Name: antimicrobial synergy testing by the inkjet printer-assisted automated checkerboard array and the manual time-kill method
Uploaded: 2019-04-18T12:30:00
Duration: 12 min 3 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method at JoVE.com

Thea Brennan-Krohn bir Eunice Kennedy Shriver Ulusal Çocuk Sağlığı Enstitüsü tarafından desteklenen ve eğitim grant (T32HD055148), Ulusal Enstitüsü alerji ve bulaşıcı hastalıklar eğitim grant (insani gelişme Pediatrik Enfeksiyon Hastalıkları Araştırma T32AI007061), bir Boston çocuk öğretim geliştirme fakülte kariyer geliştirme, hastane Office Bursu ve bir Ulusal Enstitüsü alerji ve enfeksiyon hastalıkları kariyer geliştirme Ödülü (1K08AI132716). J.E.K. Ulusal Enstitüsü alerji ve Enfeksiyon Hastalıkları Ulusal Sağlık Enstitüleri Ödülü numarası R33 AI119114 altında tarafından desteklenmiştir. İçeriği yalnızca yazarlar sorumludur ve mutlaka Ulusal Sağlık Enstitüleri resmi görüşlerini temsil etmiyor.

<ol>
	<li>Temkin, E., Adler, A., Lerner, A., Carmeli, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbapenem-resistant+Enterobacteriaceae:+Biology,+epidemiology,+and+management.">Carbapenem-resistant Enterobacteriaceae: Biology, epidemiology, and management.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1323 (1), 22-42 (2014).</li><li>Spellberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+antibiotics.">The future of antibiotics.</a> Critical Care. 18 (3), (2014).</li><li>Spellberg, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+epidemic+of+antibiotic-resistant+infections:+a+call+to+action+for+the+medical+community+from+the+Infectious+Diseases+Society+of+America.">The epidemic of antibiotic-resistant infections: a call to action for the medical community from the Infectious Diseases Society of America.</a> Clinical infectious diseases an official publication of the Infectious Diseases Society of America. 46 (2), 155-164 (2008).</li><li>Elemam, A., Rahimian, J., Doymaz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+antibiotic+synergy+for+polymyxin+B-resistant+carbapenemase-producing+Klebsiella+pneumoniae.">In vitro evaluation of antibiotic synergy for polymyxin B-resistant carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae.</a> Journal of Clinical Microbiology. 48 (10), 3558-3562 (2010).</li><li>Poirel, L., Kieffer, N., Nordmann, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+evaluation+of+dual+carbapenem+combinations+against+carbapenemase-producing+Enterobacteriaceae.">In vitro evaluation of dual carbapenem combinations against carbapenemase-producing Enterobacteriaceae.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 71 (1), 156-161 (2016).</li><li>Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergy,+antagonism,+and+what+the+chequerboard+puts+between+them.">Synergy, antagonism, and what the chequerboard puts between them.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 52, (2003).</li><li>Zusman, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+review+and+meta-analysis+of+in+vitro+synergy+of+polymyxins+and+carbapenems.">Systematic review and meta-analysis of in vitro synergy of polymyxins and carbapenems.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (10), 5104-5111 (2013).</li><li>Clock, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+doripenem+alone+and+in+multi-agent+combinations+against+extensively+drug-resistant+Acinetobacter+baumannii+and+Klebsiella+pneumoniae.">In vitro activity of doripenem alone and in multi-agent combinations against extensively drug-resistant Acinetobacter baumannii and Klebsiella pneumoniae.</a> Diagnostic Microbiology and Infectious Disease. 76 (3), 343-346 (2013).</li><li>Hirsch, E. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessment+of+antimicrobial+combinations+for+Klebsiella+pneumoniae+carbapenemase-producing+K.+pneumoniae.">Assessment of antimicrobial combinations for Klebsiella pneumoniae carbapenemase-producing K. pneumoniae.</a> Journal of Infectious Diseases. 207 (5), 786-793 (2013).</li><li>T&#228;ngd&#233;n, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+double-+and+triple-antibiotic+combinations+for+VIM-+and+NDM-producing+klebsiella+pneumoniae+by+in+vitro+time-kill+experiments.">Evaluation of double- and triple-antibiotic combinations for VIM- and NDM-producing klebsiella pneumoniae by in vitro time-kill experiments.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 58 (3), 1757-1762 (2014).</li><li>Tascini, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+activity+of+colistin+plus+rifampin+against+colistin-resistant+kpc-producing+klebsiella+pneumoniae.">Synergistic activity of colistin plus rifampin against colistin-resistant kpc-producing klebsiella pneumoniae.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (8), 3990-3993 (2013).</li><li>Paul, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combination+therapy+for+carbapenem-resistant+Gram-negative+bacteria.">Combination therapy for carbapenem-resistant Gram-negative bacteria.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 69 (9), 2305-2309 (2014).</li><li>Rafailidis, P. I., Falagas, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Options+for+treating+carbapenem-resistant+Enterobacteriaceae.">Options for treating carbapenem-resistant Enterobacteriaceae.</a> Current Opinion in Infectious Diseases. 27 (6), 479-483 (2014).</li><li>Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Verification+of+an+automated,+digital+dispensing+platform+for+at-will+broth+microdilution-based+antimicrobial+susceptibility+testing.">Verification of an automated, digital dispensing platform for at-will broth microdilution-based antimicrobial susceptibility testing.</a> Journal of Clinical Microbiology. 54 (9), 2288-2293 (2016).</li><li>Brennan-Krohn, T., Truelson, K., Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+Synergistic+Activity+of+Antimicrobial+Combinations+Against+Carbapenem-Resistant+Enterobacteriaceae+Using+Inkjet+Printer-Based+Technology.">Screening for Synergistic Activity of Antimicrobial Combinations Against Carbapenem-Resistant Enterobacteriaceae Using Inkjet Printer-Based Technology.</a> J Antimicrob Chemother. 72 (10), 2775-2781 (2017).</li><li>Brennan-Krohn, T., Pironti, A., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergistic+Activity+of+Colistin-Containing+Combinations+against+Colistin-Resistant+Enterobacteriaceae.">Synergistic Activity of Colistin-Containing Combinations against Colistin-Resistant Enterobacteriaceae.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2018).</li><li>Falagas, M. E., Kasiakou, S. K., Saravolatz, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin:+The+Revival+of+Polymyxins+for+the+Management+of+Multidrug-Resistant+Gram-Negative+Bacterial+Infections.">Colistin: The Revival of Polymyxins for the Management of Multidrug-Resistant Gram-Negative Bacterial Infections.</a> Clinical Infectious Diseases. 40 (9), 1333-1341 (2005).</li><li>Nation, R. L., Li, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+in+the+21st+century.">Colistin in the 21st century.</a> Current Opinion in Infectious Diseases. 22 (6), 535-543 (2009).</li><li>Ah, Y. -. M., Kim, A. -. J., Lee, J. -. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+resistance+in+Klebsiella+pneumoniae.">Colistin resistance in Klebsiella pneumoniae.