Name: detection of a circulating microrna custom panel in patients with metastatic colorectal cancer
Uploaded: 2019-03-14T13:00:00
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इस अध्ययन को आंशिक रूप से roche स्पा और इतालवी दवाओं एजेंसी (aifa) द्वारा वित्त पोषित किया गया ।

नोट: अच्छा प्रयोगशाला अभ्यास (जीएलपी) के अनुसार एक निष्फल धूआं हुड के तहत निम्न चरणों के सभी प्रदर्शन.
1. प्लाज्मा संग्रह और भंडारण
<ol><li>एक K3E edta ट्यूब में परिधीय रक्त नमूना के 3 मिलीलीटर ले ?...

<ol>
	<li>Luo, H. -. Y., Xu, R. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictive+and+prognostic+biomarkers+with+therapeutic+targets+in+advanced+colorectal+cancer.">Predictive and prognostic biomarkers with therapeutic targets in advanced colorectal cancer.</a> World journal of gastroenterology. 20 (14), 3858-3874 (2014).</li><li>Toiyama, Y., Okugawa, Y., Fleshman, J., Richard, C., Goel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+as+potential+liquid+biopsy+biomarkers+in+colorectal+Cancer:+A+systematic+review.">MicroRNAs as potential liquid biopsy biomarkers in colorectal Cancer: A systematic review.</a> BBA Reviews on Cancer. 5 (6), (2018).</li><li>Kok, M. G. M., Halliani, A., Moerland, P. D., Meijers, J. C. M., Creemers, E. E., Pinto-Sietsma, S. 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mirnas छोटे गैर कोडिंग कर रहे हैं rnas (लंबाई में 18-25 न्यूक्लियोटाइड) 3 ' अपने लक्ष्य दूत आरएनए के utr क्षेत्र बाध्यकारी और बाधा और/ वे इस प्रकार शोधों स्तर पर जीन अभिव्यक्ति नियामकों माना जा सकता है । पिछले दशक में, ?...

