Name: construction of a multilayered mesenchymal stem cell sheet with a 3d dynamic culture system
Uploaded: 2018-10-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System at JoVE.com

Эта работа была поддержана Фонд национального естественных наук Китая (Грант номер 31771064); Наука и технологии планирования проекта провинции Гуандун (Грант номера 2013B010404030, 2014A010105029 и 2016A020214012); Наука и технологии планирования проекта Гуанчжоу (Грант номер 201607010063); и студентов инноваций и предпринимательства программа обучения (Грант номер 201610559028); Национальный научный фонд для молодых ученых Китая (предоставить номер 31800819).

Все стволовых клеток и животных эксперимент процедуры были проведены согласно этические принципы национального руководства для ухода и использования лабораторных животных и одобрен Цзинань университета животное уход и использование Комитетом (Гуанчжоу, Китай).
1. Подго...

<ol>
	<li>Miyahara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monolayered+mesenchymal+stem+cells+repair+scarred+myocardium+after+myocardial+infarction.">Monolayered mesenchymal stem cells repair scarred myocardium after myocardial infarction.</a> Nature Medicine. 12 (4), 459-465 (2006).</li><li>Narita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+cell-sheet+technique+eliminates+arrhythmogenicity+of+skeletal+myoblast-based+therapy+to+the+heart+with+enhanced+therapeutic+effects.">The use of cell-sheet technique eliminates arrhythmogenicity of skeletal myoblast-based therapy to the heart with enhanced therapeutic effects.</a> International Journal of Cardiology. 168 (1), 261-269 (2013).</li><li>Narita, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Use+of+Scaffold-free+Cell+Sheet+Technique+to+Refine+Mesenchymal+Stromal+Cell-based+Therapy+for+Heart+Failure.">The Use of Scaffold-free Cell Sheet Technique to Refine Mesenchymal Stromal Cell-based Therapy for Heart Failure.</a> Molecular Therapy. 21 (4), 860-867 (2013).</li><li>Matsuo, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiently+Piled-Up+Cardiac+Tissue-Like+Sheets+With+Pluripotent+Stem+Cell-Derived+Cells+Robustly+Promotes+Cell+Engraftment+and+Ameliorates+Cardiac+Dysfunction+After+Myocardial+Infarction.">Efficiently Piled-Up Cardiac Tissue-Like Sheets With Pluripotent Stem Cell-Derived Cells Robustly Promotes Cell Engraftment and Ameliorates Cardiac Dysfunction After Myocardial Infarction.</a> Circulation. 128 (22), (2013).</li><li>Alshammary, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+cardiac+stem+cell+sheet+transplantation+on+myocardial+infarction.">Impact of cardiac stem cell sheet transplantation on myocardial infarction.</a> Surgery Today. 43 (9), 970-976 (2013).</li><li>Chen, G. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+a+novel+PLGA+fiber/collagen+composite+web+as+a+scaffold+for+engineering+of+articular+cartilage+tissue+with+adjustable+thickness.">The use of a novel PLGA fiber/collagen composite web as a scaffold for engineering of articular cartilage tissue with adjustable thickness.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 67a (4), 1170-1180 (2003).</li><li>Cerqueira, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+Adipose+Stem+Cells+Cell+Sheet+Constructs+Impact+Epidermal+Morphogenesis+in+Full-Thickness+Excisional+Wounds.">Human Adipose Stem Cells Cell Sheet Constructs Impact Epidermal Morphogenesis in Full-Thickness Excisional Wounds.</a> Biomacromolecules. 14 (11), 3997-4008 (2013).</li><li>Sasagawa, T., Shimizu, T., Sekiya, S., Yamato, M., Okano, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+angiogenic+potential+between+prevascular+and+non-prevascular+layered+adipose-derived+stem+cell-sheets+in+early+post-transplanted+period.">Comparison of angiogenic potential between prevascular and non-prevascular layered adipose-derived stem cell-sheets in early post-transplanted period.</a> Journal of Biomedical Materials Research Part A. 102 (2), 358-365 (2014).