</a> International Journal of Antimicrobial Agents. 44 (1), 8-15 (2014).</li><li>Bratu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbapenemase-producing+Klebsiella+pneumoniae+in+Brooklyn,+NY:+Molecular+epidemiology+and+in+vitro+activity+of+polymyxin+B+and+other+agents.">Carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae in Brooklyn, NY: Molecular epidemiology and in vitro activity of polymyxin B and other agents.</a> Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 56 (1), 128-132 (2005).</li><li>Barth, N., Ribeiro, V. B., Zavasckid, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+polymyxin+B+plus+imipenem,+meropenem,+or+tigecycline+against+KPC-2-producing+Enterobacteriaceae+with+high+MICs+for+these+antimicrobials.">In vitro activity of polymyxin B plus imipenem, meropenem, or tigecycline against KPC-2-producing Enterobacteriaceae with high MICs for these antimicrobials.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 59 (6), 3596-3597 (2015).</li><li>MacLowry, J., Jaqua, M., Selepak, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detailed+methodology+and+implementation+of+a+semiautomated+serial+dilution+microtechnique+for+antimicrobial+susceptibility+testing.">Detailed methodology and implementation of a semiautomated serial dilution microtechnique for antimicrobial susceptibility testing.</a> Appl Microbiol. 20 (1), 46-53 (1970).</li><li>Brennan-Krohn, T., Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+poisoned+well:+Enhancing+the+predictive+value+of+antimicrobial+susceptibility+testing+in+the+era+of+multidrug+resistance.">The poisoned well: Enhancing the predictive value of antimicrobial susceptibility testing in the era of multidrug resistance.</a> Journal of Clinical Microbiology. 55 (8), 2304-2308 (2017).</li><li>Doern, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+does+2+plus+2+equal+5?+A+review+of+antimicrobial+synergy+testing.">When does 2 plus 2 equal 5? A review of antimicrobial synergy testing.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (12), 4124-4128 (2014).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing. 28th ed. CLSI supplement M100. , (2018).</li><li>CLSI. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standard - Tenth Edition. CLSI document M07-A10. , (2015).</li><li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> M07: Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Aerobically, 11th Edition. , (2018).</li><li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods for determining bactericidal activity of antimicrobial agents; approved guideline M26-A. 19 (18), 7 (1999).</li><li>Naghili, H., Tajik, H., Mardani, K., Razavi Rouhani, S. M., Ehsani, A., Zare, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+drop+plate+technique+for+bacterial+enumeration+by+parametric+and+nonparametric+tests.">Validation of drop plate technique for bacterial enumeration by parametric and nonparametric tests.</a> Veterinary research forum. 4 (3), 179-183 (2013).</li><li>Chen, C. Y., Nace, G. W., Irwin, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+6x6+drop+plate+method+for+simultaneous+colony+counting+and+MPN+enumeration+of+Campylobacter+jejuni,+Listeria+monocytogenes,+and+Escherichia+coli.">A 6x6 drop plate method for simultaneous colony counting and MPN enumeration of Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, and Escherichia coli.</a> Journal of Microbiological Methods. 55 (2), 475-479 (2003).</li><li>Queenan, A. M., Foleno, B., Gownley, C., Wira, E., Bush, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+Inoculum+and+Activity+in+AmpC-+and+Extended-Spectrum+(ESBL)-Producing+Escherichia+coli+and+Klebsiella+pneumoniae+Clinical+Isolates+Tested+by+Using+NCCLS+ESBL+Methodology.">Effects of Inoculum and Activity in AmpC- and Extended-Spectrum (ESBL)-Producing Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae Clinical Isolates Tested by Using NCCLS ESBL Methodology.</a> Journal of Clinical Microbiology. 42 (1), 269-275 (2004).</li><li>Smith, K. P., Kirby, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inoculum+Effect+in+the+Era+of+Multidrug+Resistance:+Minor+Differences+in+Inoculum+Have+Dramatic+Effect+on+Minimal+Inhibitory+Concentration+Determination.">The Inoculum Effect in the Era of Multidrug Resistance: Minor Differences in Inoculum Have Dramatic Effect on Minimal Inhibitory Concentration Determination.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. , (2018).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synergism+Testing:+Broth+Microdilution+Checkerboard+and+Broth+Macrodilution+Methods.">Synergism Testing: Broth Microdilution Checkerboard and Broth Macrodilution Methods.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. , (2016).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time-Kill+Assay+for+Determining+Synergy.">Time-Kill Assay for Determining Synergy.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. , (2016).</li><li>Hindler, J. A., Humphries, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Colistin+MIC+variability+by+method+for+contemporary+clinical+isolates+of+multidrug-resistant+gram-negative+bacilli.">Colistin MIC variability by method for contemporary clinical isolates of multidrug-resistant gram-negative bacilli.</a> Journal of Clinical Microbiology. 51 (6), 1678-1684 (2013).</li><li>Sutherland, C. A., Nicolau, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=To+add+or+not+to+add+Polysorbate+80:+Impact+on+colistin+MICs+for+clinical+strains+of+Enterobacteriaceae+and+Pseudomonas+aeruginosa+and+quality+controls.">To add or not to add Polysorbate 80: Impact on colistin MICs for clinical strains of Enterobacteriaceae and Pseudomonas aeruginosa and quality controls.</a> Journal of Clinical Microbiology. 52 (10), 3810 (2014).</li><li>Fuchs, P. C., Barry, a. L., Brown, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Susceptibility+testing+quality+control+studies+with+fosfomycin+tromethamine.">Susceptibility testing quality control studies with fosfomycin tromethamine.</a> European journal of clinical microbiology &amp; infectious diseases official publication of the European Society of Clinical Microbiology. 16 (7), 538-540 (1997).</li><li>Leber, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimum+Bactericidal+Concentration+Testing.">Minimum Bactericidal Concentration Testing.</a> Clinical Microbiology Procedures Handbook, Fourth Edition. 5.14.1.11. , (2016).</li><li>Cai, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+activity+of+polymyxin+B+in+combination+with+various+antibiotics+against+extensively+drug-resistant+Enterobacter+cloacae+with+decreased+susceptibility+to+polymyxin+B.">In vitro activity of polymyxin B in combination with various antibiotics against extensively drug-resistant Enterobacter cloacae with decreased susceptibility to polymyxin B.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 60 (9), 5238-5246 (2016).</li><li>Bulman, Z. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymyxin+combinations+combat+Escherichia+coli+harboring+mcr-1+and+blaNDM-5:+Preparation+for+a+postantibiotic+Era.">Polymyxin combinations combat Escherichia coli harboring mcr-1 and blaNDM-5: Preparation for a postantibiotic Era.</a> mBio. 8 (4), (2017).</li></ol>

