Name: antimicrobial synergy testing by the inkjet printer-assisted automated checkerboard array and the manual time-kill method
Uploaded: 2019-04-18T12:30:00
Duration: 12 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method at JoVE.com

תיאה ברנן-קרון נתמכה על ידי יוניס קנדי שרייבר המכון הלאומי הילד לבריאות ומחקר בהתפתחות מחלות זיהומיות בילדים הכשרה גרנט (T32HD055148), המכון הלאומי לאלרגיה, מחלות זיהומיות (מענק הכשרה T32AI007061), מלגת החולים למשרד של הפקולטה פיתוח סגל פיתוח קריירה לילדים בבוסטון, ופרס של המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות הקריירה פיתוח (1K08AI132716). J.E.K. נתמך על ידי המכון הלאומי לאלרגיה ומחלות זיהומיות של מכוני הבריאות הלאומיים תחת מספר פרס R33 AI119114. התוכן הוא אך ורק באחריות המחברים, ואינם מייצגים בהכרח את הנופים הרשמי של מכוני הבריאות הלאומיים.

<ol>
	<li>Temkin, E., Adler, A., Lerner, A., Carmeli, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbapenem-resistant+Enterobacteriaceae:+Biology,+epidemiology,+and+management.">Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae: Biology, epidemiology, and management.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1323 (1), 22-42 (2014).</li><li>Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+antibiotics.">The future of antibiotics.</a> Critical Care. 18 (3), (2014).</li><li>Spellberg, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemic+of+antibiotic-resistant+infections:+a+call+to+action+for+the+medical+community+from+the+Infectious+Diseases+Society+of+America.">The epidemic of antibiotic-resistant infections: a call to action for the medical community from the Infectious Diseases Society of America.</a> Clinical infectious diseases an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 46 (2), 155-164 (2008).</li><li>Elemam, A., Rahimian, J., Doymaz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+antibiotic+synergy+for+polymyxin+B-resistant+carbapenemase-producing+Klebsiella+pneumoniae.">In vitro evaluation of antibiotic synergy for polymyxin B-resistant carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae.</a> Journal of Clinical Microbiology. 48 (10), 3558-3562 (2010).</li><li>Poirel, L., Kieffer, N., Nordmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+dual+carbapenem+combinations+against+carbapenemase-producing+Enterobacteriaceae.">In vitro evaluation of dual carbapenem combinations against carbapenemase-producing Enterobacteriaceae.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 71 (1), 156-161 (2016).</li><li>Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy,+antagonism,+and+what+the+chequerboard+puts+between+them.">Synergy, antagonism, and what the chequerboard puts between them.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 52, (2003).</li><li>Zusman, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+review+and+meta-analysis+of+in+vitro+synergy+of+polymyxins+and+carbapenems.">Systematic review and meta-analysis of in vitro synergy of polymyxins and carbapenems.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (10), 5104-5111 (2013).</li><li>Clock, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+doripenem+alone+and+in+multi-agent+combinations+against+extensively+drug-resistant+Acinetobacter+baumannii+and+Klebsiella+pneumoniae.">In vitro activity of doripenem alone and in multi-agent combinations against extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae.</a> Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 76 (3), 343-346 (2013).</li><li>Hirsch, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+antimicrobial+combinations+for+Klebsiella+pneumoniae+carbapenemase-producing+K.+pneumoniae.">Assessment of antimicrobial combinations for Klebsiella pneumoniae carbapenemase-producing K. pneumoniae.</a> Journal of Infectious Diseases. 207 (5), 786-793 (2013).</li><li>T&#228;ngd&#233;n, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+double-+and+triple-antibiotic+combinations+for+VIM-+and+NDM-producing+klebsiella+pneumoniae+by+in+vitro+time-kill+experiments.">Evaluation of double- and triple-antibiotic combinations for VIM- and NDM-producing klebsiella pneumoniae by in vitro time-kill experiments.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (3), 1757-1762 (2014).</li><li>Tascini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+activity+of+colistin+plus+rifampin+against+colistin-resistant+kpc-producing+klebsiella+pneumoniae.">Synergistic activity of colistin plus rifampin against colistin-resistant kpc-producing klebsiella pneumoniae.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (8), 3990-3993 (2013).</li><li>Paul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+for+carbapenem-resistant+Gram-negative+bacteria.">Combination therapy for carbapenem-resistant Gram-negative bacteria.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (9), 2305-2309 (2014).</li><li>Rafailidis, P. I., Falagas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Options+for+treating+carbapenem-resistant+Enterobacteriaceae.">Options for treating carbapenem-resistant Enterobacteriaceae.</a> Current Opinion in Infectious Diseases. 27 (6), 479-483 (2014).</li><li>Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Verification+of+an+automated,+digital+dispensing+platform+for+at-will+broth+microdilution-based+antimicrobial+susceptibility+testing.">Verification of an automated, digital dispensing platform for at-will broth microdilution-based antimicrobial susceptibility testing.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (9), 2288-2293 (2016).</li><li>Brennan-Krohn, T., Truelson, K., Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+Synergistic+Activity+of+Antimicrobial+Combinations+Against+Carbapenem-Resistant+Enterobacteriaceae+Using+Inkjet+Printer-Based+Technology.">Screening for Synergistic Activity of Antimicrobial Combinations Against Carbapenem-Resistant Enterobacteriaceae Using Inkjet Printer-Based Technology.</a> J Antimicrob Chemother. 72 (10), 2775-2781 (2017).</li><li>Brennan-Krohn, T., Pironti, A., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+Activity+of+Colistin-Containing+Combinations+against+Colistin-Resistant+Enterobacteriaceae.">Synergistic Activity of Colistin-Containing Combinations against Colistin-Resistant Enterobacteriaceae.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2018).</li><li>Falagas, M. E., Kasiakou, S. K., Saravolatz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin:+The+Revival+of+Polymyxins+for+the+Management+of+Multidrug-Resistant+Gram-Negative+Bacterial+Infections.">Colistin: The Revival of Polymyxins for the Management of Multidrug-Resistant Gram-Negative Bacterial Infections.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (9), 1333-1341 (2005).</li><li>Nation, R. L., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+in+the+21st+century.">Colistin in the 21st century.</a> Current Opinion in Infectious Diseases. 22 (6), 535-543 (2009).</li><li>Ah, Y. -. M., Kim, A. -. J., Lee, J. -. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+resistance+in+Klebsiella+pneumoniae.">Colistin resistance in Klebsiella pneumoniae.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 44 (1), 8-15 (2014).</li><li>Bratu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbapenemase-producing+Klebsiella+pneumoniae+in+Brooklyn,+NY:+Molecular+epidemiology+and+in+vitro+activity+of+polymyxin+B+and+other+agents.">Carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae in Brooklyn, NY: Molecular epidemiology and in vitro activity of polymyxin B and other agents.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 56 (1), 128-132 (2005).</li><li>Barth, N., Ribeiro, V. B., Zavasckid, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+polymyxin+B+plus+imipenem,+meropenem,+or+tigecycline+against+KPC-2-producing+Enterobacteriaceae+with+high+MICs+for+these+antimicrobials.">In vitro activity of polymyxin B plus imipenem, meropenem, or tigecycline against KPC-2-producing Enterobacteriaceae with high MICs for these antimicrobials.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (6), 3596-3597 (2015).</li><li>MacLowry, J., Jaqua, M., Selepak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+methodology+and+implementation+of+a+semiautomated+serial+dilution+microtechnique+for+antimicrobial+susceptibility+testing.">Detailed methodology and implementation of a semiautomated serial dilution microtechnique for antimicrobial susceptibility testing.</a> Appl Microbiol. 20 (1), 46-53 (1970).</li><li>Brennan-Krohn, T., Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+poisoned+well:+Enhancing+the+predictive+value+of+antimicrobial+susceptibility+testing+in+the+era+of+multidrug+resistance.">The poisoned well: Enhancing the predictive value of antimicrobial susceptibility testing in the era of multidrug resistance.</a> Journal of Clinical Microbiology. 55 (8), 2304-2308 (2017).</li><li>Doern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+does+2+plus+2+equal+5?+A+review+of+antimicrobial+synergy+testing.">When does 2 plus 2 equal 5? A review of antimicrobial synergy testing.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (12), 4124-4128 (2014).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 28th ed. CLSI supplement M100. , (2018).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard - Tenth Edition. CLSI document M07-A10. , (2015).</li><li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> M07: Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically, 11th Edition. , (2018).</li><li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods for determining bactericidal activity of antimicrobial agents; approved guideline M26-A. 19 (18), 7 (1999).</li><li>Naghili, H., Tajik, H., Mardani, K., Razavi Rouhani, S. M., Ehsani, A., Zare, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+drop+plate+technique+for+bacterial+enumeration+by+parametric+and+nonparametric+tests.">Validation of drop plate technique for bacterial enumeration by parametric and nonparametric tests.</a> Veterinary research forum. 4 (3), 179-183 (2013).</li><li>Chen, C. Y., Nace, G. W., Irwin, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+6x6+drop+plate+method+for+simultaneous+colony+counting+and+MPN+enumeration+of+Campylobacter+jejuni,+Listeria+monocytogenes,+and+Escherichia+coli.">A 6x6 drop plate method for simultaneous colony counting and MPN enumeration of Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli.</a> Journal of Microbiological Methods. 55 (2), 475-479 (2003).</li><li>Queenan, A. M., Foleno, B., Gownley, C., Wira, E., Bush, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Inoculum+and+Activity+in+AmpC-+and+Extended-Spectrum+(ESBL)-Producing+Escherichia+coli+and+Klebsiella+pneumoniae+Clinical+Isolates+Tested+by+Using+NCCLS+ESBL+Methodology.">Effects of Inoculum and Activity in AmpC- and Extended-Spectrum (ESBL)-Producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae Clinical Isolates Tested by Using NCCLS ESBL Methodology.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (1), 269-275 (2004).</li><li>Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inoculum+Effect+in+the+Era+of+Multidrug+Resistance:+Minor+Differences+in+Inoculum+Have+Dramatic+Effect+on+Minimal+Inhibitory+Concentration+Determination.">The Inoculum Effect in the Era of Multidrug Resistance: Minor Differences in Inoculum Have Dramatic Effect on Minimal Inhibitory Concentration Determination.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2018).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergism+Testing:+Broth+Microdilution+Checkerboard+and+Broth+Macrodilution+Methods.">Synergism Testing: Broth Microdilution Checkerboard and Broth Macrodilution Methods.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. , (2016).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-Kill+Assay+for+Determining+Synergy.">Time-Kill Assay for Determining Synergy.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. , (2016).</li><li>Hindler, J. A., Humphries, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+MIC+variability+by+method+for+contemporary+clinical+isolates+of+multidrug-resistant+gram-negative+bacilli.">Colistin MIC variability by method for contemporary clinical isolates of multidrug-resistant gram-negative bacilli.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (6), 1678-1684 (2013).</li><li>Sutherland, C. A., Nicolau, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+add+or+not+to+add+Polysorbate+80:+Impact+on+colistin+MICs+for+clinical+strains+of+Enterobacteriaceae+and+Pseudomonas+aeruginosa+and+quality+controls.">To add or not to add Polysorbate 80: Impact on colistin MICs for clinical strains of Enterobacteriaceae and Pseudomonas aeruginosa and quality controls.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (10), 3810 (2014).</li><li>Fuchs, P. C., Barry, a. L., Brown, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+testing+quality+control+studies+with+fosfomycin+tromethamine.">Susceptibility testing quality control studies with fosfomycin tromethamine.</a> European journal of clinical microbiology &amp; infectious diseases official publication of the European Society of Clinical Microbiology. 16 (7), 538-540 (1997).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimum+Bactericidal+Concentration+Testing.">Minimum Bactericidal Concentration Testing.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. 5.14.1.11. , (2016).</li><li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+polymyxin+B+in+combination+with+various+antibiotics+against+extensively+drug-resistant+Enterobacter+cloacae+with+decreased+susceptibility+to+polymyxin+B.">In vitro activity of polymyxin B in combination with various antibiotics against extensively drug-resistant Enterobacter cloacae with decreased susceptibility to polymyxin B.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 60 (9), 5238-5246 (2016).</li><li>Bulman, Z. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymyxin+combinations+combat+Escherichia+coli+harboring+mcr-1+and+blaNDM-5:+Preparation+for+a+postantibiotic+Era.">Polymyxin combinations combat Escherichia coli harboring mcr-1 and blaNDM-5: Preparation for a postantibiotic Era.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li></ol>

