Name: antimicrobial synergy testing by the inkjet printer-assisted automated checkerboard array and the manual time-kill method
Uploaded: 2019-04-18T12:30:00
Duration: 12 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method at JoVE.com

Thea برينان-كروهن أيد قبل "يونيس كينيدي شرايفر الوطني معهد صحة الطفل" و "التنمية البشرية" طب الأمراض المعدية الأبحاث منحة التدريب (T32HD055148)، و "المعهد الوطني للحساسية" و "الأمراض المعدية" (منحة التدريب T32AI007061)، زمالة مستشفى المكتب من كلية التنمية كلية التطوير الوظيفي بوسطن للأطفال، والمعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية جائزة تنمية مهنية (1K08AI132716). J.E.K. أيده بالمعهد الوطني للحساسية والأمراض المعدية من "المعاهد الوطنية للصحة" تحت رقم جائزة R33 AI119114. المحتوى هي المسؤولة الوحيدة عن المؤلفين ولا تمثل بالضرورة وجهات النظر الرسمية "المعاهد الوطنية للصحة".

<ol>
	<li>Temkin, E., Adler, A., Lerner, A., Carmeli, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbapenem-resistant+Enterobacteriaceae:+Biology,+epidemiology,+and+management.">Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae: Biology, epidemiology, and management.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1323 (1), 22-42 (2014).</li><li>Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+antibiotics.">The future of antibiotics.</a> Critical Care. 18 (3), (2014).</li><li>Spellberg, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemic+of+antibiotic-resistant+infections:+a+call+to+action+for+the+medical+community+from+the+Infectious+Diseases+Society+of+America.">The epidemic of antibiotic-resistant infections: a call to action for the medical community from the Infectious Diseases Society of America.</a> Clinical infectious diseases an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 46 (2), 155-164 (2008).</li><li>Elemam, A., Rahimian, J., Doymaz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+antibiotic+synergy+for+polymyxin+B-resistant+carbapenemase-producing+Klebsiella+pneumoniae.">In vitro evaluation of antibiotic synergy for polymyxin B-resistant carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae.</a> Journal of Clinical Microbiology. 48 (10), 3558-3562 (2010).</li><li>Poirel, L., Kieffer, N., Nordmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+dual+carbapenem+combinations+against+carbapenemase-producing+Enterobacteriaceae.">In vitro evaluation of dual carbapenem combinations against carbapenemase-producing Enterobacteriaceae.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 71 (1), 156-161 (2016).</li><li>Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy,+antagonism,+and+what+the+chequerboard+puts+between+them.">Synergy, antagonism, and what the chequerboard puts between them.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 52, (2003).</li><li>Zusman, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+review+and+meta-analysis+of+in+vitro+synergy+of+polymyxins+and+carbapenems.">Systematic review and meta-analysis of in vitro synergy of polymyxins and carbapenems.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (10), 5104-5111 (2013).</li><li>Clock, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+doripenem+alone+and+in+multi-agent+combinations+against+extensively+drug-resistant+Acinetobacter+baumannii+and+Klebsiella+pneumoniae.">In vitro activity of doripenem alone and in multi-agent combinations against extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae.</a> Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 76 (3), 343-346 (2013).</li><li>Hirsch, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+antimicrobial+combinations+for+Klebsiella+pneumoniae+carbapenemase-producing+K.+pneumoniae.">Assessment of antimicrobial combinations for Klebsiella pneumoniae carbapenemase-producing K. pneumoniae.</a> Journal of Infectious Diseases. 207 (5), 786-793 (2013).</li><li>T&#228;ngd&#233;n, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+double-+and+triple-antibiotic+combinations+for+VIM-+and+NDM-producing+klebsiella+pneumoniae+by+in+vitro+time-kill+experiments.">Evaluation of double- and triple-antibiotic combinations for VIM- and NDM-producing klebsiella pneumoniae by in vitro time-kill experiments.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (3), 1757-1762 (2014).</li><li>Tascini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+activity+of+colistin+plus+rifampin+against+colistin-resistant+kpc-producing+klebsiella+pneumoniae.">Synergistic activity of colistin plus rifampin against colistin-resistant kpc-producing klebsiella pneumoniae.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (8), 3990-3993 (2013).</li><li>Paul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+for+carbapenem-resistant+Gram-negative+bacteria.">Combination therapy for carbapenem-resistant Gram-negative bacteria.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (9), 2305-2309 (2014).</li><li>Rafailidis, P. I., Falagas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Options+for+treating+carbapenem-resistant+Enterobacteriaceae.">Options for treating carbapenem-resistant Enterobacteriaceae.</a> Current Opinion in Infectious Diseases. 27 (6), 479-483 (2014).</li><li>Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Verification+of+an+automated,+digital+dispensing+platform+for+at-will+broth+microdilution-based+antimicrobial+susceptibility+testing.">Verification of an automated, digital dispensing platform for at-will broth microdilution-based antimicrobial susceptibility testing.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (9), 2288-2293 (2016).</li><li>Brennan-Krohn, T., Truelson, K., Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+Synergistic+Activity+of+Antimicrobial+Combinations+Against+Carbapenem-Resistant+Enterobacteriaceae+Using+Inkjet+Printer-Based+Technology.">Screening for Synergistic Activity of Antimicrobial Combinations Against Carbapenem-Resistant Enterobacteriaceae Using Inkjet Printer-Based Technology.</a> J Antimicrob Chemother. 72 (10), 2775-2781 (2017).</li><li>Brennan-Krohn, T., Pironti, A., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+Activity+of+Colistin-Containing+Combinations+against+Colistin-Resistant+Enterobacteriaceae.">Synergistic Activity of Colistin-Containing Combinations against Colistin-Resistant Enterobacteriaceae.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2018).</li><li>Falagas, M. E., Kasiakou, S. K., Saravolatz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin:+The+Revival+of+Polymyxins+for+the+Management+of+Multidrug-Resistant+Gram-Negative+Bacterial+Infections.">Colistin: The Revival of Polymyxins for the Management of Multidrug-Resistant Gram-Negative Bacterial Infections.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (9), 1333-1341 (2005).</li><li>Nation, R. L., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+in+the+21st+century.">Colistin in the 21st century.</a> Current Opinion in Infectious Diseases. 22 (6), 535-543 (2009).</li><li>Ah, Y. -. M., Kim, A. -. J., Lee, J. -. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+resistance+in+Klebsiella+pneumoniae.">Colistin resistance in Klebsiella pneumoniae.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 44 (1), 8-15 (2014).</li><li>Bratu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbapenemase-producing+Klebsiella+pneumoniae+in+Brooklyn,+NY:+Molecular+epidemiology+and+in+vitro+activity+of+polymyxin+B+and+other+agents.">Carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae in Brooklyn, NY: Molecular epidemiology and in vitro activity of polymyxin B and other agents.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 56 (1), 128-132 (2005).</li><li>Barth, N., Ribeiro, V. B., Zavasckid, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+polymyxin+B+plus+imipenem,+meropenem,+or+tigecycline+against+KPC-2-producing+Enterobacteriaceae+with+high+MICs+for+these+antimicrobials.">In vitro activity of polymyxin B plus imipenem, meropenem, or tigecycline against KPC-2-producing Enterobacteriaceae with high MICs for these antimicrobials.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (6), 3596-3597 (2015).</li><li>MacLowry, J., Jaqua, M., Selepak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+methodology+and+implementation+of+a+semiautomated+serial+dilution+microtechnique+for+antimicrobial+susceptibility+testing.">Detailed methodology and implementation of a semiautomated serial dilution microtechnique for antimicrobial susceptibility testing.</a> Appl Microbiol. 20 (1), 46-53 (1970).</li><li>Brennan-Krohn, T., Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+poisoned+well:+Enhancing+the+predictive+value+of+antimicrobial+susceptibility+testing+in+the+era+of+multidrug+resistance.">The poisoned well: Enhancing the predictive value of antimicrobial susceptibility testing in the era of multidrug resistance.</a> Journal of Clinical Microbiology. 55 (8), 2304-2308 (2017).</li><li>Doern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+does+2+plus+2+equal+5?+A+review+of+antimicrobial+synergy+testing.">When does 2 plus 2 equal 5? A review of antimicrobial synergy testing.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (12), 4124-4128 (2014).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 28th ed. CLSI supplement M100. , (2018).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard - Tenth Edition. CLSI document M07-A10. , (2015).</li><li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> M07: Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically, 11th Edition. , (2018).</li><li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods for determining bactericidal activity of antimicrobial agents; approved guideline M26-A. 19 (18), 7 (1999).</li><li>Naghili, H., Tajik, H., Mardani, K., Razavi Rouhani, S. M., Ehsani, A., Zare, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+drop+plate+technique+for+bacterial+enumeration+by+parametric+and+nonparametric+tests.">Validation of drop plate technique for bacterial enumeration by parametric and nonparametric tests.</a> Veterinary research forum. 4 (3), 179-183 (2013).</li><li>Chen, C. Y., Nace, G. W., Irwin, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+6x6+drop+plate+method+for+simultaneous+colony+counting+and+MPN+enumeration+of+Campylobacter+jejuni,+Listeria+monocytogenes,+and+Escherichia+coli.">A 6x6 drop plate method for simultaneous colony counting and MPN enumeration of Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli.</a> Journal of Microbiological Methods. 55 (2), 475-479 (2003).</li><li>Queenan, A. M., Foleno, B., Gownley, C., Wira, E., Bush, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Inoculum+and+Activity+in+AmpC-+and+Extended-Spectrum+(ESBL)-Producing+Escherichia+coli+and+Klebsiella+pneumoniae+Clinical+Isolates+Tested+by+Using+NCCLS+ESBL+Methodology.">Effects of Inoculum and Activity in AmpC- and Extended-Spectrum (ESBL)-Producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae Clinical Isolates Tested by Using NCCLS ESBL Methodology.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (1), 269-275 (2004).</li><li>Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inoculum+Effect+in+the+Era+of+Multidrug+Resistance:+Minor+Differences+in+Inoculum+Have+Dramatic+Effect+on+Minimal+Inhibitory+Concentration+Determination.">The Inoculum Effect in the Era of Multidrug Resistance: Minor Differences in Inoculum Have Dramatic Effect on Minimal Inhibitory Concentration Determination.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2018).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergism+Testing:+Broth+Microdilution+Checkerboard+and+Broth+Macrodilution+Methods.">Synergism Testing: Broth Microdilution Checkerboard and Broth Macrodilution Methods.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. , (2016).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-Kill+Assay+for+Determining+Synergy.">Time-Kill Assay for Determining Synergy.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. , (2016).</li><li>Hindler, J. A., Humphries, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+MIC+variability+by+method+for+contemporary+clinical+isolates+of+multidrug-resistant+gram-negative+bacilli.">Colistin MIC variability by method for contemporary clinical isolates of multidrug-resistant gram-negative bacilli.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (6), 1678-1684 (2013).</li><li>Sutherland, C. A., Nicolau, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+add+or+not+to+add+Polysorbate+80:+Impact+on+colistin+MICs+for+clinical+strains+of+Enterobacteriaceae+and+Pseudomonas+aeruginosa+and+quality+controls.">To add or not to add Polysorbate 80: Impact on colistin MICs for clinical strains of Enterobacteriaceae and Pseudomonas aeruginosa and quality controls.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (10), 3810 (2014).</li><li>Fuchs, P. C., Barry, a. L., Brown, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+testing+quality+control+studies+with+fosfomycin+tromethamine.">Susceptibility testing quality control studies with fosfomycin tromethamine.</a> European journal of clinical microbiology &amp; infectious diseases official publication of the European Society of Clinical Microbiology. 16 (7), 538-540 (1997).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimum+Bactericidal+Concentration+Testing.">Minimum Bactericidal Concentration Testing.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. 5.14.1.11. , (2016).</li><li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+polymyxin+B+in+combination+with+various+antibiotics+against+extensively+drug-resistant+Enterobacter+cloacae+with+decreased+susceptibility+to+polymyxin+B.">In vitro activity of polymyxin B in combination with various antibiotics against extensively drug-resistant Enterobacter cloacae with decreased susceptibility to polymyxin B.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 60 (9), 5238-5246 (2016).</li><li>Bulman, Z. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymyxin+combinations+combat+Escherichia+coli+harboring+mcr-1+and+blaNDM-5:+Preparation+for+a+postantibiotic+Era.">Polymyxin combinations combat Escherichia coli harboring mcr-1 and blaNDM-5: Preparation for a postantibiotic Era.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li></ol>

