Name: spatiotemporally controlled nuclear translocation of guests in living cells using caged molecular glues as photoactivatable tags
Uploaded: 2019-01-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Spatiotemporally Controlled Nuclear Translocation of Guests in Living Cells Using Caged Molecular Glues as Photoactivatable Tags at JoVE.com

Reconhecemos o centro para a integração de NanoBio, da Universidade de Tóquio. Este trabalho foi apoiado por subsídio para jovens cientistas (B) (26810046) K.O. e parcialmente financiado por subsídio para pesquisa especialmente promovido (25000005) T.A. R.M. graças a bolsas de pesquisa de Japão sociedade para a promoção da ciência (JSPS ) para jovens cientistas e o programa para as principais escolas de pós-graduação (GPLLI).

1. preparação dos convidados com colagem-R enjauladoTags
<ol><li>Prepare a solução de cola-NBD Caged.<ol>
<li>Sintetiza Cagedcola-NBD (Figura 1) seguindo os procedimentos descritos anteriormente20.</li>
		<li>Prepare uma solução stock de Cagedcola-NBD (10 mM) em seco dimetilsulfóxido (DMSO). Nota: Guarde a solução-mãe no escuro. A solução pode ser diluída com buffers aquosas ou meios de cultura celular em c...

<ol>
	<li>Miller, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+gene+therapy+comes+of+age.">Human gene therapy comes of age.</a> Nature. 357, 455-460 (1992).</li><li>Roth, J. A., Cristiano, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+Therapy+for+Cancer:+What+Have+We+Done+and+Where+Are+We+Going.">Gene Therapy for Cancer: What Have We Done and Where Are We Going.</a> Journal of the National Cancer Institute. 89, 21-39 (1997).</li><li>Verma, I. M., Weitzman, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GENE+THERAPY:+Twenty-First+Century+Medicine.">GENE THERAPY: Twenty-First Century Medicine.</a> Annual Review of Biochemistry. 74, 711-738 (2005).</li><li>Ragin, A. D., Morgan, R. 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K., Okuro, K., Sasaki, S., Hoashi, Y., Aida, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reductively+Cleavable+Nanocaplets+for+siRNA+Delivery+by+Template-Assisted+Oxidative+Polymerization.">Reductively Cleavable Nanocaplets for siRNA Delivery by Template-Assisted Oxidative Polymerization.</a> Journal of the American Chemical Society. 137, 15608-15611 (2015).</li><li>Hatano, J., Okuro, K., Aida, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoinduced+Bioorthogonal+1,3-Dipolar+Poly-cycloaddition+Promoted+by+Oxyanionic+Substrates+for+Spatiotemporal+Operation+of+Molecular+Glues.">Photoinduced Bioorthogonal 1,3-Dipolar Poly-cycloaddition Promoted by Oxyanionic Substrates for Spatiotemporal Operation of Molecular Glues.</a> Angewandte Chemie, International Edition. 55, 193-198 (2016).</li><li>Arisaka, A., Mogaki, R., Okuro, K., Aida, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caged+Molecular+Glues+as+Photoactivatable+Tags+for+Nuclear+Translocation+of+Guests+in+Living+Cells.">Caged Molecular Glues as Photoactivatable Tags for Nuclear Translocation of Guests in Living Cells.</a> Journal of the American Chemical Society. 140, 2687-2692 (2018).</li><li>Suzuki, Y., Okuro, K., Takeuchi, T., Aida, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Friction-Mediated+Dynamic+Disordering+of+Phospholipid+Membrane+by+Mechanical+Motions+of+Photoresponsive+Molecular+Glue:+Activation+of+Ion+Permeation.">Friction-Mediated Dynamic Disordering of Phospholipid Membrane by Mechanical Motions of Photoresponsive Molecular Glue: Activation of Ion Permeation.</a> Journal of the American Chemical Society. 134, 15273-15276 (2012).</li><li>Wang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-water-content+mouldable+hydrogels+by+mixing+clay+and+a+dendritic+molecular+binder.">High-water-content mouldable hydrogels by mixing clay and a dendritic molecular binder.</a> Nature. 463, 339-343 (2010).</li><li>Tamesue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Linear+versus+Dendritic+Molecular+Binders+for+Hydrogel+Network+Formation+with+Clay+Nanosheets:+Studies+with+ABA+Triblock+Copolyethers+Carrying+Guanidinium+Ion+Pendants.">Linear versus Dendritic Molecular Binders for Hydrogel Network Formation with Clay Nanosheets: Studies with ABA Triblock Copolyethers Carrying Guanidinium Ion Pendants.</a> Journal of the American Chemical Society. 135, 15650-15655 (2013).</li><li>Mohr, D., Frey, S., Fischer, T., G&#252;ttler, T., G&#246;rlich, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterisation+of+the+passive+permeability+barrier+of+nuclear+pore+complexes.">Characterisation of the passive permeability barrier of nuclear pore complexes.</a> EMBO Journal. 28, 2541-2553 (2009).</li><li>Best, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Click+Chemistry+and+Bioorthogonal+Reactions:+Unprecedented+Selectivity+in+the+Labeling+of+Biological+Molecules.">Click Chemistry and Bioorthogonal Reactions: Unprecedented Selectivity in the Labeling of Biological Molecules.</a> Biochemistry. 48, 6571-6584 (2009).</li><li>Kl&#225;n, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photoremovable+Protecting+Groups+in+Chemistry+and+Biology:+Reaction+Mechanisms+and+Efficacy.">Photoremovable Protecting Groups in Chemistry and Biology: Reaction Mechanisms and Efficacy.</a> Chemical Reviews. 113, 119-191 (2013).</li></ol>