מתקן דיגיטלי D300 חומרים מתכלים המשויך נמסרו בידי Tecan (Morrisville, NC). Tecan היה אין תפקיד תכנון המחקר, איסוף/פרשנות הנתונים, הכנת כתב היד או ההחלטה לפרסם.

שתי השיטות המתוארות כאן שני מספקים מידע אודות הפעילות של antimicrobials בשילוב בהשוואה פעילותם בודדים. הדיגיטלי באמצעות מדפסת הזרקת דיו אוטומטיות dispensing השיטה היא התאקלמות של השיטה המתוארת ב מדריך נהלים מיקרוביולוגיה קלינית33, בעוד השיטה זמן-להרוג מקרוב יותר עוקב אחר הפרוטוקול המתאים מאותו התייחסות34.
ב שיטת מערך לוח שחמט, חישובים כדי לקבוע את אמצעי האחסון הדרושים של מניות מיקרוביאלית כדי להוסיף מכל קידוח כמו גם מחלק של אמצעי אחסון אלה היא אוטומטית, וכך למנוע כמה מקורות פוטנציאליים העיקריים של שגיאה שאירעה במדריך למשתמש מערך לוח שחמט. זה עדיין חיוני, עם זאת, כי החוקר קובע כי מניות המקורי נעשים הריכוז המיועד, כי המטרה הסופית ריכוזים. מוזנים לתוך התוכנה D300 כהלכה. הוספת ההשעיה מיקרוביאלית כדי בארות בצלחת 384-טוב עשויה להיות מאתגרת בהתחלה ודורש טיפול כדי לוודא כי פיפטה טיפים הזן את הבארות המתאים ומעלה הנוזל הזה לא להתיז את הקצוות של הבארות מטפל נוזלי אוטומטי יכול לשמש במקום פיפטה רב-ערוצי ידניים כדי להגדיל את המהירות והדיוק שבה ההשעיה חיידקי מתווסף בארות. כמפורט בפרוטוקול, D300 דורש התוספת של חומרים פעילי שטח, polysorbate 20 (P-20), עבור טיפול בנוזלים נאותה. חומרים פעילי שטח שונים, polysorbate 80-ריכוז של 0.002%, נרשמה להורדת colistin מיקרוגרם עבור אורגניזמים עם colistin מיקרוגרם של < µg/mL 2 במבחני microdilution מרק רגיל. 35 , 36 המעבדה שלנו בעבר הראו כי P-20 בריכוזים עד 0.0015% לא השפיע על תוצאות מיקרופון בסיוע D300 בהשוואה הפניה BMD14. בדוגמה assay המובאת כאן, P-20 המרבי הוא ריכוז הוא 0.0014%.
בעיה אחת נתקלנו עם כמה מבחני מערך של לוח שחמט היה מספר רב של בארות שהמערכת דילגה עליהם. זה התרחש בקצב בלתי מידתית עם אנטיביוטיקה מסוימים. באופן ספציפי, על מסך של שילובים נגד אוסף של קרבפנם עמידים Enterobacteriaceae, מצאנו כי בעוד 49 של ניסויים 521 (9.4%) היו שמיש עקב מספר בארות שהמערכת דילגה עליהם, 2 12 אנטיביוטיקה נבדק (fosfomycin ו- cefepime) היוו 46 של ניסויים אלה (94%). לעלייה בשיעור כזה עשוי להיות סביר יותר סמים כי הם רגישים במיוחד ל32,3731,השפעה inoculum. ראוי לציין, CLSI אינה ממליצה על בדיקות fosfomycin מרק דילול25 עקב חששות לגבי האמינות של תוצאות באמצעות שיטה זו, אשר עשוי להסביר את התוצאות לא אמין עם תרופה זו. ניתן לבצע מספר שינויים לשיטה לוח שחמט אוטומטית בהתאם להעדפות החוקר. Antimicrobials יכול ובשמפו לוחות כבר המכיל חיידקי ההשעיה, ולא לתוך בארות ריק, אם זה עדיף מטעמים של זרימת העבודה בתוך המעבדה. בעוד 384-ובכן צלחות שימשו כאן, השיטה יכול גם להתבצע ב 96-ובכן צלחת מבחני בשינוי המתאים נפח טוב. השימוש של תבנית 96-ובכן צלחת עשויה לסייע בבארות שהמערכת דילגה עליהם תוך צמצום של אנטיביוטיקה רגישים במיוחד לשינויים קטנים ב- inoculum. בעת חישוב FICאני, ייתכנו מצבים המיקרופון איפה את סרגל (כלומר, מעל כל נבדק), כולל מצבים שבו התרופה הנבדקת יש אין כל פעילות בנפרד נגד הסוג של אורגניזם הנבדקת. במקרים אלה, FIC יכול להיות מחושב בהתבסס על בהנחה שהמיקרופון הוא גבוה יותר מאשר הריכוז הגבוה ביותר נבדק אחד דילול. זוהי האסטרטגיה הכי שמרנית, ההנחה היא ערך מקסימלי FIC אפשרי עבור כל דילול איפה עיכוב הוא ציין במהלך הבדיקה סינרגיה. לדוגמה, אם המיקרופון בפועל היו במקום שני ההכפלה דילולים לעיל הריכוז הגבוה ביותר נבדק, ואז FICs המתאים יהיה כפולה נמוך יותר הקצאות השמרני, וכן הלאה.
כדי להעריך באופן מדויק את פעילות אחרים של תרופות וזמינותו הזמן-להרוג, זה חיוני כי תרבויות להיות בצמיחה לוגריתמי-פאזי, במיוחד כאשר דופן התא הפעיל אנטיביוטיקה מתבצעת שנבדקו28. על החיידקים במהירות גוברת להשתמש בדוגמה זו (ק' pneumoniae), 3 שעות של דגירה ברעידות היה המתאים להגיע בשלב זה צמיחה, אבל כמויות שונות של זמן עשוי להיות נחוץ עבור אורגניזמים שונים. באופן כללי, התרבות צריכה להופיע בעליל אבל לא כבדה עכורים. משך הזמן המתאים יכול להיקבע על ידי בניית עקומת גדילה עם ספירות המושבה שצולמו זמן טורי נקודות (למשל, כל 30 דקות במשך 4-6 h)38. חשוב גם inoculum ההתחלתי המיועד במחקר להרוג זמן. הריכוז היעד של inoculum ההתחלה הוא כ 5 x 105 עונה 1 פרק 106 CFU/mL. דילול המתוארים כאן (100 μL של השעיה מקפרלנד 1.0 ב 10 מ"ל של מדיה) יוצר את inoculum הזה pneumoniae קלבסיאלה , מינים אחרים Enterobacteriaceae , שבו בדקנו אותו. אם הצפיפות של inocula המוצא בניסוי באמצעות אורגניזמים שונים באופן משמעותי גבוה יותר או נמוך יותר, ואז לדילול שונה עשוי להיות נחוץ. (דילול המתאימות הדרושות עבור זן נתון יכול להיקבע על ידי ביצוע ספירת צלחת של השעיה מקפרלנד 0.5 או 1.0 כדי לקבוע כמה אורגניזמים עכירות הזה מייצג, ואז לחשב את הסכום שלפיו ההשעיה הראשוני חייב להיות מדולל להגיע הריכוז הסופי המתאים). אם, על סקירה של צלחת ספירת מן המחקר סינרגיה, נמצא את inoculum המוצא של כל אחד הצינורות המכילים אנטיביוטיקה היה נמוך באופן משמעותי inoculum ההתחלתי של הפקד צמיחה, הדבר עשוי להעיד על דחויים או לאנטיביוטיקה או מאוד הריגה מהירה של חיידקים בזמן קצר בין תוספת של חיידקים כדי הצינור המכיל אנטיביוטיקה הסרת aliquot עבור ציפוי. אם המספר הממשי של מושבות בתיבה הנפתחת מדולל בסדרה הוא נמוך ממספר מושבות דילולים עוקבות, הדבר מצביע על אפקט אנטיביוטי דחויים. אפשרויות שונות תוארו למניעת את האפקט הזה, כולל שמתפשטת aliquot יחיד הצלחת38 או ספינינג לדגימה, הסרת את תגובת שיקוע של השעיית מחדש בתוך תמיסת מלח סטרילית לפני ציפוי39. נקודת הזמן השיטה להרוג זמן, חשוב גם עבור החוקר ביעילות אך במדויק להסיר aliquot של כל שפופרת תרבות ולבצע דילולים טורי. עיכובים במהלך תהליך זה, במיוחד במהלך המוקדמות עת נקודות המתרחשים ברצף קרובים, יכול להוביל תקופות ממושכות שבמהלכו תרבויות אינן מתפשט, מזועזע, ואילו dispensing רשלני, טורי דילולים יכול להוביל צלחת לא מדויק סופרת. לעומת השיטה צלחת כפולה של הצלחת לספור, שבה 100 μL של כל דילול משתרע על פני צלחת אגר כולו, שיטת צלחת ירידה המתוארת היא הרבה יותר מהירה, דורש מספר קטן יותר של פלטות אגר, ומאפשר עבור ספירה מהירה יותר, כמספר המרבי אפשר לספור מספר מושבות עבור כל טיפה היא 30, בעוד בדרך כלל ניתן לספור עד 300 מושבות מצלחת כפולה. עם זאת, שיטת צלחת כפולה זאת גם אופציה אם החוקרים נמצאים יותר נוח עם טכניקה זו. אם טיפות התפשט לתוך השני לאחר ומקבלים פיפטה רב-ערוצי, ניתן לבצע במקום יישומים בודדים של טיפות יותר כמרווחים עם פיפטה ערוץ אחד. מניסיוננו, קירור צלחות ב 4 ° C לפני dispensing טיפות דומה כדי לצמצם את התפשטות מוגזמת.
מגבלה אחת אחת מהטכניקות שתוארו כאן היא כי התוצאות של שני סוגי assay סינרגיה (מערך לוח שחמט, זמן-kill) אינם תמיד concordant, מאחר ביותר מאמרים סינרגיה משתמשות שיטה אחת או אחרת במקום שניהם ביחד, זה יכול יהיה קשה לדעת איך לשלב נתונים שני סוגים של מבחני. כי השיטה מערך אוטומטי לוח שחמט שפיתחנו היא פשוטה תפוקה גבוהה, השתמשנו בו בתוקף כסוג של המסך כדי לבדוק שילובים נגד מספר גדול יותר של מבודד וכדי לקבוע אילו שילובים הריכוז היו סינרגטי. ואז אנחנו לבצע מספר קטן יותר של הזמן-להרוג מחקרים, בחירת שילובים וריכוזי שהיה יעיל של מערך לוח שחמט. ראוי לציין, כי וזמינותו לוח שחמט מבוצעת בדרך כלל בקנה מידה דילול microbroth, בעוד assay זמן-להרוג משתמשת אחסון גדולים יותר (בדומה לדילול macrobroth), מצאנו כי FICs היו שונים בין שתי השיטות, לפעמים עם גבוה יותר ריכוזי נדרש בדרך כלל ב וזמינותו להרוג זמן להפגין פעילות. תופעה זו נרשמה בעבר כאשר macrobroth ו- microbroth של תוצאות וזמינותו של דילול מיקרופון מושווים עבור החיידקים גראם שליליים26 ומתי inocula גדולים (כמו שימוש במחקרים זמן-kill) לעומת את inoculum רגיל בשימוש מבחני מערך דילול, לוח שחמט microbroth32. מגבלה ספציפית של המערך לוח שחמט הוא ההשתנות הגלום ב microbroth דילול מיקרופון בדיקות22. בזמן FICאני המכנסונים של סינרגיה חשבון עבור ההשתנות מתמטית6 כאלה השתנות בלתי נמנע מעלה חשש הנאמנות ועקביות של לוח שחמט מערך תוצאות.
בגלל המגבלות הטבועות סינרגיה כל גופית בדיקות בשיטות (כולל טיפוח החיידקים של מדיום הגידול מלאכותי, בריכוזים אנטיביוטי סטטי ו קורס לזמן מוגבל), וחייבות להיות מאושרות התוצאות המתקבלות על ידי שיטות אלה, בהמשך הערכה באמצעות טכניקות משלימה. שיטות כאלה כוללים מחקרים במבחנה פרמוקוקינטיים/pharmacodynamic (PK/PD) (למשל, סיב חלול זיהום דגם40), מודלים, ו, בסופו של דבר, בבני PK/PD והיעילות. שיטת מערך אוטומטי לוח שחמט המתוארים כאן, על-ידי מתן שיטה מהירה שבה המסך שילובים לפעילות פוטנציאל סינרגטי, מאפשרת יותר ממוקד ניצול של טכניקות אלה. עוד יותר אוטומציה של כל השיטות האלה, כמו חקירה שיטתית כמו טוב יותר של הקשר בין פרמטרים במבחנה התוצאות הקליניות, יהיה חשוב ב קנה מידה למעלה את השימוש סינרגיה בדיקות והגברת את תחולתן קליניים.

