Name: detection of a circulating microrna custom panel in patients with metastatic colorectal cancer
Uploaded: 2019-03-14T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of a Circulating MicroRNA Custom Panel in Patients with Metastatic Colorectal Cancer at JoVE.com

Denna studie finansierades delvis av Roche S.p.A. och den italienska läkemedel byrån (AIFA).

Obs: Utför alla de följande stegen under en steriliserad spiskåpa enligt god laboratoriesed (GLP).
1. plasma insamling och lagring
<ol><li>Samla 3 mL av perifert blodprovet i en K3E EDTA-rör.</li>
	<li>Centrifugera röret vid rumstemperatur vid 1 880 x g i 15 min.</li>
	<li>Återställa supernatant plasma i alikvoter av 450 µL.</li>
	<li>Lagra proverna vid-80 ° C fram till användning. Obs: Processen perifert blod röret inom 2 h av samling...

<ol>
	<li>Luo, H. -. Y., Xu, R. -. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predictive+and+prognostic+biomarkers+with+therapeutic+targets+in+advanced+colorectal+cancer.">Predictive and prognostic biomarkers with therapeutic targets in advanced colorectal cancer.</a> World journal of gastroenterology. 20 (14), 3858-3874 (2014).</li><li>Toiyama, Y., Okugawa, Y., Fleshman, J., Richard, C., Goel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNAs+as+potential+liquid+biopsy+biomarkers+in+colorectal+Cancer:+A+systematic+review.">MicroRNAs as potential liquid biopsy biomarkers in colorectal Cancer: A systematic review.</a> BBA Reviews on Cancer. 5 (6), (2018).</li><li>Kok, M. G. M., Halliani, A., Moerland, P. D., Meijers, J. C. M., Creemers, E. E., Pinto-Sietsma, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalization+panels+for+the+reliable+quantification+of+circulating+microRNAs+by+RT-qPCR.">Normalization panels for the reliable quantification of circulating microRNAs by RT-qPCR.</a> FASEB Journal. 29 (9), 3853-3862 (2015).</li><li>Marabita, F., De Candia, P., Torri, A., Tegn&#233;r, J., Abrignani, S., Rossi, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normalization+of+circulating+microRNA+expression+data+obtained+by+quantitative+real-time+RT-PCR.">Normalization of circulating microRNA expression data obtained by quantitative real-time RT-PCR.</a> Briefings in Bioinformatics. 17 (2), 204-212 (2016).</li><li>Danese, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reference+miRNAs+for+colorectal+cancer:+Analysis+and+verification+of+current+data.">Reference miRNAs for colorectal cancer: Analysis and verification of current data.</a> Scientific Reports. 7 (1), 1-12 (2017).</li><li>Zheng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+validation+of+reference+genes+for+qPCR+detection+of+serum+microRNAs+in+colorectal+adenocarcinoma+patients.">Identification and validation of reference genes for qPCR detection of serum microRNAs in colorectal adenocarcinoma patients.</a> PLoS ONE. 8 (12), 1-10 (2013).</li><li>Lv, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+Original+TRIzol-Based+Technique+Improves+the+Extraction+of+Circulating+MicroRNA+from+Serum+Samples.">Optimization of the Original TRIzol-Based Technique Improves the Extraction of Circulating MicroRNA from Serum Samples.</a> Clinical laboratory. 61 (12), 1953-1960 (2015).</li><li>Tan, G. W., Khoo, A. S. B., Tan, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+extraction+kits+and+RT-qPCR+systems+adapted+to+high-throughput+platform+for+circulating+miRNAs.">Evaluation of extraction kits and RT-qPCR systems adapted to high-throughput platform for circulating miRNAs.</a> Scientific reports. 5, 9430 (2015).</li><li>Altman, D. G., McShane, L. M., Sauerbrei, W., Taube, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reporting+Recommendations+for+Tumor+Marker+Prognostic+Studies+(REMARK):+explanation+and+elaboration.">Reporting Recommendations for Tumor Marker Prognostic Studies (REMARK): explanation and elaboration.</a> PLoS medicine. 9 (5), (2012).</li><li>Tiberio, P., Callari, M., Angeloni, V., Daidone, M. G., Appierto, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+in+using+circulating+miRNAs+as+cancer+biomarkers.">Challenges in using circulating miRNAs as cancer biomarkers.</a> BioMed Research International. 2015, (2015).</li><li>Kroh, E. M., Parkin, R. K., Mitchell, P. S., Tewari, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+circulating+microRNA+biomarkers+in+plasma+and+serum+using+quantitative+reverse+transcription-PCR+(qRT-PCR).">Analysis of circulating microRNA biomarkers in plasma and serum using quantitative reverse transcription-PCR (qRT-PCR).</a> Methods (San Diego, Calif). 50 (4), 298-301 (2010).</li><li>Cheng, H. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+Processing+Conditions+Substantially+Influence+Circulating+microRNA+Biomarker+Levels.">Plasma Processing Conditions Substantially Influence Circulating microRNA Biomarker Levels.</a> PLoS ONE. 8 (6), 1-11 (2013).</li><li>Moret, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+an+improved+protocol+for+plasma+microRNA+extraction.">Assessing an improved protocol for plasma microRNA extraction.</a> PloS one. 8 (12), (2013).</li><li>Khoury, S., Ajuyah, P., Tran, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+small+noncoding+RNAs+from+human+serum).">Isolation of small noncoding RNAs from human serum).</a> Journal of visualized experiments JoVE. (88), e51443 (2014).</li><li>Schwarzenbach, H., Nishida, N., Calin, G. A., Pantel, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+relevance+of+circulating+cell-free+microRNAs+in+cancer.">Clinical relevance of circulating cell-free microRNAs in cancer.</a> Nature Reviews Clinical Oncology. 11 (3), 145-156 (2014).</li></ol>