Inquéritos anteriores de luz-acionou translocação de proteínas para o núcleo da célula foram obtidos usando enjaulado NLS7,8,9. Como mencionado anteriormente, esses métodos exigem técnicas adicionais para incorporar as proteínas NLS-marcados para o citoplasma. Em contraste, a nossa marca de cola-R Cagedpermite não só a translocação nuclear induzida por foto, mas também a captação celular dos convidados...

O núcleo da célula, que carrega a informação genética, dentre as mais importantes organelas é como um destino de entrega da droga subcellular, desde modulação de replicação de gene e expressão é eficaz no tratamento de várias doenças, incluindo câncer e genética 1,2,3de distúrbios. Para nuclear entrega de drogas, a conjugação de peptídeo etiquetas tais como um sinal de localização nuclear a4,5,6 tem sido amplamente pesquisada. No entanto, a fim de reduzir os efeitos colaterais indesejados, controle spatiotemporal de translocação nuclear é necessário.
Anteriormente, acionada por luz translocação de proteínas para o núcleo celular foi conseguida usando enjaulado NLS7,8,9. NLS migra para o núcleo da célula por ligação a proteínas de transporte citoplasmáticos6. Nos métodos relatados, proteínas comentários enjaulado NLS do rolamento são diretamente incorporadas no citoplasma por microinjeção8 ou expressos nas células de destino usando um código genético expansão técnica9. Portanto, um método que pode alcançar tanto celular absorção e translocação nuclear induzida por foto é vantajoso para aplicações práticas.
Aqui, descrevemos a luz-acionou a translocação nuclear dos convidados em células vivas, usando tags dendríticas cola molecular enjaulado (Cagedcola-R, Figura 1). Water-soluble colas molecular10,11,12,13,14,15,16,17,18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23 tendo vários pingentes de Gu+ têm sido desenvolvidos anteriormente, que aderem firmemente a proteínas11,12,13,14,15, 16,17, ácidos nucleicos18,19,20, de membranas fosfolipídicas21e argila nanosheets22,23 , através da formação de múltiplas pontes de sal entre seus pingentes Gu+ e oxyanionic grupos dos alvos. O pingentes de Gu+ de Cagedcola-R é protegido por um grupo de photocleavable aniônicos, nitroveratryloxycarbonyl butirato-substituídos (BANVOC). Os hóspedes com cola de Caged-R são absorvidos vivos células através de endocitose e estadia em endossomos (Figura 2). Sobre photoirradiation, os grupos NVOC BAde Cagedcola-R são desanexados para render uma uncaged molecular cola (cola deUncaged-R) carregando vários pingentes de Gu+ , que então facilita a migração do convidado etiquetado para o citoplasma, seguido-se o núcleo da célula (Figura 2). A marca de cola-R Cagedpode ser uncaged pela exposição a UV ou luz de dois fotões infravermelha (NIR) sem grave fototoxicidade. Demonstramos a entrega nuclear controlada spatiotemporally de macromoleculares convidados, bem como convidados da pequeno-molécula com etiquetas de colagem-R Caged, usando pontos quânticos (QDs) e uma tintura fluorescente (nitrobenzoxadiazole; NBD), respectivamente, como exemplos.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58631/58631fig1.jpg"> Figura 1: Estruturas esquemáticas do Cagedcola-R. Os 9 pendentes de íon (Gu.+) ultracentrifugation do Cagedcola-R são protegidos por um grupo de nitroveratryloxycarbonyl butirato-substituídos (BANVOC). Os grupos NVOC BAsão clivados por irradiação com UV ou luz NIR dois fotões. O núcleo focal do Cagedcola-R é acrescido com nitrobenzoxadiazole (NBD) ou dibenzocylooctyne (DBCO). Reproduzido com permissão da referência20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58631/58631fig1large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58631/58631fig2.jpg"> Figura 2: Ilustração esquemática da luz-acionou a translocação nuclear de convidados conjugados com uma marca de cola-R Caged. O convidado / conjugado de colagem-RCagedé retomado em vida células através de endocitose. Após a photoirradiation, a marca de cola-R Cagedé uncaged para produzir uma marca de cola-R Uncaged, que pode facilitar a fuga de CDDP do convidado marcado. Posteriormente, os comentários marcados migra para o núcleo da célula. Reproduzido com permissão da referência20. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58631/58631fig2large.jpg" target="_blank">Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.</a>