وقدمت تيكان (موريسفيل، نورث كارولاينا) "موزع D300 الرقمية" والمواد الاستهلاكية المرتبطة بها. وقد تيكان أي دور في تصميم الدراسة أو جمع/تفسير البيانات، وإعداد مخطوطة أو قرار نشر.

طريقتين الموصوفة هنا على حد سواء تقديم معلومات حول النشاط مضادات الميكروبات المستخدمة في تركيبة على النشاط الفردي بالمقارنة. الرقمية المدعومة من الطابعة النافثة للحبر الآلي، الاستغناء عن الأسلوب تكييف الطريقة الموضحة في "دليل إجراءات الميكروبيولوجيا السريرية"33، بينما يتبع أسلوب قتل الوقت أوثق البروتوكول المقابلة من نفس الرجوع إلى34.
في أسلوب صفيف الشطرنج الآلي العمليات الحسابية لتحديد حجم المخزون الميكروبات إضافة إلى كل بئر اللازمة فضلا عن الاستغناء عن هذه المجلدات، وبالتالي القضاء على بعض المصادر المحتملة الرئيسية لمصادفة خطأ في دليل لوح شطرنج الصفيف. بيد أنها لا تزال ضرورية، أن يحدد المحقق أن الأرصدة الأصلية مصنوعة في تركيز المقصودة وأن تركيزات الهدف النهائي يتم إدخالها في البرنامج D300 بشكل صحيح. إضافة تعليق مضادات الميكروبات للآبار في صفيحة 384-جيدا يمكن أن تكون صعبة في البداية ويتطلب العناية لضمان أن الماصة أدخل نصائح الآبار المناسبة وأن السائل لا يصل دفقة حواف الآبار. يمكن استخدام معالج سائل الآلي بدلاً من ماصة الأقنية باليد لزيادة السرعة والدقة التي يتم إضافة تعليق البكتيرية للآبار. كما ورد في البروتوكول، D300 يتطلب إضافة الفاعل، بوليسوربيت 20 (P-20)، للتعامل الصحيح مع السائل. وقد لوحظ خافض للتوتر السطحي مختلفة، بولي سوربات 80، بتركيز 0.002 في المائة، انخفاض الدخل كوليستين للكائنات الحية مع البلدان المتوسطة الدخل كوليستين < 2 ميكروغرام/مل في فحوصات ميكروديلوتيون مرق القياسية. 35 , 36 مختبرنا سابقا أظهر أن P-20 بتركيزات تصل إلى 0.0015% قد أي تأثير على نتائج D300-بمساعدة هيئة التصنيع العسكري بالمقارنة مع مرجع BMD14. في المثال المقايسة المقدمة هنا، P-20 الحد الأقصى هو تركيز 0.0014%.
ونحن واجه مشكلة واحدة مع بعض فحوصات الصفيف رقعة الداما كان عدد كبير من الآبار تم تخطيها. وهذا حدث بمعدل غير متناسب مع بعض المضادات الحيوية. على وجه التحديد، في شاشة تركيبات ضد مجموعة من مقاومة الكاربابينيمات Enterobacteriaceae، وجدنا أنه بينما 49 المحاكمات 521 (9.4%) غير صالحة للاستعمال بسبب عدة آبار تم تخطيها، 2 12 المضادات الحيوية اختبار (فوسفوميسين وسيفيبيمي) واستأثرت 46 من هذه المحاكمات (94%). قد تكون هذه زيادة معدلات أكثر احتمالاً في المخدرات التي عرضه بشكل خاص لتأثير العدوى31،،من3237. ملاحظة، لا توصي كلسي اختبار فوسفوميسين في مرق تمييع25 بسبب المخاوف حول موثوقية النتائج مع هذا الأسلوب، مما قد يفسر نتائج يمكن الاعتماد عليها مع هذا الدواء. يمكن إجراء بعض التعديلات للأسلوب الآلي الشطرنج وفقا لتفضيل المحقق. يمكن الاستغناء مضادات الميكروبات في لوحات الفعل الذي يتضمن تعليق البكتيرية، بدلاً من الآبار فارغة، وإذا كان هذا الأفضل لأسباب تتعلق بسير العمل داخل المختبر. بينما استخدمت لوحات 384-جيدا هنا، الطريقة يمكن أيضا تنفذ في فحوصات لوحة 96-جيدا مع التعديل المناسب لحجم جيدا. قد يساعد استخدام شكل لوحة 96-جيدا في الآبار تم تخطي الحد للمضادات الحيوية التي شديدة الحساسية للتغيرات الصغيرة في العدوى. عند حساب FICأنا، قد يكون هناك حالات حيث هيئة التصنيع العسكري خارج النطاق (أي، أعلى من اختبار)، بما في ذلك حالات فيها العقاقير يجري اختبارها بأي نشاط فردي ضد النوع من الكائنات الحية التي يجري اختبارها. في هذه الحالات، FIC يمكن حساب استناداً إلى افتراض واحد إضعاف أعلى من أعلى تركيز اختبار هيئة التصنيع العسكري. هذه هي الاستراتيجية الأكثر محافظة، كما أنه يفترض قيمة FIC القصوى الممكنة لتمييع أي حيث لوحظ تثبيط أثناء اختبار التآزر. على سبيل المثال، إذا كانت هيئة التصنيع العسكري الفعلي بدلاً من تخفيف مضاعفة اثنين أعلاه أعلى تركيز اختبارها، ثم FICs المقابلة سيكون من شقين هما أقل من تعيينات المحافظين، وهلم جرا.
من أجل تقييم نشاط جراثيم المخدرات في مقايسة قتل الوقت دقة، من الضروري أن تكون الثقافات لوغاريتمي مرحلة النمو، لا سيما عند جدار الخلية النشطة المضادات الحيوية التي يجري اختبارها28. للبكتيريا تنمو بسرعة المستخدمة في هذا المثال (K. الرئوية)، 3 ساعات للحضانة مع الهز كان مناسبة للوصول إلى هذه المرحلة من النمو، ولكن كميات مختلفة من الوقت قد يكون ضروريا للكائنات الحية المختلفة. وبصفة عامة، ينبغي أن تظهر الثقافة عكر واضح ولكن ليس بشكل كبير. يمكن تحديد المبلغ المناسب للوقت عن طريق إنشاء منحنى نمو مع مستعمرة التهم اتخذت في وقت المسلسل نقاط (مثلاً كل 30 دقيقة ح 4-6)38. العدوى انطلاق المقصود في الدراسة قتل الوقت مهم أيضا. تركز الهدف من العدوى ابتداء من حوالي 5 × 105 إلى 1 × 106 زيمبابوي/مل. تمييع الموصوفة هنا (100 ميكروليتر من تعليق ماكفارلاند 1.0 في 10 مل من وسائل الإعلام) يولد هذه العدوى الكلبسيله الرئوية وغيرها من الأنواع انتيروباكتيرياسي التي اختبرناها عليه. إذا كانت كثافة لقاح الانطلاق في تجربة استخدام الكائنات المختلفة إلى حد كبير أعلى أو أقل من ذلك، ثم إضعاف مختلفة قد تكون ضرورية. (التخفيف المناسبة المطلوبة لنوع معين يمكن تحديده من خلال إجراء عد لوحة من تعليق ماكفارلاند 0.5 أو 1.0 لتحديد كيفية العديد من الكائنات الحية ويمثل هذا التعكر، ثم حساب المبلغ الذي يجب أن يكون التعليق الأولى المخفف للوصول إلى تركيز النهائية المناسبة). إذا، على استعراض التهم لوحة من الدراسة التآزر، وجد العدوى انطلاق أي من الأنابيب المحتوية على المضادات الحيوية كانت أقل بكثير من العدوى ابتداء من مراقبة النمو، وهذا قد يشير إلى أما ترحيل المضادات الحيوية أو جداً القتل السريع للبكتيريا في أن الوقت القصير بين إضافة البكتيريا للأنبوبة المحتوية على المضادات الحيوية وإزالة قاسمة للطلاء. إذا كان العدد الفعلي للمستعمرات في إسقاط غير مخفف في سلسلة أقل من العدد المستعمرات في تخفيف اللاحقة، وهذا يوحي بأثر ترحيل المضادات الحيوية. وقد وصف خيارات مختلفة لمنع هذا التأثير، بما في ذلك نشر من قاسمة واحد يزيد كامل لوحة38 أو الغزل أسفل النموذج وإزالة المادة طافية، وإعادة تعليق في المحلول الملحي المعقم قبل التصفيحات39. في كل مرة نقطة في طريقة قتل الوقت، كما أنها حاسمة بالنسبة للمحقق لكفاءة ولكن دقة إزالة قاسمة من كل أنبوبة الثقافة وإجراء تخفيف المسلسل. يمكن أن يؤدي التأخير أثناء هذه العملية، لا سيما خلال النقاط الزمنية المبكرة التي تحدث في الخلافة، وإغلاق لفترات طويلة خلالها الثقافات ليست المحتضنة واهتزت، بينما يمكن أن يؤدي الاستغناء عن الإهمال وتخفيف المسلسل إلى لوحة غير دقيقة التهم الموجهة إليه. أسلوب انتشار لوحة لوحة العد، التي تنتشر 100 ميكروليتر من كل تمييع صفيحة أجار كامل، بالمقارنة مع الأسلوب لوحة إسقاط وصف أكثر بكثير من السريعة، يتطلب عدد أقل من لوحات أجار، ويسمح لعد أسرع، كحد أقصى هو عدد معدود من المستعمرات لكل قطره 30، بينما تصل إلى 300 المستعمرات يمكن أن تحسب عادة من لوحة انتشار. ومع ذلك، الأسلوب لوحة انتشار أيضا خياراً إذا كان المحققون أكثر راحة مع هذا الأسلوب. إذا انتشرت قطرات إلى بعضها البعض بعد الاستغناء عن ماصة متعددة القنوات، يمكن إجراء التطبيق الفردية من قطرات متباعدة على نطاق أوسع مع ماصة قناة واحدة بدلاً من ذلك. في تجربتنا، التبريد لوحات عند 4 درجة مئوية قبل الاستغناء عن قطرات فيما يبدو للحد من الانتشار المفرط.
واحد الحد من الأساليب الموصوفة هنا هو أن نتائج هذين النوعين من مقايسة التآزر (صفيف الشطرنج وقتل الوقت) ليست متطابقة دائماً، ومنذ آخر نشرت مقالات التعاضد استخدام طريقة واحدة أو أخرى بدلاً من كليهما معا، فإنه يمكن يكون من الصعب على معرفة كيفية دمج البيانات من هذين النوعين من الاختبارات. لأن أسلوب صفيف الشطرنج الآلي قمنا بتطوير بسيط والفائق، استخدمنا أنها سارية المفعول كنوع من الشاشة لاختبار تركيبات لعدد أكبر من يعزل وتحديد مجموعات التركيز الذي كان التآزر. ثم أجرينا عدد أقل من الدراسات قتل الوقت، تحديد تركيبات والتركيزات التي كانت فعالة في الصفيف رقعة الداما. من المذكرة، لأنه عادة ما يتم تنفيذ المقايسة رقعة الداما على نطاق تمييع ميكروبروث، بينما المقايسة قتل الوقت يستخدم كميات أكبر (مماثلة إلى إضعاف ماكروبروث)، وجدنا أن FICs مختلفان في بعض الأحيان بين الأسلوبين، مع ارتفاع التركيزات المطلوبة عموما في مقايسة قتل الوقت لإثبات النشاط. هذه الظاهرة وقد لوحظ سابقا عند مقارنة نتائج فحص هيئة التصنيع العسكري تمييع ماكروبروث وميكروبروث لعصيات سلبية الغرام26 وعندما لقاح أكبر (كما هو مستخدم في دراسات قتل الوقت) مقارنة مع العدوى القياسية المستخدمة في الصفيف تمييع والشطرنج ميكروبروث assays32. وجود قيود محددة المصفوفة رقعة الداما هو التغير المتأصلة في تمييع ميكروبروث اختبار22هيئة التصنيع العسكري. بينما FICأنا قطع لحساب التآزر لهذا التغير رياضيا6 مثل هذا التغير لا محالة يثير القلق بشأن موثوقية واتساق رقعة الداما مصفوفة النتائج.
يجب تأكيد النتائج التي تم الحصول عليها بهذه الطرق بسبب القيود الملازمة للتآزر في المختبر كل اختبار طرق (بما في ذلك زراعة البكتيريا في وسيط نمو الصناعي، وتركيزات المضادات الحيوية ثابتة ودورة لمدة زمنية محدودة)، و كذلك تقييم استخدام تقنيات تكميلية. هذه الأساليب تشمل الدراسات في المختبر الحرائك الدوائية/ميكروبيولوجية (PK/PD) (مثلاً، الألياف المجوفة العدوى النموذجي40)، نماذج حيوانية، وفي النهاية، الدراسات الإنسانية PK/PD وفعالية. يسمح أسلوب صفيف الشطرنج الآلي الموضحة هنا، بتوفير طريقة سريعة معها إلى تركيبات الشاشة للنشاط التآزر المحتملة، لمزيد من المعلومات تستهدف الاستفادة من هذه التقنيات. زيادة التشغيل الآلي لكل من هذه الأساليب، كالتحقيق جيدا أكثر انتظاما للعلاقة بين المعلمات في المختبر والنتائج السريرية، ستكون هامة في القياس حتى استخدام التآزر التجارب وزيادة قابليته للتطبيق السريري.