D300 Dijital dağıtıcı ve ilişkili sarf malzemeleri Tecan (Morrisville, NC) tarafından verilmiştir. Tecan çalışma tasarım, veri toplama/yorumu, el yazması hazırlık veya yayımlamak için karar herhangi bir rolü yoktu.

İki yöntem tanımlamak burada her ikisi birlikte bireysel faaliyetlerini karşılaştırıldığında kullanılan antimicrobials etkinliği hakkında bilgi sağlar. Otomatik, mürekkep püskürtmeli yazıcı destekli dijital dağıtım yöntemi olduğu zaman-kill yöntem daha yakından ilgili iletişim kuralı aynı takip ederken Klinik Mikrobiyoloji yordamlar el kitabı olarak33, açıklanan yöntemi bir adaptasyon 34başvuru.
Dama Tahtası dizi yönteminde antimikrobiyal hisse senedi için her şey eklemek için gerekli hacmi yanı sıra bu birimlere dağıtımı belirlemek için hesaplamalar otomatik, böylece bazı manuel karşılaştı hata büyük potansiyel kaynakları ortadan Dama Tahtası dizi. Ancak, hala temel araştırmacı özgün hisse senetleri hedeflenen konsantrasyon yapılır ve hedefi son konsantrasyonları D300 yazılım doğru olarak girilmesi belirler. Antimikrobiyal süspansiyon 384-şey plaka wells için ilk başta zor olabilir ve bakımı gerektirir ekleme o pipet emin olmak için uygun kuyu ipuçları girin ve o sıvı sıçrama kuyuları kenarlarını yukarı değil. Bir otomatik sıvı işleyicisi bir el çok kanallı pipet yerine hız ve bakteriyel süspansiyon wells için Eklenme doğruluğu artırmak için kullanılabilir. İletişim kuralında açıklandığı gibi D300 yüzey aktif, polysorbate 20 (P-20), uygun sıvı taşıma için eklenmesi gerektirir. Farklı yüzey aktif, polysorbate 80, %0,002, konsantrasyon, kolistin doz ile organizmalar için kolistin mikrofonlar düşürmek için kaydetti < 2 µg/mL standart suyu microdilution deneyleri. 35 , 36 bizim laboratuvar gösterdi daha önce bu P-20 0.0015 kadar % D300 destekli mikrofon sonuçları karşılaştırma ile üzerinde bir etkisi vardı konsantrasyonlarda başvuru BMD14. Burada sunulan tahlil örnekte en fazla P-20 %0.0014 konsantrasyon olmasıdır.
Karşılaştığımız bir sorun bazı Dama Tahtası dizi deneyleri ile çok sayıda atlanan wells yapıldı. Bu bazı antibiyotikler orantısız bir oranla meydana geldi. Özellikle, ekranda kombinasyonları carbapenem dirençli Enterobacteriaceaetopluluğu karşı 521 denemeler (% 9.4) 49 bulduk birden fazla atlanan kuyuları nedeniyle kullanılamaz edildi 2 Bu davalar (% 94) 46 için muhasebeleştirilir test 12 antibiyotik (fosfomycin ve cefepime). Bu tür artış oranları daha büyük olasılıkla için inoculum etkisi31,32,37özellikle duyarlı uyuşturucu olabilir. Not, fosfomycin suyu seyreltme25 sonuçları güvenilirliğini kaygıları nedeniyle bu ilaç ile görülen güvenilmez sonuçlar açıklayabilir bu yöntemle test CLSI tavsiye etmez. Otomatik Dama Tahtası yöntemine göre araştırmacı tercih bazı değişiklikler yapılabilir. Bu laboratuvar iş akışı sebebiyle tercih ise antimicrobials zaten bakteriyel süspansiyon içeren levhalar yerine boş wells, reçete. 384-iyi tabaklar burada kullanılan iken, yöntem aynı zamanda iyi biriminin uygun değişiklik ile 96-şey plaka deneyleri içinde yürütülen olabilir. 96-şey plaka biçimi kullanımı özellikle inoculum küçük değişikliklere duyarlı antibiyotikler için azalan bakiyeli atlanan Wells yardımcı olabilir. BenFIC hesaplanırken, mikrofon (yani, daha yüksek test daha), test edilen uyuşturucu hiçbir etkinlik tek tek test edilen organizma türü karşı sahip olduğu durumlar da dahil olmak üzere kapalı-ölçek olduğu durumlar olabilir. Bu gibi durumlarda, FIC tabanlı mikrofon bir seyreltme test en yüksek konsantrasyonu yüksek olduğunu varsayarak hesaplanabilir. Maksimal olası FIC değer nerede inhibisyon sinerji test sırasında görülmektedir herhangi bir seyreltme için varsayar gibi en koruyucu strateji bu. Gerçek mikrofon yerine iki katlama dilutions yukarıdaki olsaydı o zaman karşılık gelen FICS iki kat muhafazakar atamaları ve benzeri daha düşük olacağını örneğin en yoğun, test.
Doğru bir zaman-kill tahlil ilaçların bakterisidal etkinlik değerlendirmek için özellikle hücre duvarı etkin antibiyotik test28olan zaman kültür evresi logaritmik artış olması esastır. Kuluçka sallayarak ile 3 saat (K. pneumoniae), bu örnekte kullanılan hızla büyüyen bakteriler için bu büyüme aşama ulaşmak uygun, ama zaman farklı miktarda farklı organizmalar için gerekli olabilir. Genel olarak, kültür gözle görülür ama değil ağır bulanık görünmesi gerekir. Zaman uygun miktarda alınan seri zaman puan (örneğin, her 30 dakikada 4-6 h)38, koloni sayıları ile bir büyüme eğrisi oluşturmak yoluyla belirlenebilir. Zaman-kill çalışmada amaçlanan başlangıç inoculum da önemlidir. Başlangıç inoculum hedef konsantrasyonu yaklaşık 5 x 105 ' e 1 x 106 CFU/mL olduğunu. Burada açıklanan seyreltme (1.0 McFarland süspansiyon medya 10 ml, 100 μL) bu inoculum Klebsiella pneumoniae ve hangi biz-si olmak sınav o diğer Enterobacteriaceae türler için oluşturur. Başlangıç inocula farklı organizmalar kullanarak bir deneyde yoğunluğu, önemli ölçüde daha yüksek veya daha düşük ise, o zaman farklı seyreltme gerekli olabilir. (Belirli bir tür için gerekli uygun seyreltme 0.5 veya 1.0 McFarland süspansiyon plaka sayısı gerçekleştirerek bu bulanıklık temsil eder, sonra da hangi tarafından ilk süspansiyon olmalıdır tutarı hesaplamak kaç organizmalar belirlemek için belirlenebilir uygun nihai toplama ulaşmak için seyreltilmiş.) Plaka sayar sinerji çalışma daha gözden geçirme üstünde, herhangi bir antibiyotik içeren tüpler başlangıç inoculum önemli ölçüde büyüme denetim başlangıç inoculum düşük olmuştur fark edilirse, bu her iki antibiyotik ertelenmiş gösterebilir veya çok kaplama kısa süre ek antibiyotik içeren tüp bakteri ve aliquot kaldırılması arasında içinde hızlı öldürme bakteri. Bir dizi su katılmamış düşüş kolonilerde gerçek sayısı alt daha sonraki dilutions kolonilerde sayısı ise, bu antibiyotik ertelenmiş etkisi göstermektedir. Farklı seçenekler bir bütün plaka38 üzerinde tek bir aliquot yayılan veya örnek iplik, süpernatant kaldırma ve yeniden39kaplama önce steril serum fizyolojik içinde askıya almak da dahil olmak üzere bu etkiyi önlemek için tarif edilmiştir. Zaman-kill yöntem her zaman noktasında da verimli bir şekilde ama doğru her kültür tüp sizden bir aliquot çıkarmak ve seri dilutions gerçekleştirmek için dedektif için çok önemlidir. Bu işlem sırasında özellikle yakın art arda meydana erken zaman puan sırasında gecikmeler uzun süre boyunca kültürler değildir neden olabilir inkübe ve sarsıldı, dikkatsiz dağıtımı ve seri dilutions yanlış plakasına açabilir, ancak sayar. Her seyreltme 100 μL bir tüm agar plaka üzerinde yayılmış plaka sayma, formanın plaka yöntemine göre açıklanan bırak plaka yöntemi çok daha hızlı, Ağar kaplamalar bir çok daha az sayıda gerektirir ve daha hızlı, en fazla sayım için izin verir En çok 300 kolonileri genellikle yayılmış tabağı sayılabilir, ancak sayılabilir kolonileri için her damla 30, sayısıdır. Müfettişler bu tekniği ile daha rahat iseniz ancak, formanın plaka yöntemi da bir seçenektir. Damla içine bir çok kanallı pipet ile dağıtımı sonra yayıldı, bir tek kanallı pipet ile daha geniş aralıklı damla bireysel uygulama yerine yapılabilir. Deneyim, soğutucu plakalar 4 ° C'de damla dağıtım öncesinde aşırı yayılmasını azaltmak için görünüyordu.
Burada açıklanan teknikler bir sınırlama sinerji tahlil (Dama Tahtası dizi ve zaman-kill) iki tür sonuçları her zaman uyumlu değildir, ve ondan beri en sinerji makaleleri bir yöntemi veya diğer tercihan--dan her ikisi birlikte kullanma, o-ebilmek değil deneyleri iki tür verileri bütünleştirmek bilmek zor olabilir. Çünkü geliştirdiğimiz otomatik Dama Tahtası array yöntemi basit ve yüksek üretilen iş, biz sonuç olarak ekran bir tür olarak test kombinasyonları karşı yalıtır daha çok sayıda ve hangi konsantrasyon kombinasyonlarını sinerjik belirlemek için kullanmış. Sonra zaman-kill çalışmalar, daha az sayıda kombinasyonları ve Dama Tahtası dizide etkili olmuştu konsantrasyonları seçme gerçekleştirilir. Zaman-kill tahlil daha büyük birimleri (benzer), macrobroth seyreltme için kullanırken Dama Tahtası tahlil genellikle bir microbroth seyreltme ölçekte gerçekleştirildiğinden belirtmek gerekirse biz FICS bazen iki yöntem arasında farklı bulundu ile daha yüksek konsantrasyonları genellikle zaman-kill tahlil faaliyet göstermek için gerekli. Ayagin Gram-negatif basiller26 ve ne zaman daha büyük inocula (saat-kill çalışmalarda kullanılan gibi) kullanılan standart inoculum ile karşılaştırıldığında için macrobroth ve microbroth seyreltme mikrofon tahlil sonuçları karşılaştırıldığında bu olgu daha önce dikkat edilmiştir microbroth seyreltme ve Dama Tahtası dizi32deneyleri. Dama Tahtası dizinin belirli bir sınırlama doğasında değişkenlik microbroth seyreltme22test mikrofon var. Ben FIC cutoffs sinerji hesabı bu değişkenliği için süre matematiksel olarak6 böyle değişkenlik kaçınılmaz olarak yükseltir güvenilirlik ve tutarlılık Dama Tahtası dizi sonuçları hakkında endişe.
Tüm tüp bebek sinerji testi (bakteri tarımı bir yapay büyüme orta, statik antibiyotik konsantrasyonları ve sınırlı bir süre ders dahil) yöntemleri doğal sınırlamaları nedeniyle, bu yöntemlerle elde edilen sonuçlar onaylandığı takdirde ve daha fazla ek teknikleri kullanılarak hesaplandı. Tüp Bebek farmakokinetik/Farmakodinamik (PK/PD) çalışmaları (örneğin, hollow fiber enfeksiyon modeli40), hayvan modelleri, tür yöntemler içerir ve nihayet insan PK/PD ve etkinlik çalışmaları. Daha fazla bilgi için hızlı bir yöntem ile ekran kombinasyonları için potansiyel sinerjik etkinlik, sağlayarak açıklanan otomatik Dama Tahtası dizi yöntem sağlar hedef bu tekniklerin kullanımı. Ayrıca tüp bebek parametreleri ve klinik sonuçlar arasındaki ilişkinin daha iyi olarak sistematik soruşturma olarak tüm bu yöntemlerin otomasyon ölçekleme içinde önemli olacak yukarı testleri ve klinik onun uygulanabilirliği artan sinerji kullanımı.

