Name: platelet-based detection of nitric oxide in blood by measuring vasp phosphorylation
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation at JoVE.com

Dette arbejde blev finansieret af NIH murene tilskud til Dr. Alan N. Schechter.

Bemærk: Blodprøver blev indhentet fra NIH blodbank (IRB godkendt protokollen: 99-CC-0168).
1. blod prøve forberedelse
Bemærk: For at undgå trombocyt aktivering, udgyde blod langsomt og blandes forsigtigt med citrat ved at vende røret flere gange.
<ol><li>
Trombocyt-rich plasma (PRP) forberedelse
	<ol>
<li>Tegne 30-50 mL blod ved hjælp af en 20 G eller større diameter nål og tilfø...

<ol>
	<li>Huang, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+reaction+between+nitrite+and+deoxyhemoglobin.+Reassessment+of+reaction+kinetics+and+stoichiometry.">The reaction between nitrite and deoxyhemoglobin. Reassessment of reaction kinetics and stoichiometry.</a> Journal of Biological Chemistry. 280 (35), 31126-31131 (2005).</li><li>Cosby, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nitrite+reduction+to+nitric+oxide+by+deoxyhemoglobin+vasodilates+the+human+circulation.">Nitrite reduction to nitric oxide by deoxyhemoglobin vasodilates the human circulation.</a> Nature Medicine. 9 (12), 1498-1505 (2003).</li><li>Mo, E., Amin, H., Bianco, I. H., Garthwaite, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+a+cellular+nitric+oxide/cGMP/phosphodiesterase-5+pathway.">Kinetics of a cellular nitric oxide/cGMP/phosphodiesterase-5 pathway.</a> Journal of Biological Chemistry. 279 (5), 26149-26158 (2004).</li><li>Park, J. W., Piknova, B., Nghiem, K., Lozier, J. N., Schechter, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+effect+of+nitrite+on+coagulation+processes+demonstrated+by+thromboelastography.">Inhibitory effect of nitrite on coagulation processes demonstrated by thromboelastography.</a> Nitric oxide. 40, 45-51 (2014).</li><li>Wajih, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+red+blood+cell+S-nitrosation+in+nitrite+bioactivation+and+its+modulation+by+leucine+and+glycose.">The role of red blood cell S-nitrosation in nitrite bioactivation and its modulation by leucine and glycose.</a> Redox Biology. 8, 415-421 (2016).</li><li>Akrawinthawong, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+flow+cytometric+analysis+of+the+inhibition+of+platelet+reactivity+due+to+nitrite+reduction+by+deoxygenated+erythrocytes.">A flow cytometric analysis of the inhibition of platelet reactivity due to nitrite reduction by deoxygenated erythrocytes.</a> PLoS One. 9 (3), e92435 (2014).</li><li>Friebe, A., Koesling, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+nitric+oxide-sensitive+guanylyl+cyclase.">Regulation of nitric oxide-sensitive guanylyl cyclase.</a> Circulation Research. 93 (2), 96-105 (2003).</li><li>Srihirun, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+inhibition+by+nitrite+is+dependent+on+erythrocytes+and+deoxygenation.">Platelet inhibition by nitrite is dependent on erythrocytes and deoxygenation.</a> PLoS One. 7 (1), e30380 (2012).</li><li>Smolenski, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+and+regulation+of+vasodilator-stimulated+phosphoprotein+serine+239+phosphorylation+in+vitro+and+in+intact+cells+using+a+phosphospecific+monoclonal+antibody.">Analysis and regulation of vasodilator-stimulated phosphoprotein serine 239 phosphorylation in vitro and in intact cells using a phosphospecific monoclonal antibody.</a> Journal of Biological Chemistry. 273 (32), 20029-20035 (1998).</li><li>Burkhart, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+first+comprehensive+and+quantitative+analysis+of+human+platelet+protein+composition+allows+the+comparative+analysis+of+structural+and+functional+pathways.">The first comprehensive and quantitative analysis of human platelet protein composition allows the comparative analysis of structural and functional pathways.</a> Blood. 120 (15), e73-e82 (2012).</li><li>Parakaw, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Platelet+inhibition+and+increased+phosphorylated+vasodilator-stimulated+phosphoprotein+following+sodium+nitrite+inhalation.">Platelet inhibition and increased phosphorylated vasodilator-stimulated phosphoprotein following sodium nitrite inhalation.</a> Nitric oxide. 66, 10-16 (2017).</li><li>Srihirun, S., Piknova, B., Sibmooh, N., Schechter, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phosphorylated+vasodilator-stimulated+phosphoprotein+(P-VASPSer239)+in+platelets+is+increased+by+nitrite+and+partially+deoxygenated+erythrocytes.">Phosphorylated vasodilator-stimulated phosphoprotein (P-VASPSer239) in platelets is increased by nitrite and partially deoxygenated erythrocytes.</a> PLoS One. 13 (3), e0193747 (2018).</li><li>Mal Cortese-Krott, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+soluble+guanylate+cyclase+in+RBCs:+preserved+activity+in+patients+with+coronary+artery+disease.">Identification of a soluble guanylate cyclase in RBCs: preserved activity in patients with coronary artery disease.</a> Redox Biology. 14, 328-337 (2018).</li><li>Abel, K., Mieskes, G., Walter, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dephosphorylation+of+the+focal+adhesion+protein+VASP+in+vitro+and+in+intact+human+platelets.">Dephosphorylation of the focal adhesion protein VASP in vitro and in intact human platelets.</a> FEBS letter. 370 (3), 184-188 (1995).</li></ol>