CRC तीसरी सबसे अक्सर निदान द्रोह और कैंसर से संबंधित मौत का चौथा कारण दुनिया भर में प्रतिनिधित्व करता है । तिथि करने के लिए, bevacizumab (बी), एक मोनोक्लोनल संवहनी-endothelial वृद्धि कारक (vegf) के खिलाफ निर्देशित एंटीबॉडी, और सीटुक्जीमैब (सी) या panitumumab (पी), मोनोक्लोनल एपिडर्मल वृद्धि कारक रिसेप्टर (egfr) के खिलाफ निर्देश एंटीबॉडी, के लिए अनुमोदित कीमोथेरेपी (सीटी) regimens के साथ संयोजन में पहली पंक्ति उपचार ।
K-ras और N-ras जीन में परिवर्तन केवल नैदानिक रूप से उपयोगी बायोमार्कर हैं, जो उन रोगियों की पहचान करने में सक्षम हैं, जिन्हें एंटी-ईजीएफआर-आधारित सीटी से कम लाभ होने की संभावना है । हालांकि कई अध्ययनों के लिए बायोमार्कर कि बी के जवाब की भविष्यवाणी कर रहे है के लिए खोज आयोजित किया गया है सीटी आधारित है, वहां अभी भी नैदानिक अभ्यास1में उपयोग के लिए विश्वसनीय और प्रभावी दवाओं की एक पर्याप्त कमी है ।
mirnas छोटे rnas (लंबाई में 18-25 ंयूक्लियोटाइड) कर रहे है कि लक्ष्य जीन के अनुवाद को विनियमित और कई फिजियोथोलॉजिकल प्रक्रियाओं में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, भ्रूणविज्ञान और कैंसरजनन सहित । ये अणु प्लाज्मा/सीरम, मूत्र और थूक जैसे जैविक तरल पदार्थों में अत्यधिक स्थिर होते हैं, जो गैर-इनवेसिव नमूनाकरण2के लिए उपयोग करने के लिए मजबूत बायोमार्कर को रेंडर करते हैं । एंजियोजेनिक मार्ग में शामिल mirnas के एक पैनल का उपयोग करना, हम एक बी आधारित सीटी आहार के साथ इलाज मेटास्टेटिक सीआरसी (mcrc) के साथ रोगियों में नैदानिक परिणाम की भविष्यवाणी करने में सक्षम नए घूम बायोमार्कर की पहचान करने के उद्देश्य से.
हम की एक श्रृंखला का विश्लेषण ५२ mcrc रोगियों के भीतर बी आधारित सीटी के साथ इलाज किया भावी multicenter यादृच्छिक चरण III परीक्षण "इतालवी परीक्षण उन्नत कोलोरेक्टल कैंसर में" (itaca). वर्तमान प्रोटोकॉल स्थानीय नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था (comitato ईटीको क्षेत्र vasta ई इस्टिट्युटो scientifico romagnolo प्रति लो स्टूडियो ई ला cura देई तुमोरी (irst) irst, नहीं ६७४) 19वें सितंबर को २००७ । सभी मरीजों को ब्लड सैंपल कलेक्शन से पहले सूचित सहमति दे दी । प्रत्येक रोगी के लिए, शिरापरक रक्त के नमूने उपचार से पहले एकत्र किए गए थे और पहली नैदानिक मूल्यांकन (8 सप्ताह के बाद) में रोगी परिणाम के संबंध में उपचार के दौरान आधारभूत mirna अभिव्यक्ति और इसके मॉडुलन का मूल्यांकन करने के लिए ।
साहित्य की एक खोज के माध्यम से, हम 21 mirnas एंजियजेनिक प्रक्रिया है कि मानव प्लाज्मा में detectable होने के लिए जाना जाता है के साथ सहसंबद्ध का चयन किया: है-मीर-१०७, है-मीर-126-3p, है-मीर-145-5p, है-मीर-194-5p, है-मीर-199a-5p, है-मीर-200b-3p, है-मीर-20b-5p , है-मीर-21-5p, है-मीर-210-3p, है-मीर-221-3p, है-मीर-24-3p, है-मीर-27a-3p, है-मीर-29b-3p, है-मीर-335-5p, है-मीर-424-5p, है-मीर-497-5p, है-mir-520d-3p, है-मीर-92a-3p, है-mir-17-5p और है-मीर-155-5p । हम भी चुना है-मीर-223-3p और है-मीर-४८४ अंतर्जात सामान्यीकरण के लिए3,4,5,6, और cel-मीर-३९ exogenous सामान्यीकरण के लिए एक स्पाइक के रूप में सी एलिगेंस से शुद्ध. सभी डेटा normalizations का उपयोग किया गया 2 ̂ ̄ (...) विधि ।
प्रसारित mirnas का पता लगाने के कुछ तकनीकी कठिनाइयों प्रस्तुत करता है क्योंकि अणुओं प्लाज्मा में बहुत कम स्तर पर मौजूद हैं और उनके प्रवर्धन रासायनिक उनके छोटे अनुक्रम दिया चुनौतीपूर्ण है. इन कारणों के लिए, हम एक प्रक्रिया है कि phenol और एक गिलास फाइबर कॉलम आधारित कार्यप्रणाली के साथ दोनों कार्बनिक निष्कर्षण समझता है का चयन किया । प्रसारित mirna निष्कर्षण तरल बायोप्सी के क्षेत्र में एक गर्म विषय है, और हम एक वाणिज्यिक किट है कि राशि और बरामद पैदावार7,8की गुणवत्ता के मामले में सबसे विश्वसनीय में से एक होना दिखाया गया है का चयन किया । हम 5 पर एक एडाप्टर के अलावा द्वारा प्रतिलेखन mirnas रिवर्स करने के लिए एक प्रोटोकॉल का चयन ' और एक पाली (एक) पूंछ के लिए 3 ' परिपक्व mirnas की चयनात्मकता और प्रतिक्रिया की विशिष्टता बढ़ाने के लिए.
विधि की मजबूती को देखते हुए, हमने आरटी-पीसीआर के लिए पूर्व-देखा जांच के साथ कस्टम प्लेट को डुप्लिकेट में प्रत्येक नमूने का आकलन करने के लिए डिजाइन किया है और प्रत्येक थाली के भीतर 2 रोगियों का विश्लेषण, जैसा कि चित्रा 1में दिखाया गया है ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Rnase-free Safe-lock 1.5 mL tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030 123.328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rnase-free Safe-lock 2 mL tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030 123.344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rnase-free 20 &#181;L tips</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>S1123-1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rnase-free 200 &#181;L tips</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>S1120-8810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rnase-free 1000 &#181;L tips</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>S1122-1830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mirVana PARIS RNA and Native Protein Purification Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AM1556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A28007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% ethanol anidrous ACS grade</td>
			<td>Carlo Erba Reagents</td>
			<td>414605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercapto-ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Fast Advanced Master Mix</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>4444558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Advanced miRNA Assays</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A25576</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7500 Real-Time PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4406984</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2-2, 1-10, 2-20, 20-200, 100-1000 &#181;L laboratory pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop microcentrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop heating block</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fume hood</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2 mL PCR tubes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of a circulating microrna custom panel in patients with metastatic colorectal cancer