microRNA är små icke-kodande RNAs (18-25 nukleotider i längd) kan bindande regionen 3' UTR i deras mål messenger RNA och hämmande eller förnedrande det. De kan alltså anses gene expression tillsynsmyndigheter på translationell nivå. Under det senaste decenniet, har flera microRNA korrelerats med cancer initiering och utveckling, vilket gör dem användbara kliniska biomarkörer för diagnostik, prognos och behandling. Skyddas av Rnaser, är microRNA närvarande i en stabil form i biologiska vätskor såsom blod,...

CRC representerar tredje vanligaste diagnosen malignitet och den fjärde orsaken till cancerrelaterad död i världen. Hittills har har bevacizumab (B), en monoklonal antikropp riktad mot vascular-endotel tillväxtfaktor (VEGF), och (C) cetuximab eller panitumumab (P), monoklonala antikroppar riktade mot epidermal tillväxtfaktor (EGFR), godkänts för första linjens behandling i kombination med kemoterapi (CT) regimer.
Mutationer i K-RAS - och N-RAS gener är de enda kliniskt användbara biomarkörer kan identifiera patienter som är minst benägna att dra nytta av anti-EGFR-baserade CT. Även om flera studier har genomförts för att söka efter biomarkörer som är prediktiva för svar till B-baserade CT, finns det fortfarande en betydande brist på tillförlitliga och effektiva läkemedel för användning i klinisk praxis1.
microRNA är små RNAs (18-25 nukleotider i längd) som reglerar översättningen av målgener och spelar en avgörande roll i många physiopathological processer, inklusive embryogenes och karcinogenicitet. Dessa molekyler är mycket stabil i biologiska vätskor såsom plasma/serum, urin och slem, som gör dem robusta biomarkörer för att använda för icke-invasiv provtagning2. Med hjälp av en panel av microRNA involverade i angiogena väg, vi syftade till att identifiera nya cirkulerande biomarkörer kan förutsäga kliniskt utfall hos patienter med metastatisk CRC (mCRC) behandlas med en B-baserad CT regim.
Vi analyserade en rad 52 mCRC-patienter som behandlas med B-baserade CT inom den prospektiv multicenter randomiserad fas III-prövning ”italienska rättegång i avancerad kolorektalcancer” (ITACa). Detta protokoll godkändes av den lokala etiska kommittén (Comitato Etico området Vasta e Istituto Scientifico Romagnolo per lo Studio e la Cura dei Tumori (IRST) IRCCS, nr 674) på 19: e September 2007. Alla patienter gav informerat samtycke innan blod provsamling. För varje patient, venöst blodprover samlades in före behandling och vid den första kliniska utvärderingen (efter 8 veckor) för att utvärdera baslinjen miRNA uttryck och dess modulering under behandling i förhållande till patientens resultatet.
Genom att söka på litteraturen, vi valt 21 microRNA korrelerade med angiogena processen som är kända för att kunna upptäckas i human plasma: har-miR-107, har-miR-126-3 p, har-miR-145-5 p, har-miR-194-5 p, har-miR-199a - 5p, har-miR-200b - 3p, har-miR-20b - 5p , har-miR-21-5 p, har-miR-210-3 p, har-miR-221-3 p, har-miR-24-3 p, har-miR-27a - 3p, har-miR-29b - 3p, har-miR-335-5 p, har-miR-424-5 p, har-miR-497-5 p, har-miR - 520d - 3p, har-miR-92a - 3p, har-miR-17-5 p och har-miR-155-5 p. Vi valde också har-miR-223-3 p och har-mir-484 för endogena normalisering3,4,5,6, och cel-miR-39 renas från C. elegans som ett spike för exogena normalisering. Alla data normalizations utfördes med hjälp av metoden 2 ̂ ̄(ΔΔCt).
Påvisande av cirkulerande microRNA presenterar några tekniska svårigheter eftersom molekylerna befinner sig på mycket låga nivåer i plasma och deras förstärkning är kemiskt utmanande med tanke på deras kort sekvens. Av dessa skäl har valt vi ett förfarande som anser både organiska extraktion med fenol och en glas-fiber kolumnbaserade metod. Cirkulerande miRNA utvinning är ett hett ämne i fältet av flytande biopsi, och vi valde ett kommersiella kit som har visat sig vara en av de mest tillförlitliga när det gäller mängden och kvaliteten på återvunna avkastning7,8. Vi valde ett protokoll till omvänd transkribera microRNA genom tillägg av en adapter 5' och en poly(A) svans till 3' av den mogna miRNA att förbättra fiskeredskapens selektivitet och specificitet av reaktionen.
Robustheten av metoden, vi utformade anpassade plattor med pre fläckig sonder för RT-PCR att bedöma varje prov i två exemplar och analyseras 2 patienter inom varje platta, som visas i figur 1.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Rnase-free Safe-lock 1.5 mL tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030 123.328</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rnase-free Safe-lock 2 mL tubes</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>0030 123.344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rnase-free 20 &#181;L tips</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>S1123-1810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rnase-free 200 &#181;L tips</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>S1120-8810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rnase-free 1000 &#181;L tips</td>
			<td>Starlab</td>
			<td>S1122-1830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mirVana PARIS RNA and Native Protein Purification Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AM1556</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Advanced miRNA cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A28007</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% ethanol anidrous ACS grade</td>
			<td>Carlo Erba Reagents</td>
			<td>414605</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercapto-ethanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M3148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Fast Advanced Master Mix</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>4444558</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TaqMan Advanced miRNA Assays</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>A25576</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7500 Real-Time PCR System</td>
			<td>Applied Biosystems</td>
			<td>4406984</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2-2, 1-10, 2-20, 20-200, 100-1000 &#181;L laboratory pipettes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop microcentrifuge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Benchtop heating block</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fume hood</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2 mL PCR tubes</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of a circulating microrna custom panel in patients with metastatic colorectal cancer

