Name: construction of a multilayered mesenchymal stem cell sheet with a 3d dynamic culture system
Uploaded: 2018-10-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System at JoVE.com

هذا العمل كان تدعمها "مؤسسة العلوم الطبيعية الوطنية الصينية" (رقم المنحة 31771064)؛ العلوم والتكنولوجيا تخطيط المشروع من مقاطعة قوانغدونغ (منحة الأرقام 2013B010404030 و 2014A010105029 و 2016A020214012)؛ العلوم والتكنولوجيا تخطيط المشروع من قوانغتشو (رقم المنحة 201607010063)؛ والمرحلة الجامعية الابتكار وتنظيم برنامج تدريبي (رقم المنحة 201610559028)؛ المؤسسة الوطنية للعلوم "العلماء الشباب من الصين" (منح رقم 31800819).

جميع الخلايا الجذعية وإجراءات التجربة الحيوانية كانت تجري وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية "الدليل الوطني" لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ووافقت عليها لجنة الاستخدام (قوانغتشو، الصين) وجامعة جينان العناية بالحيوان.
1-إعداد السقالة النيابة العامة مع ديسيلولاريزيشن<sub...

<ol>
	<li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction.">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nature Medicine. 12 (4), 459-465 (2006).</li><li>Narita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cell-sheet+technique+eliminates+arrhythmogenicity+of+skeletal+myoblast-based+therapy+to+the+heart+with+enhanced+therapeutic+effects.">The use of cell-sheet technique eliminates arrhythmogenicity of skeletal myoblast-based therapy to the heart with enhanced therapeutic effects.</a> International Journal of Cardiology. 168 (1), 261-269 (2013).</li><li>Narita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Use+of+Scaffold-free+Cell+Sheet+Technique+to+Refine+Mesenchymal+Stromal+Cell-based+Therapy+for+Heart+Failure.">The Use of Scaffold-free Cell Sheet Technique to Refine Mesenchymal Stromal Cell-based Therapy for Heart Failure.</a> Molecular Therapy. 21 (4), 860-867 (2013).</li><li>Matsuo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiently+Piled-Up+Cardiac+Tissue-Like+Sheets+With+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Cells+Robustly+Promotes+Cell+Engraftment+and+Ameliorates+Cardiac+Dysfunction+After+Myocardial+Infarction.">Efficiently Piled-Up Cardiac Tissue-Like Sheets With Pluripotent Stem Cell-Derived Cells Robustly Promotes Cell Engraftment and Ameliorates Cardiac Dysfunction After Myocardial Infarction.</a> Circulation. 128 (22), (2013).</li><li>Alshammary, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+cardiac+stem+cell+sheet+transplantation+on+myocardial+infarction.">Impact of cardiac stem cell sheet transplantation on myocardial infarction.</a> Surgery Today. 43 (9), 970-976 (2013).</li><li>Chen, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+novel+PLGA+fiber/collagen+composite+web+as+a+scaffold+for+engineering+of+articular+cartilage+tissue+with+adjustable+thickness.">The use of a novel PLGA fiber/collagen composite web as a scaffold for engineering of articular cartilage tissue with adjustable thickness.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 67a (4), 1170-1180 (2003).</li><li>Cerqueira, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Adipose+Stem+Cells+Cell+Sheet+Constructs+Impact+Epidermal+Morphogenesis+in+Full-Thickness+Excisional+Wounds.">Human Adipose Stem Cells Cell Sheet Constructs Impact Epidermal Morphogenesis in Full-Thickness Excisional Wounds.</a> Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).</li><li>Sasagawa, T., Shimizu, T., Sekiya, S., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+angiogenic+potential+between+prevascular+and+non-prevascular+layered+adipose-derived+stem+cell-sheets+in+early+post-transplanted+period.">Comparison of angiogenic potential between prevascular and non-prevascular layered adipose-derived stem cell-sheets in early post-transplanted period.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (2), 358-365 (2014).