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Azide-PEG4-NHS ester</td>
			<td>Click Chemistry Tools</td>
			<td>AZ103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Q-dot 655 ITK</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q21521MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Regenerated cellulose membrane (MWCO 3,500)</td>
			<td>NIPPON Genetics</td>
			<td>TOR-3K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Regenerated cellulose membrane (MWCO 25,000)</td>
			<td>Harvard Apparatus</td>
			<td>7425-RC25K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hep3B Cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>HB-8064</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>8-chambered glass substrate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>155411JP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>167008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eagle&#39;s minimal essential medium (EMEM)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>10370-021</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>SH30406.02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffer saline (D-PBS)</td>
			<td>Wako Pure Chemical Industries</td>
			<td>045-29795</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LysoTracker Red</td>
			<td>Lonza Walkersville</td>
			<td>PA-3015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>H342</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Counting Kit-8</td>
			<td>Dojindo</td>
			<td>CK04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Carl-Zeiss</td>
			<td>LSM 510</td>
			<td>Equipped with two-photon excitation laser (Mai Tai laser, Spectra-Physics)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>TCS SP8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xenon light source</td>
			<td>Asahi Spectra</td>
			<td>LAX-102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microplate reader</td>
			<td>Molecular Devices</td>
			<td>SpectraMax Paradigm</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

spatiotemporally controlled nuclear translocation of guests in living cells using caged molecular glues as photoactivatable tags

O núcleo da célula é dentre as organelas mais importantes como um destino de entrega da droga subcellular, desde modulação de replicação de gene e expressão é eficaz no tratamento de várias doenças. Aqui, demonstramos a luz-acionou a translocação nuclear de convidados usando enjaulado tags cola molecular (Cagedcola-R), cujas múltiplas guanidínio pingentes de íon (Gu.+) são protegidos por um grupo de photocleavable aniônicos (butirato-substituídos nitroveratryloxycarbonyl; BA NVOC). Os hóspedes com cola de Caged-R são absorvidos vivos células através de endocitose e permanecem em endossomos. No entanto, após photoirradiation, Cagedcola-R é convertido em uncaged molecular cola (cola-RUncaged) carregando vários pingentes de Gu+ , que facilita a fuga de CDDP e translocação nuclear subsequente dos convidados. Este método é promissor para entrega da droga local-seletiva nuclear multiplataforma, desde que os convidados etiquetados podem migrar para o citoplasma, seguido pelo núcleo da célula apenas quando photoirradiated. Enjaulado Etiquetas de colagem-R podem entregar macromoleculares convidados como pontos quânticos (QDs) bem como convidados da pequeno-molécula. Enjaulado Etiquetas de colagem-R podem ser uncaged com luz UV, não só mas também dois fotões infravermelho próximo (NIR) a luz, que pode penetrar profundamente no tecido.