Det ökar intresset för flytande biopsi för diagnos, prognos och terapeutisk övervakning, skapar behovet av tillförlitliga och användbara biomarkörer för klinisk praxis. Här presenterar vi ett protokoll extrakt, omvänd transkribera och utvärdera uttrycksnivåerna av cirkulerande microRNA från plasmaprover av patienter med kolorektal cancer (CRC). mikroRNA (Mirna) är en klass av icke-kodande RNAs 18-25 nukleotider i längd som reglerar uttrycket av målgener på translationell nivå och spela en viktig roll, bland annat av pro - och anti-angiogena funktion, i Fysiopatologi av olika organ. microRNA är stabila i biologiska vätskor såsom serum och plasma, vilket gör dem idealiska cirkulerande biomarkörer för cancer diagnos, prognos och behandling beslutsfattande och övervakning. Cirkulerande miRNA extraktionen utfördes med hjälp av en snabb och effektiv metod som innefattar både ekologisk och kolumn-baserade metoder. För miRNA retrotranscription använde vi en multi-steg-procedur som anser polyadenylation på 3' och ligering av en adapter på 5' av den mogna microRNA, följt av slumpmässiga miRNA före förstärkning. Vi valde en 24-miRNA anpassad panel ska testas av kvantitativ realtids polymeras-kedjereaktion (qRT-PCR) och fläckig miRNA sonderna på array anpassade plattor. Vi genomförde qRT-PCR plate körs på en realtids PCR-System. Städning microRNA för normalisering valdes använder GeNorm programvara (v. 3.2). Data analyserades med hjälp av uttrycket suite-programvara (v 1.1) och statistiska analyser utfördes. Metoden visade sig vara tillförlitliga och tekniskt robust och kan vara användbart att utvärdera biomarkör nivåer i flytande prov såsom plasma eller serum.

Vi analyserade en panel av angiogenes-relaterade cirkulerande microRNA avseende progressionsfri överlevnad (PFS), total överlevnad (OS) och objektiva svar Betygsätt (ORR) i en 52 mCRC patienter behandlade med B-baserade CT. Utvärderingen av sådana biomarkörer i plasmaprover är utmanande på grund av tekniska svårigheter. Vi använde etablerade metoder för miRNA utvinning från patientens plasmaprover, omvänd transkription och före förstärkning. Efter tillverkarens anvisningar...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of a Circulating MicroRNA Custom Panel in Patients with Metastatic Colorectal Cancer at JoVE.com

Detection of a Circulating MicroRNA Custom Panel in Patients with Metastatic Colorectal Cancer

Vi presenterar ett protokoll för att utvärdera uttrycksnivåerna av cirkulerande mikroRNA (Mirna) i plasmaprover från cancerpatienter. I synnerhet använde vi ett kommersiellt tillgängliga kit för cirkulerande miRNA utvinning och omvänd transkription. Slutligen, analyserade vi en panel med 24 utvalda microRNA använder realtid pre fläckig sonden anpassade plattor.

Upptäckt av en cirkulerande mikroRNA anpassad Panel hos patienter med metastaserad kolorektal Cancer

There is increasing interest in liquid biopsy for cancer diagnosis, prognosis and therapeutic monitoring, creating the need for reliable and useful ...