Kökenlerinin dayanıklı (MDR) bakteriyel patojenler, özellikle MDR Ayagin Gram-negatif bakteriler gibi carbapenem dirençli Enterobacteriaceae (CRE), yayılmasını klinisyenler için başarılı anti infective terapi giderek sınırlı seçenekleri ile terk etti 1, roman antibakteriyel ilaç bulma2,3durgun hızı tarafından şiddetlenir bir sorun. Antimikrobiyal sinerji, iki ilaç birlikte kullanılan bir katkı daha büyük etkisi uygulamak bile bu bakterilerin biri veya her ikisi için dayanıklıdır MDR bakteri, tedavisinde kullanılacak varolan antibiyotik salvaging imkanı sunar antibiyotik tek tek. Bu raporda açıklanan teknikleri, birlikte kullanıldıklarında test tüp bebek sinerji iki tamamlayıcı yöntemler sunar müfettişler verimli ekran antibiyotik kombinasyonları sinerjik unsuruna (otomatik için ilgi için izin Dama Tahtası array yöntemi) ve daha sonra daha fazla inhibisyonu ve umut verici kombinasyonları (elle yapılan zaman-kill yöntem) tarama aşamasında tespit gösterdiği öldürme Kinetik değerlendirmek için.
Dama Tahtası dizi tahlil tüp bebek sinerji test en sık kullanılan yöntemlerden biri, içinde iki farklı antibiyotik bir bakteriyel karşı inhibitör etkinliği izole minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) test bir değişiklik test konsantrasyon kombinasyonları4,5aralığında. İki ilaç birlikte kullanıldığında katkı etkinlik daha büyük uygulamayın, kombinasyonu sinerjik6kabul edilir. Ancak, bir Dama Tahtası dizi el ile ayarlama hesaplamalar ve zahmetli ve insan hatası karşı savunmasız sulandrarak ve pipetting adımları bir dizi içerir. Bu kısıtlamaları öncelikle antibiyotik kombinasyonları ve bakteriyel yalıtır az sayıda geriye dönük olarak değerlendirilmesi için test sinerji kullanımının sınırlanmasının etkisi vardı ve sonuçları her zaman çalışmaları7arasındatutarlı olmamıştır, 8,9,10,11. Ayrıca, sinerji sınama karmaşıklığını onun olarak kullanım dışı kalması Klinik Mikrobiyoloji laboratuvarında ve tüp bebek sinerji sınama verileri sanal yokluğu kombinasyon terapisi12, klinik çalışmalar için katkıda bulunmuştur 13.
Verimlilik ve Dama Tahtası dizi yöntem-in artırmak için biz daha önce mürekkep püskürtmeli baskı teknolojisi için tam olarak kullanır bizim laboratuvarda geliştirilmiş bir otomatik mikrofon test tekniği kullanmak ve sürekli küçük birimleri dağıtmak yaptı wells için yapılan bir microtiter içine antibiyotik hisse senedi çözümün14plaka. Platform karmaşık hesaplamalar ve birden çok pipetting adımı ihtiyacını namussuz. İlişkili yazılım hesaplar ve antibiyotik kullanıcı sade bir şekilde istenen konsantrasyon aralığı girişleri, bir iki boyutlu Dama Tahtası dizi oluşturmak için uygun birimler ve antibiyotikler hisse senedi çözüm konsantrasyonu dağıtır. Biz başlangıçta bu yöntem bir koleksiyon CRE yalıtır15 karşı test edilmiş ve daha sonra kolistin içeren kombinasyonlar faaliyetin, kolistin dayanıklı yalıtır16karşı test üzerinde odaklanmıştır. Kolistin MDR Ayagin Gram-negatif patojenlere17,18ve kolistin direnci tedavisinde genellikle için ayrılan son çare bir ilaç zaten onları ideal hale MDR bakteri neredeyse pan dayanıklı19, işler olduğunu adaylar için tek tek büyük küçük harf duyarlı oldukları uyuşturucu kullanan roman tedavi stratejilerinin geliştirilmesi için. Kolistin ve protein sentezi inhibitörü antibiyotik Minosiklin ile birlikte sinerji, hatta kolistin bir subinhibitory giderek artan bağlı olduğundan tek tek, muhtemelen her bu ilaçların dayanıklı suşlar karşı çok yüksek oranda olduğu bulundu Hatta kolistin dirençli bakteriler üzerinde etkisi permeabilizing. Bir örnek bu kağıt olarak kullanmak için bu kombinasyon seçtik. Not, sinerji test aynı zamanda hem ayrı ayrı olan iki ilaç gelişmiş etkinlik için değerlendirmek için kullanılabilir.
Otomatik Dama Tahtası array yöntemi hızlı, yüksek üretilen iş sinerji test kolaylaştırır. Ancak, Dama Tahtası array yöntemi kısıtlamalar bulunmaktadır. Değiştirilmiş bir mikrofon tahlil olarak sadece Bakteriyel büyüme inhibisyonu ve öldürme değil üzerinde veri sağlar ve bu veriler üzerinde antibiyotik etkileri zaman içinde sağlamaz. Aksine, zaman-kill sinerji deneyleri el ile performansını daha fazla emek yoğun olmakla birlikte inhibisyonu ve öldürme üzerinde bir 24 h saat ders20,21bilgi sağlar. Biz zaman-kill analiz yalıtır daha küçük bir sayı üzerinde bizim Dama Tahtası dizi sonuçları onaylamak için ve biz tespit sinerjik kombinasyonları da bakteri yok edici olup olmadığını belirlemek için kullanılır.
Her iki Dama Tahtası dizi ve zaman-kill sinerji yöntem uyuşturucu kombinasyonları faaliyete değerli bilgiler sağlamak ve son derece dirençli bakteriyel patojenler için potansiyel yeni tedavi seçenekleri değerlendirilmesinde özellikle yararlıdır. Yöntemleri de içerdiği sınırlamaları var. Standart microbroth seyreltme mikrofon yöntemi iki ilaç birlikte bir Dama Tahtası dizide test edilirken yükselten 1 iki kat seyreltme22, bilinen beklenen hata yelpazesine sahiptir. Sinerjik bir arada sadece uyuşturucu birlikte dörtte biri onların anılan sıraya göre MICs6', etkin değilse dikkate bu alır dikkate alır sinerji standart tanımlı değişkenliği, (ki neden düşünülen böyle değişkenlik ama beklenen biyolojik ve teknik dalgalanmaları23bir arada gelen) kaçınılmaz kararsızca sinerji sonuçları güvenilirlik hakkında oluşturur. Sinerji testleri için kurulan kalite kontrol standartları eksikliği de geçerli bir kısıtlamadır. Belki de sinerji test yöntemlerinin en önemli sınırlama tüp bebek sonuçları ve klinik sonuçlar arasında kurulan ilişkiler eksikliği olduğunda kombinasyonları hastalar24tedavi etmek için kullanılır. Daha basit ve daha hızlı sinerji testi yöntemleri, burada açıklanan otomatik Dama Tahtası dizi yöntemi gibi tüp bebek sinerji klinik veya hasta sonuçları diğer değerlendirme içinde daha iyi test entegrasyonu kolaylaştırmak Tüp Bebek ve içinde vivo etkileri gelecekte arasındaki ilişkiyi tanımlamak.
Burada mevcut otomatik Dama Tahtası array yöntemi kombinasyonları çeşitli yüksek üretilen iş tarama için bir seçenek sunar ve sıradışı, "yüksek risk-ödül yüksek" kombinasyon zaman büyük bir yatırım yapmadan hızlı değerlendirme sağlar ve kaynaklar. Biz daha sonra göstermek, zaman-kill yöntem kombinasyonu sinerjik faaliyete ek destekleyici bilgiler sağlar ve onun bakterisidal etkinlik ve antibakteriyel Kinetik karakterize etmek için yardımcı olabilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Escherichia coli strain ATCC 25922</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>25922</td>
			<td>QC strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.5 mL microcentrifuge tubes</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>1605-0000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 L 0.22 &#181;m bottle-top filter</td>
			<td>Thermo Scientific Nalgene</td>
			<td>597-4520</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12 mm x 75 mm borosilicate glass round bottom culture tubes</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>14-961-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 mL conical tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>15 x 100 mm or 15 x 150 mm Mueller Hinton agar plates</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>R01620 or R04050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mm stainless steel closures for 25 x 150 mm glass culture tubes</td>
			<td>Bellco</td>
			<td>2005-02512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 x 150 mm borosilicate glass round bottom culture tubes</td>
			<td>Bellco</td>
			<td>2011-25150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>348-well sterile clear, flat-bottom, untreated microplates with lids</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>781186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL conical tubes</td>
			<td>Phenix</td>
			<td>SS-PH50</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL sterile reagent reservoirs</td>
			<td>Corning</td>
			<td>4870</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96 deep well polypropylene microplate with 2 mL wells</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>12-566-612</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>96-well sterile clear, round-bottom, untreated microplates with lids</td>
			<td>Evergreen</td>
			<td>222-8032-01R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cation adjusted Mueller Hinton broth</td>
			<td>BD Diagnostics</td>
			<td>212322</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colistin sulfate</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>J60915</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D300e Control Software</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DensiCHEK Plus McFarland reader</td>
			<td>bioM&#233;rieux</td>
			<td>21250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel spreadsheet software</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra long SHARP 10 &#181;L Precision Barrier Tips</td>
			<td>Denville Scientific</td>
			<td>P1096-FR</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HP D300 digital dispenser</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HP D300 T8+ cassettes</td>
			<td>HP/Tecan</td>
			<td>30097370</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minocycline hydrochloride</td>
			<td>Chem-Impex</td>
			<td>14302</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Picus 12-channel 10-300 &#181;L pipette</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>735461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysorbate 20</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP-337</td>
			<td>Brand name: Tween 20</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium chloride</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>S271</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrophotometer</td>
			<td>Tecan</td>
			<td>Infinite M1000 PRO</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xplorer 12-channel 50-1200 &#181;L pipette</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>2231000328</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