</li><li>Ishii, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilayered+adipose-derived+regenerative+cell+sheets+created+by+a+novel+magnetite+tissue+engineering+method+for+myocardial+infarction.">Multilayered adipose-derived regenerative cell sheets created by a novel magnetite tissue engineering method for myocardial infarction.</a> International Journal of Cardiology. 175 (3), 545-553 (2014).</li><li>Godier-Furnemont, A. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Composite+scaffold+provides+a+cell+delivery+platform+for+cardiovascular+repair.">Composite scaffold provides a cell delivery platform for cardiovascular repair.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 108 (19), 7974-7979 (2011).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospun+nanofibrous+sheets+of+collagen/elastin/polycaprolactone+improve+cardiac+repair+after+myocardial+infarction.">Electrospun nanofibrous sheets of collagen/elastin/polycaprolactone improve cardiac repair after myocardial infarction.</a> American Journal of Translational Research. 8 (4), 1678-1694 (2016).</li><li>Arana, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epicardial+delivery+of+collagen+patches+with+adipose-derived+stem+cells+in+rat+and+minipig+models+of+chronic+myocardial+infarction.">Epicardial delivery of collagen patches with adipose-derived stem cells in rat and minipig models of chronic myocardial infarction.</a> Biomaterials. 35 (1), 143-151 (2014).</li><li>Wang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+high+bioactivity+multilayered+bone-marrow+mesenchymal+stem+cell+sheets+for+myocardial+infarction+using+a+3D-dynamic+system.">Preparation of high bioactivity multilayered bone-marrow mesenchymal stem cell sheets for myocardial infarction using a 3D-dynamic system.</a> Acta Biomaterialia. 72, 182-195 (2018).</li><li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+phospholipase+A(2)+to+prepare+acellular+porcine+corneal+stroma+as+a+tissue+engineering+scaffold.">The use of phospholipase A(2) to prepare acellular porcine corneal stroma as a tissue engineering scaffold.</a> Biomaterials. 30 (21), 3513-3522 (2009).</li><li>Degano, I. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+self-assembling+peptide+nanofiber+scaffolds+on+mouse+embryonic+fibroblast+implantation+and+proliferation.">The effect of self-assembling peptide nanofiber scaffolds on mouse embryonic fibroblast implantation and proliferation.</a> Biomaterials. 30 (6), 1156-1165 (2009).</li><li>Lampe, K. J., Heilshorn, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Building+stem+cell+niches+from+the+molecule+up+through+engineered+peptide+materials.">Building stem cell niches from the molecule up through engineered peptide materials.</a> Neuroscience Letters. 519 (2), 138-146 (2012).</li><li>Cui, X. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+Mesenchymal+Stem+Cells+with+Self-Assembling+Polypeptide+Scaffolds+Is+Conducive+to+Treating+Myocardial+Infarction+in+Rats.">Transplantation of Mesenchymal Stem Cells with Self-Assembling Polypeptide Scaffolds Is Conducive to Treating Myocardial Infarction in Rats.</a> Tohoku Journal of Experimental Medicine. 222 (4), 281-289 (2010).</li><li>Jun, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatially+Assembled+Bilayer+Cell+Sheets+of+Stem+Cells+and+Endothelial+Cells+Using+Thermosensitive+Hydrogels+for+Therapeutic+Angiogenesis.">Spatially Assembled Bilayer Cell Sheets of Stem Cells and Endothelial Cells Using Thermosensitive Hydrogels for Therapeutic Angiogenesis.</a> Advanced Healthcare Materials. 6 (9), (2017).</li><li>Chen, C. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Porous+tissue+grafts+sandwiched+with+multilayered+mesenchymal+stromal+cell+sheets+induce+tissue+regeneration+for+cardiac+repair.">Porous tissue grafts sandwiched with multilayered mesenchymal stromal cell sheets induce tissue regeneration for cardiac repair.</a> Cardiovascular Research. 80 (1), 88-95 (2008).</li></ol>

