Name: construction of a multilayered mesenchymal stem cell sheet with a 3d dynamic culture system
Uploaded: 2018-10-20T15:00:00
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इस कार्य को राष्ट्रीय प्राकृतिक विज्ञान फाउंडेशन ऑफ चाइना (अनुदान संख्या ३१७७१०६४) द्वारा समर्थित किया गया; गुआंग्डोंग प्रांत की विज्ञान और प्रौद्योगिकी योजना परियोजना (अनुदान संख्याएं 2013B010404030, 2014A010105029, और 2016A020214012); गुआंगज़ौ के विज्ञान और प्रौद्योगिकी योजना परियोजना (अनुदान संख्या २०१६०७०१००६३); और स्नातक नवाचार और उद्यमिता प्रशिक्षण कार्यक्रम (अनुदान संख्या २०१६१०५५९०२८); चीन के युवा वैज्ञानिकों के लिए राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (ग्रांट नंबर ३१८००८१९) ।

सभी स्टेम सेल और पशु प्रयोग प्रक्रियाओं की देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के उपयोग के लिए राष्ट्रीय गाइड के नैतिक दिशा निर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया और जिनान विश्वविद्यालय पशु देखभाल और उपयोग समित...

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	<li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction.">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nature Medicine. 12 (4), 459-465 (2006).</li><li>Narita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cell-sheet+technique+eliminates+arrhythmogenicity+of+skeletal+myoblast-based+therapy+to+the+heart+with+enhanced+therapeutic+effects.">The use of cell-sheet technique eliminates arrhythmogenicity of skeletal myoblast-based therapy to the heart with enhanced therapeutic effects.</a> International Journal of Cardiology. 168 (1), 261-269 (2013).</li><li>Narita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Use+of+Scaffold-free+Cell+Sheet+Technique+to+Refine+Mesenchymal+Stromal+Cell-based+Therapy+for+Heart+Failure.">The Use of Scaffold-free Cell Sheet Technique to Refine Mesenchymal Stromal Cell-based Therapy for Heart Failure.</a> Molecular Therapy. 21 (4), 860-867 (2013).</li><li>Matsuo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiently+Piled-Up+Cardiac+Tissue-Like+Sheets+With+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Cells+Robustly+Promotes+Cell+Engraftment+and+Ameliorates+Cardiac+Dysfunction+After+Myocardial+Infarction.">Efficiently Piled-Up Cardiac Tissue-Like Sheets With Pluripotent Stem Cell-Derived Cells Robustly Promotes Cell Engraftment and Ameliorates Cardiac Dysfunction After Myocardial Infarction.</a> Circulation. 128 (22), (2013).</li><li>Alshammary, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+cardiac+stem+cell+sheet+transplantation+on+myocardial+infarction.">Impact of cardiac stem cell sheet transplantation on myocardial infarction.</a> Surgery Today. 43 (9), 970-976 (2013).</li><li>Chen, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+novel+PLGA+fiber/collagen+composite+web+as+a+scaffold+for+engineering+of+articular+cartilage+tissue+with+adjustable+thickness.">The use of a novel PLGA fiber/collagen composite web as a scaffold for engineering of articular cartilage tissue with adjustable thickness.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 67a (4), 1170-1180 (2003).</li><li>Cerqueira, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Adipose+Stem+Cells+Cell+Sheet+Constructs+Impact+Epidermal+Morphogenesis+in+Full-Thickness+Excisional+Wounds.">Human Adipose Stem Cells Cell Sheet Constructs Impact Epidermal Morphogenesis in Full-Thickness Excisional Wounds.</a> Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).</li><li>Sasagawa, T., Shimizu, T., Sekiya, S., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+angiogenic+potential+between+prevascular+and+non-prevascular+layered+adipose-derived+stem+cell-sheets+in+early+post-transplanted+period.">Comparison of angiogenic potential between prevascular and non-prevascular layered adipose-derived stem cell-sheets in early post-transplanted period.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (2), 358-365 (2014).</li><li>Ishii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilayered+adipose-derived+regenerative+cell+sheets+created+by+a+novel+magnetite+tissue+engineering+method+for+myocardial+infarction.">Multilayered adipose-derived regenerative cell sheets created by a novel magnetite tissue engineering method for myocardial infarction.</a> International Journal of Cardiology. 175 (3), 545-553 (2014).</li><li>Godier-Furnemont, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composite+scaffold+provides+a+cell+delivery+platform+for+cardiovascular+repair.">Composite scaffold provides a cell delivery platform for cardiovascular repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (19), 7974-7979 (2011).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+nanofibrous+sheets+of+collagen/elastin/polycaprolactone+improve+cardiac+repair+after+myocardial+infarction.">Electrospun nanofibrous sheets of collagen/elastin/polycaprolactone improve cardiac repair after myocardial infarction.</a> American Journal of Translational Research. 8 (4), 1678-1694 (2016).</li><li>Arana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+delivery+of+collagen+patches+with+adipose-derived+stem+cells+in+rat+and+minipig+models+of+chronic+myocardial+infarction.">Epicardial delivery of collagen patches with adipose-derived stem cells in rat and minipig models of chronic myocardial infarction.</a> Biomaterials. 35 (1), 143-151 (2014).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+high+bioactivity+multilayered+bone-marrow+mesenchymal+stem+cell+sheets+for+myocardial+infarction+using+a+3D-dynamic+system.">Preparation of high bioactivity multilayered bone-marrow mesenchymal stem cell sheets for myocardial infarction using a 3D-dynamic system.</a> Acta Biomaterialia. 72, 182-195 (2018).</li><li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+phospholipase+A(2)+to+prepare+acellular+porcine+corneal+stroma+as+a+tissue+engineering+scaffold.">The use of phospholipase A(2) to prepare acellular porcine corneal stroma as a tissue engineering scaffold.</a> Biomaterials. 30 (21), 3513-3522 (2009).</li><li>Degano, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+on+mouse+embryonic+fibroblast+implantation+and+proliferation.">The effect of self-assembling peptide nanofiber scaffolds on mouse embryonic fibroblast implantation and proliferation.</a> Biomaterials. 30 (6), 1156-1165 (2009).</li><li>Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+stem+cell+niches+from+the+molecule+up+through+engineered+peptide+materials.">Building stem cell niches from the molecule up through engineered peptide materials.</a> Neuroscience Letters. 519 (2), 138-146 (2012).</li><li>Cui, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Mesenchymal+Stem+Cells+with+Self-Assembling+Polypeptide+Scaffolds+Is+Conducive+to+Treating+Myocardial+Infarction+in+Rats.">Transplantation of Mesenchymal Stem Cells with Self-Assembling Polypeptide Scaffolds Is Conducive to Treating Myocardial Infarction in Rats.</a> Tohoku Journal of Experimental Medicine. 222 (4), 281-289 (2010).</li><li>Jun, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatially+Assembled+Bilayer+Cell+Sheets+of+Stem+Cells+and+Endothelial+Cells+Using+Thermosensitive+Hydrogels+for+Therapeutic+Angiogenesis.">Spatially Assembled Bilayer Cell Sheets of Stem Cells and Endothelial Cells Using Thermosensitive Hydrogels for Therapeutic Angiogenesis.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (9), (2017).</li><li>Chen, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porous+tissue+grafts+sandwiched+with+multilayered+mesenchymal+stromal+cell+sheets+induce+tissue+regeneration+for+cardiac+repair.">Porous tissue grafts sandwiched with multilayered mesenchymal stromal cell sheets induce tissue regeneration for cardiac repair.</a> Cardiovascular Research. 80 (1), 88-95 (2008).</li></ol>

वर्तमान प्रोटोकॉल एक multilayered एमएससी शीट के निर्माण के लिए एक कुशल विधि की रिपोर्ट । यह सेल शीट इष्टतम यांत्रिक शक्ति, उच्च कोशिका बोने घनत्व, और अनुकूल स्टेम सेल की गतिविधि प्रदर्शित । एक उदाहरण के रूप में...