התפשטות multidrug עמידים (MDR) פתוגנים חיידקיים, במיוחד MDR חיידקים גראם שליליים כגון קרבפנם עמידים Enterobacteriaceae (CRE), הותירה קלינאים עם אפשרויות מוגבלות יותר ויותר על טיפול מוצלח anti-infective 1, בעיה מתעצמת על קצב איטי של הרומן לתרופות אנטיבקטריאליות-גילוי-2,-3. סינרגיה מיקרוביאלית, שבו שתי תרופות בשילוב להפעיל השפעה גדולה יותר-יותר-תוסף, מציע את האפשרות של להציל הקיים אנטיביוטיקה לשימוש בטיפול של MDR חיידקים, גם כאשר חיידקים אלו עמידים אחד או שני אנטיביוטיקה באופן אינדיבידואלי. השיטות המתוארות במאמר זה מספק שתי שיטות משלימות של סינרגיה במבחנה בדיקה זה כשמשתמשים יחד, לאפשר חוקרים כדי ביעילות מסך שילובים מיקרוביאלית של הריבית עבור עדות (אוטומטית סינרגטיים לפעילות שיטת מערך לוח שחמט) ואז להעריך עוד יותר את קינטיקה של עיכוב והרג שבאנדרטה שילובים המבטיחים שזוהו בשלב הסינון (שיטת זמן-להרוג ידנית).
אחת השיטות הנפוצות ביותר של סינרגיה במבחנה בדיקות וזמינותו מערך לוח שחמט, שינוי של הריכוז המעכב המינימלי (MIC) בדיקה שבה לבודד פעילות המעכבת של שני סוגי אנטיביוטיקה שונים נגד בקטריאלית נבדקים מעל טווח הריכוז שילובים4,5. אם התרופות שני מפעילים יותר פעילות מוספים כאשר נעשה שימוש יחד, נחשב השילוב סינרגטי6. עם זאת, הגדרת מערך לוח שחמט באופן ידני כולל סדרה של חישובים של צעדים המדללת ו pipetting מפרך ובלתי פגיע אנוש. אילוצים אלה היו את השפעת הגבלת השימוש של סינרגיה בדיקות בעיקר הערכה רטרוספקטיבי של מספר קטן של שילובים לאנטיביוטיקה, מבודד חיידקי, התוצאות לא תמיד היו עקביים בין מחקרים7, 8,9,10,11. יתר על כן, תרמה למורכבות של סינרגיה בדיקות שלו אי-זמינות במעבדה למיקרוביולוגיה קלינית, העדר וירטואלי של סינרגיה במבחנה בדיקות נתונים ממחקרים קליניים של שילוב טיפול12, 13.
על מנת להגביר את היעילות והתפוקה של השיטה מערך לוח שחמט, עשינו שימוש אוטומטי מיקרופון בדיקות טכניקה שפותחו בעבר במעבדה שלנו המשתמשת בטכנולוגיית הדפסה הזרקת דיו כדי בדיוק וכן בעקביות לוותר על אמצעי אחסון קטן בפתרון מניות לאנטיביוטיקה לתוך בארות צלחת microtiter14. פלטפורמת obviates לצורך חישובים מורכבים והשלבים pipetting מרובים. התוכנה המשוייכת מחשבת, dispenses אחסון המתאים של אנטיביוטיקה כדי ליצור מערך דו מימדי לוח שחמט, אם המשתמש פשוט כניסות הטווח הרצוי ריכוז וריכוז פתרון מניות של האנטיביוטיקה. בתחילה נבדק בשיטה זו נגד אוסף של CRE מבודד15 ואנו מכן התמקדו בדיקות colistin המכילות שילובים עבור פעילות נגד מבודד עמידים colistin16. Colistin היא תרופה של המוצא האחרון השמור בדרך כלל לשימוש בטיפול של MDR פתוגנים גראם שליליים17,18, ו colistin התנגדות רינדור כבר MDR חיידקים עמידים כמעט פאן19, הופכות אותה לאידיאלית מועמדים עבור הפיתוח של אסטרטגיות טיפוליות הרומן משתמש בסמים שלגביו הן רגישות בנפרד. מצאנו כי השילוב של colistin ו minocycline לאנטיביוטיקה מעכב סינתזה של חלבון היה שיעור גבוה מאוד של סינרגיה, אפילו נגד זנים שהיו עמידים לכל אחת מן התרופות הללו בנפרד, יש להניח כי colistin מפעילה את subinhibitory ההשפעה permeabilizing על אפילו colistin חיידקים עמידים. בחרנו שילוב זה להשתמש כדוגמה בעיתון הזה. ראוי לציין, סינרגיה בדיקות יכול לשמש גם כדי להעריך עבור יעילות משופרת של שתי תרופות שהן שתיהן יעיל באופן אינדיבידואלי.
שיטת מערך לוח שחמט אוטומטית מקלה על בדיקה מהירה, תפוקה גבוהה סינרגיה. עם זאת, שיטת מערך לוח שחמט יש מגבלות. כמו assay ששונה מיקרופון, הוא מספק נתונים רק על עיכוב של התפתחות חיידקים ולא על הריגה, אינה מספקת נתונים על השפעות אנטיביוטיות לאורך זמן. לעומת זאת, ידני הביצועים של מבחני זמן-להרוג סינרגיה יותר עמל רב, אך מספק מידע על עיכוב והרג מעל20,21קורס הזמן 24 שעות ביממה. השתמשנו להרוג זמן ניתוח על מספר קטן יותר של מבודד כדי לאשר את התוצאות מערך לוח שחמט שלנו וכדי לקבוע אם הצירופים סינרגטי זיהינו היו גם אחרים.
שתי השיטות סינרגיה לוח שחמט מערך ולהרוג זמן לספק מידע חשוב על הפעילות של שילובים תרופתיים, הם שימושיים במיוחד להערכת פוטנציאל אפשרויות טיפוליות הרומן של פתוגנים חיידקיים עמידים מאוד. השיטות יש גם מגבלות הטבועות. שיטת הדילול מיקרופון רגיל microbroth יש טווח השגיאה הצפוי ידועים 1 כפולה דילול22, אשר הוא גדל כאשר שתי תרופות נבדקים יחד במערך לוח שחמט. ההגדה התקנית של סינרגיה, הרואה את שילוב סינרגטי רק אם הסמים אינם פעילים יחד רבע שלהם בהתאמה מיקרוגרם6, לוקח בחשבון זה צפוי השתנות, אבל כזה השתנות (אשר נחשב כתוצאה מכך משילוב של תנודות ביולוגי, טכני23) נמנע יוצר הנילון לגבי אמינות התוצאות סינרגיה. העדר סטנדרטים בקרת איכות הוקמה לבדיקת סינרגיה הוא גם מגבלה הנוכחי. אולי המגבלה המשמעותי ביותר של כל שיטות בדיקה סינרגיה הוא העדר מתאמים הוקמה בין התוצאות במבחנה ואת התוצאות הקליניות כאשר שילובים משמשים לטיפול בחולים24. סינרגיה פשוטה יותר ומהירה יותר בדיקות בשיטות, כגון לוח שחמט אוטומטיות מערך השיטה המתוארת כאן, עשוי להקל על השילוב של סינרגיה במבחנה בדיקות במסגרת ניסויים קליניים או אחרים הערכות של תוצאות המטופל כדי לאפיין את הקשר בין השפעות במבחנה של ויוו בעתיד.
שיטת מערך אוטומטי לוח שחמט שבה אנו מציגים כאן מציעה אפשרות להקרנה תפוקה גבוהה של מגוון שילובים ומאפשר הערכה מהירה של שילובים "גבוה סיכון גבוהה פרס" יוצא דופן, ללא השקעה גדולה של זמן, משאבים. השיטה להרוג זמן, אשר לאחר מכן נדגים, יכולים לספק מידע תומך נוסף על הפעילות סינרגטי של השילוב, יכול לעזור לאפיון שלה פעילות אחרים, קינטיקה אנטיבקטריאלי.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Escherichia coli strain ATCC 25922</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>25922</td>
			<td>QC strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1605-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L 0.22 &#181;m bottle-top filter</td>
			<td>Thermo Scientific Nalgene</td>
			<td>597-4520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 mm x 75 mm borosilicate glass round bottom culture tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-961-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 x 100 mm or 15 x 150 mm Mueller Hinton agar plates</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R01620 or R04050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mm stainless steel closures for 25 x 150 mm glass culture tubes</td>
			<td>Bellco</td>
			<td>2005-02512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 x 150 mm borosilicate glass round bottom culture tubes</td>
			<td>Bellco</td>
			<td>2011-25150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>348-well sterile clear, flat-bottom, untreated microplates with lids</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>781186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile reagent reservoirs</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 deep well polypropylene microplate with 2 mL wells</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-566-612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well sterile clear, round-bottom, untreated microplates with lids</td>
			<td>Evergreen</td>
			<td>222-8032-01R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cation adjusted Mueller Hinton broth</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>212322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colistin sulfate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J60915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D300e Control Software</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DensiCHEK Plus McFarland reader</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>21250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel spreadsheet software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra long SHARP 10 &#181;L Precision Barrier Tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1096-FR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HP D300 digital dispenser</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HP D300 T8+ cassettes</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td>30097370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minocycline hydrochloride</td>
			<td>Chem-Impex</td>
			<td>14302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picus 12-channel 10-300 &#181;L pipette</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>735461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate 20</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP-337</td>
			<td>Brand name: Tween 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Infinite M1000 PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xplorer 12-channel 50-1200 &#181;L pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>2231000328</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