انتشار المقاوم للأدوية المتعددة (المقاوم) البكتيرية المسببة للأمراض، لا سيما المقاوم بكتيريا سلبية الغرام مثل Enterobacteriaceae الكاربابينيمات المقاوم (CRE)، وقد ترك الأطباء مع خيارات محدودة على نحو متزايد للعلاج مدى نجاح 1، مشكلة تتفاقم بتباطؤ وتيرة اكتشاف العقاقير المضادة للبكتيريا رواية2،3. التآزر مضادات الميكروبات، التي تمارس اثنين من الأدوية المستخدمة في الجمع بين تأثير أكبر من المواد المضافة، ويتيح إمكانية إنقاذ المضادات الحيوية الموجودة لاستخدامها في علاج بكتيريا المقاوم للأدوية، وحتى عندما تكون هذه البكتيريا مقاومة لأحد أو كلا المضادات الحيوية على حدة. التقنيات الموضحة في هذه الورقة تقديم طريقتين مكملة للتآزر في المختبر التجارب أنه عندما تستخدم معا، السماح لمحققين بكفاءة الشاشة تركيبات مضادات الميكروبات من الفائدة لدليل على نشاط تعاوني (الآلي أسلوب صفيف الشطرنج) ومن ثم مواصلة تقييم حركية تثبيط وقتل تجلى تركيبات واعدة تم تحديدها في مرحلة الفرز (الطريقة اليدوية قتل الوقت).
إحدى الطرق الأكثر استخداماً لاختبار التآزر في المختبر هو مقايسة الصفيف رقعة الداما، تختبر تعديلاً لاختبار تركيز الحد الأدنى المثبطة (MIC) الذي عزل النشاط المثبطة لاثنين من المضادات الحيوية المختلفة ضد البكتيريا أكثر من مجموعة من مجموعات تركيز4،5. إذا كانت المخدرات هما بذل أكبر من النشاط المضافة عند استخدامها معا، يعتبر الجمع بين التآزر6. ومع ذلك، إعداد مجموعة شطرنج يدوياً ينطوي على سلسلة من العمليات الحسابية وخطوات تمييع وبيبيتينج شاقة ومعرضة للخطأ البشري. هذه القيود أدت إلى الحد من استخدام التآزر اختبار أساسا لتقييم أثر رجعي لعدد قليل من مجموعات المضادات الحيوية والبكتيرية المعزولة، والنتائج لم تكن دائماً متسقة بين الدراسات7، 8،9،،من1011. وعلاوة على ذلك، ساهم تعقيد اختبار التآزر لعدم توافر لها في مختبر الميكروبيولوجيا السريرية والغياب الفعلي للبيانات اختبار التآزر في المختبر من الدراسات السريرية للجمع بين العلاج12، 13.
من أجل زيادة الكفاءة والإنتاجية لأسلوب صفيف رقعة الداما، قدمنا استخدام أسلوب الاختبار الآلي هيئة التصنيع العسكري سبق أن وضعت في المختبر يستخدم تكنولوجيا الطباعة النافثة للحبر بدقة واستمرار الاستغناء عن أحجام صغيرة حل مخزون المضادات الحيوية في آبار في لوحة ميكروتيتير14. البرنامج يغني عن الحاجة إلى عمليات حسابية معقدة ومتعددة الخطوات بيبيتينج. البرنامج المقترن بحساب ويوزع كميات مناسبة من المضادات الحيوية لإنشاء صفيف ثنائي الأبعاد شطرنج إذا كان المستخدم ببساطة مدخلات نطاق التركيز المطلوب وتركيز حل مخزون المضادات الحيوية. ونحن في البداية اختبار هذا الأسلوب ضد مجموعة من لجنة المساواة العرقية يعزل15 وبعد ذلك ركزت على اختبار التركيبات المحتوية على كوليستين للنشاط ضد مستفردات كوليستين المقاوم16. كوليستين دواء أخير عادة محجوزة للاستخدام في علاج مقاومة المقاوم للأدوية المتعددة العوامل الممرضة سلبية الغرام17،18، وكوليستين يجعل الفعل المقاوم البكتيريا مقاومة لعموم تقريبا19، يجعلها مثالية المرشحين لوضع استراتيجيات علاجية رواية استخدام العقاقير التي غير حساسة على حدة. لقد وجدنا أنه المزيج من كوليستين والمونوسكلين البروتين التوليف مثبط للمضادات الحيوية بمعدل مرتفع جداً من التآزر، حتى ضد السلالات التي كانت مقاومة لكل من هذه الأدوية كل على حدة، يفترض أن تمارس كوليستين سوبينهيبيتوري بيرميبيليزينج تأثير على البكتيريا المقاومة حتى كوليستين. وقد اخترنا هذا الجمع استخدامه كمثال في هذه الورقة. من المذكرة، اختبار التآزر يمكن أيضا استخدامها لتقييم لفعالية تعزيز اثنين من المخدرات التي على حد سواء فعالة على حدة.
وييسر أسلوب صفيف الشطرنج الآلي اختبار التفاعل السريع والفائق. ومع ذلك، يكون الأسلوب الصفيف رقعة الداما القيود. تعديل مقايسة هيئة التصنيع العسكري، يوفر البيانات فقط على تثبيط النمو البكتيري وليس على القتل، ولا توفر بيانات عن تأثيرات المضادات الحيوية على مر الزمن. على النقيض من ذلك، الأداء اليدوي لفحوصات التآزر قتل الوقت كثيفة العمالة أكثر لكنه يوفر المعلومات على تثبيط وقتل خلال 24 ساعة وقت دورة20،21. استخدمنا تحليل قتل الوقت على عدد أصغر من المستخلصات لتأكيد نتائجنا الصفيف الشطرنج ولتحديد ما إذا كانت مجموعات التآزري حددنا أيضا جراثيم.
كلا الأسلوبين التآزر الصفيف وقتل الوقت رقعة الداما توفر معلومات قيمة عن نشاط تركيبات العقاقير، وهي مفيدة بشكل خاص في تقييم الخيارات العلاجية رواية المحتملة لمسببات الأمراض البكتيرية شديدة المقاومة. كما أن الأساليب والقيود المتأصلة. أسلوب تمييع هيئة التصنيع العسكري ميكروبروث القياسية على نطاق خطأ المتوقع معروفة من 1 تمييع شقين22، التي تزداد عندما يتم اختبار المخدرات اثنين معا في مجموعة شطرنج. المتوقع تعريف موحد للتآزر، التي تعتبر مزيجاً تآزري فقط إذا كانت المخدرات تنشط معا في ربع بهم كل البلدان المتوسطة الدخل6، يأخذ في الاعتبار هذا التباين، ولكن مثل هذا التغير (والذي يعتقد أن يؤدي إلى من مزيج من التقلبات البيولوجية والتقنية23) حتما يولد عدم اليقين حول موثوقية النتائج التآزر. عدم وجود معايير مراقبة الجودة لاختبار التآزر قيد الحالية أيضا. ولعل الحد أهم من جميع طرق الاختبار التآزر هو عدم وجود الارتباطات الثابتة بين النتائج المختبرية والنتائج السريرية عند استخدام تركيبات لعلاج المرضى24. أبسط وأكثر سرعة من التآزر اختبار الأساليب، مثل الشطرنج الآلي صفيف الأسلوب الموصوفة هنا، قد تيسير إدماج التآزر في المختبر التجارب داخل التجارب السريرية أو تقييمات أخرى لنتائج المرضى بغية تحسين يميز العلاقة بين الآثار في المختبر وفي المجراة في المستقبل.
أسلوب صفيف الشطرنج الآلي الذي نحن الحاضرين هنا يقدم خياراً للفرز الفائق لمجموعة متنوعة من تركيبات ويسمح للتقييم السريع لمجموعات "عالية المخاطر عالية مكافأة" غير عادية، ودون استثمار كبير من الوقت و الموارد. يمكن تقديم معلومات داعمة إضافية عن نشاط تعاوني للجمع بين الأسلوب وقت القتل، الذي ندلل فيما بعد، ويمكن أن يساعد على تميز نشاط جراثيم والحركية المضادة للبكتيريا.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Escherichia coli strain ATCC 25922</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>25922</td>
			<td>QC strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1605-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L 0.22 &#181;m bottle-top filter</td>
			<td>Thermo Scientific Nalgene</td>
			<td>597-4520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 mm x 75 mm borosilicate glass round bottom culture tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-961-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 x 100 mm or 15 x 150 mm Mueller Hinton agar plates</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R01620 or R04050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mm stainless steel closures for 25 x 150 mm glass culture tubes</td>
			<td>Bellco</td>
			<td>2005-02512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 x 150 mm borosilicate glass round bottom culture tubes</td>
			<td>Bellco</td>
			<td>2011-25150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>348-well sterile clear, flat-bottom, untreated microplates with lids</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>781186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile reagent reservoirs</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 deep well polypropylene microplate with 2 mL wells</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-566-612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well sterile clear, round-bottom, untreated microplates with lids</td>
			<td>Evergreen</td>
			<td>222-8032-01R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cation adjusted Mueller Hinton broth</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>212322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colistin sulfate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J60915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D300e Control Software</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DensiCHEK Plus McFarland reader</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>21250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel spreadsheet software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra long SHARP 10 &#181;L Precision Barrier Tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1096-FR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HP D300 digital dispenser</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HP D300 T8+ cassettes</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td>30097370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minocycline hydrochloride</td>
			<td>Chem-Impex</td>
			<td>14302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picus 12-channel 10-300 &#181;L pipette</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>735461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate 20</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP-337</td>
			<td>Brand name: Tween 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Infinite M1000 PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xplorer 12-channel 50-1200 &#181;L pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>2231000328</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

