Name: flow cytometric detection of newly-formed breast cancer stem cell-like cells after apoptosis reversal
Uploaded: 2019-01-26T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal at JoVE.com

Este trabalho foi financiado pela inovadora tecnologia fundo de inovação tecnologia Comissão: financiamento de apoio do estado chave laboratório de Agrobiotecnologia (CUHK), o fundo de investigação biomédica Lo Kwee-Seong e a Fundação de Hysan Lee. Y.X. foi apoiada pelo curso de pós-bolsa de estudo do CUHK.

1. preparação da mama -tronco as células cancerosas
<ol><li>Cultura MCF-7 e células MDA-MB-231 em 10 mL de vermelho de fenol-livre Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 suplementado com 10% inactivadas pelo calor fetal de soro bovino (FBS) em um prato de 100 mm. Cultura T47D em 10 mL de vermelho de fenol-livre RPMI 1640 suplementado com 2 mM L-glutamina, 10% inactivadas pelo calor FBS e 1% v/v penicilina-estreptomicina (PS) em um prato de 100 mm. Células de cultura a 37 ° C numa incubadora ...

Este protocolo descreve uma maneira direta e clara para detectar a transição de células-tronco de câncer de mama em células da mama CSC como resultado da reversão de apoptose. Confirmação das propriedades dessas células invertida CSC poderia assistida usando eun vitro mammosphere formação do ensaio e na vivo transplante de enxerto em camundongos imunodeficientes18,24,26 ,,<sup class="xref...