Da blodplader nemt aktiveres, skånsom håndtering af trombocyt-holdige prøver er påkrævet. Hurtig pipettering og livlig ryste bør undgås. Trombocyttal hæmmere såsom prostacyclin (BGB2) kan bruges til at forhindre trombocyt aktivering; men dette kan påvirke nogle signaling veje inde blodpladerne. Forberedelse af trombocyt pellets, vi tilføje ACD til trombocyt suspensioner og bruge centrifugering.
Frisklavet blodplader i PRP har en begrænset levetid, levetid, op til 2 h. Fo...

Blodplader er lille disk-formet celle fragmenter stammer fra megakaryocytes, der er afgørende for blodpropper. Den blodpropper kaskade er initieret af forskellige bioaktive molekyler (såsom kollagen eller ADP), udgivet efter skade af vaskulære væg. De blodet til at størkne proces kan ændres blandt forskellige effektorer af nitrogenoxid (NO). Nej, naturligt produceret af pattedyrceller, er en af de mest alsidige fysiologiske signaler. Det fungerer som en potent vasodilatator, neurotransmitter og immun modulator, at nævne et par af dens mange funktioner. I blodbanen, ikke også hjælper med at regulere omfanget af blodpropper ved at hæmme trombocytaggregation. En af de mest sandsynlige kilder til Nej i blodbanen er nitrit, en uorganisk ion, der har vist sig at fungere som en forløber for nr. Reagerer med røde blodlegemer (RBC), nitrit er reduceret til Nej og deoxyHb oxideres til methemoglobin (metHb)1. INGEN frigivet fra røde blodlegemer er vasoaktive og forårsager vasorelaxation2. Denne nitrit reduktion pathway er suppleant ingen generation pathway, handler sammen med og supplere den klassiske ingen generation sti af endotelial nitrogenoxid syntase på hypoksiske betingelser.
Blodplader, selv er ikke i stand til at reducere nitrit i nr men er meget følsomme over for sin tilstedeværelse. I intakt blodplader, ikke i nanomolar vifte øger cGMP (EF50 = 10 nM) og fosforylering af VASP (EF50 = 0,5 nM)3. Derfor, blodplader kan tjene som en fremragende sensor af nitrit reduktion af røde blodlegemer og ingen overgang til blodet. Der er flere metoder, som direkte kan måle omfanget af trombocyt aktivering - såsom aggregometry og thromboelastography (TEG)4,5. Disse metoder kræver dog dyre specialiserede instrumentering og temmelig store mængder af materiale. Det er også muligt at overvåge hændelser downstream, efter nej er frigivet fra RBC, ved hjælp af ændringerne i trombocyttal overflade protein udtryk – såsom P-selectin6. IKKE er også kendt for at øge mængden af cGMP i blodplader7. Tidligere brugte vi cGMP at overvåge ingen overgang til blod efter nitrit reduktion af deoxygenated RBC8. Dette viste sig for at være en meget følsom metode; men cGMP er en kortvarig molekyle og dens afsløring indebærer omfattende arbejdskraft. En anden mulighed, beskrevet i præsenteres protokollen bruger fosforylering af vasodilator-stimuleret phospho (VASP)-protein til at påvise tilstedeværelsen af NO i blodet. VASP er et substrat af protein kinase G aktivisering, hvilke er fosforyleret på samspillet med NO gennem sGC/cGMP vej9. Påviselige VASP fosforylering sker ved meget lav NO koncentrationer, som kunne gøre blodplader en meget følsomme detektor ingen tilstedeværelse i blodet. VASP er stærkt udtrykt i blodplader, men ikke i andre celler, som giver mulighed for at følge selektivt de begivenheder, der involverer blodplader10.