</li><li>Ishii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilayered+adipose-derived+regenerative+cell+sheets+created+by+a+novel+magnetite+tissue+engineering+method+for+myocardial+infarction.">Multilayered adipose-derived regenerative cell sheets created by a novel magnetite tissue engineering method for myocardial infarction.</a> International Journal of Cardiology. 175 (3), 545-553 (2014).</li><li>Godier-Furnemont, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composite+scaffold+provides+a+cell+delivery+platform+for+cardiovascular+repair.">Composite scaffold provides a cell delivery platform for cardiovascular repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (19), 7974-7979 (2011).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+nanofibrous+sheets+of+collagen/elastin/polycaprolactone+improve+cardiac+repair+after+myocardial+infarction.">Electrospun nanofibrous sheets of collagen/elastin/polycaprolactone improve cardiac repair after myocardial infarction.</a> American Journal of Translational Research. 8 (4), 1678-1694 (2016).</li><li>Arana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+delivery+of+collagen+patches+with+adipose-derived+stem+cells+in+rat+and+minipig+models+of+chronic+myocardial+infarction.">Epicardial delivery of collagen patches with adipose-derived stem cells in rat and minipig models of chronic myocardial infarction.</a> Biomaterials. 35 (1), 143-151 (2014).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+high+bioactivity+multilayered+bone-marrow+mesenchymal+stem+cell+sheets+for+myocardial+infarction+using+a+3D-dynamic+system.">Preparation of high bioactivity multilayered bone-marrow mesenchymal stem cell sheets for myocardial infarction using a 3D-dynamic system.</a> Acta Biomaterialia. 72, 182-195 (2018).</li><li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+phospholipase+A(2)+to+prepare+acellular+porcine+corneal+stroma+as+a+tissue+engineering+scaffold.">The use of phospholipase A(2) to prepare acellular porcine corneal stroma as a tissue engineering scaffold.</a> Biomaterials. 30 (21), 3513-3522 (2009).</li><li>Degano, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+on+mouse+embryonic+fibroblast+implantation+and+proliferation.">The effect of self-assembling peptide nanofiber scaffolds on mouse embryonic fibroblast implantation and proliferation.</a> Biomaterials. 30 (6), 1156-1165 (2009).</li><li>Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+stem+cell+niches+from+the+molecule+up+through+engineered+peptide+materials.">Building stem cell niches from the molecule up through engineered peptide materials.</a> Neuroscience Letters. 519 (2), 138-146 (2012).</li><li>Cui, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Mesenchymal+Stem+Cells+with+Self-Assembling+Polypeptide+Scaffolds+Is+Conducive+to+Treating+Myocardial+Infarction+in+Rats.">Transplantation of Mesenchymal Stem Cells with Self-Assembling Polypeptide Scaffolds Is Conducive to Treating Myocardial Infarction in Rats.</a> Tohoku Journal of Experimental Medicine. 222 (4), 281-289 (2010).</li><li>Jun, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatially+Assembled+Bilayer+Cell+Sheets+of+Stem+Cells+and+Endothelial+Cells+Using+Thermosensitive+Hydrogels+for+Therapeutic+Angiogenesis.">Spatially Assembled Bilayer Cell Sheets of Stem Cells and Endothelial Cells Using Thermosensitive Hydrogels for Therapeutic Angiogenesis.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (9), (2017).</li><li>Chen, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porous+tissue+grafts+sandwiched+with+multilayered+mesenchymal+stromal+cell+sheets+induce+tissue+regeneration+for+cardiac+repair.">Porous tissue grafts sandwiched with multilayered mesenchymal stromal cell sheets induce tissue regeneration for cardiac repair.</a> Cardiovascular Research. 80 (1), 88-95 (2008).</li></ol>

هذا البروتوكول التقارير وسيلة فعالة لبناء ورقة MSC متعدد الطبقات. يسلك هذه الورقة الخلية أمثل القوة الميكانيكية وخلية عالية الكثافة بذر بيواكتيفيتي الخلايا الجذعية مواتية. استخدام بمسكس على سبيل مثال، يتم إنشاء هيكل الخلية 3D بسرعة مع RAD16--أنا هيدروجيل الببتيد. بعد يجري المستزرعة في النظام ...