Câncer tem sido das principais causas de morte, causando um fardo pesado para países em todo o mundo1. Cancro da mama classifica altamente tanto em termos de incidência e mortalidade em pacientes do sexo feminino entre todos os tipos de câncer1. Devido a heterogeneidade do cancro, uma combinação de drogas é geralmente usada em quimioterapia para alcançar câncer célula morte2,3,4. No entanto, desde medicamentos quimioterápicos comuns muitas vezes alvo de5,de DNA6, dinâmica da proteína síntese7,8 e/ou microtubule9, crescendo rapidamente as células são afetadas mais enquanto células quiescentes, tais como câncer células-tronco (CSC) s são geralmente menos afetados10. CSCs são, portanto, mais chances de sobreviver após o tratamento, que leva mais tarde a resistência às drogas e câncer recaída10,11. Daí, eliminação de CSCs tornou-se um tema importante para o tratamento de câncer e estudo da origem do CSCs é necessário.
Foram realizados mais estudos sobre o fenômeno da reversão de apoptose na recente década12,13,14,15,16,17,18 , 19. antes do surgimento deste conceito, tem sido amplamente aceito que as células irreversivelmente passará por apoptose após a ativação de caspase. Caspases são uma família de enzimas de proteínas que desempenham um papel chave nos estágios de iniciação e execução da apoptose, incluindo a formação de complexos a apoptose e a clivagem de substratos a jusante20. Ativação de caspases carrasco como caspase 3 ou caspase 7 tem sido considerada como o "ponto sem retorno" para apoptose21. No entanto, os pesquisadores observaram recentemente que reversão de apoptose ocorre ambos in vitro e in vivo, , durante o qual células pode recuperar de apoptose, mesmo após a ativação de caspase12,13,14 , 15 , 16 , 17 , 18 , 19. Além disso, características agressivas tais como maior resistência ao indutor de apoptose original e maior capacidade de invasão são detectados no cancer inverteu as células15. Portanto, foi proposto que a percentagem de células CSC seria maior na população invertida quando comparado com as células não tratadas, eventualmente, contribuindo para as características mais malignas após reversão de apoptose18.
Anteriormente, muitos esforços foram feitos para controlar a reversão de apoptose in vitro e, mais importante, in vivo, que ajudar muito em confirmar a universalidade deste processo16,17,19. No entanto, um estudo sistemático sobre as consequências das células invertidas é insuficiente devido o isolamento insatisfatório de células que sofreram genuinamente reversão de apoptose. Há uma necessidade de adquirir pilhas apoptotic puro e recuperá-los para um estudo mais aprofundado. Assim, podemos usar o marcador tradicionalmente bem aceitado de ativação de caspase carrasco como o marcador do "ponto sem retorno"21 para apoptose e utilizar fluorescência-ativado da pilha (FACS) para discriminar caspase-ativado células manchadas de classificação com tintura de deteção de Caspase-3/7 verde. O corante é covalentemente ligado a uma sequência de aminoácidos curto, Cecilia, que pode ser reconhecida e clivada por ativas caspases 3/7. O decote ajuda a liberar a tintura, que vai translocar do citosol para o núcleo onde vincula-se ao DNA e emite forte fluorescência. Este procedimento evita o uso de uma população de células em massa em que algumas células não podem ter sofrido apoptose.
CSCs ou células de tumor-iniciando foram identificadas em muitos tumores sólidos usando um único ou uma combinação de vários marker(s) de superfície e muito poucos números destas células são suficientes para tumores de forma em camundongos imunodeficientes22,23, 24,25,26,27. Uma combinação de CD44 e CD24 tem sido comumente usada em estudos de mama CSC e CD44+/CD24– células foram definidas como o peito CSCs26,,27,28,29 , 30. recentemente, que temos realizado uma série de experimentos para confirmar a relação proposta entre apoptose reversão e CSCs e demonstrar que células de câncer de mama invertida ganharam maior capacidade de formação de tumor in vitro e in vivo com um elevada percentagem de células com CSC marcadores18. Embora nós não poderia excluir a possibilidade de que mama CSCs sobrevivem melhores e, assim, obter enriquecidas após a reversão de apoptose, importante, quando podemos isolar as células-tronco cancerosas e assunto para reversão de apoptose, CSC sairá no originalmente-tronco população de células de câncer, sugerindo que Stema câncer células podem contribuir para o aumento da percentagem de CSCs durante reversão de apoptose.
Este artigo tem como objetivo demonstrar a transição de células-tronco de câncer de mama para CSC células da mama após a reversão de apoptose e para detectar esta transição por citometria de fluxo. As células-tronco de câncer de mama são inicialmente preparadas isolando CD44–/CD24+ de mama células cancerosas por FACS. Em seguida, apoptose é induzida e confirmado por mudanças morfológicas sob o microscópio. Depois, pilhas apoptotic positivamente rotulados pelo corante verde deteção de Caspase 3/7 são isoladas por FACS e mais cultivadas na ausência de indutores de apoptose para reversão de apoptose. As células invertidas então estão manchadas com marcadores de CSC após 7 dias de recuperação para análise de fluxo cytometric. Células com CD44+/CD24 marcadores– re-aparecem na população invertida, sugerindo que transição de células-tronco cancerosas para CSC células ocorreu durante a reversão de apoptose.
Reversão de apoptose tem sido observada em câncer múltiplo linhas celulares, bem como as células primárias normais tratados com apoptotic diferentes estímulos em vitro12,13. Este processo também foi rastreado em Drosophila modelo in vivo de16,17,19. Muita informação sobre o mecanismo subjacente de recidiva de câncer em modelos de câncer de diferentes doenças e a origem do CSCs pode ser obtida através do uso da técnica, conforme descrito neste manuscrito.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>MCF-7</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>HTB-22</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>HTB-26</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T47D</td>
			<td>American Type Culture Collection (ATCC)</td>
			<td>HTB-133</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagent</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.05% trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25300054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.25% trypsin-EDTA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 680 annexin V conjugate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A35109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>bovine serum albumin</td>
			<td>USB</td>
			<td>9048-46-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2 &#183; 2H2O</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-5080</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellEvent caspase-3/7 green fluorescent dye</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>C10423</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D2650</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fc block</td>
			<td>Miltenyi Biotec</td>
			<td>130-059-901</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>fetal bovine serum</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16000044</td>
			<td>heat-inactivated</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>USB</td>
			<td>16926</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>H3570</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>25030081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitotracker Red CMXRos</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M7512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monoclonal antibodies against human CD24</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>555428</td>
			<td>PE Clone:ML5 
			Lot:5049759 
			RRID:AB_395822</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>monoclonal antibodies against human CD44</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>560531</td>
			<td>PERCP-CY5.5 Clone:G44-26 
			Lot:7230770 
			RRID:AB_1727485</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>31434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>paclitaxel</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T7402</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PE Mouse IgG2a, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>554648</td>
			<td>Clone:G155-178 (RUO) 
			RRID:AB_395491</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15070-063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b, &#954; Isotype Control</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>558304</td>
			<td>Clone:27-35 
			RRID:AB_647257</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>phosphate buffered saline</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21600010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>propidium iodide</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P1304MP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute 1640 medium</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>11835055</td>
			<td>phenol red-free</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sodium azide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S2002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>staurosporine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S4400</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100 mm culture dish</td>
			<td>Greiner Bio-One</td>
			<td>664160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well tissue culture plates</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>150628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Strainer 40-&#956;m nylon mesh</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>08-771-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSuite software bundle v1.0</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>651360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACSVerse</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>651155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FluoView FV1000 confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>IX81</td>
			<td>60X objective</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FV10-ASW Viewer software Ver.4.2b</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>round-bottom polystyrene 12 &#215; 75 mm tubes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>352003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>S3e sorter</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>1451006</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flow cytometric detection of newly-formed breast cancer stem cell-like cells after apoptosis reversal