antimicrobial synergy testing by the inkjet printer-assisted automated checkerboard array and the manual time-kill method

כמו המחירים של פתוגנים (MDR) multidrug עמידים ממשיכים לעלות, משיגה את התפתחות antimicrobials חדש, רומן גישות טיפול של חיידקים MDR הופכים יותר ויותר הכרח. אחד גישה כזו היא טיפול משולב, אשר שניים או יותר אנטיביוטיקה משמשים יחד לטיפול זיהום נגד איזה אחת או את שתיהן תרופות עשוי להיות לא יעיל לבד. כאשר שתי תרופות, בשילוב, להפעיל גדול יותר אפקט תוסף, הם נחשבים סינרגטי. חקירה במבחנה של פעילות סינרגטיים היא צעד ראשון חשוב בהערכת יעילות אפשרית של שילובים תרופתיים. שתי שיטות בדיקה סינרגיה במבחנה הראשי פותחו: המערך לוח שחמט, המחקר להרוג זמן. בנייר זה, אנו מציגים שיטת מערך אוטומטי לוח שחמט זה עושה שימוש בטכנולוגיית הדפסה הזרקת דיו כדי להגביר את היעילות והדיוק של טכניקה זו, כמו גם שיטה סינרגיה להרוג זמן ידני רגיל. המערך האוטומטי לוח שחמט יכול לשמש וזמינותו ההקרנה תפוקה גבוהה, בעוד המחקר זמן-להרוג ידני מספק נתונים משלימים נוספים על פעילות סינרגטיים והרג.
המערך לוח שחמט הוא שינוי של תקן הריכוז המעכב המינימלי (MIC) בדיקות, שבו חיידקים מודגרות באנטיביוטיקה-שילובים שונים ריכוז ומוערכת עבור הצמיחה עיכוב לאחר דגירה בין לילה. ביצועים ידנית של המערך לוח שחמט דורש מפרך ומועדת לשגיאות סדרת דילולים וחישובים. בשיטה אוטומטית הציגו כאן, החישוב ואת dispensing נדרש פתרון מניות לאנטיביוטיקה אמצעי אחסון הן אוטומטיות באמצעות טכנולוגיית מדפסת הזרקת הדיו. ב וזמינותו סינרגיה להרוג זמן, חיידקים מודגרות עם האנטיביוטיקה של עניין, גם ביחד וגם בנפרד, שנדגמו במרווחי זמן במשך 24 שעות ביממה לתרבות כמותית. התוצאות ניתן לקבוע שילוב סינרגטי, בין אם זה אחרים, לספק נתונים על עיכוב ו הריגת חיידקים לאורך זמן.