Настоящий Протокол сообщает эффективный метод для построения многослойных листов MSC. Эта ячейка листа экспонатов оптимальная механическая прочность, плотность посева высокой клеток и отпорности благоприятные стволовых клеток. Использование BMSCs в качестве примера, 3D клеточной структ?...

Терапия стволовой клетки было сообщено как эффективным средством лечения многих заболеваний; Однако низкий ячейки хранения и бедными выживания в целевой зоне остаются критические вопросы, после инъекции традиционные стволовых клеток. Для решения этой проблемы, ткани инженерных ученые разработали технику ячейки листа. Однослойное ячейки листа с нетронутыми внеклеточная матрица сначала был подготовлен с помощью температуры ответ культуры блюдо1, и его последующие исследования сообщили значительные улучшения сохранения стволовых клеток и выживания в infarcted Площадь2,3. Среди методов создания многослойных ячейки листа было сообщено как эффективную стратегию для улучшения выживание клетки и клетки листа терапевтический эффект3,4. С тех пор ученые работали на разработке методов строительства различных клеток листа для того, чтобы увеличить количество клеток, свойства стволовых клеток и механические свойства ячеек листов. До настоящего времени определенные типы клеток листа были построены и учился в лечении инфаркта миокарда5, хряща травмы6, и кожи раны7.
Биологическую стволовых клеток до пересадки показал возникающих влияние на регенерацию тканей потерпевшего, и стратегии строительства различных клеток листа имеют различные эффекты на стволовые клетки. С одной стороны вырожденная ячеек листов только состояла из высокой плотности стволовых клеток, и естественных внеклеточной матрицы могут быть приобретены укладки листов однослойное клетки8 или с помощью магнитных ткани, инженерной техники9. С другой стороны исследователи разработали различные леса для обеспечения адекватного механическую прочность и поддержки клеток роста10,11,12, что позволило низкий стволовых клеток, заполнение плотности для обеспечения питания питания. Однако несмотря на эти подходы, поставки низкой эффективности питания в структуре многослойных ячейки листа остается серьезной проблемой во время строительства в пробирке . Таким образом эффективно и целесообразно ячейки листа строительство системы срочно требуется.
Этот протокол описывает шаги по подготовке multilayeredmesenchymal стволовых клеток (МСК) ячейку листа. В этой конструкции системы клетки листа механическую прочность обеспечивается DPP. Основываясь на этом леску, 3D клеточной структуры может быть быстро построен с RAD16-я пептид гидрогеля и динамический перфузия системы используется для культуры многослойных ячейки листа, чтобы стабилизировать 3D клеточную структуру листа и обеспечить достаточное питание поставка для клеток. С помощью этой системы, многослойных BMSC лист был успешно подготовлен и выставлены оптимального терапевтического эффекта на инфаркт миокарда крыс модель13.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:657px;" width="658">
	<tbody>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;width:216px;">Phospholipase A2</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">P6534</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sodium deoxycholate</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">D6750-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Phosphate buffer</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">89033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Penicillin streptomycin / amphotericin&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">15640055</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Buffer bicarbonate</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">C3041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Table concentrator</td>
			<td style="width:108px;">Changzhou Aohua Instrument Co.</td>
			<td style="width:167px;">KT20183</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium(DMEM)</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">10-014-CVR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:216px;">South American fetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Gibco BRL</td>
			<td style="width:167px;">10270-106/P30-3302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">L-Glutamine</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">25-005-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">0.25% Trypsin/2.21 mM EDTA</td>
			<td style="width:108px;">Corning Cellgro</td>
			<td style="width:167px;">25-053-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Biosafety cabinet</td>
			<td style="width:108px;">Esco,Singapore</td>
			<td style="width:167px;">AC2-2S1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Constant temperature incubator&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Esco,Singapore</td>
			<td style="width:167px;">CLS-170B-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Centrifuge tube&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Corning</td>
			<td style="width:167px;">430790</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">EP tube</td>
			<td style="width:108px;">Axygen</td>
			<td style="width:167px;">31617934</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Centrifugal machine</td>
			<td style="width:108px;">TOMOS</td>
			<td>1-16R&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Sucrose</td>
			<td style="width:108px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:167px;">S9378-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pura Matrix&#160;</td>
			<td style="width:108px;">BD</td>
			<td style="width:167px;">354250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:39px;width:216px;">Dynamic perfusion culture system</td>
			<td style="width:108px;">Minucells and Minutissue</td>
			<td style="width:167px;">D-93077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Peristaltic pump</td>
			<td style="width:108px;">Ismatec</td>
			<td style="width:167px;">IPC N8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Pump tubing</td>
			<td style="width:108px;">Ismatec</td>
			<td style="width:167px;">Nr.1306</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 1300&#160;</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>tissue carrier components&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>dynamic perfusion system&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 0006</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>gas exchange equipment&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 0002</td>
			<td style="width:108px;">Regensburg</td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>500 mL glass bottle&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MINUSHEET 1301</td>
			<td style="width:108px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
			<td>perfusion culture container&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

construction of a multilayered mesenchymal stem cell sheet with a 3d dynamic culture system