Hovedformålet med denne protokol er at beskrive metoden i detaljer til påvisning af ingen udgivelse i fuldblod med sin interaktion med trombocytter ved overvågning VASP fosforylering11,12. Den beskrevne metode giver tidlig påvisning af lav ingen koncentrationer - teoretisk i nanomolar rækkevidde, hvilket gør denne protokol mere følsomme end cGMP bestemmelse, som følge af brugen af standard vestlige skamplet teknikker opnåeligt i de fleste laboratorium indstillinger.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Tri-sodium citrate</td>
			<td>Supply by NIH blood bank</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid</td>
			<td>Supply by NIH blood bank</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G7528-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl; sodium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-7653 1kg</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4; sodium phosphate monobasic, monohydrate</td>
			<td>Mallinckrodt Chemical</td>
			<td>7892-04</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl; potassium chloride</td>
			<td>Mallinckrodt Chemical</td>
			<td>6858</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3; sodium bicarbonate</td>
			<td>Mallinckrodt Chemical</td>
			<td>7412-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES; N-[2-Hydroxyethyl]piperazine-N&#39;-[-ethanesulfonic acid]</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375-500g</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2 (1 M); magnesium chloride</td>
			<td>Quality Biology</td>
			<td>351-033-721</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2; calcium chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5080-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Narrow-mouth HDPE Economy bottles</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>2089-0001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red septum stopper NO.29</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>FB57877</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaNO2-; sodium nitrite</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S2252-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIZMA Base; Tris[hydroxymethyl]aminomethane</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8524-250G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NP-40; 4-Nonylphenyl-polyethylene glycol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>74385-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease inhibitor cocktail set III</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>539134</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phospho-VASP (Ser239) antibody</td>
			<td>Cell signaling technology</td>
			<td>3114</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VASP antibody</td>
			<td>Cell signaling technology</td>
			<td>3112</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GAPDH (14C10) Rabbit mAb</td>
			<td>Cell signaling technology</td>
			<td>2118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M-6250-10ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peroxidase AffiniPure Goat Anti-Rabbit IgG (H+L)</td>
			<td>Jackson Immuno Research Laboratories</td>
			<td>111-035-003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clarity Western ECL Substrate</td>
			<td>BIO-RAD</td>
			<td>1705060-200ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CO-oximeter (ABL 90 flex)</td>
			<td>Radiometer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

platelet-based detection of nitric oxide in blood by measuring vasp phosphorylation