وقد تم الإبلاغ عن العلاج بالخلايا الجذعية كعلاج فعال للعديد من الأمراض؛ ومع ذلك، استبقاء خلية منخفضة وبقاء الفقراء داخل المنطقة الهدف تظل القضايا الحرجة بعد حقن الخلايا الجذعية التقليدية. لحل هذه المشكلة، وضع علماء هندسة الأنسجة خلية ورقة تقنية. أعدت ورقة خلية مونولاييريد مع المصفوفة خارج الخلية سليمة أولاً باستخدام طبق ثقافة الاستجابة لدرجة الحرارة1، وأفادت به دراسات المتابعة تحسينات هامة للاحتفاظ بالخلايا الجذعية، والبقاء على قيد الحياة داخل إينفاركتيد المجال2،3. من بين الأساليب، سجلت بناء الورقة خلية متعددة الطبقات كاستراتيجية فعالة لتحسين بقاء الخلية والخلية ورقة التأثير العلاجي3،4. ومنذ ذلك الحين، عملت العلماء على تطوير أساليب التشييد ورقة خلية مختلفة بغية زيادة حجم الخلية وخاصية الخلايا الجذعية، والخاصية الميكانيكية صحائف الخلية. وحتى الآن، تم تشييد أنواع معينة من خلية ورقة ودرس في علاج احتشاء عضلة القلب5، إصابة الغضروف6، والجلد الجرح7.
بيواكتيفيتي الخلايا الجذعية قبل الزرع وأظهرت تأثير ناشئة على تجديد الأنسجة المتضررة، واستراتيجيات بناء الورقة خلية مختلفة لها تأثيرات مختلفة على الخلايا الجذعية. من ناحية، أوراق خلية المتلاقية فقط يتألف من خلايا جذعية عالية الكثافة، ومصفوفات خارج الخلية الطبيعية يمكن الحصول عليها ب أوراق خلية مونولاييريد التراص8 أو بواسطة استخدام تقنيات هندسة الأنسجة المغناطيسية9. من ناحية أخرى، طور الباحثون السقالات مختلفة توفير قوة ميكانيكية كافية ودعم الخلية النمو10،11،12، مما يسمح لخلايا الجذعية منخفضة البذر الكثافة لضمان التغذية الإمداد. على الرغم من هذه النهج، إمدادات التغذية كفاءة منخفضة داخل هيكل الخلية متعدد الطبقات ورقة زال شاغلا رئيسيا خلال عملية التشييد في المختبر . ولذلك، مطلوب على وجه السرعة نظام بناء ورقة خلية فعالة ومجدية.
ويصف هذا البروتوكول خطوات لإعداد ورقة خلية من خلايا الجذعية (MSC) مولتيلاييريدميسينكهيمال. في هذا النظام من البناء، خلية ورقة قوة ميكانيكية يتم توفيرها من قبل النيابة العامة. وبناء على هذه السقالة، هيكل الخلية 3D يمكن بسرعة بناؤها مع RAD16--أنا هيدروجيل الببتيد، ونظام التروية حيوي يستخدم للثقافة الورقة خلية متعددة الطبقات، بغية تحقيق الاستقرار في هيكل الخلية 3D ورقة وتوفير التغذية الكافية إمدادات للخلايا. باستخدام هذا النظام، تم بنجاح إعداد ورقة بمسك متعدد الطبقات وأظهرت تأثير علاجية مثلى على نموذج احتشاء عضلة القلب الفئران13.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:657px;" width="658">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Phospholipase A2</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">P6534</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium deoxycholate</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phosphate buffer</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">89033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Penicillin streptomycin / amphotericin&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">15640055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Buffer bicarbonate</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">C3041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Table concentrator</td>
			<td style="width:108px;">Changzhou Aohua Instrument Co.</td>
			<td style="width:167px;">KT20183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium(DMEM)</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">10-014-CVR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:216px;">South American fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">10270-106/P30-3302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">25-005-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.25% Trypsin/2.21 mM EDTA</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">25-053-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Biosafety cabinet</td>
			<td style="width:108px;">Esco,Singapore</td>
			<td style="width:167px;">AC2-2S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Constant temperature incubator&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Esco,Singapore</td>
			<td style="width:167px;">CLS-170B-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Centrifuge tube&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:167px;">430790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EP tube</td>
			<td style="width:108px;">Axygen</td>
			<td style="width:167px;">31617934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Centrifugal machine</td>
			<td style="width:108px;">TOMOS</td>
			<td>1-16R&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">S9378-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pura Matrix&#160;</td>
			<td style="width:108px;">BD</td>
			<td style="width:167px;">354250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:216px;">Dynamic perfusion culture system</td>
			<td style="width:108px;">Minucells and Minutissue</td>
			<td style="width:167px;">D-93077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Peristaltic pump</td>
			<td style="width:108px;">Ismatec</td>
			<td style="width:167px;">IPC N8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pump tubing</td>
			<td style="width:108px;">Ismatec</td>
			<td style="width:167px;">Nr.1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 1300&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>tissue carrier components&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>dynamic perfusion system&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 0006</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>gas exchange equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 0002</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>500 mL glass bottle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 1301</td>
			<td style="width:108px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>perfusion culture container&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