antimicrobial synergy testing by the inkjet printer-assisted automated checkerboard array and the manual time-kill method

Yeni antimicrobials, gelişimi geride bıraktı oranları kökenlerinin dayanıklı (MDR) patojenlerin, yükselmeye devam ettikçe MDR bakteri tedavisinde yeni yaklaşımlar giderek bir zorunluluk haline. Böyle bir yaklaşım kombinasyon tedavisi, hangi iki veya daha fazla antibiyotik birlikte bir enfeksiyona karşı tedavi etmek için kullanılır hangi birini veya her ikisini ilaçlar tek başına etkisiz olabilir. Ne zaman birlikte, iki ilaç kullanmak daha büyük bir katkı etkisi onlar sinerjik kabul edilir. Sinerjik aktivitesinin in vitro soruşturma uyuşturucu kombinasyonları mümkün etkinliğinin değerlendirilmesinde önemli bir ilk adımdır. İki ana tüp bebek sinerji test yöntemleri geliştirilmiştir: Dama Tahtası dizi ve zaman-kill çalışma. Bu yazıda, biz bu bir otomatik Dama Tahtası dizi yöntemi mevcut verimlilik ve bu teknik, hem de bir çift el ile zaman-kill sinerji yöntemi doğruluğunu artırmak için mürekkep püskürtmeli baskı teknolojisi kullanır. El ile zaman-kill çalışma sinerjik etkinlik ve öldürme ek, tamamlayıcı veri sağlarken otomatik Dama Tahtası dizi yüksek üretilen iş tarama tahlil olarak hizmet verebilir.
Dama Tahtası dizi hangi bakteriler antibiyotikler, farklı konsantrasyon kombinasyonları ile inkübe ve büyüme inhibisyon gecede kuluçka sonra için değerlendirilen test, Standart minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) bir değişiklik olduğunu. El ile performans Dama Tahtası dizi hesaplamalar ve dilutions zahmetli ve hata eğilimli bir dizi gerektirir. Otomatik yönteminde, hesaplama ve birimleri mürekkep püskürtmeli yazıcı teknolojisi kullanımı yoluyla otomatik olarak gerekli antibiyotik hisse senedi çözümün dağıtımı sundu. Zaman-kill sinerji assay olarak, faiz, antibiyotiklerle birlikte ve ayrı ayrı inkübe bakteri ve kantitatif kültürü için 24 saat boyunca aralıklarla örnek. Sonuçları bir kombinasyonu sinerjik olup olmadığını ve bakteri yok edici olup olmadığını belirlemek ve veri inhibisyonu ve bakterilerin öldürülmesi zaman içinde sağlar.