antimicrobial synergy testing by the inkjet printer-assisted automated checkerboard array and the manual time-kill method

نهج مبتكرة لعلاج بكتيريا المقاوم معدلات المقاوم للأدوية المتعددة (المقاوم) مسببات استمرار ارتفاع، متجاوزا تطوير مضادات جديدة، بشكل متزايد ضرورة. واحد مثل هذا النهج هو الجمع بين العلاج، في أي اثنين أو أكثر من المضادات الحيوية وتستخدم معا لعلاج عدوى ضد أي واحد أو كلا من هذه العقاقير قد تكون عديمة الفاعلية وحدها. عندما المخدرات اثنين، مجتمعة، بذل أكبر من تأثير المواد المضافة، وأنها تعتبر من التآزر. التحقيق في المختبر نشاط تعاوني خطوة أولى هامة في تقييم فعالية ممكنة من تركيبات العقاقير. ووضعت اثنين من طرق الاختبار التآزر في المختبر الرئيسي: الصفيف الشطرنج والدراسة وقت القتل. في هذه الورقة، نقدم أسلوب صفيف شطرنج الآلي الذي يجعل استخدام تكنولوجيا الطباعة النافثة للحبر لزيادة كفاءة ودقة هذه التقنية، فضلا عن طريقة تآزر قتل الوقت يدوية قياسية. يمكن أن تكون الصفيف الشطرنج الآلي مقايسة فرز الفائق، بينما تقدم الدراسة قتل الوقت دليل بيانات إضافية وتكميلية في نشاط تعاوني والقتل.
الصفيف رقعة الداما هو تعديل القياسية المثبطة أدنى تركيز (MIC) الاختبار، الذي المحتضنة مع المضادات الحيوية في تركيبات مختلفة من تركيز البكتيريا وتقييمها لتثبيط النمو بعد الحضانة بين عشية وضحاها. يتطلب الأداء اليدوي الخاص بالصفيف رقعة الداما سلسلة شاقة وعرضه للخطأ في العمليات الحسابية وتخفيف. في الأسلوب الآلي المعروضة هنا، والحساب، والاستغناء عن حل مخزون المضادات الحيوية المطلوبة الآلي وحدات التخزين عن طريق استخدام تكنولوجيا الطابعة النافثة للحبر. في مقايسة التآزر قتل الوقت، البكتيريا المحتضنة مع المضادات الحيوية ذات الاهتمام، سواء معا وعلى حدة، وأخذ عينات منها وعلى فترات متقطعة على مدى 24 ساعة للثقافة الكمية. النتائج يمكن تحديد ما إذا كان الجمع بين التآزر وما إذا كان من جراثيم، وتقديم بيانات عن تثبيط وقتل البكتيريا على مر الزمن.