construction of a multilayered mesenchymal stem cell sheet with a 3d dynamic culture system

العلاج بالخلايا الجذعية يظهر مبشرة بالخير مستقبلا في تجديد الجهاز المصاب والأنسجة، وقد وضعت الخلية ورقة تقنية لتحسين استبقاء خلية منخفضة وبقاء الفقراء داخل المنطقة الهدف. ومع ذلك، أثناء عملية البناء في المختبر ، إيجاد حل للحفاظ على الخلايا الجذعية بيواكتيفيتي وزيادة حجم الخلية داخل الخلية الورقة حاجة ملحة. هنا، يقدم هذا البروتوكول طريقة لبناء ورقة خلية متعددة الطبقات مع بيواكتيفيتي الخلايا الجذعية مواتية وقابلية التشغيل الأمثل. تامور الخنزيري ديسيلولاريزيد (الحزب الديمقراطي التقدمي) أعدها phospholipase طريقة ديسيلولاريزيشن2 (جيش التحرير الشعبي الصيني2) سقالة خلية ورقة، وهي معزولة الفئران نخاع العظام الخلايا الجذعية الوسيطة (بمسكس) وتوسيع كخلايا المصنف. يتكون هيكل ورقة مؤقتة الخلية متعدد الطبقات باستخدام RAD16--أنا هيدروجيل الببتيد. وأخيراً، هو مثقف الورقة خلية مع نظام التروية دينامية لتحقيق الاستقرار في هيكل ثلاثي الأبعاد (3D)، والورقة الخلية يمكن الحصول عليها بعد ثقافة 48 ساعة في المختبر. هذا البروتوكول يوفر طريقة فعالة ومجدية لبناء ورقة خلايا الجذعية المتعددة الطبقات، والورقة خلية يمكن تطويرها كمنتج علاج بخلايا الجذعية مواتية في المستقبل.

ويرد في الشكل 1التخطيطي التشييد ورقة الخلايا الجذعية متعددة الطبقات. إعداد السقالة ورقة الخلية بواسطة الأسلوب ديسيلولاريزيشن2 جيش التحرير الشعبي الصيني هو الخطوة الأولى. بناء على السقالة، شيد هيكل خلية 3D مؤقتة بخلط الخلايا الجذعية مع hydrogel الببتيد ...

Watch this Scientific Journal Video about Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System at JoVE.com

Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

بناء ورقة الطبقات الوسيطة من الخلايا الجذعية مع نظام 3D دينامية الثقافة

توفر هذه المقالة طريقة فعالة ومجدية لبناء أوراق الخلايا الجذعية متعددة الطبقات مع خاصية الخلايا الجذعية مواتية.