स्टेम सेल थेरेपी कई रोगों के लिए एक प्रभावी उपचार के रूप में सूचित किया गया है; हालांकि, कम सेल प्रतिधारण और लक्ष्य क्षेत्र के भीतर गरीब अस्तित्व पारंपरिक स्टेम सेल इंजेक्शन के बाद महत्वपूर्ण मुद्दों रह । इस समस्या को हल करने के लिए टिशू इंजीनियरिंग के वैज्ञानिकों ने सेल शीट तकनीक विकसित की । बरकरार extracellular मैट्रिक्स के साथ एक monolayered सेल शीट सबसे पहले तापमान प्रतिक्रिया संस्कृति डिश1का उपयोग करके तैयार किया गया था, और उसके अनुवर्ती अध्ययन स्टेम सेल प्रतिधारण और infarcted के भीतर अस्तित्व के महत्वपूर्ण सुधार की सूचना क्षेत्रफल2,3. तरीकों के अलावा, multilayered सेल शीट का निर्माण सेल अस्तित्व में सुधार और सेल शीट उपचारात्मक प्रभाव3,4के लिए एक प्रभावी रणनीति के रूप में सूचित किया गया है । तब से, वैज्ञानिकों सेल राशि, स्टेम सेल संपत्ति, और सेल शीट के यांत्रिक संपत्ति को बढ़ाने के लिए अलग सेल शीट निर्माण विधियों के विकास पर काम किया है । अब तक, सेल शीट के कुछ प्रकार का निर्माण किया गया है और रोधगलन के उपचार में अध्ययन5, उपास्थि चोट6, और त्वचा घाव7.
प्रत्यारोपण से पहले स्टेम सेल की गतिविधि घायल ऊतक पुनर्जनन पर एक उभरते प्रभाव दिखाई दिया, और अलग सेल शीट निर्माण रणनीतियों स्टेम कोशिकाओं पर अलग प्रभाव है । एक तरफ, धाराप्रवाह सेल शीट्स केवल उच्च घनत्व स्टेम कोशिकाओं के शामिल है, और प्राकृतिक extracellular मैट्रिक्स monolayered सेल शीट्स8 stacking द्वारा या चुंबकीय ऊतक इंजीनियरिंग तकनीक9का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है । दूसरी ओर, शोधकर्ताओं ने अलग मचान विकसित करने के लिए पर्याप्त यांत्रिक शक्ति प्रदान करने के लिए और समर्थन सेल विकास10,11,12, जो एक कम स्टेम कोशिका बोने की सघनता के लिए पोषण सुनिश्चित करने की अनुमति आपूर्ति. हालांकि, इन तरीकों के बावजूद, multilayered सेल शीट संरचना के भीतर कम कुशल पोषण आपूर्ति में इन विट्रो निर्माण के दौरान एक प्रमुख चिंता बनी हुई है । इसलिए, एक कुशल और व्यवहार्य सेल शीट निर्माण प्रणाली तत्काल आवश्यक है ।
यह प्रोटोकॉल multilayeredmesenchymal स्टेम सेल (MSC) कक्ष पत्रक तैयार करने के लिए चरणों का वर्णन करता है । इस निर्माण प्रणाली में, सेल शीट यांत्रिक शक्ति एक डीपीपी द्वारा प्रदान की जाती है । इस पाड़ के आधार पर, 3d सेल संरचना जल्दी RAD16-मैं पेप्टाइड hydrogel के साथ निर्माण किया जा सकता है, और एक गतिशील छिड़काव प्रणाली multilayered सेल शीट संस्कृति के लिए प्रयोग किया जाता है, क्रम में 3 डी सेल शीट संरचना को स्थिर करने और पर्याप्त पोषण प्रदान कोशिकाओं के लिए आपूर्ति । इस प्रणाली का उपयोग करना, एक multilayered BMSC शीट सफलतापूर्वक तैयार किया गया था और चूहे रोधगलन पर एक इष्टतम उपचारात्मक प्रभाव का प्रदर्शन13मॉडल ।

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:657px;" width="658">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Phospholipase A2</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">P6534</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium deoxycholate</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phosphate buffer</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">89033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Penicillin streptomycin / amphotericin&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">15640055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Buffer bicarbonate</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">C3041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Table concentrator</td>
			<td style="width:108px;">Changzhou Aohua Instrument Co.</td>
			<td style="width:167px;">KT20183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium(DMEM)</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">10-014-CVR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:216px;">South American fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">10270-106/P30-3302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">25-005-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.25% Trypsin/2.21 mM EDTA</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">25-053-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Biosafety cabinet</td>
			<td style="width:108px;">Esco,Singapore</td>
			<td style="width:167px;">AC2-2S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Constant temperature incubator&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Esco,Singapore</td>
			<td style="width:167px;">CLS-170B-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Centrifuge tube&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:167px;">430790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EP tube</td>
			<td style="width:108px;">Axygen</td>
			<td style="width:167px;">31617934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Centrifugal machine</td>
			<td style="width:108px;">TOMOS</td>
			<td>1-16R&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">S9378-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pura Matrix&#160;</td>
			<td style="width:108px;">BD</td>
			<td style="width:167px;">354250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:216px;">Dynamic perfusion culture system</td>
			<td style="width:108px;">Minucells and Minutissue</td>
			<td style="width:167px;">D-93077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Peristaltic pump</td>
			<td style="width:108px;">Ismatec</td>
			<td style="width:167px;">IPC N8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pump tubing</td>
			<td style="width:108px;">Ismatec</td>
			<td style="width:167px;">Nr.1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 1300&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>tissue carrier components&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>dynamic perfusion system&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 0006</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>gas exchange equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 0002</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>500 mL glass bottle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 1301</td>
			<td style="width:108px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>perfusion culture container&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