ويعرض الشكل 1A شبكة من تجربة تآزر صفيف رقعة الداما جنبا إلى جنب مع كوليستين تركيزات 0-16 ميكروغرام/مل ميكروغرام/مل الذي المينوسكلين في تركيزات 0-32 واختبارها ضد سلالة كولاي 0494 إدارة الأغذية والعقاقير--مركز السيطرة على الأمراض. وتمثل القيم القراءات سبيكتروفوتوميتريك في الكثافة البصرية 600 نانومتر (OD600). الآبار مع القيم600 OD أدناه 0.07 (والذي يتوافق مع أي نمو بالفحص البصري) هي الأحمر المظلل، بينما الآبار مع القيم600 OD 0.07 (الذي يتوافق مع النمو بالفحص البصري) الأخضر مظللة. لكل دواء، هو تركيز الحد الأدنى المثبطة (MIC؛ الغامق) أدنى تركيز للعقاقير التي تثبط نمو البكتيريا. المينوسكلين، هذا 32 ميكروغرام/مل، وأنها كوليستين، 8 ميكروغرام/مل. يتم الاحتفاظ التظليل في الشكل 1 باء، ولكن يتم استبدال القيم داخل الآبار التي تحول دون النمو بقيم الفهرس (FICأنا) تركيز المثبطة كسرية. وهذه تتحدد على النحو التالي: في كل بئر، يحسب مؤشر التركيز المثبطة كسرية (FIC) كل دواء بقسمة تركيز المضادات الحيوية في هذا البئر بهيئة التصنيع العسكري المخدرات، و FICأنا يتم حسابه بجمع FICs اثنين. ترد الآبار مع FICأنا قيمة 0.5، الذي يعتبر قطع للتآزر، مع كسر خط حدود، وجيدا مع FICأنا القيمة الأدنى (0.094) هو الغامق. لأن الحد الأدنى FICأنا القيمة في النطاق تآزرية، يعتبر الجمع بين التآزر.
الشكل 2 ألف و 2 باء الشكل تظهر شبكات مماثلة لتلك الموجودة في الشكل 1A و 1B الشكل، ولكن في هذه الحالة الجمع بين لا تثبت التآزر ضد عزل اختبار (عزلالرئوية ك. 4 بيدمك)، نظراً الحد الأدنى FICأنا التي تحول دون النمو هو 1، و > 0.5.
ويوضح الشكل 3 قراءات الكثافة البصرية من شبكة تآزر رقعة الداما التي وقع فيها العديد من الآبار تم تخطيها (كلواكاي عن عزل 27 بيدمك المعقدة). تم تخطي الآبار هي الآبار التي تحول دون النمو البكتيري على الرغم من وجود النمو البكتيري في الآبار المجاورة مع تركيزات أعلى من المضادات الحيوية. هذه الظاهرة التي تعرف أن يحدث في معيار هيئة التصنيع العسكري الاختبار كذلك، من المحتمل نظراً للتنوع البيولوجي في خصائص النمو البكتيري من جيدا إلى جيد وإلى حساسية بعض المضادات الحيوية للفروق الصغيرة في العدوى البكتيرية23 , 31 , 32-إذا كان أكثر من واحد تخطي وقع أيضا في مجموعة شطرنج، نحن تجاهل النتائج والمتكررة المقايسة.
الرقم 4 ويعرض أمثلة التآزر قتل الوقت نتائج ثلاث مجموعات اختبار ضد K. الرئوية عزل 32 بيدمك. يتم الإشارة إلى التهم مستعمرة في مقياس لوغاريتمي على y-المحور والوقت، بالساعات، في العاشر-المحور. ويتضح الفرق بين العدوى الانطلاق في أنبوب يحتوي على الجمع بين المخدرات وتركيز البكتيريا في هذا الأنبوب في ح 24 بشريط أحمر والعدد، بينما الفرق بين تركيز البكتيريا في 24 ساعة بين أنبوب تحتوي على التركيبة والانبوب الذي يحتوي على عامل وحيد الأكثر نشاطا وحدها يتجلى في الشريط الأزرق وعدد. ويبين الشكل 4A النتائج من المزيج من كوليستين والمونوسكلين؛ كان هذا المزيج التآزري (الفرق بين تركيزات البكتيريا تتعرض لتركيبة وأنشط عامل إيه تو وحدها سجل10 زيمبابوي/مل في 24 ساعة) وجراثيم (انخفاض من بدء العدوى إلى التركز في سجل إيه ثري ح 2410 CFU/mL). ويبين الشكل 4B النتائج من المزيج من كوليستين والكليندامايسين، وهو مزيج من التآزر ولكنه لم يكن من جراثيم. هذه التركيبة أعاق نمو البكتيريا، التي لا المخدرات وحدها، بل لم يقتل منهم. يبين الشكل 4 النتائج من المزيج من كوليستين والاريثروميسين، التي ليست جراثيم أو التآزر.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig1.jpg"> الشكل 1: لوح شطرنج صفيف النتائج المتظاهرين التعاضد (المينوسكلين + كوليستين محك كولاي سلالة 0494 إدارة الأغذية والعقاقير--مركز السيطرة على الأمراض). (أ) تفسير قراءات والنمو سبيكتروفوتوميتريك صفيف رقعة الداما. القيم في الخلايا قراءات الكثافة البصرية 600 نانومتر (OD600). الخلايا التي تحتوي على قيم600 OD أدناه 0.07 (المقابلة لأي نمو بالفحص البصري) هي الأحمر المظلل، بينما هي الخلايا التي تحتوي على قيم600 OD 0.07 (المقابلة للنمو بالفحص البصري) الأخضر مظللة. (ب) تركيز المثبطة كسور حساب الرقم القياسي (FICأنا). وقد أبقى التظليل التي تشير إلى النمو أو لا النمو. قيم كوليستين والمونوسكلين على طول xو y-محاور، على التوالي، تمثل الآن تركيز المثبطة كسرية (FIC)، أو نسبة تركيز الدواء في هذا العمود أو الصف إلى (تركيز المثبطة الدنيا هيئة التصنيع العسكري) لأن المخدرات وحدها. هو القيمة في كل خلية FICأنا، أو مجموع FICs الاثنين من المخدرات في ذلك جيدا. ويرفق مربع يحدها خط كسر كبير الآبار مع FICأنا 0.5. الخلية تحدها سميكة يشير إلى البئر مع أدنى FICأنا التي تحول دون النمو، أو الحد الأدنى FICأنا. نظراً للحد الأدنى FICأنا 0.5، يعتبر الجمع بين التآزر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig2.jpg"> الشكل 2: لوح شطرنج صفيف نتائج مزيجاً لا تثبت التآزر (المينوسكلين + كوليستين محك K. الرئوية عزل 4 بيدمك). قيم الكثافة البصرية (A) في تفسير 600 نانومتر والنمو رقعة الداما مصفوفة النتائج كما هو موضح الشكل 1A. (ب) تركيز المثبطة كسور حساب الرقم القياسي (FICأنا) كما هو موضح على الشكل 1A. نظراً للحد الأدنى FICأنا > 0.5، لا يعتبر الجمع بين التآزر. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig3.jpg"> الشكل 3: لوح شطرنج مصفوفة النتائج التي أونينتيربريتابلي نظراً لتخطي الآبار (المينوسكلين + كوليستين اختبار ضد كلواكاي عن مجمع عزل 27 بيدمك). قيم الكثافة الضوئية في تفسير 600 نانومتر والنمو رقعة الداما مصفوفة النتائج كما هو موضح الشكل 1A. وأظهرت عدة آبار تم تخطيها، التي تحول دون النمو البكتيري على الرغم من وجود نمو في الآبار المجاورة مع تركيزات أعلى من المضادات الحيوية،. النتائج ليست هي التفسير، ويحتاج إلى تكرار التجربة. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig4.jpg"> الشكل 4: نتائج التآزر قتل الوقت ثلاث مجموعات اختبار ضد بيدمك عزل الرئوية ك. 32. وترد التهم مستعمرة في مقياس لوغاريتمي على y-المحور والوقت، بالساعات، في العاشر-المحور. ويتضح الفرق بين تركيز البكتيريا في التركيبة في 24 ساعة، والعدوى الانطلاق في الأنبوب بشريط أحمر وعدد. إذا كان الانخفاض من بدء العدوى إلى التركز في ح 24 إيه ثري سجل10 زيمبابوي/mL، يعتبر الجمع بين جراثيم. ويتضح الفرق بين تركيز البكتيريا في 24 ساعة بين الأنبوبة التي تحتوي على التركيبة والانبوب الذي يحتوي على عامل وحيد أنشط وحدة الشريط الأزرق وعدد؛ إذا كان هناك إيه تو سجل10 الحد من زيمبابوي/mL، يعتبر الجمع بين التآزر. (أ) كوليستين (لجنة العلم والتكنولوجيا) + المينوسكلين (دقيقة)، تركيبة التآزري وجراثيم على حد سواء. (ب) كوليستين + الكليندامايسين (CLI)، مزيج التآزري ولكن ليس جراثيم. (ج) كوليستين + الاريثروميسين (ERY)، مجموعة ليس التآزر أو جراثيم. نشرت هذه النتائج في البداية كجزء من دراسة نشاط تعاوني المحتوية على كوليستين تركيبات ضد مقاومة كوليستين Enterobacteriaceae، الذي أثبتنا أن كوليستين كان التآزر مع عدد من المضادات الحيوية التي تنشط على حدة فقط (مثل الكليندامايسين) أو بالدرجة الأولى (مثل الاريثروميسين) ضد البكتيريا إيجابية16. (ملاحظة أن الاريثروميسين التآزر من الصفيف رقعة الداما ضد سلالة سيظهر، لكنه ليس بالوقت--قتل، حتى تم اختياره هنا كمثال على تركيبة غير تآزرية.) افترضنا أن كوليستين، المعروف بقانون قبل بيرميبيليزيشن الغشاء الخارجي الغرام، تمارس أثرا بيرميبيليزينج سوبينهيبيتوري على كوليستين مقاومة البكتيريا سلبية الغرام، مما يتيح دخول المخدرات مثل الكليندامايسين عادة لا يمكن إدخال الخلية سلبية الغرام. تم تعديل لوحة (ألف) من هذا العدد من برينان-كروهن وبيرونتي 2018 كيربي16، حقوق الطبع والنشر © أمريكا جمعية علم الأحياء المجهرية ومضادات الجراثيم والعلاج الكيميائي، 62(10)، 2018، بيي: e00873-18، دوي: 10.1128/AAC.00873-18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method at JoVE.com

Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method

اختبار التآزر الميكروبات المستخدمة لتقييم تأثير اثنين أو أكثر من المضادات الحيوية المستخدمة في تركيبة وتتم عادة بواحدة من طريقتين: الصفيف رقعة الداما أو المقايسة قتل الوقت. وهنا، نقدم الآلي وتقنية التآزر الصفيف الشطرنج ساعدت الطابعة النافثة للحبر ودراسة كلاسيكية قتل الوقت تآزر.