Blodplader er de ansvarlig for korrekt blodpropper blodkomponenter. Deres funktion er stærkt reguleret af forskellige veje. En af de mest potente vasoaktive agenter, nitrogenoxid (NO), kan også fungere som en kraftig hæmmer af trombocytaggregation. Direkte er ingen opdagelse i blodet meget udfordrende på grund af sin høje reaktivitet med celle-frit hæmoglobin, der begrænser ikke half-life til rækken millisekund. I øjeblikket, baseret ingen ændringer efter interventioner skønnes kun på målte ændringer af nitrit og nitrat (medlemmer af nitrat-nitrit-ingen stofskiftevej). Men præcis, disse målinger er temmelig vanskeligt at fortolke vis en vis faktiske uden ændringer, på grund af den naturligt høje baseline nitrit og nitrat niveauer, der er flere størrelsesordener højere end forventede ændringer af nogen selv. Derfor, udvikling af direkte og enkle metoder, der gør det muligt at påvise NO direkte er længst. Denne protokol adresser en potentiel anvendelse af blodplader som en yderst følsom ingen sensor i blodet. Det beskriver indledende trombocyt rige plasma (PRP) og vasket trombocyt præparater og anvendelse af nitrit og deoxygenated røde blodlegemer som ingen generatorer. Fosforylering af VASP på Serin 239 (P-VASPSer239) bruges til at påvise tilstedeværelsen af nr. Det faktum at VASP protein er stærkt udtrykt i blodplader og at det hurtigt er fosforyleret når ingen er til stede fører til en enestående mulighed for at bruge denne sti til direkte ingen paavisning i blodet.

Venøse blodprøver har pO2 værdier mellem 50-80 mmHg. Deoxygenation af helium aftager hurtigt pO2 til 25 mmHg inden for 10 min. øget deoxygenation tid lidt længere falder pO2. Men øget tid af deoxygenation også fører til betydeligt øgede niveauer af celle-frit hæmoglobin (bestemmes af co Oximeter, visuelt ses på figur 2 som i stigende grad rød farvning af plasma) (Figur 2A-B</st...

Watch this Scientific Journal Video about Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation at JoVE.com

Platelet-based Detection of Nitric Oxide in Blood by Measuring VASP Phosphorylation

Vi præsenterer her, en protokol for at løse den potentielle anvendelse af blodplader som en yderst følsom oxid sensor i blodet. Det beskriver indledende trombocyt udarbejdelse og anvendelse af nitrit og deoxygenated røde blodlegemer som nitrogenoxid generatorer.

Trombocyt-baseret detektion af nitrogenoxid i blodet ved at måle VASP fosforylering

Platelets are the blood components responsible for proper blood clotting. Their function is highly regulated by various pathways. One of the most potent ...

