ek sorulara cevap için yapılabilir. Bu teknik, gelişiminden sonra tümörigenez ve tümörigenez ile ilgili temel faktörlerin ve yolların araştırılmasında ilaç geliştirme alanında araştırmacıların önünü açmış ve murine hayvan modellerinde anti-kanser ilacının mekanizmalarının araştırılmasını sağlar.Isofluran veya diğer gaz anestezisi ile çalışmanın dozunun son derece zor olabileceğini ve aktif karbon maskesi kullanmak gibi önlemlerin bu işlemi yaparken her zaman alınması gerektiğini unutmayın.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures (Video) | JoVE 

İşlevsel Genomik Tarama kullanılması Kanser Hücre Sfero Kültürleri Potansiyel Yeni İlaç Hedefleri Belirlemek İçin

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer (Video) | JoVE 

Bir Portal Ven Enjeksiyon Modeli Karaciğer Metastazı Meme Kanseri Eğitim için

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish (Video) | JoVE 

Embriyonik Zebra balığı İnsan Kanser Hücrelerinin İnvazif Davranış

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal (Video) | JoVE 

Apoptozis ters sonra yeni kurulan meme kanser kök hücre benzeri hücre akış sitometrik algılama

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland

Modeling Breast Cancer via an Intraductal Injection of Cre-expressing Adenovirus into the Mouse Mammary Gland (Video) | JoVE 

CRE-ifade Adenovirus fare mammary bezi içine bir Intraductal enjeksiyon yoluyla meme kanseri modelleme

Breast cancer is a heterogeneous disease, possibly due to complex interactions between different cells of origins and oncogenic events. Mouse models are ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model (Video) | JoVE 

Ortotopik Meme Kanseri Modeli Kullanarak Üçlü Negatif Meme Kanseri Eğitimi

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad

Rat Mammary Epithelial Cell Transplantation into the Interscapular White Fat Pad (Video) | JoVE 

Interscapular Beyaz Yağ Ped içine Rat Mammary Epitel Hücre Nakli

As early as the 1970s, researchers have successfully transplanted mammary epithelial cells into the interscapular white fat pad of rats. Grafting mammary ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer (Video) | JoVE 

Meme Kanseri için Preklinik Modeller Olarak Meme Tümörlerinin Ortopedik Transplantasyonu

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells

Modeling Brain Metastasis Via Tail-Vein Injection of Inflammatory Breast Cancer Cells (Video) | JoVE 

İnflamatuar Meme Kanseri Hücrelerinin Kuyruk-Ven Enjeksiyonu ile Beyin Metastazının Modellenmesi

Metastatic spread to the brain is a common and devastating manifestation of many types of cancer. In the United States alone, about 200,000 patients are ...

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research

Mammary Epithelial and Endothelial Cell Spheroids as a Potential Functional In vitro Model for Breast Cancer Research (Video) | JoVE 

Meme Kanseri Araştırmaları için Potansiyel Fonksiyonel In vitro Model Olarak Meme Epitel ve Endotel Hücre Sferoidleri

Breast cancer is the leading cause of mortality in women. The growth of breast cancer cells and their subsequent metastasis is a key factor for its ...