Recorrência de câncer há muito tempo tem sido estudada por oncologistas, enquanto os mecanismos subjacentes permanecem obscuros. Recentemente, nós e os outros encontraram que um fenômeno chamado apoptose inversão leva a aumentada tumorigenicidade em vários modelos de célula sob diferentes estímulos. Estudos anteriores concentraram-se em localizar este processo in vitro e in vivo; no entanto, o isolamento de células real invertidas ainda tem de ser alcançado, que limita a nossa compreensão sobre as consequências da inversão de apoptose. Aqui, aproveitamos uma tintura de deteção de Caspase-3/7 verde para células de rótulo com caspases ativadas após a indução da apoptose. Células com sinais positivos são mais separadas por fluorescência-ativado da pilha (FACS) de classificação para a recuperação. Análise morfológica sob microscopia confocal ajuda a confirmar o status de apoptotic antes FACS. Um aumento de tumorigenicidade muitas vezes pode ser atribuído à elevação no percentual de câncer células-tronco (CSC)-como as células. Também, dada a heterogeneidade do cancro da mama, identificando a origem dessas células CSC-como seria fundamental para o tratamento do câncer. Assim, nos preparamos células-tronco de câncer de mama antes de desencadear a apoptose, isolando células caspase-ativado e executar o procedimento de reversão de apoptose. Análise de citometria de fluxo revela que células de mama CSC-como voltar a aparecer no grupo invertido, indicando células da mama-CSC são transitadas de células-tronco de câncer de mama durante a reversão de apoptose. Em resumo, este protocolo inclui o isolamento de células de câncer de mama apoptotic e detecção de mudanças na percentagem de CSC em células invertidas por citometria de fluxo.

Fim de observar a transição do peito-tronco células de câncer de mama CSC células, uma primeira classificação do CD44–/CD24+ células de câncer de mama eram necessários. Para a linhagem de células MCF-7, que tem cerca de 0,15% células com marcadores de CSC na população original (Figura 1), esta etapa ajudou exclui a possibilidade de enriquecimento do CSC durante reversão de apoptose. Pelo contrário, se não houvesse nenh...

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Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal (Video) | JoVE

Aqui, apresentamos um protocolo para isolar células de câncer de mama apoptotic classificando fluorescência-ativado da pilha e detectar ainda mais a transição de células-tronco de câncer de mama para células de células-tronco, como câncer de mama após a reversão de apoptose por citometria de fluxo.

Fluxo Cytometric deteção da recém-formada mama câncer células-tronco células após a reversão de apoptose

Cancer recurrence has long been studied by oncologists while the underlying mechanisms remain unclear. Recently, we and others found that a phenomenon ...

