Name: localization of the locus coeruleus in the mouse brain
Uploaded: 2019-03-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain at JoVE.com

ونحن نشكر أبيغيل موتشينديتسي للحفاظ على مستعمرة الماوس. استخدام مصدر فوتون متقدمة في "مختبر أرغون الوطني" تدعمها وزارة الطاقة الأمريكية، مكتب العلوم، "مكتب للطاقة العلوم الأساسية"، تحت رقم العقد: دي-AC02-06CH11357. ونحن نشكر أولغا أنتيبوفا والدكتور ستيفان فوغت لدعم المستخدم والمساعدة في "المصدر فوتون متقدمة". تم تمويل هذا العمل من 2R01GM101502 منح "المعهد الوطني للصحة" إلى SL.

وأقر دراسات الحيوانات "رعاية الحيوان جامعة جونز هوبكنز"، واستخدام (ACUC) البروتوكول رقم M017M385.
1. تشريح الدماغ
<ol><li>لشل، تخدير الفئران من تطبيق إيسوفلوراني 3%.<ol>
<li>نقع القطن كرة مع قطرات إيسوفلوراني ووضعه في أنبوب ميكروسينتريفوجي 15 مل. مكان الآنف الحيوان في الأنبوب والسماح يستن...

<ol>
	<li>Robertson, S. D., Plummer, N. W., de Marchena, J., Jensen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+origins+of+central+norepinephrine+neuron+diversity.">Developmental origins of central norepinephrine neuron diversity.</a> Nature neuroscience. 16, 1016-1023 (2013).</li><li>Kobayashi, R. M., Palkovits, M., Jacobowitz, D. M., Kopin, I. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biochemical+mapping+of+the+noradrenergic+projection+from+the+locus+coeruleus.+A+model+for+studies+of+brain+neuronal+pathways.">Biochemical mapping of the noradrenergic projection from the locus coeruleus. A model for studies of brain neuronal pathways.</a> Neurology. 25, 223-233 (1975).</li><li>Olson, L., Fuxe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+projections+from+the+locus+coeruleus+noradrealine+neurons:+the+cerebellar+innervation.">On the projections from the locus coeruleus noradrealine neurons: the cerebellar innervation.</a> Brain research. 28, 165-171 (1971).</li><li>Costa, A., Castro-Zaballa, S., Lagos, P., Chase, M. H., Torterolo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+MCH-containing+fibers+in+the+feline+brainstem:+Relevance+for+REM+sleep+regulation.">Distribution of MCH-containing fibers in the feline brainstem: Relevance for REM sleep regulation.</a> Peptides. , 50-61 (2018).</li><li>Semba, J., Toru, M., Mataga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Twenty-four+hour+rhythms+of+norepinephrine+and+serotonin+in+nucleus+suprachiasmaticus,+raphe+nuclei,+and+locus+coeruleus+in+the+rat.">Twenty-four hour rhythms of norepinephrine and serotonin in nucleus suprachiasmaticus, raphe nuclei, and locus coeruleus in the rat.</a> Sleep. 7, 211-218 (1984).</li><li>Takeuchi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Locus+coeruleus+and+dopaminergic+consolidation+of+everyday+memory.">Locus coeruleus and dopaminergic consolidation of everyday memory.</a> Nature. 537, 357-362 (2016).</li><li>Korf, J., Aghajanian, G. K., Roth, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+turnover+of+norepinephrine+in+the+rat+cerebral+cortex+during+stress:+role+of+the+locus+coeruleus.">Increased turnover of norepinephrine in the rat cerebral cortex during stress: role of the locus coeruleus.</a> Neuropharmacology. 12, 933-938 (1973).</li><li>Sara, S. J., Segal, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasticity+of+sensory+responses+of+locus+coeruleus+neurons+in+the+behaving+rat:+implications+for+cognition.">Plasticity of sensory responses of locus coeruleus neurons in the behaving rat: implications for cognition.</a> Progress in brain research. 88, 571-585 (1991).</li><li>Markevich, V. A., Voronin, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+reactions+of+sensomotor+cortex+neurons+to+stimulation+of+emotionally+significant+brain+structures].">Synaptic reactions of sensomotor cortex neurons to stimulation of emotionally significant brain structures].</a> Zhurnal vysshei nervnoi deiatelnosti imeni I P Pavlova. 29, 1248-1257 (1979).