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...

وقد تم الإبلاغ على نطاق واسع عن العلاج بالخلايا الجذعية كعلاج واعد للعديد من الأمراض. وقد تم تطوير تقنيات ورقة الخلية من أجل تحسين الاحتفاظ الخلية والبقاء على قيد الحياة داخل الأهداف، أيضا. أثناء بناء أوراق الخلية، وإمدادات التغذية غير كافية لا تزال مشاكل رئيسية لفقدان وظيفة الخلايا الجذعية، وخاصية الخلايا الجذعية غير مرضية من شأنه أن يؤثر في النهاية الآثار العلاجية في الجسم الحي.هدفنا لإعداد المتاحة متعددة الطبقات المنتج ورقة الخلايا الجذعية، وضعنا فريقنا الأقطاب الخلوية، pericardium وسقالة ورقة الخلية. استنادا إلى سقالة الخلايا المتعددة الطبقات بداية سيتم بناؤها بسرعة مع غير الببتيد الهيدروجين ويستخدم نظام الانفعال ديناميات لضمان إمدادات التغذية في الخلايا الجذعية في المختبر. إخراج سقالة DBP المجففة ووضعها في وسط القاعدة السوداء.وضع حلقة التوتر الأبيض على سقالة DBP، ولصقها في الناقل الأنسجة. تأكد من أن سقالة DBP ثابتة تمامًا في حامل الأنسجة. أضف 100 من وسائط ثقافة ميكروليترز على سقالة DBP.ضع السقالة في حاضنة درجة 37 مئوية ، واسمح لها بالانكت لمدة 15 دقيقة. أخرج الخلايا من الحاضنة، وازيل وسائل الثقافة من طبق الثقافة، واغسل الخلايا بلطف بمليلترين من PBS الدافئ. إزالة جميع برنامج تلفزيوني من طبق الثقافة، وتأكد من عدم وجود سائل لا يزال.إضافة ملليلتر إلى 1.25٪ تريبسين حل للطبق، واحتضان الخلايا لمدة ثلاث دقائق. إيقاف تأثير تريبسين عن طريق إضافة متوسط ثقافة ملليلترين. غسل بلطف الخلايا من الطبق.نقل تعليق الخلية في أنبوب جديد 15 ملليلتر الطرد المركزي. اِيُجَل الخلايا في 220 مرة جاذبية لمدة خمس دقائق، والحصول على رواسب الخلايا. إزالة المناط، والقضاء على رواسب الخلية.إعادة تعليق الخلايا مع ثلاثة ملليلتر 10٪ محلول السكروز. pirate 10 microliters تعليق الخلية، ورقم الخلية المحتوى يقرأ قياس الهيموليتات، واستخراج ثلاثة ملايين خلية ونقل في أنبوب الطرد المركزي الجديد 1.5 ملليلتر. ازاح الخلايا في 220 مرة الجذر التربيعي لمدة خمس دقائق، وإزالة تماما عظمى والحصول على الرواسب الخلايا.إعداد 20 ميكروليترز 10٪ محلول السكروز. بلطف إعادة تعليق الخلايا والحصول على تعليق موحد. إضافة 20 ميكروليتر الببتيد هلام هيدرولي في الجزء العلوي من تعليق بلطف مزيج هلام الببتيد المائية، وتعليق الخلايا مع T، إخراج سقالة DBP، وترك الناقل الأنسجة، ومن ثم التعرق بلطف متوسط calculi مع T.Aspirate الخليط الخليط وإضافة بالتساوي على سقالة DBP.أضف ملليلتر الكالسيوميدات إلى الجزء السفلي من الناقل الأنسجة. إضافة بلطف أربعة ملليلتر المتوسطة الثقافية في طبق الثقافة ثم تظهر ورقة الخلية. وضع الخلايا في الحاضنة لمدة ساعتين السماح لها الثقافة.نظام الضخ الديناميكي تشمل حاوية ثقافة الضخ الغاز تبادل recrement وزجاجة. تجميع نظم الضخ ديناميكية كما هو مبين في الشكل. إضافة اثنين من المتوسطات ثقافة المليلتر المائية في زجاجة.إدراج ورقة الخلية في غرفة حاوية الثقافة، إضافة ثلاثة ملليلترات الثقافة الوسيطات في الحاوية، ووضع نظم ضخ دينامية في الحاضنات، والبدء في ضخ. فتح حاوية الثقافة في إعادة تراكب ثنائي. إخراج ورقة الخلية من حاوية الثقافة ووضعها في طبق الثقافة.استخدام ملقط واحد لشل الناقل الأنسجة واستخدام أخرى اثنين من ملقط لفصل حلقة التوتر الأبيض من القاعدة السوداء. وأخيراً، الحصول على ورقة الخلية متعددة الطبقات. سقالة DBP شفافة.وS SEM إعادة بيع يبين أن الكليات القبض والمكونات محجوزة تماما. ويمكن الحصول على أوراق الخلية وعقد بواسطة ملقط للحفاظ على قصيرة. ويمكن نقل هذه الورقة الخلية إلى 1.5 ملليلتر أنبوب السيليندريفورم.كنموذج على سبيل المثال بدءا من يظهر الخلية من BMFC إيجابية للغاية لعلامة الخلايا الجذعية CD 9O والأقراص المدمجة 29. بعد بناء الخلية يترك BMFC ورقة الخلية لا يزال مستويات التوسع عالية من CD 90 والأقراص المدمجة 29. بناء بنية الخلية متعددة الطبقات هو الخطوة الهامة للبروتوكول.يتطلب وقت التحريك أربعة جل هيدروني عندما تتغير قيمة PH من SA إلى محايد ، لذلك ، من المهم غسل الخلية بمحلول السكروز لإزالة أيونات السطح. أيضا ، فإن نسبة حجم تعليق الخلية وpanthihydrogel ليست صديقة جيدة لبناء هيكل متعدد الطبقات المؤقتة. بعد تشكيل هيكل الخلايا الجذعية 3D، سترى نظام الضخ الديناميكي مهم لتثبيت هيكل متعدد الطبقات وكذلك الحفاظ على viabilities الخلايا الجذعية.يمكن للتسرب الديناميكي لمتوسط الثقافة أن يسهل انتشار الخلايا الجذعية واستقراء سياق الخلية داخل البنية متعددة الطبقات أيضًا يجب تعديل موازين الحرارة الديناميكية للثقافة وفقًا لأنواع الخلايا الجذعية المختلفة.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Microfabricated Platforms for Mechanically Dynamic Cell Culture