مضادات الميكروبات التآزر التجارب التي تدعمها الطابعة النافثة للحبر الصفيف الشطرنج الآلي وقتل الوقت الأسلوب اليدوي

As rates of multidrug-resistant (MDR) pathogens continue to rise, outpacing the development of new antimicrobials, novel approaches to treatment of MDR ...

اختبار تآزر صفيف لوحة الداما اليدوي هو أسلوب كثيف العمالة وعرضة للخطأ. في المقابل، فإن أسلوب لوحة الداما التلقائية التي تعتمد على الطابعة النافثة للحبر يعمل على تحسين السرعة والدقة والإنتاجية بشكل كبير. طريقة الداما بورد الآلي يجعل من الممكن لفحص أعداد كبيرة من الأدوية لمجموعات التآزر، في حين أن طريقة الوقت قتل يمكن أن تؤكد ومواصلة استكشاف نشاط هذه المجموعات.اكتشاف المضادات الحيوية الجديدة لا يواكب انتشار المقاومة، ولكن التحقيق في تركيبات التآزر يوفر إمكانية لإنقاذ الأدوية الموجودة لعلاج البكتيريا المقاومة. على الرغم من أننا نبرهن على هذه التقنية مع مضادات الجراثيم ، إلا أنه يمكن استخدامها أيضًا مع فئات أخرى من مضادات الميكروبات أو حتى لأنواع مختلفة من اختبار الدواء أو المركب. في هذا الفيديو، نُظهر طريقة صفيف لوحة الداما الآلية وطريقة يدوية لقتل الوقت.نقترح إجراء دراسات صفيف الداما أولاً لتحديد التركيبات الواعدة ، ثم التحقيق في هذه الدراسات الإضافية مع دراسات قتل الوقت. للبدء، وجعل حلول الأسهم المضادة للميكروبات من colistin و minocycline، ومن ثم تنفيذ مراقبة الجودة على حلول الأسهم كما هو موضح في بروتوكول النص المرافق. بعد ذلك، أضف حوالي ملليلتر واحد من كلوريد الصوديوم 0.9٪، ملحي، إلى 12 ملليمتر في 75 ملليمتر جولة أنابيب الثقافة الزجاج السفلي.حدد واحد أو اثنين من المستعمرات من لوحة بين عشية وضحاها من البكتيريا، ووضعها في أنابيب الثقافة. دوامة الأنابيب بلطف لتعليق البكتيريا في المحلل. تحقق من تركيز البكتيريا باستخدام قارئ McFarland.ضبط التركيز عن طريق إضافة المزيد من البكتيريا المالحة أو أكثر لتحقيق 0.5 McFarland قراءة التعكر. ثم، تمييع البكتيريا من واحد إلى 300 عن طريق إضافة 100 ميكرولترات من التعليق إلى 30 ملليلتر من مرق مولر-هينتون المعدلة في أنبوب مخروطي 50 ملليلتر للوصول إلى كثافة الخلايا النهائية من خمس مرات 10 إلى وحدات تشكيل المستعمرة الخامسة لكل ملليلتر. الآن، إعداد مضادات الميكروبات للطباعة باتباع جنبا إلى جنب في بروتوكول النص المصاحب.حفظ البروتوكول، ثم انقر فوق الزر تشغيل في أعلى اليسار، متبوعاً الزر ابدأ. قم بتحميل لوحة 384-well في حامل اللوحة، واضغط على Loaded تحت موجه لوحة التحميل 1 Synergy. ثم ضع T8 + كاسيت في فتحة الكاسيت، ثم اضغط على تحميل ضمن موجه تحميل T8 + Cassette.عند المطالبة، إضافة محلول مخزون المضادات الحيوية إلى الخزانات المشار إليها على الكاسيت. بعد إضافة كل حل، اضغط على الزر "تعبئة". بمجرد أن يضيف موزع D300 مخزون المضادات الحيوية في وحدات التخزين المناسبة لكل بئر ويظهر المربع Run Completed ، انقر فوق إغلاق وإزالة اللوحة وإيقاف تشغيل D300.بعد ذلك ، صب التعليق البكتيري المعد مسبقًا في خزان كاشف معقمة. استخدام ماصة متعددة القنوات لإضافة 50 ميكروليتر من التعليق إلى جميع الآبار في صفيف الداما. ثم، إضافة 50 ميكرولترات من مرق مولر-هينتون المعدلة بدون بكتيريا إلى بئر فارغة.وستكون هذه هي السيطرة السلبية بشكل جيد لتأكيد عقم وسائل الإعلام. احتضان في حاضنة الهواء المحيط 35 درجة مئوية لمدة 16 إلى 20 ساعة. لتحليل الاختبار، اتبع في بروتوكول النص المصاحب.بالنسبة لاختبار التآزر وقت القتل، أعد مرة أخرى حلول المخزون المضاد للميكروبات كما هو موضح في بروتوكول النص. ثم، وجعل تعليق 0.5 مكفارلاند من الكائن الحي اختبار في المالحة العقيمة. إضافة 100 ميكرولترات من تعليق 0.5 ماكفارلاند إلى خمسة ملليلتر من CAMHB في 25 في 150 ملليمتر الزجاج جولة أسفل أنبوب الثقافة مع إغلاق الفولاذ المقاوم للصدأ، ودوامة بلطف لخلط.باستخدام حلقة تطعيم عقيمة ، فإن العزلة تُزال قطرة من التعليق المخفف على صفيحة أجار الدم ، وتحتضن اللوحة عند 35 درجة مئوية في الهواء المحيط لتأكيد نقاء الإخاء. استبدال الإغلاق على الأنبوب، واحتضانه في رف أنبوب اختبار على شاكر في 35 درجة مئوية في الهواء المحيط لمدة 3 ساعات على الأقل، حتى يتم التوصل إلى نمو اللوغاريتمي المرحلة. في حين أن الثقافة الأولية هي احتضان، إضافة 10 ملليلتر من مرق مولر-هينتون تعديل الموجبة إلى خمسة أنابيب ثقافة الزجاج autoclaved.لدراسة التآزر وقت قتل, ينبغي أن يكون دواء واحد على الأقل في التركيز الذي لا يؤثر على منحنى النمو بشكل فردي. ويمكن تحديد ذلك من خلال تقييم آثار تركيزات الأدوية الفردية قبل دراسة التآزر. إلى الأنبوب الأول، إضافة 10 ميكرولترات من مخزون colistin ملليغرام واحد للحصول على تركيز colistin النهائي من ميكروغرام واحد لكل ملليلتر، وهذا هو التركيز الذي هو غير فعالة ضد سلالة المستخدمة في هذا المثال.بالنسبة للأنبوب الثاني، أضف 10 ميكرولترات من مخزون مينوسيكلين من ملليغرام واحد لكل ملليلتر للحصول على تركيز نهائي من ميكروغرام واحد لكل ملليلتر. هذا التركيز هو أيضا غير فعالة ضد سلالة المستخدمة في هذا المثال. إلى الأنبوب الثالث، إضافة 10 ميكرولترات من مخزون مينوسيكلين واحد ملليغرام لكل ملليلتر و10 ميكرولترات من مخزون الكوليتين من ملليغرام واحد لكل ملليلتر.