नैदानिक अभ्यास के लिए विश्वसनीय और उपयोगी बायोमार्कर की आवश्यकता पैदा करने, कैंसर निदान, रोग का निदान और चिकित्सीय निगरानी के लिए तरल बायोप्सी में रुचि बढ़ रही है । यहाँ, हम निकालने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत, रिवर्स ट्रांसक्राइब और कोलोरेक्टल कैंसर (सीआरसी) के साथ रोगियों के प्लाज्मा नमूनों से mirnas परिसंचारी के अभिव्यक्ति के स्तर का मूल्यांकन. micrornas (mirnas) गैर की एक कक्षा हैं-कोडिंग rnas की लंबाई में 18-25 न्यूक्लियोटाइड की अभिव्यक्ति को विनियमित करने के लिए लक्ष्य जीन शोधों स्तर पर और एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाते हैं, सहित कि समर्थक और विरोधी एंजियोजेनिक समारोह के फिजियोथोलॉजी में विभिन्न अंगों । mirnas इस तरह के सीरम और प्लाज्मा के रूप में जैविक तरल पदार्थ में स्थिर हैं, जो उन्हें कैंसर निदान, रोग का निदान और उपचार निर्णय लेने और निगरानी के लिए आदर्श परिचालित बायोमार्कर renders. मिरना निष्कर्षण परिचालित एक तेजी से और प्रभावी तरीका है कि दोनों कार्बनिक और कॉलम-आधारित तरीके शामिल है का उपयोग किया गया । mirna retrotranscription के लिए, हम एक बहु कदम प्रक्रिया है कि 3 पर polyadenylation समझता है ' और परिपक्व mirna के 5 ' पर एक एडाप्टर के बंधाव, यादृच्छिक mirna पूर्व प्रवर्धन द्वारा पीछा किया । हम एक 24 mirna कस्टम पैनल का चयन करने के लिए मात्रात्मक वास्तविक समय पोलीमरेज़ श्रृंखला प्रतिक्रिया (qrt-पीसीआर) द्वारा परीक्षण किया और सरणी कस्टम प्लेटों पर mirna जांच देखा । हमने qrt-पीसीआर प्लेट का प्रदर्शन रीयल-टाइम पीसीआर सिस्टम पर चलता है । मानक के लिए हाउसकीपिंग mirnas का उपयोग कर genorm सॉफ्टवेयर (v. ३.२) का चयन किया गया । डेटा अभिव्यक्ति सुइट सॉफ्टवेयर (v १.१) का उपयोग कर विश्लेषण किया गया और सांख्यिकीय विश्लेषण किया गया । विधि विश्वसनीय और तकनीकी रूप से मजबूत साबित हुई और प्लाज्मा और/या सीरम जैसे तरल नमूनों में बायोमार्कर के स्तर का मूल्यांकन करने के लिए उपयोगी हो सकता है ।

हम एक ५२ mcrc रोगियों में प्रगति से मुक्त अस्तित्व (pfs), समग्र अस्तित्व (ओएस) और उद्देश्य प्रतिक्रिया दर (orr) के संबंध में एंजियोजेनेसिस से संबंधित परिसंचारी mirnas के एक पैनल का विश्लेषण बी आधारित सी?...

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Detection of a Circulating MicroRNA Custom Panel in Patients with Metastatic Colorectal Cancer

हम कैंसर रोगियों से प्लाज्मा नमूनों में माइक्रोना (mirnas) परिसंचारी के अभिव्यक्ति के स्तर का मूल्यांकन करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । विशेष रूप से, हम mirna निष्कर्षण और रिवर्स transcription परिचालित के लिए एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट का इस्तेमाल किया । अंत में, हम वास्तविक समय पूर्व देखा जांच कस्टम प्लेटों का उपयोग कर 24 चयनित mirnas के एक पैनल का विश्लेषण किया ।

मेटास्टेटिक कोलोरेक्टल कैंसर के साथ रोगियों में एक परिसंचारी microrna कस्टम पैनल का पता लगाने

There is increasing interest in liquid biopsy for cancer diagnosis, prognosis and therapeutic monitoring, creating the need for reliable and useful ...