Os isolamentos de populações genuínas de células de reversão apoptótica tem sido um problema anteriormente, o que limita muito nossa compreensão sobre as consequências da reversão da apoptose. Este protocolo nos permite gerar populações mais puras de células de reversão apoptótica. A principal vantagem dessa técnica é que os materiais e equipamentos utilizados estão amplamente disponíveis em diferentes instituições.Esta técnica é prontamente aplicável para isolar uma população mais pura de células que sofreram reversão da apoptose. Como relatado anteriormente, as células normais também podem passar por reversão da apoptose, que além das células cancerígenas de mama, diferentes células de quimioterapia, bem como células normais, podem ser iniciadas e os vários estímulos apoptóticos podem ser usados. Como a célula de reversão passou por apoptose e triagem rápida, a taxa de recuperação geralmente é baixa.Um número de célula inicial maior é recombinante para aumentar o rendimento final. Para começar, cultura MCF-7, MDA-MB-231, Para começar, cultura MCF-7, MDA-MB-231 e células T47D, de acordo com o protocolo de texto. Depois disso, lave as células com PBS duas vezes, depois adicione dois mililitros de 0,05% trypsin-EDTA de 0,05% trypsin-EDTA ao MCF-7, e células MDA-MB-231, para as células MCF-7 e MDA-MB-231, e dois mililitros de 0,25% trypsin-EDTA e dois mililitros de 0,25% trypsin-EDTA para as células T47D.para as células T47D. Cultue as células por cinco minutos a 37 graus Celsius, em uma incubadora de cultura de células de dióxido de carbono de 5%. Enquanto as células incubam, verifique o desprendimento das células com um microscópio para evitar a super digestão por trippsina-EDTA.Quando mais de 90% das células se desprenderem, adicione cinco mililitros de meio RPMI completo ao prato, e pipeta-o sobre a superfície da camada celular várias vezes. Em seguida, transfira as células para tubos cônicos de 15 mililitros e centrífuga. Descarte o supernatante e suspenda as pelotas com tampão FACS em tubos microcentrífugas de 1,5 mililitro.Em seguida, divida as células em vários tubos. Centrifugar os tubos mais uma vez, e descartar o supernatante. Em seguida, adicione bloco fc diluído às amostras.Incubar as amostras no gelo no escuro por 20 minutos, antes de centrifugar as amostras novamente. Depois disso, descarte o supernaspe. Em seguida, adicione anticorpos monoclonais fluorocromáticos conjugados contra CD44 humanos, cd24, contra CD44 humano, e CD24, em um a 40, e de uma a 10 diluições, respectivamente, aos grupos de coloração dupla.Para os controles positivos, adicione anticorpos CD44 Para os controles positivos, adicione anticorpos CD44 às células MDA-MB-231, às células MDA-MB-231 e anticorpos CD24 às células MCF-7 e anticorpos CD24 às células MCF-7 em uma a 40, e de um a 10 diluições, respectivamente. Adicionar PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b Kappa, Adicionar PerCP-Cy5.5 Mouse IgG2b Kappa, diluído a uma proporção de um a 40 para células como um controle de isótopos para anticorpos CD44. Em seguida, adicione PE Mouse IgG2a Kappa, Em seguida, adicione PE Mouse IgG2a Kappa, diluído em uma proporção de um a 10 para as células como um controle de isótopos para anticorpos CD24.Incubar as amostras a 4 graus Celsius no escuro por 30 minutos. Em seguida, centrifugar as amostras a 300 g's Then, centrifugar as amostras a 300 g's e quatro graus Celsius por cinco minutos. Descarte o supernascer e lave a pelota duas vezes em 500 micro litros de PBS.Em seguida, repita a centrifugação como descrito anteriormente. Suspenda a pelota em 0,5 mililitros de PBS e filtre a suspensão através de uma malha de nylon de 40 micrômetros. Em seguida, execute a suspensão através de um classificador celular ativado por fluorescência.Colete as células com marcadores negativos CD44 e CD24 positivos em tubos de fundo redondo contendo um mililitro de meio de coleta. Em seguida, centrifugar os tubos, e descartar o supernasal. Em seguida, emplaque as células cancerígenas de mama classificadas em um prato de cultura contendo meio de coleta fresco para mais cultura.Primeiro, use uma staurosporina milimila em DMSO, para preparar 2,5 micro-molares de staurosporina em médio, de acordo com o protocolo de texto. Em seguida, remova o meio de cultura das células. Lave as células com dois mililitros de PBS uma vez, depois disso, adicione 10 mililitros do meio de estaurosporina às células MSF-7 por seis horas, para induzir apoptose, quando as células são 70% confluentes.Em seguida, prepare um paclitaxel milimão no DMSO. Em seguida, adicione 12,5 micro