Терапия стволовой клетки показывает многообещающее будущее в регенерации потерпевшего органов и тканей и клеток листа техника была разработана для улучшения удержания низкой клеток и бедными выживания в целевой зоне. Однако во время процесса строительства в vitro срочно необходима решение для сохранения стволовых клеток биологическую и увеличивая объем ячейки в ячейку листа. Здесь этот протокол представляет метод для построения клеток многослойного листа с благоприятным стволовых клеток биологическую и оптимальной работоспособности. Decellularized свинину перикарда (DPP) подготовлен фосфолипазы decellularization метод2 (2пла) как на эшафот ячейки листа, и изолированы и расширена в сеяный клетки костного мозга крысы мезенхимальных стволовых клеток (BMSCs). Временные многослойных клеточной структуры листа строится с помощью RAD16-я пептид гидрогеля. Наконец лист клетки культивировали с системой динамического перфузии стабилизировать структуру трехмерного (3D), и ячейку листа могут быть получены после 48-часовой культуры в пробирке. Этот протокол предоставляет метод эффективно и целесообразно для создания многослойных стволовых клеток лист и ячейку листа могут быть разработаны как продукт терапии благоприятные стволовых клеток в будущем.

Схема строительства лист многослойных стволовых клеток показана на рисунке 1. Первым шагом является подготовка на эшафот ячейки листа методом decellularization2 пла. Основываясь на эшафот, временного 3D клеточной структуры строится путем смешивания ство?...

Watch this Scientific Journal Video about Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System at JoVE.com

Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

Строительство многослойных мезенхимальных стволовых клеток листа с системой 3D динамичной культуры

Эта статья предоставляет метод эффективно и целесообразно для построения листы многослойного стволовых клеток с свойства благоприятные стволовых клеток.

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...

Терапия стволовыми клетками широко сообщалось как перспективное лечение многих заболеваний. И методы листа клетки были разработаны для того, чтобы улучшить удержание клетки и выживание в пределах целей, тоже. Во время строительства клеточных листов недостаточное питание остается ключевой проблемой для потери функции стволовых клеток, и является неудовлетворительным свойством стволовых клеток, наконец, эффект терапевтического воздействия in vivo.Наша цель, чтобы подготовить доступные многослойные стволовые клетки лист продукта, наша команда разработала клеточных полюсов, перикард и лист клеток эшафот. Основываясь на эшафот многослойных клеток стартер будет быстро построен с неапептидом водорода и динамика перфузии система используется для обеспечения питания питания стволовых клеток в пробирке. Вынул высушенный DBP эшафот и положил его в центре черного основания.Положите белое кольцо напряжения на эшафот DBP, и прикрепить его в ткани перевозчика. Убедитесь, что DBP эшафот полностью закреплен в ткани перевозчика. Добавьте 100 сред культуры микролитров на эшафот DBP.Положите эшафот в инкубатор 37 градусов по Цельсию, и дайте ему впитаться в течение 15 минут. Вынюйте клетки из инкубатора, удалите культурные среды из культурного блюда, аккуратно вымойте клетки двумя миллилитров теплого PBS. Удалите все PBS из культуры блюдо, и убедитесь, что не остается жидкости.Добавьте два миллилитра в раствор 1,25%трипсина в блюдо и инкубировать клетки в течение трех минут. Остановите эффект трипсина, добавив два миллилитров культуры среды. Аккуратно вымойте клетки из тарелки.Перенесите подвески клеток в новую центробежную трубку на 15 миллилитров. Центрифугат клеток в 220 раз тяжести в течение пяти минут, и получить клеточные отложения. Удалите супернатант и уничтожь клеточный осадок.Повторно приостанавливать клетки с тремя миллилитров 10% раствор сахарозы. Аспират 10 микролитров клеточной подвески, и содержание номера клетки читает гемоцитометр, извлечь три миллиона клеток и передачи в вашей новой 1,5 миллилитров центробежной трубки. Центрифугат клеток в 220 раз квадратный корень в течение пяти минут, полностью удалить supernatants и получить клетки осадок.Приготовьте 20 микролитров 10% раствора сахарозы. Аккуратно повторно приостанавливайте клетки и получите единую подвеску. Добавить 20 микролитров пептид гидрогеля в верхней части подвески осторожно смешать пептид гидро гель, и клетки подвески с T, вынюхить DBP эшафот, оставляя ткани перевозчика, а затем осторожно аспирировать исчисление медианы с T.Aspirate смесь смеси и равномерно добавить на DBP эшафот.Добавьте один миллилитр кальциедетата в нижней части носителя ткани. Аккуратно добавьте четыре миллилитровой культурной среды в блюдо культуры, а затем выйти лист клетки. Поместите клетки в инкубатор на два часа, чтобы дать ему культуру.Динамическая перфузионная система включает в себя контейнер культуры перфузии, газо обменивающиеся recrement и стеклянную бутылку. Сборки являются динамическими системами перфузии, как показано на рисунке. Добавьте в стеклянную бутылку два медианы культуры гидромилитров.Вставьте лист клетки в камеру контейнера культуры, добавьте три миллилитров культуры медианы в контейнере, положить динамические системы перфузии в инкубаторы, и начать перекачивать. Откройте контейнер культуры в двупозволенном лежачем. Вынул лист клетки из контейнера культуры и положил его в блюдо культуры.Используйте один типс, чтобы обездвижить носителя ткани и использовать еще два force, чтобы отделить белое кольцо напряжения от черной базы. Наконец, получить многослойный лист ячейки. DBP эшафот прозрачный.Sem перепродает показывает, что колледжи захватили и компоненты полностью зарезервированы. Листы клеток могут быть получены и проведены типсами для кратковременного сохранения. Эти листы клеток могут быть переданы в 1,5 миллилитров цилиндрической трубки.В качестве модели, например, начиная с клеточных показов BMFC'S весьма позитивным для стволовых клеток маркер CD 9O и CD 29. После клеточной конструкции BMFC'S, покидая лист ячейки, остается высоким уровнем расширения CD 90 и CD 29. Строительство многослойной структуры ячейки является критическим шагом протокола.Время кастрюли требует четырех гидрогеля, когда значение PH меняется от SA к нейтральному, поэтому важно мыть клетку раствором сахарозы, чтобы удалить поверхностные ионы. Кроме того, соотношение объема клеточной подвески и пантигидрогеля не является хорошим другом для построения временной многослойной конструкции. После формирования 3D структуры стволовых клеток, вы увидите, что динамическая система перфузии имеет важное значение для стабилизации многослойной структуры, а также поддержания виабильности стволовых клеток.Динамическое проникновение медианы культуры смогло облегчить стволовые клетки для того чтобы пролиферировать и экстраполировать смысл клетки внутри multilayered структура также динамические термометры культуры должны быть отрегулированы согласно по-разному типам стволовой клетки.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Microfabricated Platforms for Mechanically Dynamic Cell Culture