यह विधि ट्रांसलेशनल रिसर्च फील्ड में महत्वपूर्ण सवालों के जवाब देने में मदद कर सकती है, जैसे परिसंचारी बायोमार्कर और रोगी पूर्वानुमान के बीच संबंध। इस तकनीक का मुख्य लाभ इनपुट सामग्री की कम मात्रा के साथ एक आसान और विश्वसनीय पद्धति के साथ परिसंचारी बायोमार्कर के एक पैनल की अभिव्यक्ति का मूल्यांकन करने का मौका है। इस तकनीक के निहितार्थ कैंसर रोगियों की चिकित्सा की ओर विस्तार क्योंकि यह निर्णय लेने और रोगियों के उपचार की निगरानी में उपयोगी परिसंचारी बायोमार्कर की पहचान कर सकता है ।इसके अलावा, यह विधि बायोमार्कर विश्लेषण को प्रसारित करने में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकती है। इसे अन्य प्रणालियों पर भी लागू किया जा सकता है, जैसे रोग के आणविक लक्षण वर्णन के लिए ऊतक बायोमार्कर अभिव्यक्ति विश्लेषण। इस विधि का दृश्य प्रदर्शन महत्वपूर्ण है, क्योंकि निष्कर्षण चरणों को सीखना मुश्किल है।शुरू करने के लिए, प्लाज्मा नमूने के 400 माइक्रोलीटर को आरएनएसई-मुक्त, दो मिलीलीटर ट्यूब में स्थानांतरित करें। फिर, ट्यूब में 400 माइक्रोलीटर को डेन्चरिंग समाधान जोड़ें। एक नैनोमोलर स्पाइक-इन के चार माइक्रोलीटर जोड़ें।घोल मिलाने के बाद इसमें एसिड फिनॉल-क्लोरोफॉर्म के 800 माइक्रोलीटर डालें। भंवर 60 सेकंड के लिए समाधान, और 15 मिनट के लिए अधिकतम गति से अपकेंद्रित्र। इसके बाद, ऊपरी जलीय चरण में निहित लिसेट को एक साफ ट्यूब में स्थानांतरित करें, इस बात का ध्यान रखें कि इंटरफेज परेशान न हो।बरामद जलीय चरण की मात्रा को मापें, और लिस्एट में इथेनॉल की 1/3 मात्रा जोड़ें। फिर, एक ताजा संग्रह ट्यूब में एक फिल्टर कारतूस रखें। इथेनॉल-lysate मिश्रण के 700 माइक्रोलीटर तक फिल्टर कारतूस में स्थानांतरित करें।10, 000 बार गुरुत्वाकर्षण पर 30 सेकंड के लिए फिल्टर कारतूस अपकेंद्रित्र। इसके बाद, प्रवाह के माध्यम से कुल मात्रा को मापें। फिर, फिलट्रेट में इथेनॉल की मात्रा का 2/3 जोड़ें, और अच्छी तरह से मिलाएं।एक ताजा संग्रह ट्यूब में एक दूसरे फिल्टर कारतूस रखें। फिर, नमूने के 700 माइक्रोलीटर को कारतूस में स्थानांतरित करें, और प्रवाह को त्यागने से पहले 30 सेकंड के लिए 10, 000 बार गुरुत्वाकर्षण पर सेंट्रलाइज करें। फिल्टर कारतूस के लिए माइक्रोआरएनए धोने के समाधान के 700 माइक्रोलीटर जोड़ें, और 15 सेकंड के लिए 10, 000 बार गुरुत्वाकर्षण पर एक संग्रह ट्यूब के साथ इसे अपकेंद्रित्र।प्रवाह के माध्यम से त्यागें, और फिल्टर कारतूस एक ही ट्यूब में वापस डाल दिया। इसके बाद, फिल्टर कारतूस को एक नए संग्रह ट्यूब पर ले जाएं। फिर, कारतूस के लिए प्रीहीटेड एल्यूशन समाधान के 100 माइक्रोलीटर जोड़ें।microRNAs को ठीक करने के लिए 30 सेकंड के लिए 10, 000 बार गुरुत्वाकर्षण पर फिल्टर कारतूस अपकेंद्रित्र। टेक्स्ट प्रोटोकॉल के अनुसार पॉलीएडेनिलेशन रिएक्शन मिक्स कॉकटेल तैयार करें। एक प्रतिक्रिया प्लेट के प्रत्येक कुएं में नमूने के दो माइक्रोलीटर स्थानांतरित करें।फिर, प्रत्येक अच्छी तरह से प्रतिक्रिया कॉकटेल के तीन माइक्रोलीटर जोड़ें। भंवर और अपकेंद्रित्र सामग्री नीचे स्पिन करने के लिए संक्षेप में थाली। इसके बाद, प्लेट को थर्मल साइकिलर में रखें, और टेक्स्ट प्रोटोकॉल में उल्लिखित प्रक्रिया का पालन करें।