Şekil 1A bir Dama Tahtası dizi sinerji deneme yılında hangi Minosiklin 0-32 konsantrasyonlarda μg/mL 0-16 μg/ml konsantrasyonlarda kolistin ile birlikte ve e.coli suşu FDA-CDC 0494 karşı test bir kılavuz sunar. Değerler spektrofotometrik ölçümler, optik yoğunluk 600 nm (OD600) temsil eder. Wells (ki hiçbir büyüme için karşılık gelen görsel denetim tarafından) 0,07 altındaki OD600 değerler ile gölgeli kırmızı, OD600 değerleri (Bu büyüme için karşılık gelen görsel denetim tarafından) 0,07 Wells'le gölgeli yeşil ayrılmıştır. Her için minimum inhibitör konsantrasyonu (mikrofon; kalın) bakterilerin büyüme inhibe ilaç en düşük konsantrasyon ilaçtır. Minosiklin için bu 32 μg/mL ve kolistin için bu 8 μg/mL'dir. Gölgelendirme şekil 1Badımında korunur, ancak içinde büyüme inhibe kuyu içindeki değerleri kesirli inhibitör konsantrasyon (FICben) dizin değerleriyle değiştirilir. Bunlar aşağıdaki gibi belirlenir: her şey, her ilaç kesirli inhibitör konsantrasyon dizin (FIC) ilacın mikrofon tarafından antibiyotik o kadar iyi konsantrasyon bölünerek hesaplanır ve FICben iki FICS toplayarak hesaplanır. Bir kırık çizgili kenarlığı ile Wells bir FICben değerini kesme sinerji için kabul edilir, 0,5 ile belirtilir ve en düşük FICben değeri (0.094) ile iyi kalın olduğunu. Ben en az FIC değer sinerjik aralığında olduğundan kombinasyonu sinerjik olarak kabul edilir.
Şekil 2A ve şekil 2B'yi göstermek Izgaralar şekil 1A ve şekil 1Bbenzer, ancak bu durumda kombinasyon sinerji karşı test izole (K. pneumoniae izole BIDMC 4), çünkü göstermek yok değil hangi büyüme inhibe en az FICben olduğunu 1 > 0,5.
Şekil 3 optik yoğunluk okuma Dama Tahtası sinerji kılavuzundan birkaç atlanan wells (Enterobakter cloacae karmaşık izole BIDMC 27) oluştuğu gösterilmiştir. Atlanan kuyu kuyu içinde bakterilerin büyüme daha yüksek konsantrasyonda antibiyotik Bakteriyel büyüme bitişik Wells varlığıyla rağmen inhibe vardır. Standart MIC de test içinde oluştuğu bilinmektedir, bu olay için iyi ve bazı Antibiyotikler bakteriyel inoculum23 küçük farklılıklar için duyarlılık Bakteriyel büyüme özellikleri gönderen biyolojik değişkenlik nedeniyle muhtemeldir , 31 , 32. birden fazla de meydana gelen bir Dama Tahtası dizideki atladıysanız, sonuçları atılır ve tahlil tekrarladı.
Şekil 4 hediyeler örnekler üç kombinasyonları K. pneumoniae karşı test sonuçlarını zaman-kill sinerji BIDMC 32 yalıtmak. Koloni sayıları ylogaritmik bir ölçekte gösterilir-eksen ve süreyi, saat, x-eksen. Başlangıç inoculum ilaç kombinasyonu ve tüp 24 h, kırmızı çubuk ve numarası, 24 h arasında tüp bakteri konsantrasyonu arasındaki fark ise resimli bakteri konsantrasyonu içeren tüp arasındaki fark Kasanın ve en aktif tek ajan yalnız içeren tüp içeren mavi çubuk ve numarasına göre gösterilmiştir. Şekil 4A kolistin ve Minosiklin sonuçlarını gösterir; Bu kombinasyon ve en aktif Ajan yalnız ≥2 günlük10 CFU/mL 24 h maruz bakteri konsantrasyonları arasındaki sinerjik (fark) oluşuyordu ve (inoculum konsantrasyonu 24 h ≥3 günlük10 başlatılmasını bakterisidal düşüş CFU/mL). Şekil 4B kolistin ve Klindamisin, sinerjik ancak bakteri yok edici değildi bir arada sonuçları gösterir. Bu arada bakterilerin hangi ne ilaç tek başına yaptım ama onları öldürmedim büyüme inhibe. Şekil 4 c kolistin ve bakteri yok edici de sinerjik eritromisin sonuçlarını gösterir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig1.jpg"> Resim 1: Dama Tahtası dizi gösteren sinerji (Minosiklin + E. coli karşı test kolistin FDA-CDC 0494 zorlanma) sonuçlanır. (A)spektrofotometrik okuma ve büyüme yorumu bir Dama Tahtası dizi. Hücrelerdeki değerleri çoğu optik yoğunluk okuma 600 nm (OD600). (Görsel denetim tarafından hiçbir büyüme için karşılık gelen) 0,07 aşağıda OD600 değerleri içeren hücreleri gölgeli kırmızı, iken (görsel denetim tarafından büyüme için karşılık gelen) OD600 değerlerle 0,07 gölgeli yeşil hücrelerdir. (B) kesirli inhibitör konsantrasyon dizin (FICben) hesaplama. Büyüme veya hiçbir büyüme gösteren gölgelendirme muhafaza edilmiştir. Kolistin ve Minosiklin x- ve y-eksen, sırasıyla, şimdi temsil kesirli inhibitör konsantrasyon (FIC) veya bu sütun veya satır için minimum inhibitör konsantrasyonu (uyuşturucu konsantrasyon oranı MIC) o ilacın tek başına. FICbenher hücrede değerdir veya iki FICS toplamı o kuyuda uyuşturucu. Büyük kırık çizgi sınır kutusu wells bir FICben 0,5 ile içine alır. Kalın sınırlanmıştır hücre içinde büyüme inhibe en düşük FICben veya en az FICbeniyi gösterir. Çünkü en az FICben 0,5, kombinasyonu sinerjik olarak kabul edilir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig2.jpg"> Resim 2: Dama Tahtası dizi sonuçları sinerji (Minosiklin + BIDMC 4 izole K. pneumoniae karşı test kolistin) göstermek değil bir arada. (A)optik yoğunluk değerlerinde şekil 1Aiçin açıklandığı gibi Dama Tahtası dizi sonuçları 600 nm ve büyüme yorumu. (B) kesirli inhibitör konsantrasyon dizin (FICben) hesaplama şekil 1Aiçin açıklandığı gibi. En az FICben çünkü > 0.5, kasanın değil kabul edilir sinerjik. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig3.jpg"> Şekil 3: wells (Minosiklin + Enterobakter cloacae karşı karmaşık test kolistin izole BIDMC 27) nedeniyle uninterpretable Dama Tahtası dizi sonuçları atlandı. Optik yoğunluk değerlerinde şekil 1Aiçin açıklandığı gibi Dama Tahtası dizi sonuçları 600 nm ve büyüme yorumu. Birkaç atlanan wells, hangi Bakteriyel büyüme rağmen büyüme bitişik Wells varlığıyla antibiyotik, daha yüksek konsantrasyonlarda inhibe gösterdi. Sonuçları yorumlanabilir değildir ve tekrarlanması gerekiyor deneme. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/58636/58636fig4.jpg"> Şekil 4: Zaman-kill sinerji üç kombinasyonları K. pneumoniae ayrı tut BIDMC 32 karşı test sonuçlarını. Koloni sayıları ylogaritmik bir ölçekte gösterilir-eksen ve süreyi, saat, x-eksen. Kırmızı çubuk ve numarasına göre tüp 24 h da arada bakteri konsantrasyonu ve başlangıç inoculum arasındaki fark gösterilmektedir. İnoculum konsantrasyonu, 24 h başlatılmasını düşüş ≥3 günlük10 CFU/mL ise kasanın bakteri yok edici olarak kabul edilir. Şifreyi içeren tüp ve en aktif tek ajan yalnız içeren tüp arasında 24 h bakteri konsantrasyonu arasındaki farkı mavi çubuk ve numarasına göre gösterilmiştir; ≥2 günlük10 CFU/mL azaltma ise kombinasyonu sinerjik olarak kabul edilir. (A)kolistin (CST) + Minosiklin (dk), sinerjik ve bakteri yok edici bir arada. (B) kolistin + Klindamisin (CLI), sinerjik ama değil bakteri yok edici bir arada. (C) kolistin + eritromisin (çok), sinerjik de bakteri yok edici olmadığı bir arada. Bu sonuçlar başlangıçta kolistin içeren sinerjik aktivitesini çalışmanın bir parçası olarak yayımlanan kolistin dirençli Enterobacteriaceaeiçinde o kolistin gösterdi karşı kombinasyonları bir dizi ile sinerjik tek tek yalnızca etkin antibiyotik (örneğin Klindamisin) veya öncelikle (örneğin eritromisin) gram-pozitif bakteri16karşı. (Eritromisin sinerjik Dama Tahtası dizi gösterilen zorlanma karşı tarafından ama değil tarafından zaman öldürmek, yani o seçildi Not burada sigara sinerjik bir arada bir örnek olarak.) Biz bu olan hareket için gram-negatif dış membran permeabilization tarafından bilinen, kolistin, giderek artan giriş Klindamisin gibi ilaçların bu sağlayan bir sub-inhibitory permeabilizing etkisi kolistin dayanıklı Ayagin Gram-negatif bakteri, Ayagin Gram-negatif hücre normalde giremezsiniz. Paneli (A) bu rakamın Brennan Krohn, Pironti ve Kirby 201816, telif hakkı © American Society Mikrobiyoloji, antimikrobiyal ajanlar ve kemoterapi, modifiye edilmiştir 62(10), 2018, PII: e00873-18, doi: 10.1128/AAC.00873-18. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/58636/58636fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method at JoVE.com

Antimicrobial Synergy Testing by the Inkjet Printer-assisted Automated Checkerboard Array and the Manual Time-kill Method

Antimikrobiyal sinerji test birlikte kullanılan iki veya daha fazla antibiyotik etkisini değerlendirmek için kullanılır ve genellikle iki yöntemden birini kullanarak gerçekleştirilir: Dama Tahtası dizi ya da zaman-kill tahlil. Burada, otomatik bir, mürekkep püskürtmeli yazıcı destekli Dama Tahtası dizi sinerji teknik ve bir klasik saat-kill sinerji çalışma mevcut.

Antimikrobiyal sinerji mürekkep püskürtmeli yazıcı yoluyla tarafından test otomatik Dama Tahtası dizi ve el ile zaman-kill yöntem

As rates of multidrug-resistant (MDR) pathogens continue to rise, outpacing the development of new antimicrobials, novel approaches to treatment of MDR ...