construction of a multilayered mesenchymal stem cell sheet with a 3d dynamic culture system

स्टेम सेल थेरेपी घायल अंग और ऊतकों को पुनः उत्पन्न करने में एक होनहार भविष्य से पता चलता है, और सेल शीट तकनीक लक्ष्य क्षेत्र के भीतर कम सेल प्रतिधारण और गरीब अस्तित्व में सुधार करने के लिए विकसित किया गया है । हालांकि, इन विट्रो निर्माण प्रक्रिया के दौरान, स्टेम सेल की गतिविधियों को बनाए रखने और सेल शीट के भीतर सेल राशि को बढ़ाने के लिए एक समाधान तत्काल जरूरत है । यहां, इस प्रोटोकॉल अनुकूल स्टेम सेल के साथ एक multilayered सेल शीट के निर्माण के लिए एक विधि प्रस्तुत करता है और इष्टतम अंतर । सेलुलर सुअर का पेरीकार्डियम (डीपीपी) सेल शीट पाड़ के रूप में एक2 (पीएलए2) decellularization विधि phospholipase द्वारा तैयार किया जाता है, और चूहा अस्थि मज्जा mesenchymal स्टेम सेल (BMSCs) अलग कर रहे है और बीज के रूप में कोशिकाओं का विस्तार । अस्थाई multilayered कक्ष पत्रक संरचना RAD16-I पेप्टाइड hydrogel का उपयोग करके निर्मित है । अंत में, सेल शीट एक गतिशील छिड़काव प्रणाली के साथ संस्कृति के लिए तीन आयामी (3 डी) संरचना को स्थिर है, और सेल शीट एक ४८ के बाद प्राप्त किया जा सकता है इन विट्रो मेंघंटे संस्कृति । यह प्रोटोकॉल एक multilayered स्टेम सेल शीट के निर्माण के लिए एक कुशल और व्यवहार्य विधि प्रदान करता है, और सेल शीट भविष्य में एक अनुकूल स्टेम सेल थेरेपी उत्पाद के रूप में विकसित किया जा सकता है ।

multilayered स्टेम सेल शीट निर्माण की योजनाबद्ध चित्र 1में दिखाया गया है । पीएलए द्वारा सेल शीट पाड़ तैयार करना2 decellularization विधि पहला कदम है । पाड़ के आधार पर, एक अस्थाई 3d सेल संरचना RAD16-1 पेप...

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Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

एक 3 डी गतिशील संस्कृति प्रणाली के साथ एक Multilayered Mesenchymal स्टेम सेल शीट का निर्माण

यह लेख अनुकूल स्टेम सेल संपत्ति के साथ multilayered स्टेम सेल शीट के निर्माण के लिए एक कुशल और व्यवहार्य विधि प्रदान करता है ।

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...