लिगेशन रिएक्शन मिक्स कॉकटेल को सेंट्रलाइज ट्यूब में तैयार करें। इसके बाद, रिएक्शन प्लेट के प्रत्येक कुएं में कॉकटेल के 10 माइक्रोलीटर जोड़ें। फिर, एक मिनट के लिए 1, 900 आरपीएम पर एक शेखर पर प्रतिक्रिया प्लेट की सामग्री मिलाएं, इसके बाद प्लेट का एक संक्षिप्त अपकेंद्रित्र करें।इसके बाद, प्रतिक्रिया प्लेट को थर्मल साइकिलर में रखें, और टेक्स्ट प्रोटोकॉल में उल्लिखित प्रक्रिया का पालन करें। रिवर्स ट्रांसक्रिप्शन रिएक्शन करने के लिए, टेक्स्ट प्रोटोकॉल के अनुसार एक अपकेंद्रित्र ट्यूब में रिएक्शन मिक्स तैयार करें। फिर, लिगेशन उत्पाद युक्त प्लेट के प्रत्येक कुएं में मिश्रण के 15 माइक्रोलीटर जोड़ें।एक मिनट के लिए 1, 900 आरपीएम पर एक शेखर पर प्लेट की सामग्री मिलाएं, इसके बाद प्लेट का एक संक्षिप्त अपकेंद्रित्र करें। इसके बाद, प्लेट को थर्मल साइकिलर में रखें, और टेक्स्ट प्रोटोकॉल में उल्लिखित प्रक्रिया का पालन करें। फिर, एमआईआर-Amp रिएक्शन मिक्स तैयार करें, और एक नई प्रतिक्रिया प्लेट के प्रत्येक कुएं में मिश्रण के 45 माइक्रोलीटर जोड़ें।इसके बाद, रिएक्शन प्लेट के प्रत्येक कुएं में आरटी उत्पाद के पांच माइक्रोलीटर जोड़ें। एक मिनट के लिए 1, 900 आरपीएम पर एक शेखर पर प्लेट मिलाएं, इसके बाद प्लेट का एक संक्षिप्त अपकेंद्रित्र करें। फिर, प्लेट को थर्मल साइकिलर में रखें, और टेक्स्ट प्रोटोकॉल की तालिका में उल्लिखित प्रक्रिया का पालन करें।सबसे पहले, ते बफर में प्रत्येक सीडीएनए नमूने को पतला करें। इसके बाद पीसीआर रिएक्शन मिक्स को सेंट्रलाइज ट्यूब में तैयार करें। अधिक मात्रा में 10% जोड़ना।प्लेट के प्रत्येक कुएं में प्रतिक्रिया मिश्रण के 19 माइक्रोलीटर स्थानांतरित करें। प्लेट को सील करें, और इसे संक्षेप में अपकेंद्री करें। अंत में, एक आरटी-पीसीआर सिस्टम पर थर्मल प्रोटोकॉल करें, जैसा कि टेक्स्ट प्रोटोकॉल की तालिका दो में उल्लिखित है।स्पाइक-इन नियंत्रण के धारावाहिक कमजोर पड़ने का प्रदर्शन किया गया ताकि यह चुनना हो कि इस विशेष मामले श्रृंखला के सभी प्लाज्मा नमूनों में जोड़ने के लिए सबसे अच्छी एकाग्रता थी। इस प्रोटोकॉल के लिए धन्यवाद, हर एक रोगी में सभी बायोमार्कर का मूल्यांकन करना संभव था, साथ ही समग्र मामले श्रृंखला में एक ही बायोमार्कर भी। इस प्रोटोकॉल में, प्रगति-मुक्त अस्तित्व, समग्र अस्तित्व और उद्देश्य प्रतिक्रिया दर के संबंध में एंजियोजेनेसिस से संबंधित परिसंचारी miRNAs के एक पैनल का विश्लेषण कोलोरेक्टल कैंसर के रोगियों में किया गया था जो कीमोथेरेपी रेजिमेन के साथ इलाज किया गया था।बेसलाइन और पहले नैदानिक मूल्यांकन के बीच मिरना के अभिव्यक्ति के स्तर की तुलना करते हुए, आईएस-एमआईआर-155-5p में वृद्धि देखी गई। यह वृद्धि छोटे पीएफएस और ओएस से जुड़ी थी। इस प्रक्रिया का प्रयास करते समय, एक धुएं हुड के तहत फिनॉल-क्लोरोफॉर्म का उपयोग करके चरणों को करना याद रखना महत्वपूर्ण है। इस प्रक्रिया के बाद, परिसंचारी प्रोटीन या कोडिंग आरएनए के अलगाव और विश्लेषण जैसे अन्य तरीकों को अतिरिक्त प्रश्नों का उत्तर देने के लिए किया जा सकता है, जैसे परिसंचारी बायोमार्कर के अधिक संपूर्ण पैनल का मूल्यांकन।इसके विकास के बाद, इस तकनीक ने तरल बायोप्सी के क्षेत्र में शोधकर्ताओं के लिए कैंसर रोगियों में परिसंचारी बायोमार्कर की अभिव्यक्ति का पता लगाने का मार्ग प्रशस्त किया। यह न भूलें कि रक्त और रासायनिक अभिकर् यओं के साथ काम करना बेहद खतरनाक हो सकता है, और इस प्रक्रिया को निष्पादित करते समय दस्ताने और प्रयोगशाला कोट जैसी सावधानियां हमेशा ली जानी चाहिए।