Manuel dama tahtası dizi sinerji testi emek yoğun ve hata yatkın bir yöntemdir. Buna karşılık, otomatik mürekkep püskürtmeli yazıcı tabanlı dama tahtası yöntemimiz hızı, doğruluğu ve iş çıkışlığını önemli ölçüde artırır. Otomatik dama tahtası yöntemi, sinerjik kombinasyonlar için çok sayıda ilacın taranmasını mümkün kılarken, zaman öldürme yöntemi bu kombinasyonların etkinliğini doğrulayabilir ve daha fazla araştırabilir.Yeni antibiyotik keşif direnç yayılmasına ayak uydurmak değildir, ancak sinerjik kombinasyonları soruşturma dirençli bakterileri tedavi etmek için mevcut ilaçların kurtarma için bir olasılık sunuyor. Biz antibakteriyel ile bu tekniği göstermek rağmen, aynı zamanda antimikrobiyallerin diğer sınıfları ile hatta kombinasyon ilaç veya bileşik test farklı türleri için kullanılabilir. Bu videoda, otomatik bir dama tahtası dizi yöntemi ve manuel zaman öldürme yöntemi ni gösteriyoruz.Biz umut verici kombinasyonları belirlemek için ilk dama tahtası dizi çalışmaları gerçekleştirmek öneririz, daha sonra zaman öldürmek çalışmaları ile bu daha fazla araştırma. Başlamak için, kolistin ve minosikline antimikrobiyal stok çözümleri yapmak ve daha sonra eşlik eden metin protokolünde açıklandığı gibi stok çözümleri üzerinde kalite kontrolü gerçekleştirmek. Sonra, 12 milimetre-by-75-milimetre yuvarlak alt cam kültür tüpleri için% 0.9 sodyum klorür, tuzlu, yaklaşık bir mililitre ekleyin.Bir gecede bir bakteri tabağından bir veya iki koloni seçin ve onları kültür tüplerine yerleştirin. Girdap tüpleryavaşça çözeltideki bakterileri askıya almak için. Bir McFarland okuyucu kullanarak bakteri konsantrasyonu kontrol edin.0,5 McFarland bulanıklık okuma elde etmek için daha fazla tuzlu veya daha fazla bakteri ekleyerek konsantrasyonu ayarlayın. Daha sonra, 50 mililitrelik konik bir tüpte katyon ayarlı Mueller-Hinton suyu 30 mililitre süspansiyon 100 mikrolitre ekleyerek bakterileri 1-300 seyreltin mililitre başına beşinci koloni oluşturan birimler için beş kat 10 son hücre yoğunluğuna ulaşmak için. Şimdi, beraberindeki metin protokolü ile birlikte izleyerek baskı için antimikrobiyaller hazırlayın.Protokolü kaydedin ve ardından sol üstteki Çalıştır düğmesine ve ardından Başlat düğmesine tıklayın. Plaka tutucuya 384 kuyuluk bir plaka yükleyin ve Load Plate 1 Synergy isteminin altına yüklendi'ye basın. Ardından, kaset yuvasına bir T8+kaset yerleştirin ve Yüklü bir T8+Kaset isteminin altına yükleyin.İstenir edildiğinde, kasetüzerinde belirtilen rezervuarlara antibiyotik stok çözeltisi ekleyin. Her çözüm eklendikten sonra Dolgu düğmesine basın. D300 Dispenser her kuyuya uygun hacimlerde antibiyotik stoku ekledikten ve Run Completed kutusu göründükten sonra Kapat'ı tıklatın, plakayı çıkarın ve D300'u kapatın.Daha sonra, steril bir reaktif rezervuar içine önceden hazırlanmış bakteriyel süspansiyon dökün. Dama tahtası dizisindeki tüm kuyulara süspansiyonun 50 mikrolitresini eklemek için çok kanallı bir pipet kullanın. Sonra, boş bir kuyuya bakteri olmadan katyon ayarlı Mueller-Hinton suyu 50 mikrolitre ekleyin.Bu olumsuz kontrol iyi medyanın kısırlık onaylamak olacaktır. 35 derecelik bir ortam havakuluçkasında 16 ila 20 saat kuluçkaya yat. Testi analiz etmek için, eşlik eden metin protokolüile birlikte izleyin.Zaman öldürme sinerji testi için, metin protokolünde açıklandığı gibi antimikrobiyal stok çözümlerini yeniden hazırlayın. Sonra, steril tuzlu test organizmanın 0.5 McFarland süspansiyon olun. Paslanmaz çelik kapaklı 25 ila 150 milimetrelik cam yuvarlak alt kültür tüpünde 5 mililitre CAMHB'ye 0,5 McFarland süspansiyonunun 100 mikrolitresini ekleyin ve yavaşça karıştırın.Steril bir aşılama döngüsü kullanarak, izolasyon bir kan agar plaka üzerine seyreltilmiş süspansiyon bir damla çizgi, ve inoculum saflığını onaylamak için ortam havasında 35 santigrat derece plaka kuluçka. Tüpün kapanmasını değiştirin ve logaritma fazı büyümesine ulaşına kadar ortam havasında 35 santigrat derecelik bir çalkalayıcıüzerinde bir test tüpü rafına yerleştirin. İlk kültür kuluçka iken, beş otoklavcam kültür tüpleri katyon ayarlı Mueller-Hinton suyu 10 mililitre ekleyin.Bir zaman öldürmek sinerji çalışması için, en az bir ilaç bireysel olarak büyüme eğrisi etkilemez bir konsantrasyonda olmalıdır. Bu sinerji çalışma dan önce bireysel ilaç konsantrasyonlarının etkileri nin değerlendirilmesi ile belirlenebilir. İlk tüpe, mililitre başına bir mikrogramlık son kolistin konsantrasyonu elde etmek için mililitre başına 10 mikrolitre kolistin stoğunu ekleyin, çünkü bu örnekte kullanılan gerinime karşı etkisiz bir konsantrasyondur.İkinci tüp için, mililitre başına bir mikrogram son konsantrasyonelde etmek için bir miligram başına mililitre minosikline stok 10 mikrolitre ekleyin. Bu konsantrasyon, bu örnekte kullanılan suşa karşı da etkisizdir. Üçüncü tüpiçin, bir miligram başına mililitre minosikline stok 10 mikrolitre ve bir miligram-mililitre kolistin stok 10 mikrolitre ekleyin.Bu, birinci ve ikinci tüplerde kullanılan kolistin ve minosikline ile aynıdır. Dördüncü ve beşinci tüplerde antibiyotik eklemeyin. Bu büyüme kontrolü ve negatif kontrol tüpleri, sırasıyla olacaktır.Daha sonra, seri seyreltmeler için iki mililitrelik kuyulara sahip 96 derin kuyulu polipropilen plakayı, çok kanallı bir pipetle 1'den 4'e kadar olan sütunların B ile H'ye 900 mikrolitre steril tuzlu luk ekleyerek hazırlayın. Kültür logaritmik büyüme aşamasında olduğunda, shaker gelen kültür tüp kaldırmak ve yavaşça girdap. Süspansiyonun bir mililitresini 12'ye 75 milimetrelik cam kültür tüpüne aktarın ve yoğunluğu bir McFarland okuyucusuyla kontrol edin.Yoğunluk 1.0 McFarland'dan azsa tüpü çalkalayıcıya geri döndürün ve daha uzun süre kuluçkaya yatırın. 1.0 McFarland'dan büyükse, tüpe katyonla ayarlanmış Mueller-Hinton suyu ekleyin, girdap yavaşça ve süspansiyon 1.0 McFarland olana kadar yeniden örneklenin. Başlangıç inokülü hazırlanırken kültürün logaritmik büyüme aşamasında olması önemlidir.Bir organizmanın bu aşamaya ne zaman ulaştığını belirlemek için bir büyüme eğrisi oluşturabilirsiniz. Daha sonra, 1.0 McFarland süspansiyon100 mikrolitre ekleyin tüpler bir ile dört arasında, ve yavaşça girdap. Karıştırmadan hemen sonra ve bir, iki, dört, altı ve 24 saat, her kültür tüpünden 150 mikrolitrelik aliquot'u çıkararak tüpü yatırArak çıkarın, böylece aliquot çekilmesi sırasında steril pipet ucu tüpe değil, sadece steril pipet şaftına girsin.Daha önce hazırlanmış 96 derin kuyu plakasının ilk satırında ardışık kuyulara sırasıyla aliquots ekleyin. Tüpleri, her zaman noktasında aliquots çıkardıktan hemen sonra 35 derecelik bir santigrat ortam hava kuluçka makinesi bir shaker bir test tüpü rafa dönün. Çok kanallı bir pipet kullanarak, plakanın A satırından 100 mikrolitre çıkarın ve 900 mikrolitre salin içeren B satırına ekleyerek bir ila 10 seyreltme oluşturur.Pipet çözeltisi yukarı ve aşağı dört ila beş kez karıştırmak ve sonra ipuçlarını atın. İlk olarak, etiket Mueller-Hinton agar plakaları antibiyotik koşulları ve seyreltme ile kaplanacak. Daha sonra, ekstra uzun uçlu çok kanallı bir pipet kullanarak, damla plaka yöntemini kullanarak koloni sayıları için seyreltilmiş numuneleri plakalayın.Birinci sütundaki her kuyudan 10 mikrolitre çıkarın ve uygun şekilde etiketlenmiş plakaya bir satır halinde dikkatlice dağıtın. Tüm satırlar plakalara dağıtılana kadar devam edin. Buna ek olarak, 24 saatlik zaman diliminde, negatif kontrol tüpünden doğrudan alınan 10 mikrolitrelik bir damlayı sterilite için test etmek için bunun için ayrılmış noktaya yerleştirin.Sonra, tüm plakaları ters çevirin ve onları bir gecede 35 santigrat derecede ortam havasında kuluçkaya yatırın. Daha sonra, her alandaki koloni lerin sayısını sayın ve hücre yoğunluğunu hesaplayın. Çift sayma veya eksik kolonileri önlemek için plakanın ters inde ince uçlu kalıcı işaretli kolonileri işaretleyin.Her seyreltme serisi için, üç ila 30 kolonileri ile damla tanımlayın. Bu damlalarda kolonileri sayın ve seyreltme faktörü ile birlikte sayısı kaydedin. Burada gösterilen bir dama tahtası dizi sinerji deneyi olan mililitre başına sıfır ile 32 mikrogram konsantrasyonlarında minosikline mililitre başına sıfır ila 16 mikrogram konsantrasyonlarında kolistin ile kombine edildi ve E.coli bir suş karşı test bir ızgara.07'nin altındaki OD600 değerlerine sahip kuyular büyümeyi temsil etmez ve gölgeli kırmızıdır, yukarıda veya 07'ye eşit OD600 değerlerine sahip kuyular büyümeyi temsil eder ve gölgeli yeşildir. Her ilaç için, minimum inhibitör konsantrasyonu bakteri büyümesini inhibe ilaç en düşük konsantrasyonudur. Minosikline için, bu mililitre başına 32 mikrogram, ve kolistin için, mililitre başına sekiz mikrogram.Gölgeleme burada tutulur, ancak büyümenin inhibe edildiği kuyular içindeki değerler kesirli inhibitör konsantrasyonu veya FIC, indeks değerleri ile değiştirilir. Her kuyuda, her ilacın FIC indeksi ilacın minimum inhibitör konsantrasyonu ile bu iyi antibiyotik konsantrasyonu bölerek hesaplanır. Sinerji için kesme olarak kabul edilir 0,5, daha az veya eşit bir FIC indeksi olan wells, kırık bir çizgi kenarlığı ile gösterilir ve en düşük FIC dizini ile kuyu kalınlır.Minimum FIC değeri sinerjik aralıkta olduğundan, kombinasyon sinerjik olarak kabul edilir. Büyümenin inhibe edildiği minimum FIC indeksi 0,5'ten büyük olduğundan, sinerji göstermeyen bir durum örneği burada gösterilmiştir. Son olarak, bu örnekte, antibiyotik yüksek konsantrasyonlarda komşu kuyularda bakteri üreme varlığına rağmen, inhibe bakteriyel büyümeyi temsil eden birkaç atlanan kuyular oluştu.Bir dama panosu dizisinde birden fazla atlanan iyi oluştuysa, sonuçlar atılmalıdır ve tahkikat yinelenmelidir. Zaman öldürme sinerji testinin sonuçlarını gösteren bir grafik örneği burada sunulmuştur. Zaman öldürme sinerji sinerji sinin yorumlanması yla ilgili ayrıntılar için lütfen eşlik eden metin protokolüne bakın.Sinerjik kombinasyonların aktivitesi hakkında daha fazla bilgi farmakokinetik ve farmakodinamik değerlendirmeleri ve hayvan modelleri ile in vivo çalışmalar yoluyla elde edilebilir. Bakterilerle çalışırken her zaman kişisel koruyucu ekipman kullanımı da dahil olmak üzere uygun güvenlik prosedürlerini uygulayın. Aerosol ler üretiyor veya yüksek riskli patojenler kullanıyorsanız, tüm işleri biyogüvenlik kabininde gerçekleştirin.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Antimicrobial Susceptibility Testing of Mycobacterium Tuberculosis Complex for First and Second Line Drugs by Broth Dilution in a Microtiter Plate Format