Microfabricated المنصات الحيوي للثقافة الخلية ميكانيكيا

The ability to systematically probe in vitro cellular response to combinations of mechanobiological stimuli for tissue engineering, drug discovery or ...

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

Microcapsule الجينات كمنصة 3D لإكثار وتمايز الخلايا الجذعية الجنينية البشرية (hESC) إلى أنساب مختلفة

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

إعداد الفايبرين 3D السقالات لتطبيقات الجذعية زراعة الخلايا

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Correlative Microscopy for 3D Structural Analysis of Dynamic Interactions

الميكروسكوب المتلازم لتحليل الهيكلية 3D من التفاعلات الدينامية

Cryo-electron tomography (cryoET) allows 3D visualization of cellular structures at molecular resolution in a close-to-physiological state1. However, ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

هندسة الأنسجة: بناء ومتعددة الخلايا 3D سقالة لتسليم الطبقات صفائح خلية

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on PolyÃƒÅ½Ã‚Âµ-caprolactone Electrospun Yarns

تحسين مرفق من الوسيطة الإنسان الخلايا الجذعية على بولي (ε-caprolactone) خيوط Electrospun

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

بناء المهندسة القلب الأنسجة تعريف الإنسان لدراسة آليات العلاج الخلوي القلب

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning وجمعية Microvessels 3D

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

الانضباطي الهلاميات المائية من الرئوي خارج الخلية مصفوفة للثقافة خلية 3D

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...