איור 1A מציג רשת של לוח שחמט מערך סינרגיה ניסוי שבו minocycline בריכוזים של 0-32 μg/mL היה בשילוב עם colistin בריכוזים של 0-16 μg/mL, נבחנה נגד e. coli זן ה-FDA-ה-CDC 0494. הערכים מייצגים קריאות spectrophotometric-צפיפות אופטית 600 nm (OD600). וולס עם יתר הערכים600 מתחת 0.07 (אשר מקביל אין התפתחות על-ידי בדיקה ויזואלית) הם אדום מוצל, ואילו וולס עם יתר600 ערכים 0.07 (התואם את הצמיחה על ידי בדיקה חזותית) הם ירוקים מוצל. עבור כל תרופה, הריכוז המעכב המינימלי (מיקרופון; מודגש) הוא הריכוז הנמוך ביותר של סמים זה מעכב התפתחות חיידקים. עבור minocycline, זה 32 μg/mL, עבור colistin, זה 8 μg/mL. ההצללה נשמר באיור 1B, אך הערכים בתוך הבארות שבו הצמיחה מעוכבת מוחלפים בערכים אינדקס (FICאני) הריכוז המעכב החלקי. אלה נקבעים כדלקמן: כל היטב, האינדקס הריכוז המעכב החלקי (FIC) של כל תרופה מחושב על ידי חלוקת הריכוז של אנטיביוטיקה בתוך הבאר הזו על ידי MIC של התרופה ולא FICאני הוא מחושב על ידי סיכום של שני FICs. וולס עם FICאני ערך של 0.5, הנחשב החיתוך עבור סינרגיה, מסומנים על גבול שבור, גם עם הערך הנמוך ביותר FICאני (0.094) הוא מודגש. מכיוון FICאני הערך המינימלי הוא בטווח סינרגטי, נחשב השילוב סינרגטי.
איור 2A ו- 2B איור להציג רשתות מקבילים לאלה איור 1A , איור 1B, אך במקרה זה השילוב לא להפגין סינרגיה נגד בידוד נבדק (ק' pneumoniae המבודד BIDMC 4), כי מינימום FICאני שבה מעוכבת הצמיחה הוא 1, אשר הוא > 0.5.
איור 3 ממחיש את הקריאות צפיפות אופטית מרשת סינרגיה לוח שחמט שבה אירעה כמה בארות שהמערכת דילגה עליהם (Enterobacter cloacae מורכבים המבודד BIDMC 27). המערכת דילגה על בארות הן בארות שבהם מעוכבת התפתחות חיידקים למרות נוכחותם של התפתחות חיידקים בבארות סמוכים עם ריכוז גבוה של אנטיביוטיקה. תופעה זו, אשר ידוע להתרחש במרחק של בדיקות מיקרופון רגיל כמו גם, הוא ככל הנראה בגלל השתנות הביולוגי במאפיינים התפתחות חיידקים מן שטוב יהיה היטב את מידת הרגישות של אנטיביוטיקה מסוימים להבדלים קטנים inoculum חיידקי23 , 31 , 32. אם יותר מפעם אחת תדלג על טוב ארעו מערך לוח שחמט, אנחנו נמחק את התוצאות וחזר וזמינותו.
איור 4 מציג דוגמאות סינרגיה זמן-להרוג שלושה שילובים נבחנה נגד ק' pneumoniae לבודד BIDMC 32. המושבה ספירות הם הצביעו על מידה לוגריתמי ב- y-ציר ובזמן, תוך שעות, על ה- x-ציר. ההבדל בין inoculum מתחיל בצינור המכילה שילוב התרופות, ריכוז חיידקים בצינור הזה ב 24 שעות מודגם על ידי בר אדום מספר, כאשר ההבדל בין ריכוז חיידקים ב 24 שעות בין הצינור המכיל השילוב של הצינור המכיל את הסוכן אחד הפעילים ביותר לבד מודגם על ידי פס כחול מספר. איור 4A מראה תוצאות משילוב של colistin ו minocycline; שילוב זה היה סינרגטי (ההפרש בין ריכוזים של החיידקים נחשפו שילוב וכדי הפעיל ביותר סוכן ≥2 לבד יומן10 CFU/mL-24 שעות), אחרים (ירידה מהחל inoculum כדי ריכוז 24 h ≥ 3 יומן10 CFU/mL). איור 4B מראה תוצאות מתוך השילוב של colistin ו clindamycin, שילוב סינרגטי אבל היה לא אחרים. שילוב זה עכבות צמיחה של החיידקים, אשר לא סמים עשו לבד, אבל לא הרגתי אותם. איור 4C מראה תוצאות משילוב של colistin ו אריתרומיצין, אשר היה לא אחרים ולא סינרגטי.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig1.jpg"> איור 1: מערך לוח שחמט תוצאות המפגינים סינרגיה (minocycline + colistin כנגדם e. coli זן ה-FDA-ה-CDC 0494). (א) Spectrophotometric readout וצמיחה פרשנות של מערך לוח שחמט. הערכים בתאים הם לפי הקריאה צפיפות אופטית של 600 nm (OD600). תאים עם יתר הערכים600 מתחת 0.07 (תואם לאין התפתחות על-ידי בדיקה ויזואלית) הם אדום מוצל, ואילו תאים המכילים ערכים600 OD 0.07 (תואם לצמיחה על ידי בדיקה חזותית) הם ירוקים מוצל. חישוב מדד (FICאני) (B) הריכוז המעכב החלקי. הצללה המציין הצמיחה או אין התפתחות סודרו. הערכים עבור colistin ו minocycline לאורך x- ו - y-צירים, בהתאמה, עכשיו לייצג הריכוז המעכב החלקי (FIC), או היחס בין ריכוז התרופה באותה עמודה או שורה (הריכוז המעכב המינימלי MIC) של התרופה לבד. הערך בכל תא FICאני, או סכום FICs של השני סמים בתוך הבאר הזו. תיבת גדול גובלת קו שבור יקיף וולס עם FICאני של 0.5. התא הגובלת עבה מציין הבאר את הנמוך FICאני שבה מעוכבת גדילה, או את המינימום FICאני. מכיוון המינימום FICאני 0.5, נחשב השילוב סינרגטי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig2.jpg"> איור 2: לוח שחמט תוצאות מערך של שילוב זה לא להוכיח סינרגיה (minocycline + colistin כנגדם ק' pneumoniae לבודד BIDMC 4). (א) אופטי ערכי דחיסות-פרשנות 600 nm וצמיחה של לוח שחמט מערך תוצאות כמתואר באיור 1 א'. (B) חישוב של אינדקס (FICאני) הריכוז המעכב החלקי כמתואר באיור 1 א'. כי המינימום FICאני > 0.5, השילוב אינו נחשב סינרגטי. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig3.jpg"> איור 3: לוח שחמט מערך תוצאות שאינן uninterpretable בשל דילג וולס (minocycline + colistin כנגדם Enterobacter cloacae מורכבים לבודד BIDMC 27). ערכי צפיפות אופטית 600 nm וצמיחה פרשנות של תוצאות מערך לוח שחמט כמתואר באיור 1 א'. כמה בארות שהמערכת דילגה עליהם, שבו מעוכבת התפתחות חיידקים למרות נוכחותם של צמיחה בבארות סמוכים עם ריכוז גבוה של אנטיביוטיקה, הם הפגינו. התוצאות אינן interpretable, ואת הניסוי צריך להיות חוזרות ונשנות. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig4.jpg"> איור 4: זמן-להרוג סינרגיה תוצאות של שלושה שילובים נבחנה נגד ק' pneumoniae ולבודד BIDMC 32. ספירות המושבה הם הצביעו על מידה לוגריתמי ב- y-ציר ובזמן, תוך שעות, על ה- x-ציר. ההבדל בין ריכוז חיידקים בשילוב ב 24 שעות של inoculum מתחיל בצינור מודגם על ידי בר אדום מספר. אם הירידה הפעלה inoculum כדי ריכוז ב 24 שעות של יומן ≥ 310 CFU/mL, השילוב הוא נחשב אחרים. ההבדל בין ריכוז חיידקים ב 24 שעות בין הצינור המכיל השילוב הצינור המכיל את הסוכן אחד הפעילים ביותר לבד מודגם על ידי פס כחול מספר; אם יש ≥2 יומן10 הפחתת CFU/mL, נחשב השילוב סינרגטי. (א) Colistin (CST) + minocycline (דקות), שילוב סינרגטי וגם אחרים. Colistin (B) + clindamycin (CLI), שילוב סינרגטי, אבל אחרים לא. Colistin (ג) + אריתרומיצין (ערבויות), שילוב זה לא סינרגטי ולא אחרים. תוצאות אלו פורסמו בתחילה כחלק ממחקר של פעילות סינרגטיים המכילות colistin שילובים נגד colistin עמידים Enterobacteriaceae, שבו הפגנו colistin הזה היה סינרגטי עם מספר אנטיביוטיקה הפעילים בנפרד בלבד (למשל. clindamycin) או בעיקר (למשל אריתרומיצין) נגד חיידקים גראם חיוביים16. (שים לב כי אריתרומיצין סינרגטי על ידי מערך לוח שחמט נגד המתח המוצג, אך לא על ידי זמן-להרוג, אז זה נבחר כאן כדוגמה של שילוב שאינו סינרגטי.) שיערנו כי colistin, אשר ידוע לפעול על-ידי permeabilization של הממברנה החיצונית גראם שליליים, מפעילה השפעה permeabilizing משנה המעכבת על חיידקים גראם שליליים עמידים colistin, המאפשר כניסה של תרופות כגון clindamycin זה בדרך כלל אין אפשרות להיכנס לתא גראם שליליים. פאנל (א) של דמות זו שונתה מ ברנן-קרון, Pironti ו- 2018 קירבי16, זכויות יוצרים © האמריקאי האגודה למיקרוביולוגיה, סוכני מיקרוביאלית וכימותרפיה, 62(10), 2018, pii: e00873-18, דוי: 10.1128/AAC.00873-18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig4large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method at JoVE.com

Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method

סינרגיה מיקרוביאלית בדיקות משמש כדי להעריך את ההשפעה של האנטיביוטיקה שניים או יותר שמשמשים במשולב, מבוצעת בדרך כלל על ידי באחת משתי שיטות: המערך לוח שחמט או וזמינותו להרוג זמן. כאן, אנו מציגים ממוכנת, הזרקת דיו מדפסת בסיוע לוח שחמט מערך סינרגיה טכניקה, מחקר קלאסי סינרגיה זמן-להרוג.