Microtiter Plate Format Broth Seyreltme Birinci ve İkinci Line İlaçları Mycobacterium tuberculosis kompleksi Antimikrobiyal Duyarlılık Testi

The rapid detection of antimicrobial resistance is important in the effort to control the increase in resistant Mycobacterium 
tuberculosis (Mtb). ...

One-day Workflow Scheme for Bacterial Pathogen Detection and Antimicrobial Resistance Testing from Blood Cultures

Kan örneklerinden Bakteriyel Patojen Algılama ve Antimikrobiyal Direnç Testi için bir günlük iş akışı şeması

Bloodstream infections are associated with high mortality rates because of the probable manifestation of sepsis, severe sepsis and septic shock1. ...

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

Assessing Hepatic Metabolic Changes During Progressive Colonization of Germ-free Mouse by 1H NMR Spectroscopy

Germ-free Mouse Aşamalı Kolonizasyon sırasında Karaciğer metabolik değişiklikler Değerlendirilmesi 1 H-NMR Spektroskopi

It is well known that gut bacteria contribute significantly to the host homeostasis, providing a range of benefits such as immune protection and vitamin ...

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Multiplex PCR Assay for Typing of Staphylococcal Cassette Chromosome Mec Types I to V in Methicillin-resistant Staphylococcus aureus

Metisiline diren

Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) typing  is a very important molecular tool for understanding the epidemiology and  clonal strain ...

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Analysis of the Epithelial Damage Produced by Entamoeba histolytica Infection

Yapımcı Epitel Hasar Analizi<em&gt; Entamoeba histolytica</em&gt; Enfeksiyon

Entamoeba histolytica is the causative agent of human amoebiasis, a major cause of diarrhea and hepatic abscess in tropical countries. Infection is ...

High Throughput, Real-time, Dual-readout Testing of Intracellular Antimicrobial Activity and Eukaryotic Cell Cytotoxicity

Yüksek Verimli, gerçek zamanlı, Hücre içi Antimikrobiyal Aktiviteleri Çift okuma Test ve Ökaryotik Hücre Sitotoksisite

Traditional measures of intracellular antimicrobial activity and eukaryotic cell cytotoxicity rely on endpoint assays. Such endpoint assays require ...

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

The Ex Vivo Colon Organ Culture and Its Use in Antimicrobial Host Defense Studies

<em&gt; Ex Vivo</emAntimikrobiyal Konak savunma Çalışmaları&gt; Kolon Organ Kültür ve Kullanımı

The intestine displays an architecture of repetitive crypt structures consisting of different types of epithelial cells, lamina propia containing immune ...

Isolation, Characterization, and Purification of Macrophages from Tissues Affected by Obesity-related Inflammation

Yalıtım, karakterizasyonu ve obezite ile ilgili iltihap tarafından etkilenen dokular makrofajlar arıtma

Obesity promotes a chronic inflammatory state that is largely mediated by tissue-resident macrophages as well as monocyte-derived macrophages. ...

Printed Glycan Array: A Sensitive Technique for the Analysis of the Repertoire of Circulating Anti-carbohydrate Antibodies in Small Animals

Basılı Glycan dizi: Anti-karbonhidrat antikorlar küçük hayvanlarda dolaşan repertuar analizi için hassas tekniği

The repertoire of circulating anti-carbohydrate antibodies of a given individual is often associated with its immunological status. Not only the ...

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

Automated Behavioral Analysis of Large C. elegans Populations Using a Wide Field-of-view Tracking Platform

Otomatik davranış analizi büyük C. elegans nüfus kullanarak bir geniş alan bakış açısı izleme platformu

Caenorhabditis elegans is a well-established animal model in biomedical research, widely employed in functional genomics and ageing studies. To assess the ...