litros Em seguida, adicione 12,5 micro litros do paclitaxel de 1 milimolar ao meio completo das células T47D para compor um volume final de 10 mililitros em um tubo cônico de 15 mililitros. Remova o meio de cultura das células e lave as células com 2 mililitros de PBS.Em seguida, adicione o meio paclitaxel às células por 10 horas para induzir apoptose por 10 horas para induzir apoptose quando as células atingirem 70% de confluência. Depois disso, remova o meio do grupo MCF-7 tratado com solventes e lave-os com dois mililitros de PBS. Em seguida, adicione 10 mililitros de 0,25% de média DMSO Em seguida, adicione 10 mililitros de 0,25% de média DMSO por seis horas como o controle de solvente para staurosporina.Remova o meio de cultura do grupo T47D tratado com solventes e lave as células com dois mililitros de PBS. Em seguida, adicione 10 mililitros de 0,05% de meio DMSO Em seguida, adicione 10 mililitros de 0,05% de média DMSO por 10 horas como o controle de solvente para paclitaxel. Em seguida, manche a célula e incuba-as por 20 minutos a 37 graus Celsius em uma incubadora de dióxido de carbono de 5%.Use um microscópio de varredura a laser confocal 60 vezes para observar as alterações morfológicas das células tratadas. Colora as células MCF-7 e T47D tratadas com solventes e as células MCF-7 e T47D tratadas com solventes no escuro por 30 minutos a 37 graus Celsius em uma incubadora de dióxido de carbono de 5%. Utilizando o classificador celular ativado pela fluorescência, colete as células positivas dos grupos tratados com indutores em tubos de fundo redondo contendo um mililitro de meio de coleta.Em seguida, centrifugar os tubos como descrito anteriormente, e descartar o supernatante. Colete as células negativas dos grupos tratados com solventes em tubos de fundo redondo com um mililitro de meio de coleta. Centrifugar os tubos, e descartar o supernaspeso.Depois disso, suspenda as células classificadas em meio de coleta fresca. Semear as células em placas de cultura tecidual de 12 poços, e cultuá-las por sete dias para reversão da apoptose. Colher o MCF-7 invertido em grupos indutores e tratados com solventes com 0,05% de trypsin-EDTA.com 0,05% de trypsin-EDTA. Em seguida, colher as células T47D em ambos os indutores, em seguida, colher as células T47D em grupos indutores e tratados com solventes com 0,25% de trypsin-EDTA. Manche as células com anticorpos monoclonais conjugados fluorocromáticos contra CD44 humanos e CD24.Enquanto as células mancham, prepare os controles do isótipo como demonstrado anteriormente. Finalmente, execute as células em um citômetro de fluxo e detecte a porcentagem de células com marcadores negativos CD44 e CD24 negativos. Neste protocolo, observou-se a transição de células cancerígenas não-tronco de mama para células semelhantes a CSC de mama.O isolamento de células cancerígenas não-tronco foi feito pela primeira vez em células MCF-7. Alterações morfológicas típicas foram observadas após a adição de indutores apoptóticos, e as células recuperadas da apoptose com morfologia semelhante após a retirada de medicamentos. As células ativadas pelo caspace foram rotuladas e classificadas com base em sua maior intensidade fluorescense do que as células sem ativação do caspace.Durante o processo de indução apoptótica, o solvente foi utilizado para excluir a possibilidade de que o procedimento dos fatos, ou o próprio solvente, fosse a causa da transição. Células ativadas pelo caspace nos grupos de tratamento apoptótico-indutor foram encontradas como sendo um nexin cinco positivo e pi negativo, sugerindo que eram células apoptóticas. As células apoptóticas foram coletadas e cultivadas para recuperação, em comparação com os grupos tratados com solventes, a análise citométrica do fluxo mostrou que havia células aparecendo no quadrante negativo CD44 e CD24 na população inversa originalmente de células cancerígenas não-tronco de mama.A mordaça é importante na análise de fluxo e na triagem celular, que o controle suficiente deve ser preparado nos laboratórios. Uma vez que esse procedimento de reversão in vitro da apoptose isola células cancerígenas puras apoptóticas, experimentos como ativos in vivo tumorigênese podem ser realizados para entender as consequências do real reverso das células. Essa técnica esclarece a causa da recaída do câncer, portanto, pode ser investigada para potencialmente prevenir a recorrência em pacientes com câncer.Por favor, lembre-se de se proteger adequadamente ao realizar experimentos de cultura celular de acordo com as regulamentações de nível biossegurança em sua instituição.