Antes de photoirradiation, Hep3B células incubadas com Cagedcola-NBD exibiram a emissão de fluorescência punctate de seu interior (λext = 488 nm; Figuras 4A e 4C, verde). Uma micrografia análoga foi obtida em cima de excitação em 543 nm para corante vermelho-fluorescente (figuras 4B e 4C, vermelho), indica que o Cagedcola-NBD localizada nos endossomos. Con...

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Spatiotemporally Controlled Nuclear Translocation of Guests in Living Cells Using Caged Molecular Glues as Photoactivatable Tags

Este protocolo descreve luz-acionou translocação nuclear de convidados em células vivas, usando tags cola molecular enjaulado. Este método é promissor para a entrega de drogas de nuclear-direcionamento local-seletivo.

Spatiotemporally controlado translocação Nuclear de convidados em células vivas, usando cola Molecular enjaulada como Photoactivatable Tags

The cell nucleus is one of the most important organelles as a subcellular drug-delivery target, since modulation of gene replication and expression is ...

Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave na área de entrega de drogas, como como entregar uma droga a um celular-granular específico. A principal vantagem dessa técnica é que a translocação nuclear de gás pode ser induzida pela luz. Demonstrando o procedimento serão Rina Mogaki e Akio Arisaka, os alunos de pós-graduação do meu grupo.Para começar a preparar o ponto quântico ligou a cola molecular da gaiola sintetizando cola molecular enjaucida ligada à dibenzocyclooctyne como descrito em mais detalhes em outros lugares. Prepare uma solução de estoque de 10 milimilas da cola molecular enjaucada ligada à dibenzocyclooctyne em DMSO seco. Em seguida, prepare o ponto quântico ligado cola molecular enjaucida, primeiro fazendo pontos quânticos funcionalizados aseye.Para isso, adicione 100 microliters de 125 micromolar aseye PEG4 NHS éster em DMF a 400 microliters de uma solução DMF contendo 500 nanomolar de pontos quânticos que são revestidos com pino funcionalizado de amina. Mexa a mistura por uma hora em temperatura ambiente. Coloque a solução resultante em uma membrana de celulose regenerada e dialise-a por 24 horas contra 800 ml de DMF.Em seguida, diluir a solução de estoque de cola molecular enjaucada ligada dibenzocyclooctyne a 50 micromolar com DMF e adicionar 200 microliters dele à solução pós dicálise. Mexa a mistura por três horas em temperatura ambiente. Em seguida, dilou a mistura resultante por 24 horas contra 800 ml de DMF fresco usando uma membrana de celulose regenerada com o peso molecular cortado de 25000.Após 24 horas diluir a solução resultante para 200 nanomolar com DMF. Mantenha o carcinoma hepatocelular humano HEP3 B-cells no meio essencial mínimo da Eagle contendo 10% de FBS em condições de cultura padrão. Um dia antes do experimento, 5000 células B HEP3 em 200 microlitrais de meio de cultura em cada poço de um escorregador de vidro de 8 câmaras.Em seguida, cubra o slide e coloque-o em uma incubadora por 24 horas. No dia seguinte, remova o meio de cultura e enxágue as células duas vezes com 100 microliters de PBS pré-aquecido. A cada poço do slide de 8 câmaras adicione 200 microliters de meio livre FBS contendo 10 micromolar de uma cola molecular enjauida fluorescente.Depois de incubar por 3 horas remova o meio de cultura e enxágue a amostra celular duas vezes com 100 microliters de PBS. Para visualizar os endosários adicione 200 microlitros de mídia cultural contendo 100 nanomolar de um corante fluorescente vermelho adicional, como LysoTracker Red. Incubar a amostra celular resultante por 20 minutos.Em seguida, remova o meio de cultura e enxágue a amostra celular duas vezes com 100 microliters de PBS. Posteriormente, devolva as células a 200 microliters do meio cultural. Para induzir a translocação nuclear da cola molecular enjauida fluorescente coloque as células sob uma fonte de luz de xenônio de 100 watts equipada com um filtro de bandpass de 365 nanômetros.Exponha as células à luz UV por 2 minutos. Durante este tempo mantenha a amostra da célula de controle sem exposição uv no escuro. A tampa dos substratos de vidro pode ser retirada para uma exposição uv eficiente, no entanto, tome cuidado, pois a exposição prolongada à luz UV pode causar morte celular.Para visualizar os núcleos adicione um microliter de mancha hoeschst