هذه هي نفس الكمية من الكليستين والمينوسيكلين المستخدمة في أنابيب واحد واثنين. في الأنابيب الرابعة والخامسة، لا تضيف المضادات الحيوية. وسيكون هذا هو التحكم في النمو و السلبي أنابيب التحكم، على التوالي.المقبل، وإعداد 96 صحون البولي بروبلين عميق جيدا مع آبار مليلتر اثنين لتخفيف المسلسل عن طريق إضافة 900 ميكرولترات من المالحة العقيمة إلى الصفوف B من خلال H من الأعمدة من واحد إلى أربعة مع ماصة متعددة القنوات. عندما تكون الثقافة في مرحلة النمو اللوغاريتمي، قم بإزالة أنبوب الثقافة من الشاكر، ودوامة بلطف. نقل ملليلتر واحد من التعليق إلى أنبوب ثقافة الزجاج 12 في 75 ملليمتر، والتحقق من الكثافة مع قارئ ماكفارلاند.إذا كانت الكثافة أقل من 1.0 مكفارلاند، أعد الأنبوب إلى الشاكر واحتضان لفترة أطول. إذا كان أكبر من 1.0 ماكفارلاند، إضافة مرق مولر-هينتون تعديل الموجبة إلى الأنبوب، دوامة بلطف، وإعادة العينة حتى تعليق هو في 1.0 مكفارلاند. من المهم أن تكون الثقافة في مرحلة النمو اللوغاريتمي عند إعداد inoculum البداية.يمكنك بناء منحنى النمو لتحديد متى يصل كائن حي إلى هذه المرحلة. ثم، إضافة 100 ميكرولترات من تعليق 1.0 ماكفارلاند إلى أنابيب واحد من خلال أربعة، ودوامة لهم بلطف. مباشرة بعد خلط وعلى واحد، اثنين، أربعة، ست، و 24 ساعة، وإزالة aliquot 150 ميكرولتر من كل أنبوب الثقافة عن طريق إمالة الأنبوب بحيث فقط تلميح ماص معقمة يدخل الأنبوب وليس رمح الأنابيب غير معقمة خلال الانسحاب aliquot.أضف aliquots، على التوالي، إلى الآبار المتتالية في الصف الأول من لوحة 96 بئرًا عميقة تم إعدادها مسبقًا. عودة الأنابيب إلى رف أنبوب اختبار على شاكر في حاضنة الهواء المحيط 35 درجة مئوية مباشرة بعد إزالة aliquots في كل نقطة زمنية. باستخدام ماصة متعددة القنوات، وإزالة 100 ميكرولترات من الصف A من لوحة، وإضافته إلى الصف B، التي تحتوي على 900 ميكرولترات من المالحة، وخلق تخفيف واحد إلى 10.الماصات الحل صعودا وهبوطا أربع إلى خمس مرات لخلط، ومن ثم تجاهل النصائح. أولاً، تسمية لوحات مولر هينتون أغار مع ظروف المضادات الحيوية والتخفيف لتكون مطلية. ثم، لوحة العينات المخففة لعدد مستعمرة باستخدام طريقة لوحة قطرة، وذلك باستخدام ماصة متعددة القنوات مع نصائح اضافية طويلة.إزالة 10 ميكرولترات من كل بئر في العمود واحد، والاستغناء بعناية في صف واحد على لوحة المسمى بشكل مناسب. استمر حتى يتم توزيع كافة الصفوف على لوحات. وبالإضافة إلى ذلك، في نقطة الوقت 24 ساعة، ضع قطرة 10 ميكرولتر مأخوذة مباشرة من أنبوب التحكم السلبي على بقعة مخصصة لهذا من أجل اختبار العقم.ثم، عكس جميع لوحات، واحتضان لهم بين عشية وضحاها في 35 درجة مئوية في الهواء المحيط. ثم، عد عدد المستعمرات على كل منطقة، وحساب كثافة الخلية. وضع علامة على المستعمرات مع علامة دائمة دقيقة على عكس اللوحة لتجنب العد المزدوج أو المفقودين من المستعمرات.لكل سلسلة تخفيف، تحديد قطرات مع ثلاث إلى 30 مستعمرات. عد المستعمرات في هذه القطرات، وسجل العد جنبا إلى جنب مع عامل التخفيف. يظهر هنا هو شبكة من تجربة التآزر صفيف رقعة الداما التي المينوسيكلين في تركيزات من صفر إلى 32 ميكروغرام لكل ملليلتر تم الجمع بين colistin بتركيزات من صفر إلى 16 ميكروغرام لكل ملليلتر واختبارها ضد سلالة من القولونية.الآبار التي تقل قيمها عن 600 OD أقل من 07 لا تمثل أي نمو وهي حمراء مظللة، في حين تمثل الآبار ذات قيم OD600 أعلى أو تساوي 07 نموًا وخضراء مظللة. لكل دواء ، والحد الأدنى من تركيز المثبطة هو أدنى تركيز من المخدرات التي تمنع نمو البكتيريا. بالنسبة للمينوسكلين، هذا هو 32 ميكروغرام لكل ملليلتر، وبالنسبة للكولستين، هو ثمانية ميكروغرام لكل ملليلتر.يتم الاحتفاظ بالتظليل هنا، ولكن القيم داخل الآبار التي يتم فيها تثبيط النمو يتم استبدالها بتركيز مثبط كسري، أو قيم مؤشر FIC. في كل بئر ، يتم حساب مؤشر FIC لكل دواء عن طريق قسمة تركيز المضادات الحيوية في ذلك البئر من قبل الحد الأدنى لتركيز الدواء المثبط. يشار إلى الآبار التي يقل مؤشر FIC عن 0.5 أو يساويها، والتي تعتبر قطع التآزر، بحد خط مكسور، ويتم ابرء البئر الذي به أدنى مؤشر FIC.لأن قيمة FIC الحد الأدنى هو في نطاق التآزر، ويعتبر الجمع التآزر. ويرد هنا مثال لحالة لا تثبت التآزر، حيث أن الحد الأدنى لمؤشر FIC الذي يكبح النمو هو واحد، وهو أكبر من 0.5. وأخيراً، في هذا المثال، حدثت عدة آبار متخطية، وهو ما يمثل النمو البكتيري الذي يتم تثبيطه، على الرغم من وجود نمو بكتيري في الآبار المجاورة مع تركيزات أعلى من المضادات الحيوية.إذا تم تخطي أكثر من واحد بشكل جيد حدث في صفيف لوحة الداما، يجب تجاهل النتائج وتكرار الفحص. مثال على الرسم البياني الذي يوضح نتائج مقايسة التآزر وقت القتل هنا. يرجى الاطلاع على بروتوكول النص المصاحب للحصول على تفاصيل حول تفسير مقايسة التآزر وقت القتل.ويمكن الحصول على مزيد من المعلومات حول نشاط مجموعات التآزر من خلال تقييمات للأدوية والديناميكية الدوائية ومن خلال دراسات في علم الفعاليات مع نماذج حيوانية. اتبع دائما إجراءات السلامة المناسبة، بما في ذلك استخدام معدات الحماية الشخصية، عند العمل مع البكتيريا. إذا كنت تولد الهباء الجوي أو استخدام مسببات الأمراض عالية الخطورة، أداء جميع الأعمال في مجلس الوزراء السلامة الأحيائية.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