Denna metod kan hjälpa till att besvara viktiga frågor inom det translationella forskningsfältet, såsom sambandet mellan cirkulerande biomarkörer och patientprognosen. Den största fördelen med denna teknik är chansen att utvärdera uttrycket av en panel av cirkulerande biomarkörer med en enkel och tillförlitlig metodik med låg mängd insatsmaterial. Konsekvenserna av denna teknik sträcker sig mot behandling av cancerpatienter eftersom det skulle kunna identifiera cirkulerande biomarkörer användbara i beslutsfattandet och behandling övervakning av patienter.Även denna metod kan ge insikt i cirkulerande biomarkörer analys. Det kan också tillämpas på andra system, såsom vävnad biomarkör uttrycksanalys för molekylär karakterisering av sjukdom. Visuell demonstration av denna metod är kritisk, eftersom extraktionsstegen är svåra att lära sig.Till att börja, överför 400 mikroliter av plasmaprovet till ett RNase-fritt, två-milliliter rör. Sedan, tillsätt 400 mikroliter av denatureringslösning till röret. Lägg till fyra mikroliter av en-nanomolar spike-in.Efter blandning av lösningen, tillsätt 800 mikroliter av syra fenol-kloroform. Vortexa lösningen i 60 sekunder, och centrifug vid högsta hastighet i 15 minuter. Därefter överför lysate som finns i den övre vattenfasen till ett rent rör, var noga med att inte störa interfasen.Mät volymen av vattenfasen återhämtat sig, och tillsätt 1/3 volym av etanol till lysate. Placera sedan en filterpatron i ett nytt uppsamlingsrör. Överför upp till 700 mikroliter av etanol-lysateblandningen till filterpatronen.Centrifugera filterpatronen i 30 sekunder vid 10 000 gångers gravitation. Därefter mäta den totala volymen av flödet-through. Tillsätt sedan 2/3 av volymen etanol till filtratet och blanda väl.Placera en andra filterpatron i ett nytt uppsamlingsrör. Överför sedan upp till 700 mikroliter av provet till patronen och centrifug vid 10 000 gångers gravitation i 30 sekunder innan du kasserar genomflödet. Tillsätt 700 mikroliter mikroRNA-tvättlösning till filterpatronen, och centrifugera den med ett uppsamlingsrör vid 10, 000 gånger gravitation i 15 sekunder.Kasta genomflödet, och sätt tillbaka filterpatronen i samma rör. Efter detta flyttar du filterpatronen till ett nytt uppsamlingsrör. Lägg sedan till 100 mikroliter av förvärmd elueringslösning till patronen.Centrifugera filterpatronen vid 10, 000 gånger gravitation i 30 sekunder för att återvinna microRNAs. Förbered polyadenylation reaktionsmix cocktail enligt textprotokollet. Överför två mikroliter av provet till varje brunn av en reaktionsplatta.Tillsätt sedan tre mikroliter av reaktionscocktailen till varje brunn. Vortex och centrifug plattan kort för att snurra ner innehållet. Därefter placerar du plattan i en termisk cycler, och följ proceduren som beskrivs i textprotokollet.Förbered ligering reaktionsmix cocktail i en centrifug röret. Därefter lägger du till 10 mikroliter av cocktailen till varje brunn av reaktionsplattan. Blanda