स्टेम सेल थेरेपी व्यापक रूप से कई रोगों के लिए एक आशाजनक उपचार के रूप में सूचित किया गया है । और सेल शीट तकनीकों को सेल की अवधारण और लक्ष्यों के भीतर अस्तित्व में सुधार करने के लिए विकसित किया गया है। सेल शीट निर्माण के दौरान, अपर्याप्त पोषण की आपूर्ति स्टेम सेल के समारोह के नुकसान के लिए एक महत्वपूर्ण समस्या बनी हुई है, और एक असंतोषजनक स्टेम सेल संपत्ति अंततः वीवो में चिकित्सीय प्रभाव प्रभाव होगा ।उपलब्ध बहुस्तरीय स्टेम सेल शीट उत्पाद तैयार करने का हमारा उद्देश्य, हमारी टीम ने सेलुलराइज्ड डंडेलाइज्ड, पेरिकार्डियम और सेल शीट पाड़ विकसित किए। पाड़ के आधार पर मल्टीलेयर कोशिकाओं स्टार्टर जल्दी से nonapeptide हाइड्रोजन के साथ निर्माण किया जाएगा और एक गतिशीलता परफ्यूजन प्रणाली विट्रो में स्टेम सेल के पोषण की आपूर्ति सुनिश्चित करने के लिए प्रयोग किया जाता है । एक सूखे डीबीपी पाड़ को बाहर निकालें और इसे काले आधार के केंद्र में रखें।डीबीपी पाड़ पर एक सफेद तनाव की अंगूठी रखो, और यह ऊतक वाहक में प्रत्यय । सुनिश्चित करें कि डीबीपी पाड़ पूरी तरह से ऊतक वाहक में तय है। डीबीपी पाड़ पर 100 माइक्रोलीटर संस्कृति माध्यम जोड़ें।पाड़ को 37 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में डालें, और इसे 15 मिनट तक भिगोने दें। कोशिकाओं को इनक्यूबेटर से बाहर निकालें, संस्कृति के माध्यमों को संस्कृति पकवान से हटा दें, कोशिकाओं को गर्म पीबीएस के दो मिलीलीटर से धीरे से धोएं। संस्कृति पकवान से सभी PBS निकालें, और सुनिश्चित करें कि कोई तरल रहता है ।डिश के लिए 1.25% ट्राइप्सिन समाधान में दो मिलीलीटर जोड़ें, और कोशिकाओं को तीन मिनट तक इनक्यूबेट करें। दो मिलीलीटर संस्कृति माध्यम जोड़कर ट्राइपसिन प्रभाव को रोकें। डिश से कोशिकाओं को धीरे-धीरे धोएं।सेल निलंबन को एक नए 15 मिलीलीटर सेंट्रलाइज ट्यूब में स्थानांतरित करें। पांच मिनट के लिए 220 गुना गुरुत्वाकर्षण पर कोशिकाओं को अपकेंद्रित्र करें, और कोशिका तलछट प्राप्त करें। सुपरनेट निकालें, और कोशिका तलछट को मिटा दें।तीन मिलीलीटर 10% सुक्रोज समाधान के साथ कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें। एस्पिरेट 10 माइक्रोलीटर सेल निलंबन, और सामग्री सेल संख्या एक हीमोसाइटोमीटर पढ़ता है, तीन लाख कोशिकाओं को निकालने और अपने नए 1.5 मिलीलीटर अपकेंद्रित्र ट्यूब में हस्तांतरण। पांच मिनट के लिए 220 गुना वर्ग रूट पर कोशिकाओं को अपकेंद्रित्र करें, सुपरनेटेंट को पूरी तरह से हटा दें और कोशिकाओं को तलछट प्राप्त करें।20 माइक्रोलीटर 10% सुक्रोज समाधान तैयार करें। धीरे-धीरे कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें और एक समान निलंबन प्राप्त करें। निलंबन के शीर्ष पर 20 माइक्रोलिटर पेप्टाइड हाइड्रो जेल जोड़ें धीरे पेप्टाइड हाइड्रो जेल मिश्रण, और टी के साथ कोशिकाओं निलंबन, डीबीपी पाड़ बाहर ले, ऊतक वाहक छोड़, और फिर धीरे से एक टी के साथ कैल्कुली मीडियन aspirate मिश्रण मिश्रण और समान रूप से डीबीपी पाड़ पर जोड़ें ।