סינרגיה מיקרוביאלית בדיקות על ידי באמצעות מדפסת הזרקת דיו לוח שחמט אוטומטיות מערך ושיטת להרוג זמן ידנית

As rates of multidrug-resistant (MDR) pathogens continue to rise, outpacing the development of new antimicrobials, novel approaches to treatment of MDR ...

בדיקת סינרגיה ידנית של מערך לוח השחמט היא שיטה עתירת עבודה ונוטה לשגיאות. לעומת זאת, שיטת לוח השחמט האוטומטית שלנו המבוססת על מדפסת הזרקת דיו משפרת באופן דרמטי את המהירות, הדיוק והתפוקה. שיטת לוח השחמט האוטומטי מאפשרת לסנן מספר רב של תרופות לשילובים סינרגטיים, בעוד ששיטת ההרג בזמן יכולה לאשר ולחקור עוד יותר את הפעילות של שילובים אלה.תגלית אנטיביוטית חדשנית אינה עומדת בקצב התפשטות ההתנגדות, אך חקירת שילובים סינרגטיים מציעה אפשרות להצלת תרופות קיימות לטיפול בחיידקים עמידים. למרות שאנו מדגימים טכניקה זו עם אנטיבקטריאליים, זה יכול לשמש גם עם סוגים אחרים של מיקרוביאלית או אפילו עבור סוגים שונים של תרופות משולבות או בדיקות מורכבות. בסרטון וידאו זה, אנו מדגימים שיטת מערך לוח שחמט אוטומטית ושיטת הרג ידנית בזמן.אנו ממליצים לבצע תחילה מחקרים במערך לוח השחמט כדי לזהות שילובים מבטיחים, ולאחר מכן לחקור אותם עוד יותר עם מחקרים על הרג בזמן. כדי להתחיל, לעשות פתרונות מלאי מיקרוביאלית של קוליסטין ו minocycline, ולאחר מכן לבצע בקרת איכות על פתרונות המניות כמתואר בפרוטוקול הטקסט הנלווה. לאחר מכן, הוסיפו כמיליליטר אחד של 0.9% נתרן כלורי, מלוחים, לצינורות תרבות זכוכית עגולים 12 מ"מ על 75 מ"מ.בחר מושבה אחת או שתיים מצלחת לילה של חיידקים, והצב אותם לתוך צינורות התרבות. מערבולת הצינורות בעדינות להשעות את החיידקים בתסרון. בדוק את ריכוז החיידקים באמצעות קורא מקפרלנד.התאימו את הריכוז על ידי הוספת עוד חיידקים מלוחים או יותר כדי להשיג קריאת עגימות של 0.5 מקפרלנד. לאחר מכן, לדלל את החיידקים אחד עד 300 על ידי הוספת 100 microliters של ההשעיה ל 30 מיליליטר של מרק מיולר-הינטון מותאם יון בצינור חרוט 50 מיליליטר כדי להגיע לצפיפות תאים סופית של חמש פעמים 10 ליחידות יוצרות המושבה החמישית למיליליטר. עכשיו, להכין את מיקרוביאלית להדפסה על ידי ביצוע יחד בפרוטוקול הטקסט הנלווה.שמור את הפרוטוקול ולאחר מכן לחץ על לחצן הפעל בחלק הימני העליון ואחריו על לחצן התחל. טען צלחת 384 באר לתוך מחזיק הצלחת, ולחץ טעון תחת לוח עומס 1 סינרגיה בקשה. לאחר מכן, מקם קלטת T8+בחריץ המגירה והקש Loaded תחת שורת הפקודה טען T8+Cassette.כאשר תתבקש, להוסיף פתרון מלאי אנטיביוטי למאגרים שצוינו על הקלטת. לאחר הוספת כל פתרון, לחץ על לחצן מלא. לאחר שמתקן D300 הוסיף מלאי אנטיביוטי בנפחים מתאימים לכל באר והתיבה הפעל הושלמה מופיעה, לחץ על סגור, הסר את הצלחת וכבה את D300.לאחר מכן, יוצקים את ההשעיה החיידקית שהוכנה בעבר לתוך מאגר ריג'נט סטרילי. השתמש פיפטה רב ערוצית כדי להוסיף 50 microliters של ההשעיה לכל בארות במערך לוח השחמט. לאחר מכן, להוסיף 50 microliters של מרק מיולר-הינטון מותאם הקטיון ללא חיידקים ל באר ריקה.זו תהיה באר השליטה השלילית כדי לאשר את הסטריליות של התקשורת. דגירה באינקובטור אוויר אוויר 35 מעלות צלזיוס למשך 16 עד 20 שעות. כדי לנתח את הבדיקה, בצע בפרוטוקול הטקסט הנלווה.לבדיקת הסינרגיה בזמן להרוג, שוב להכין את פתרונות מלאי מיקרוביאלית כמתואר בפרוטוקול הטקסט. לאחר מכן, לעשות השעיה 0.5 מקפרלנד של אורגניזם הבדיקה מלוחים סטריליים. הוסף 100 microliters של ההשעיה 0.5 מקפרלנד לחמישה מיליליטר של CAMHB בצינור תרבות עגול זכוכית 25 על 150 מ"מ עם סגירת נירוסטה, ומערבולת בעדינות לערבב.באמצעות לולאת תוסנה סטרילית, בידוד פס טיפה של ההשעיה מדולל על צלחת אגר דם, ודגירה את הצלחת ב 35 מעלות צלזיוס באוויר הסביבה כדי לאשר טוהר inoculum. החלף את הסגר על הצינור, ודגירה אותו במתלה מבחנה על שייקר ב 35 מעלות צלזיוס באוויר הסביבה לפחות 3 שעות, עד צמיחה בשלב לוגריתמי הוא הגיע. בעוד התרבות הראשונית היא דגירה, להוסיף 10 מיליליטר של מרק מיולר-הינטון מותאם קטיונים לחמישה צינורות תרבות זכוכית autoclaved.עבור מחקר סינרגיה להרוג זמן, לפחות תרופה אחת צריכה להיות בריכוז שאינו משפיע על עקומת הצמיחה בנפרד. זה יכול להיקבע על ידי הערכת ההשפעות של ריכוזי תרופות בודדים לפני המחקר סינרגיה. לצינור הראשון, להוסיף 10 microliters של אחד מיליגרם למיליליטר קוליסטין מלאי כדי לקבל ריכוז קוליסטין סופי של מיקרוגרם אחד למיליליטר, כמו זה ריכוז כי הוא לא יעיל נגד המתח המשמש בדוגמה זו.עבור הצינור השני, להוסיף 10 microliters של אחד מיליגרם למיליליטר minocycline מלאי כדי לקבל ריכוז סופי של מיקרוגרם אחד למיליליטר. ריכוז זה אינו יעיל גם נגד המתח המשמש בדוגמה זו. לצינור השלישי, הוסיפו 10 מיקרוליטרים של מלאי מינוצ'ין של מיליגרם למיליליטר ו-10 מיקרוליטרים של מניית קוליסטין של מיליגרם למיליליטר.