sedan innehållet i reaktionsplattan på en shaker vid 1, 900 rpm i en minut, följt av en kort centrifug av plattan.Efter detta placerar du reaktionsplattan i en termisk cycler, och följer det förfarande som beskrivs i textprotokollet. För att utföra den omvända transkriptionsreaktionen, förbered reaktionsmixen i ett centrifugrör enligt textprotokollet. Tillsätt sedan 15 mikroliter av blandningen till varje brunn av plattan som innehåller ligering produkt.Blanda innehållet i plattan på en shaker vid 1, 900 rpm i en minut, följt av en kort centrifug av plattan. Därefter placerar du plattan i en termisk cycler, och följ proceduren som beskrivs i textprotokollet. Sedan, förbereda miR-Amp reaktionsmix, och tillsätt 45 mikroliter av blandningen till varje brunn av en ny reaktionsplatta.Efter detta, tillsätt fem mikroliter av RT-produkten till varje brunn av reaktionsplattan. Blanda plattan på en shaker vid 1, 900 rpm i en minut, följt av en kort centrifug av plattan. Placera sedan plattan i en termisk cycler, och följ proceduren som beskrivs i tabell ett i textprotokollet.Först späd varje cDNA-prov i TE-buffert. Sedan, förbereda PCR reaktionsblandningen i en centrifug röret. lägga till 10%av volymen i överskott.Överför 19 mikroliter av reaktionsblandningen till varje brunn av plattan. Försegla plattan, och centrifugera den kortfattat. Slutligen, utföra termiska protokollet på ett RT-PCR-system, som beskrivs i tabell två av textprotokollet.Serieutspädningar av spike-in kontroll utfördes för att välja vilken som var den bästa koncentrationen att lägga till i alla plasma prover av detta särskilda fall serien. Tack vare detta protokoll var det möjligt att utvärdera alla biomarkörer hos varje enskild patient, samt en enda biomarkör i den övergripande fallserien. I detta protokoll, en panel av angiogenes-relaterade cirkulerande miRNAs i förhållande till progressionsfri överlevnad, övergripande överlevnad och objektiv svarsfrekvens analyserades hos patienter med kolorektal cancer behandlas med en kemoterapi regim.Jämföra uttrycksnivåerna av miRNA mellan baslinjen och första kliniska utvärderingen, en ökning av har-miR-155-5p observerades. Denna ökning var associerad med kortare PFS och OS. Medan du försöker detta förfarande, Det är viktigt att komma ihåg att utföra stegen med hjälp av fenol-kloroform under en rök huva. Efter detta förfarande, andra metoder som isolering och analys av cirkulerande proteiner eller kodning RNA kan utföras för att svara på ytterligare frågor, som utvärdering av en mer uttömmande panel av cirkulerande biomarkörer.Efter dess utveckling banade denna teknik vägen för forskare inom området flytande biopsi att utforska uttrycket av cirkulerande biomarkörer hos cancerpatienter. Glöm inte att arbeta med blod och kemiska reagenser kan vara extremt farligt, och försiktighetsåtgärder som handskar och laboratorierock bör alltid vidtas när du utför denna procedur.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