ऊतक वाहक के नीचे एक मिलीलीटर कैल्शियम युक्त जोड़ें। धीरे-धीरे कल्चर डिश में चार मिलीलीटर कल्चरल मीडियम डालें और फिर सेल शीट उभरें। दो घंटे के लिए इनक्यूबेटर में कोशिकाओं रखो यह संस्कृति चलो ।गतिशील पर्फ्यूजन प्रणाली में एक पर्फ्यूजन कल्चर कंटेनर शामिल है जो गैस का आदान-प्रदान करते हैं और एक कांच की बोतल। असेम्बल दिखाए गए आंकड़े के रूप में गतिशील परफ्यूजन सिस्टम हैं। कांच की बोतल में दो हाइड्रो मिलीलीटर संस्कृति औसत जोड़ें।संस्कृति कंटेनर के कक्ष में सेल शीट डालें, कंटेनर में तीन मिलीलीटर संस्कृति मीडियन जोड़ें, इनक्यूबेटर में गतिशील पर्फ्यूजन सिस्टम डालें, और पंप करना शुरू करें। द्विप्रसिटिव रेक्यूम्बेंट में कल्चर कंटेनर खोलें। कल्चर कंटेनर से सेल शीट निकालकर कल्चर डिश में डाल दें।ऊतक वाहक को स्थिर करने के लिए एक संदंश का उपयोग करें और काले आधार से सफेद तनाव की अंगूठी को अलग करने के लिए एक और दो संदंश का उपयोग करें। अंत में, बहुस्तरीय सेल शीट प्राप्त करें। डीबीपी पाड़ पारदर्शी है।एसईएम पुनर्विकोस से पता चलता है कि कॉलेजों पर कब्जा कर लिया और घटक पूरी तरह से आरक्षित हैं । सेल शीट प्राप्त किया जा सकता है और कम संरक्षण के लिए संदंश द्वारा आयोजित किया जा सकता है। इन सेल शीट को 1.5 मिलीलीटर बेलिंड्रिफॉर्म ट्यूब में स्थानांतरित किया जा सकता है।उदाहरण के लिए एक मॉडल के रूप में स्टेम सेल मार्कर सीडी 9O और सीडी 29 के लिए बीएमएफसी के अत्यधिक सकारात्मक के सेल प्रदर्शनियों के साथ शुरू । सेल निर्माण के बाद बीएमएफसी के सेल शीट छोड़ने सीडी ९० और सीडी 29 के उच्च विस्तार स्तर रहता है । बहुस्तरीय कोशिका संरचना का निर्माण प्रोटोकॉल का महत्वपूर्ण कदम है।पैन समय के लिए चार हाइड्रो जेल की आवश्यकता होती है जब पीएच मूल्य एसए से तटस्थ में बदलता है, इसलिए, सतह आयनों को हटाने के लिए सुक्रोज समाधान के साथ सेल को धोना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, अस्थायी मल्टीलेयर संरचना के निर्माण के लिए सेल निलंबन और पैंथिहिड्रोगेल का मात्रा अनुपात अच्छा दोस्त नहीं है। 3 डी स्टेम सेल संरचना के गठन के बाद, आप देखेंगे कि बहुस्तरीय संरचना को स्थिर करने के साथ-साथ स्टेम सेल विग्रहों को बनाए रखने के लिए गतिशील पर्फ्यूजन प्रणाली महत्वपूर्ण है।संस्कृति औसत की गतिशील घुसपैठ स्टेम कोशिकाओं को बहुस्तरीय संरचना के भीतर कोशिका संदर्भ को पैदा करने और एक्सट्रपलेशन करने में मदद कर सकती है, यहां तक कि गतिशील संस्कृति थर्मामीटर को विभिन्न स्टेम सेल प्रकारों के अनुसार समायोजित किया जाना चाहिए।