ao meio da cultura. Incubar a amostra celular resultante por 10 minutos. Em seguida, coloque a amostra no estágio de um microscópio de varredura a laser confocal.Registre os micrografos para a cola molecular enjauida fluorescente, o LysoTracker Red, e a mancha nuclear. Como mostrado anteriormente, sementes 5000 carcinoma hepatocelular humano HEP3 células B em cada poço de um slide de câmara de 8 poços e cultura em condições padrão por 24 horas. Forneça as amostras de células com 200 microliters de meio de cultura livre FBS contendo a cola molecular enjauida fluorescentemente tingida.Incubar a amostra celular resultante por 3 horas. Em seguida, remova o meio de cultura e enxágue a amostra celular duas vezes com 100 microliters de PBS. Devolva as células para 200 microliters de meio cultural.Em seguida, sujeito a amostra de microscopia de varredura a laser confocal e registro dos micrografos conforme descrito no protocolo de texto que acompanha. Como mostrado anteriormente, 5000 células hepatocelulares humanas HEP3 B em cada poço de um escorregador de câmara de 8 poços e cultura em condições padrão por 24 horas. Forneça as amostras de células com 200 microlitadores de meio de cultura livre FBS contendo 10 nanomolares da cola molecular enjauida ligada ao ponto quântico.Incubar a amostra celular resultante por 3 horas. Em seguida, remova o meio e enxágue a amostra celular duas vezes com 100 microliters de PBS. Após enxaguar as células, devolva-as a 200 microliters de meio de cultura.Em seguida, coloque a placa sob uma fonte de luz de xenônio de 100 watts equipada com um filtro de bandpass de 365 nanômetros. Exponha a amostra celular à luz UV por 2 minutos mantendo as amostras de controle no escuro. Para visualizar os núcleos adicione 1 microliter de mancha hoechst ao meio da cultura.Incubar a amostra celular resultante por 10 minutos. Em seguida, imagem as células usando um microscópio de varredura a laser confocal. Semente o carcinoma hepatocelular humano HEP3 Células B um dia antes do experimento a 5000 células por poço em uma placa de cultura de 96 poços.Em seguida, cubra as células com 200 microliters de mídia cultural e, em seguida, coloque a placa em uma incubadora por 24 horas. No dia seguinte, remova o meio de cultura e enxágue a amostra celular duas vezes com 100 microliters de PBS. Em seguida, adicione 200 microliters de cultura livre FBS contendo a cola molecular enjauida fluorescentemente tingida em concentrações que variam de 0,1 a 100 micromolar.Incubar a placa por 3 horas e, em seguida, colocar uma placa sob a fonte de luz UV. Exponha a amostra celular à luz UV por 2 minutos mantendo as amostras de controle no escuro. Após a exposição uv em 10 microlitres do kit de contagem celular-8 reagente ao meio da cultura e incubar a amostra celular resultante por 2 horas.Em seguida, leia a absorção das amostras em 450 nanômetros usando um leitor de microplacão. Antes da radiação fotográfica, as células B incubadas com cola molecular enjaulada fluorescente apresentam emissão de fluorescência pontual do interior, um micrografo análogo mostrando o LysoTracker Red indica que a cola molecular enjaulada fluorescente foi localizada nos endósmos. Assim, a emissão de fluorescência atribuída à cola molecular enjauida fluorescente foi observada fora do núcleo celular antes da radiação UV.Após a radiação UV, a fluorescente sugere que a cola molecular enjauida fluorescente foi descagada e migrou para o citoplasma e o núcleo celular. Tal tradução nuclear da cola molecular enjauida fluorescente pode ser induzida seletivamente por 2 fótons perto da luz infravermelha. A cola molecular enjaulada fluorescente em áreas não irradiadas não escapou dos endósmosos e permaneceu como fluorescência pontual.As etiquetas de cola molecular enjauladas dendríticas também podem fornecer convidados macromoleculares, como pontos quânticos no núcleo celular. Esses conjugados podem ser levados para as células e após a exposição uv por 2 minutos a emissão de fluorescência dos pontos quânticos pode ser vista dentro do núcleo. Após esse desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores do campo da terapia genética explorarem o tratamento de baixo efeito colateral.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Facile and Efficient Preparation of Tri-component Fluorescent Glycopolymers via RAFT-controlled Polymerization