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Flow Cytometric Detection of Newly-formed Breast Cancer Stem Cell-like Cells After Apoptosis Reversal

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NF&#954;B Activity and Breast Cancer Stem Cells

Synthesis and Characterization of an Aspirin-fumarate Prodrug that Inhibits NFÃŽÂºB Activity and Breast Cancer Stem Cells (Video) | JoVE

Síntese e Caracterização de um pró-fármaco Aspirina-fumarato que inibe a actividade NFkB e da mama câncer de células estaminais

Inflammation is a cancer hallmark that underlies cancer incidence and promotion, and eventually progression to metastasis. Therefore, adding an ...

Pesquisa do câncer

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema (Video) | JoVE

Ultrassonográfico Avaliação do linfedema relacionados com o cancro da mama

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish (Video) | JoVE

Comportamento invasiva de células de cancro da mama humano em Embryonic Zebrafish

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Live-imaging of Breast Epithelial Cell Migration After the Transient Depletion of TIP60

Live-imaging of Breast Epithelial Cell Migration After the Transient Depletion of TIP60 (Video) | JoVE

Imagens ao vivo de migração de células epiteliais da mama após o esgotamento de transiente de TIP60

The wound-healing assay is efficient and one of the most economical ways to study cell migration in vitro. Conventionally, images are taken at the ...

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro

Detection of Mitochondria Membrane Potential to Study CLIC4 Knockdown-induced HN4 Cell Apoptosis In Vitro (Video) | JoVE

Deteção do potencial de membrana mitocôndria para estudar CLIC4 HN4 induzida em Knockdown celular apoptose em Vitro

Depletion of the mitochondrial membrane potential (MMP, &#916;&#936;m) is considered the earliest event in the apoptotic cascade. It even occurs ahead of ...

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells

Real Time Detection of In Vitro Tumor Cell Apoptosis Induced by CD8+ T Cells to Study Immune Suppressive Functions of Tumor-infiltrating Myeloid Cells (Video) | JoVE

Detecção de tempo real em Vitro Tumor celular apoptose induzida por CD8+ T células para estudar as funções imunológicas supressora de Tumor infiltrando células mieloides

Potentiation of the tumor-killing ability of CD8+ T cells in tumors, along with their efficient tumor infiltration, is a key element of successful ...

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia

Flow Cytometric Analysis of Mitochondrial Reactive Oxygen Species in Murine Hematopoietic Stem and Progenitor Cells and MLL-AF9 Driven Leukemia (Video) | JoVE

Análise Citométrica de fluxo de espécies reativas de oxigênio mitocondrial em células tronco e progenitoras hematopoiéticas Murinas e leucemia acionada por MLL-AF9

We present a flow cytometric approach for analyzing mitochondrial ROS in various live bone marrow (BM)-derived stem and progenitor cell populations from ...

Cell Cycle-specific Measurement of &#947;H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry

Cell Cycle-specific Measurement of ÃŽÂ³H2AX and Apoptosis After Genotoxic Stress by Flow Cytometry (Video) | JoVE

Medição específica do ciclo celular de γH2AX e apoptose após estresse genotóxico por citometria de fluxo

The presented method or slightly modified versions have been devised to study specific treatment responses and side effects of various anti-cancer ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors (Video) | JoVE

Obtenção de esferas de células-tronco cancerígenas de tumores ginecológicos e de câncer de mama

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model (Video) | JoVE

Estudando o câncer de mama triplo negativo usando modelo de câncer de mama ortotópico

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...