Denne protokol omhandler den potentielle brug af blodplader som meget følsom nitrogenoxid sensor både in vitro og in vivo i blodet. Øget fosforyleret Vasodilator-Stimuleret Phosphoprotein eller P-VASP serin 239 i blodplader nitrogenoxid har nogle fordele, herunder en evne til at opdage tilstedeværelsen af nitrogenoxid i nanomolar slægter. Inden for to timer efter indsamling af 30 til 50 milliliter fuldblod fra en sund donor tilsættes fem milliliter aliquots af blodet i det passende antal 15 milliliter koniske rør til centrifugering.Brug en plastoverførselspipette til omhyggeligt at opsamle det blodpladerige plasma fra den øverste del af supernatanterne. Pellet de plasmarige blodplader med en anden centrifugering, og vask forsigtigt pillerne i fem milliliter CGS-buffer. Centrifuge ved 400 g i 10 minutter ved stuetemperatur.Ved centrifugeringsafslutningens afslutning opsuspenrede pelletsene i tre milliliter modificeret tyrodebuffer. Brug et hæmocytometer til at tælle og justere blodpladesuspensionens masseitet til tre gange 10 til de ottende celler pr. milliliter i frisk tyroldebuffer. Derefter inkubere blodplade suspensioner i en time ved 37 grader Celsius.I mellemtiden indsamles de røde blodlegemer fra de pladefrie plasmalag af hele blodprøverne ved centrifugering efterfulgt af fire vaske i fem milliliter PBS pr. vask. Efter den sidste vask kasseres supernatanterne, og de røde blodlegemer blandes med en milliliter af de plasmarige blodplader ved den relevante eksperimentelle hæmatokrit i polypropylenflasker, der er lukket med gummipropper. Sæt en nål forbundet til en helium gastank i hver septa og indsæt 26 gauge nåle til at gøre gasudtag.Derefter langsomt hvirvle flaskerne ved stuetemperatur og bruge et oximeter til at måle den delvise ilttryk til overvågning af deoxygenation proces. Iltfaldet afhænger af heliumstrømningshastigheden og omrøringshastigheden. Derfor bør tidspunktet for iltningen optimeres, før et eksperiment påbegyndes, da dette er meget afhængigt af geometrien i den eksperimentelle opsætning.Ved reduktion af nitrit af røde blodlegemer anvendes en mikrosyring til at injicere nitrit gennem skillevæggen i de deoxygenerede prøver af PRP og RBC, således at der opnås en endelig koncentration på 10 mikromolar. Prøverne inkuberes i mindst 10 minutter ved 37 grader Celsius, og en milliliter af hver prøve overføres til et mikrocentrifugerør til centrifugering. Overfør 300 mikroliter af trombocytaffus fra den øverste del af supernatanterne til nye mikrocentrifugerør, og der tilsættes syrecitratdextrose til hvert rør i et 1-9 forhold.Centrifuge blodpladerne igen og resuspend pellets i 80 mikroliter af iskold lysis buffer indeholder protease hæmmer cocktail tre til hvert rør. Dernæst indlæses 15 mikrogram protein fra hver prøve til to separate 10% SDS-PAGE geler. Kør gelerne ved 120 volt i 1,3 timer.Ved afslutningen af løbet overføres gelerne til individuelle lattergascellulosemembraner, og enhver uspecifik binding med et passende volumen på 5 % tør mælk på 5 % blokeres. Indkube membranerne med de relevante primære antistoffer natten over ved fire grader Celsius efterfulgt af mærkning med et passende sekundært peberede peroxidaseantistof i 45 minutter ved stuetemperatur. Derefter udsætte membraner med en imager at kvantificere bandet tæthed med et passende billede analyseprogram.Sunde venøse blodprøver har delvis ilttryk værdier mellem 50 til 80 millimeter kviksølv. Deoxgenation med helium reducerer hurtigt det delvise ilttryk til 25 millimeter kviksølv inden for 10 minutter. Yderligere fald i delvist ilttryk kan opnås med en øget deoxygenationstid.Øget deoxygenation fører til forhøjede niveauer af hæmolyse som angivet ved stadig mere rød farveplasma. Dette er en virkning af deoxygenation og er ikke forårsaget af omrøring selv som angivet ved manglen på hæmolyse i prøver omrørt uden helium. Både Vasodilator-Stimuleret fosforprotein eller VASP og fosforyleret-VASP ekspressionsniveauer i blodplader faldt med stigende hæmatokrit i deoxygenated prøver som påvist af vestlige blot.Behandling med en kortlivet nitrogenoxid donor øger fosforyleret vasodilatator-stimuleret fosforprotein udtryk i blodplader inden for 10 sekunder af behandlingen. Desuden forblev niveauet af fosforyleret VASP eller P-VASP stabilt op til 10 minutter efter inkubation af NO-donoren med blodpladerigt plasma, hvilket indikerer, at der er tilstrækkelig tid til at adskille RBC fra blodplader uden at påvirke eksisterende P-VASP-niveauer. Nitrit øger også blodpladens P-VASP-niveauer ved tilstedeværelse af deoxygenerede RBC'er.Her afhænger forholdet mellem P-VASP og total VASP af hæmatokritniveauet. VASP er stærkt udtrykt i blodplader, og det er hurtigt fosforyleret i nærvær af nitrogenoxid. Derfor, denne protokol giver en metode til at studere induktion af nitrogenoxid ved forskellige fysiologiske stimuli.Med denne metode har vi med succes brugt øget P-VASP i blodplade som en markør for nitrogenoxid stimulation ved inhaleret nitrit in vivo. Glem ikke, at arbejde med blodplader med en biologisk prøve altid bør udføres ved hjælp af passende personlige beskyttelsesudstyr.