</li><li>File, S. E., Deakin, J. F., Longden, A., Crow, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+the+role+of+the+locus+coeruleus+in+anxiety+and+agonistic+behaviour.">An investigation of the role of the locus coeruleus in anxiety and agonistic behaviour.</a> Brain research. 169, 411-420 (1979).</li><li>Pamphlett, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+of+environmental+toxicants+by+the+locus+ceruleus:+a+potential+trigger+for+neurodegenerative,+demyelinating+and+psychiatric+disorders.">Uptake of environmental toxicants by the locus ceruleus: a potential trigger for neurodegenerative, demyelinating and psychiatric disorders.</a> Medical hypotheses. 82, 97-104 (2014).</li><li>Wang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuromelanin-sensitive+magnetic+resonance+imaging+features+of+the+substantia+nigra+and+locus+coeruleus+in+de+novo+Parkinson's+disease+and+its+phenotypes.">Neuromelanin-sensitive magnetic resonance imaging features of the substantia nigra and locus coeruleus in de novo Parkinson's disease and its phenotypes.</a> European journal of neurology. 25, 949-973 (2018).</li><li>Oliveira, L. M., Tuppy, M., Moreira, T. S., Takakura, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+locus+coeruleus+catecholaminergic+neurons+in+the+chemosensory+control+of+breathing+in+a+Parkinson's+disease+model.">Role of the locus coeruleus catecholaminergic neurons in the chemosensory control of breathing in a Parkinson's disease model.</a> Experimental neurology. , 172-180 (2017).</li><li>Zarow, C., Lyness, S. A., Mortimer, J. A., Chui, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuronal+loss+is+greater+in+the+locus+coeruleus+than+nucleus+basalis+and+substantia+nigra+in+Alzheimer+and+Parkinson+diseases.">Neuronal loss is greater in the locus coeruleus than nucleus basalis and substantia nigra in Alzheimer and Parkinson diseases.</a> Archives of neurology. 60, 337-341 (2003).</li><li>Chandley, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+expression+deficits+in+pontine+locus+coeruleus+astrocytes+in+men+with+major+depressive+disorder.">Gene expression deficits in pontine locus coeruleus astrocytes in men with major depressive disorder.</a> Journal of psychiatry &amp; neuroscience : JPN. 38, 276-284 (2013).</li><li>Bernard, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+expression+of+glutamate+signaling,+growth+factor,+and+glia+genes+in+the+locus+coeruleus+of+patients+with+major+depression.">Altered expression of glutamate signaling, growth factor, and glia genes in the locus coeruleus of patients with major depression.</a> Molecular psychiatry. 16, 634-646 (2011).</li><li>Gos, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyrosine+hydroxylase+immunoreactivity+in+the+locus+coeruleus+is+elevated+in+violent+suicidal+depressive+patients.">Tyrosine hydroxylase immunoreactivity in the locus coeruleus is elevated in violent suicidal depressive patients.</a> European archives of psychiatry and clinical neuroscience. 258, 513-520 (2008).</li><li>Bielau, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+evidence+for+impaired+nitric+oxide+signaling+of+the+locus+coeruleus+in+bipolar+disorder.">Immunohistochemical evidence for impaired nitric oxide signaling of the locus coeruleus in bipolar disorder.</a> Brain research. 1459, 91-99 (2012).</li><li>Wiste, A. K., Arango, V., Ellis, S. P., Mann, J. J., Underwood, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Norepinephrine+and+serotonin+imbalance+in+the+locus+coeruleus+in+bipolar+disorder.">Norepinephrine and serotonin imbalance in the locus coeruleus in bipolar disorder.</a> Bipolar disorders. 10, 349-359 (2008).</li><li>Borodovitsyna, O., Flamini, M. D., Chandler, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+Stress+Persistently+Alters+Locus+Coeruleus+Function+and+Anxiety-like+Behavior+in+Adolescent+Rats.">Acute Stress Persistently Alters Locus Coeruleus Function and Anxiety-like Behavior in Adolescent Rats.