Preparação fácil e eficiente de glicopolímeros fluorescentes Tri-componente via polimerização controlada pelo JANGADA

Synthetic glycopolymers are instrumental and versatile tools used in various biochemical and biomedical research fields. An example of a facile and ...

Química

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Radiomarcação e quantificação dos níveis celulares de Fosfoinositídeos por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência acoplado Fluxo de Cintilação

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

Sequenciamento de parede planta heteroxilanos Usando enzimática, química (metilação) e físico (espectrometria de massa, ressonância magnética nuclear) Técnicas

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

Investigations on the Ga(III) Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue

Investigations on the GaIII Complex of EOB-DTPA and Its 68Ga Radiolabeled Analogue

As investigações sobre o Complexo Ga (III) de EOB-DTPA e sua<sup&gt; 68</sup&gt; Ga Radiolabeled Analogue

We demonstrate a method for the isolation of EOB-DTPA (3,6,9-triaza-3,6,9-tris(carboxymethyl)-4-(ethoxybenzyl)-undecanedioic acid) from its Gd(III) ...

Characterizing Electron Transport through Living Biofilms

Caracterizando o transporte de elétrons através de biofilmes vivos

Here we demonstrate the method of electrochemical gating used to characterize electrical conductivity of electrode-grown microbial biofilms under ...

Laser-heating and Radiance Spectrometry for the Study of Nuclear Materials in Conditions Simulating a Nuclear Power Plant Accident

Aquecimento a laser e espectrometria de radiância para o estudo de materiais nucleares em condições que simulam um acidente em uma usina nuclear

Major and severe accidents have occurred three times in nuclear power plants (NPPs), at Three Mile Island (USA, 1979), Chernobyl (former USSR, 1986) and ...

In Situ Detection and Single Cell Quantification of Metal Oxide Nanoparticles Using Nuclear Microprobe Analysis

In Situ Detection and Single Cell Quantification of Metal Oxide Nanoparticles Using Nuclear Microprobe Analysis

In Situ Deteção e única célula quantificação de nanopartículas de óxido de Metal usando análise de microsonda Nuclear

Micro-analytical techniques based on chemical element imaging enable the localization and quantification of chemical composition at the cellular level. ...

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Controlled Photoredox Ring-Opening Polymerization of O-Carboxyanhydrides Mediated by Ni/Zn Complexes

Controlado por polimerização de anel de abertura Photoredox do - Carboxyanhydrides, mediada por complexos de Ni/Zn

Here, we describe an effective protocol that combines photoredox Ni/Ir catalysis with the use of a Zn-alkoxide for efficient ring-opening polymerization, ...

Achieving Moderate Pressures in Sealed Vessels Using Dry Ice As a Solid CO2 Source

Achieving Moderate Pressures in Sealed Vessels Using Dry Ice As a Solid CO2 Source

Atingir pressões moderadas em vasos selados usando gelo seco como uma sólido CO2 fonte

Herein is presented a general strategy to perform reactions under mild to moderate CO2 pressures with dry ice. This technique obviates the need for ...

Light-driven Molecular Motors on Surfaces for Single Molecular Imaging

Motores moleculares orientado a luz em superfícies para única imagem Molecular

The design and synthesis of a synthetic system that aims for the direct visualization of a synthetic rotary motor at the single molecule level on surfaces ...