Microfabricated платформы для механическим динамическим культуре клеток

The ability to systematically probe in vitro cellular response to combinations of mechanobiological stimuli for tissue engineering, drug discovery or ...

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

Альгината микрокапсулы в качестве 3D-платформа для распространения и дифференциации эмбриональных стволовых клеток человека (чЭСК) для разных линий

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

Подготовка 3D фибрина лесов для стволовых Приложения культуре клеток

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Correlative Microscopy for 3D Structural Analysis of Dynamic Interactions

Корреляционно микроскопии для 3D Структурный анализ динамических взаимодействий

Cryo-electron tomography (cryoET) allows 3D visualization of cellular structures at molecular resolution in a close-to-physiological state1. However, ...

Tissue Engineering: Construction of a Multicellular 3D Scaffold for the Delivery of Layered Cell Sheets

Тканевая инженерия: Строительство многоклеточного 3D строительные леса на поставки слоистых сотовых листов

Many tissues, such as the adult human hearts, are unable to adequately regenerate after damage.2,3 Strategies in tissue engineering propose innovations to ...

Construction of Defined Human Engineered Cardiac Tissues to Study Mechanisms of Cardiac Cell Therapy

Строительство Defined человека Engineered сердечной ткани для изучения механизмов сердечной терапии клеток

Human cardiac tissue engineering can fundamentally impact therapeutic discovery through the development of new species-specific screening systems that ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning и сборка 3D микрососудов

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

Настраиваемый гидрогели от легочного внеклеточной матрицы для 3D клеточных культур

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

Exploring the Potential of Mesenchymal Stem Cell Sheet on The Development of Hepatocellular Carcinoma In Vivo

Exploring the Potential of Mesenchymal Stem Cell Sheet on The Development of Hepatocellular Carcinoma In Vivo

Изучение потенциала мезенхимальных стволовых клеток листа на развитие гепатоцеллюлярной карциномы In Vivo

An in vivo animal model that mimics human cancer could have various applications that deliver significant clinical information. The currently used ...

A Microfluidic Platform for Stimulating Chondrocytes with Dynamic Compression

Микрофлюидная платформа для стимулирования хондроцитов с динамическим сжатием

Mechanical stimuli are known to modulate biological functions of cells and tissues. Recent studies have suggested that compressive stress alters growth ...