Advanced djurmodell av Colorectal metastas i Lever: avbildningsmetoder och egenskaper av metastaserande kloner

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

Ett syngent musmodell av metastaserad njurcellscancer för kvantitativ och Longitudinal Bedömning av Prekliniska terapier

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolering av cirkulerande tumörceller i en ortotopisk musmodell av kolorektal cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

A Genetically Engineered Mouse Model of Sporadic Colorectal Cancer

En genetiskt konstruerad musmodell av sporadisk kolorektal cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, colorectal cancer mouse models based on tumor cell injection have severe limitations ...

Practical Considerations in Studying Metastatic Lung Colonization in Osteosarcoma Using the Pulmonary Metastasis Assay

Praktiska överväganden studera metastaserande lungcancer kolonisationen i osteosarkom med pulmonell metastas-analys

The pulmonary metastasis assay (PuMA) is an ex vivo lung explant and closed cell culture system that permits researchers to study the biology of lung ...

In Vivo Inhibition of MicroRNA to Decrease Tumor Growth in Mice

In vivo-hämning av mikroRNA för att minska tumörtillväxten hos möss

MicroRNAs (miRNAs) are important regulators of gene expression through their ability to destabilize mRNA and inhibit translation of target mRNAs. An ...

Evaluation of Colorectal Cancer Risk and Prevalence by Stool DNA Integrity Detection

Utvärdering av kolorektal cancer risk och prevalens av avföring DNA Integrity Detection

Nowadays, stool DNA can be isolated and analyzed by several methods. The long fragments of DNA in stool can be detected by a qPCR assay, which provides a ...

Micromanipulation of Circulating Tumor Cells for Downstream Molecular Analysis and Metastatic Potential Assessment

Micromanipulation av cirkulerande tumör celler för nedströms molekylär analys och metastatisk potentiell bedömning

Blood-borne metastasis accounts for&#160;most cancer-related deaths and involves circulating tumor cells (CTCs) that are successful in establishing new ...

Detection and Monitoring of Tumor Associated Circulating DNA in Patient Biofluids

Detektion och övervakning av tumörassocierade cirkulerande DNA i patientens Biofluider

Complications associated with upfront and repeat surgical tissue sampling present the need for minimally invasive platforms capable of molecular ...

Semi-automatic PD-L1 Characterization and Enumeration of Circulating Tumor Cells from Non-small Cell Lung Cancer Patients by Immunofluorescence

Semi-automatisk PD-L1 karakterisering och uppräkning av cirkulerande tumörceller från icke-småcellig Lung cancer patienter genom Immunofluorescensering

Circulating tumor cells (CTCs) derived from the primary tumor are shed into the bloodstream or lymphatic system. These rare cells (1&#8722;10 cells per mL ...