זוהי אותה כמות של קוליסטין ו minocycline המשמש צינורות 1 ו -2. בצינורות הרביעי והחמישי, אין להוסיף אנטיביוטיקה. זו תהיה בקרת הצמיחה וצינורות הבקרה השליליים, בהתאמה.לאחר מכן, הכינו 96 צלחות פוליפרופילן עמוקות עם שתי בארות מיליליטר לדילול סדרתי על ידי הוספת 900 מיקרוליטרים של תמיסת מלח סטרילית לשורות B דרך H של עמודים 1 עד 4 עם פיפטה רב ערוצית. כאשר התרבות נמצאת בשלב צמיחה לוגריתמית, הסר את צינור התרבות מהשייקר, ומערבולת אותו בעדינות. העבר מיליליטר אחד של ההשעיה לצינור תרבות זכוכית 12 על 75 מילימטר, ולבדוק את הצפיפות עם קורא מקפרלנד.אם הצפיפות היא פחות מ 1.0 מקפרלנד, להחזיר את הצינור שייקר דגירה יותר. אם הוא גדול מ- 1.0 מקפרלנד, הוסף מרק מולר-הינטון מותאם-יון לצינור, מערבולת בעדינות, ודגום מחדש עד ההשעיה היא ב 1.0 מקפרלנד. חשוב שהתרבות נמצאת בשלב הצמיחה הלוגאריתמית בעת הכנת האנקולום ההתחלתי.אתה יכול לבנות עקומת צמיחה כדי לקבוע מתי אורגניזם מגיע לשלב זה. לאחר מכן, מוסיפים 100 מיקרוליטרים של ההשעיה של 1.0 מקפרלנד לצינורות 1 עד 4, ומערבולת אותם בעדינות. מיד לאחר ערבוב ובשעה אחת, שתיים, ארבע, שש ו -24 שעות, להסיר aliquot 150 מיקרוליטר מכל צינור תרבות על ידי הטיית הצינור, כך שרק קצה פיפטה סטרילי נכנס הצינור ולא פיר pipettor סטרילי במהלך נסיגת aliquot.הוסף aliquots, בהתאמה, בארות רצופות בשורה הראשונה של צלחת 96 עמוק מוכן בעבר. מחזירים צינורות למדף מבחנה על שייקר באינקובטור אוויר אוויר סביבה של 35 מעלות צלזיוס מיד לאחר הסרת aliquots בכל נקודת זמן. באמצעות פיפטה רב-ערוצית, הסר 100 מיקרוליטרים משורה א' של הצלחת, והוסף אותה לשורה B, המכילה 900 מיקרוליטרים של מלוחים, ויוצרת דילול של 1 עד 10.פיפטה הפתרון למעלה ולמטה ארבע עד חמש פעמים כדי לערבב, ולאחר מכן להשליך את הטיפים. ראשית, לתייג מולר-הינטון אגר צלחות עם תנאים אנטיביוטיים ודילול להיות מצופה. לאחר מכן, צלחת דגימות מדוללות עבור ספירת המושבה באמצעות שיטת צלחת טיפה, באמצעות פיפטה רב ערוצית עם טיפים ארוכים במיוחד.הסר 10 microliters מכל באר בעמודה אחת, ולוותר בזהירות בשורה על הצלחת שכותרתו כראוי. המשך עד שכל השורות יחלקו על צלחות. בנוסף, בנקודת הזמן של 24 שעות, מניחים טיפה של 10 מיקרוליטר שנלקחה ישירות מצינור הבקרה השלילי למקום המוקדש לכך כדי לבדוק סטריליות.לאחר מכן, להפוך את כל הצלחות, ו דגירה אותם לילה ב 35 מעלות צלזיוס באוויר הסביבה. לאחר מכן, ספור את מספר המושבות בכל אזור וחשב את צפיפות התאים. סמן מושבות עם סמן קבוע קצה דק על החלק ההפוך של הצלחת, כדי למנוע ספירה כפולה או מושבות חסרות.עבור כל סדרת דילול, לזהות טיפות עם שלוש עד 30 מושבות. לספור את המושבות בטיפות אלה, ולתרשם את הספירה יחד עם גורם הדילול. מוצגת כאן רשת מניסוי סינרגיה של מערך דממה שבו minocycline בריכוזים של אפס עד 32 מיקרוגרם למיליליטר שולבו עם קוליסטין בריכוזים של אפס עד 16 מיקרוגרם למיליליטר ונבדק נגד זן של E.coli.בארות עם ערכי OD600 מתחת ל- 07 אינן מייצגות צמיחה ומוצללים באדום, בעוד בארות עם ערכי OD600 מעל או שווה ל- 07 מייצגות צמיחה ומוצלות בירוק. עבור כל תרופה, הריכוז המעכב המינימלי הוא הריכוז הנמוך ביותר של תרופה המעכבת צמיחה חיידקית. עבור minocycline, זה 32 מיקרוגרם למיליליטר, ועל קוליסטין, זה שמונה מיקרוגרם למיליליטר.הצללה נשמרת כאן, אבל ערכים בתוך בארות שבו הצמיחה מעוכבים מוחלפים על ידי ריכוז מעכבי שבר, או FIC, ערכי מדד. בכל באר, מדד FIC של כל תרופה מחושב על ידי חלוקת הריכוז של אנטיביוטיקה גם על ידי ריכוז מעכבות מינימלי של התרופה. בארות עם מדד FIC של פחות או שווה ל 0.5, אשר נחשב ניתוק לסינרגיה, מסומנים עם גבול קו שבור, ואת באר עם מדד FIC הנמוך ביותר מודגש.מכיוון שערך ה- FIC המינימלי נמצא בטווח הסינרגטי, השילוב נחשב סינרגטי. דוגמה למקרה שאינו מדגים סינרגיה מוצגת כאן, כמו מדד FIC המינימלי שבו הצמיחה מעוכב הוא אחד, שהוא גדול מ 0.5. לבסוף, בדוגמה זו, התרחשו מספר בארות מדלגות, המייצגות צמיחה חיידקית מעוכב, למרות נוכחות של צמיחה חיידקית בארות סמוכות עם ריכוזים גבוהים יותר של אנטיביוטיקה.אם יותר מאחד דילג היטב התרחש במערך לוח דמקת, יש למחוק את התוצאות ואת הבדיקה חוזרת על עצמה. דוגמה לגרף המדגים תוצאות של בדיקת סינרגיה של הרג בזמן מוצגת כאן. אנא עיינו בפרוטוקול הטקסט הנלווה לקבלת פרטים על פרשנות של תצהיס הסינרגיה של הרג הזמן.מידע נוסף על הפעילות של שילובים סינרגטיים ניתן להשיג באמצעות הערכות של פרמקוקינטיקה ופרמקודינמיקה באמצעות מחקרים vivo עם מודלים של בעלי חיים. בצע תמיד נהלי בטיחות מתאימים, כולל שימוש בציוד מגן אישי, בעת עבודה עם חיידקים. אם אתה יוצר אירוסולים או משתמש בפתוגנים בסיכון גבוה, בצע את כל העבודה בקבינט biosafety.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