اختبار الحساسية للمضادات الميكروبات مجمع المتفطرة السل للأدوية الخط الأول والثاني عن طريق التخفيف في شكل حساء بلايت Microtiter

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

One-day Workflow Scheme for Bacterial Pathogen Detection and Antimicrobial Resistance Testing from Blood Cultures

في يوم واحد خطة سير العمل للكشف عن مسببات الأمراض البكتيرية ومضادات الميكروبات اختبار المقاومة من زرع الدم

Bloodstream infections are associated with high mortality rates because of the probable manifestation of sepsis, severe sepsis and septic shock1. ...

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

تقييم التغيرات الأيضية الكبدي خلال الاستعمار التدريجي الماوس مجانا من جرثومة 1 H NMR الطيفي

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

?????? PCR ????? ??????? ?? ?????????? ????? ???????? ????? ?? ????? ??? ?????? ?? ????????? ??????<em&gt; ???????? ????????? ???????</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

تحليل الأضرار الظهارية التي تنتجها<em&gt; المتحولة الحالة للنسج</em&gt; عدوى

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

High Throughput, Real-time, Dual-readout Testing of Intracellular Antimicrobial Activity and Eukaryotic Cell Cytotoxicity

إنتاجية عالية، في الوقت الحقيقي، اختبار مزدوج قراءات من بين الخلايا مضادات الميكروبات آخر وحقيقية النواة السمية لخلايا

Traditional measures of intracellular antimicrobial activity and eukaryotic cell cytotoxicity rely on endpoint assays. Such endpoint assays require ...

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

ال<em&gt; فيفو السابقين</em&gt; القولون ثقافة الجهاز واستخدامه في الدراسات الدفاعية المضيف مضادات الميكروبات

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

عزل وتوصيف وتنقية الضامة من الأنسجة المتضررة من التهاب المتصلة بالسمنة

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

المطبوعة جليكان الصفيف: تقنية حساسة لتحليل مرجع تعميم الأجسام المضادة الكربوهيدرات في الحيوانات الصغيرة

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

الآلي التحليل السلوكي لكبير C. ايليجانس السكان استخدام واسعة مجال-من-عرض "تتبع النظام الأساسي"

Caenorhabditis elegans is a well-established animal model in biomedical research, widely employed in functional genomics and ageing studies. To assess the ...