Research

JoVE Journal

Medicine

Analytical Techniques for Assaying Nitric Oxide Bioactivity

Analytiske teknikker til analyse af nitrogenoxid Bioaktivitet

Nitric oxide (NO) is a diatomic free radical that is extremely short lived in biological systems (less than 1 second in circulating blood)1. NO may be ...

MicroRNA Detection in Prostate Tumors by Quantitative Real-time PCR (qPCR)

MicroRNA Detection in Prostate Tumors by Quantitative Real-time PCR qPCR

MicroRNA Påvisning i prostata tumorer ved kvantitativ real-time PCR (qPCR)

MicroRNAs (miRNAs) are single-stranded, 18&#x2013;24 nucleotide long, non-coding RNA molecules. They are involved in virtually every cellular process ...

Cerenkov Luminescence Imaging (CLI) for Cancer Therapy Monitoring

Cerenkov Luminescence Imaging CLI for Cancer Therapy Monitoring

In  molecular imaging, positron emission tomography (PET) and optical imaging (OI)  are two of the most important and thus most widely used modalities1-3. ...

5/6th Nephrectomy in Combination with High Salt Diet and Nitric Oxide Synthase Inhibition to Induce Chronic Kidney Disease in the Lewis Rat

Chronic kidney disease (CKD) is a global problem. Slowing CKD progression is a major health priority. Since CKD is characterized by complex derangements ...

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Phosphorus-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: A Tool for Measuring In Vivo Mitochondrial Oxidative Phosphorylation Capacity in Human Skeletal Muscle

Fosfor-31 Magnetic Resonance Spectroscopy: et redskab til måling<em&gt; In vivo</em&gt; Mitokondrie Oxidativ phosphorylering Kapacitet i human skeletmuskulatur

Skeletal muscle mitochondrial oxidative phosphorylation (OXPHOS) capacity, which is critically important in health and disease, can be measured in vivo ...

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro and In Vivo Detection of Mitophagy in Human Cells, C. Elegans, and Mice

In Vitro og In Vivo påvisning af Mitophagy i humane celler, C. Elegansog mus

Mitochondria are the powerhouses of cells and produce cellular energy in the form of ATP. Mitochondrial dysfunction contributes to biological aging and a ...

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Rutine Screening metode for mikropartikler i trombocyttal transfusioner

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

Synthesis, Characterization, and Application of Superparamagnetic Iron Oxide Nanoprobes for Extrapulmonary Tuberculosis Detection

Syntese, karakterisering og anvendelse af superparamagnetiske jernoxid nanosonder til ekstrapulmonal tuberkulosedetektion

A molecular imaging probe comprising superparamagnetic iron oxide (SPIO) nanoparticles and Mycobacterium tuberculosis surface antibody (MtbsAb) was ...

Endotoxin Activity Assay for the Detection of Whole Blood Endotoxemia in Critically Ill Patients

Endotoxin-Aktivitetsanalyse til påvisning af fuldblods Endotoxæmi hos kritisk syge patienter

Lipopolysaccharide, also known as endotoxin, is a fundamental component of gram-negative bacteria and plays a crucial role in the development of sepsis ...

A Novel Inhalation Mask System to Deliver High Concentrations of Nitric Oxide Gas in Spontaneously Breathing Subjects

En ny indånding Mask System til at levere høje koncentrationer af nitrogenoxid gas i spontant vejrtrækning Emner

Nitric Oxide (NO) is administered as gas for inhalation to induce selective pulmonary vasodilation. It is a safe therapy, with few potential risks even if ...