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Microfabricated Platforms for Mechanically Dynamic Cell Culture

यंत्रवत् गतिशील सेल संस्कृति के लिए microfabricated प्लेटफार्म

The ability to systematically probe in vitro cellular response to combinations of mechanobiological stimuli for tissue engineering, drug discovery or ...

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

और मानव भ्रूण स्टेम कोशिकाओं (hESC) के प्रसार और भेदभाव के लिए एक 3 डी मंच के रूप में विभिन्न प्रजातियों के लिए alginate microcapsule

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

3 डी आतंच की तैयारी स्टेम सेल संस्कृति अनुप्रयोगों के लिए scaffolds

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Correlative Microscopy for 3D Structural Analysis of Dynamic Interactions

गतिशील सहभागिता की 3 डी स्ट्रक्चरल विश्लेषण के लिए correlative माइक्रोस्कोपी

Cryo-electron tomography (cryoET) allows 3D visualization of cellular structures at molecular resolution in a close-to-physiological state1. However, ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

टिशू इंजीनियरिंग: स्तरित सेल पत्रक के वितरण के लिए एक बहुकोशिकीय 3D पाड़ के निर्माण

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on PolyÃƒÅ½Ã‚Âµ-caprolactone Electrospun Yarns

पाली (ε-caprolactone) Electrospun सूत पर मानव mesenchymal स्टेम सेल की कुर्की का अनुकूलन

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

निर्धारित मानव इंजीनियर कार्डिएक ऊतकों के निर्माण हृदय सेल थेरेपी के तंत्र का अध्ययन करने के लिए

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning और 3 डी microvessels के विधानसभा

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

3 डी सेल संस्कृति के लिए पल्मोनरी बाह्य मैट्रिक्स से Tunable Hydrogels

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...