רגישות בדיקת Antimicrobial של קומפלקס שחפת Mycobacterium עבור תרופות הקו הראשון והשני על ידי דילול מרק בפורמט פלייט microtiter

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

One-day Workflow Scheme for Bacterial Pathogen Detection and Antimicrobial Resistance Testing from Blood Cultures

יום אחד זרימת עבודה עבור תוכנית זיהוי פתוגן חיידקי ובדיקות ההתנגדות Antimicrobial מתרבויות דם

Bloodstream infections are associated with high mortality rates because of the probable manifestation of sepsis, severe sepsis and septic shock1. ...

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

הערכת שינויים מטבוליים כבדית במהלך להתיישבות מתקדמת של עכבר נבט בחינם על ידי 1 H NMR ספקטרוסקופיה

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex assay PCR ?????? ?? ???? Mec ???????? ???? Staphylococcal I ?V ?-methicillin<em&gt; ???????????</em

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

ניתוח של נזק אפיתל הופק על ידי<em&gt; Histolytica Entamoeba</em&gt; זיהום

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

High Throughput, Real-time, Dual-readout Testing of Intracellular Antimicrobial Activity and Eukaryotic Cell Cytotoxicity

תפוקה גבוהה, בזמן אמת, בדיקת Dual-readout של פעילות מיקרוביאלית תאיים Cytotoxicity Cell איקריוטיים

Traditional measures of intracellular antimicrobial activity and eukaryotic cell cytotoxicity rely on endpoint assays. Such endpoint assays require ...

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

ה<em&gt; Ex Vivo</em&gt; קולון איברי תרבות השימוש בו מארח אנטימיקרוביים ללימודי ביטחון

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

בידוד, אפיון, טיהור של מקרופאגים רקמות מושפעות על ידי דלקת הקשורות להשמנת יתר

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

מערך Glycan המודפס: טכניקה רגישה לניתוח של הרפרטואר של מחזורי נוגדנים אנטי-פחמימות בבעלי חיים קטנים

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

אוטומטיות התנהגותית ניתוח של גדול C. elegans אוכלוסיות שימוש רחב שדה-of-view מעקב פלטפורמה

Caenorhabditis elegans is a well-established animal model in biomedical research, widely employed in functional genomics and ageing studies. To assess the ...