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

जिगर में कोलोरेक्टल मेटास्टेसिस के उन्नत पशु मॉडल: इमेजिंग तकनीक और metastatic क्लोन का गुण

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

पूर्व नैदानिक ​​चिकित्सा के मात्रात्मक और अनुदैर्ध्य मूल्यांकन के लिए एक syngeneic माउस प्रक्षेपि के मॉडल गुर्दे सेल कार्सिनोमा

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

कोलोरेक्टल कैंसर के ऑर्थोटोपिक माउस मॉडल में ट्यूमर कोशिकाओं को प्रसारित करने का अलगाव

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

स्पोराडिक कोलोरेक्टल कैंसर का आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

ऑस्टियो में फेफड़े के मेटास्टेसिस परख का उपयोग मेटास्टेटिक फेफड़ों औपनिवेशीकरण अध्ययन में व्यावहारिक विचार

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

चूहे में ट्यूमर की वृद्धि को कम करने के लिए MicroRNA के Vivo निषेध में

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection

स्टूल डीएनए इंटीग्रिटी डिटेक्शन द्वारा कोलोरेक्टल कैंसर जोखिम और व्यापकता का मूल्यांकन

Nowadays, stool DNA can be isolated and analyzed by several methods. The long fragments of DNA in stool can be detected by a qPCR assay, which provides a ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

अनुप्रवाह आण्विक विश्लेषण और मेटास्टेटिक संभावित मूल्यांकन के लिए परिसंचारी ट्यूमर कोशिकाओं के micromanipulation

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Detection and Monitoring of Tumor Associated Circulating DNA in Patient Biofluids

रोगी Biofluids में ट्यूमर एसोसिएटेड परिसंचरण डीएनए की जांच और निगरानी

Complications associated with upfront and repeat surgical tissue sampling present the need for minimally invasive platforms capable of molecular ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

इम्यूनोफ्लोरेसेंस द्वारा गैर-छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर रोगियों से अर्द्ध-स्वचालित पीडी-एल 1 विशेषता और परिसंचरण ट्यूमर कोशिकाओं की गणना

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...