</a> Neuroscience. 373, 7-19 (2018).</li><li>Hirschberg, S., Li, Y., Randall, A., Kremer, E. J., Pickering, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+dichotomy+in+spinal-+vs+prefrontal-projecting+locus+coeruleus+modules+splits+descending+noradrenergic+analgesia+from+ascending+aversion+and+anxiety+in+rats.">Functional dichotomy in spinal- vs prefrontal-projecting locus coeruleus modules splits descending noradrenergic analgesia from ascending aversion and anxiety in rats.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>McCall, J. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRH+Engagement+of+the+Locus+Coeruleus+Noradrenergic+System+Mediates+Stress-Induced+Anxiety.">CRH Engagement of the Locus Coeruleus Noradrenergic System Mediates Stress-Induced Anxiety.</a> Neuron. 87, 605-620 (2015).</li><li>Borges, G. P., Mico, J. A., Neto, F. L., Berrocoso, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticotropin-Releasing+Factor+Mediates+Pain-Induced+Anxiety+through+the+ERK1/2+Signaling+Cascade+in+Locus+Coeruleus+Neurons.">Corticotropin-Releasing Factor Mediates Pain-Induced Anxiety through the ERK1/2 Signaling Cascade in Locus Coeruleus Neurons.</a> The international journal of neuropsychopharmacology. 18, (2015).</li><li>Simone, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethinyl+estradiol+and+levonorgestrel+alter+cognition+and+anxiety+in+rats+concurrent+with+a+decrease+in+tyrosine+hydroxylase+expression+in+the+locus+coeruleus+and+brain-derived+neurotrophic+factor+expression+in+the+hippocampus.">Ethinyl estradiol and levonorgestrel alter cognition and anxiety in rats concurrent with a decrease in tyrosine hydroxylase expression in the locus coeruleus and brain-derived neurotrophic factor expression in the hippocampus.</a> Psychoneuroendocrinology. 62, 265-278 (2015).</li><li>Carter, M. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuning+arousal+with+optogenetic+modulation+of+locus+coeruleus+neurons.">Tuning arousal with optogenetic modulation of locus coeruleus neurons.</a> Nature. 13, 1526-1533 (2010).</li><li>Fan, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Corticosterone+administration+up-regulated+expression+of+norepinephrine+transporter+and+dopamine+beta-hydroxylase+in+rat+locus+coeruleus+and+its+terminal+regions.">Corticosterone administration up-regulated expression of norepinephrine transporter and dopamine beta-hydroxylase in rat locus coeruleus and its terminal regions.</a> Journal of neurochemistry. 128, 445-458 (2014).</li><li>Xiao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper+regulates+rest-activity+cycles+through+the+locus+coeruleus-norepinephrine+system.">Copper regulates rest-activity cycles through the locus coeruleus-norepinephrine system.</a> Nature chemical biology. 14, 655-663 (2018).</li><li>Amaral, D. G., Sinnamon, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+locus+coeruleus:+neurobiology+of+a+central+noradrenergic+nucleus.">The locus coeruleus: neurobiology of a central noradrenergic nucleus.</a> Progress in neurobiology. 9, 147-196 (1977).</li><li>Ralle, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Disease+at+a+Single+Cell+Level:+intracellular+copper+trafficking+activates+compartment-specific+responses+in+hepatocytes.">Disease at a Single Cell Level: intracellular copper trafficking activates compartment-specific responses in hepatocytes.</a> The Journal of Biological Chemistry. 285, 30875-30883 (2010).</li><li>Paxinos, G., Franklin, K. B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2013).</li><li>Bonnemaison, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper,+zinc+and+calcium:+imaging+and+quantification+in+anterior+pituitary+secretory+granules.">Copper, zinc and calcium: imaging and quantification in anterior pituitary secretory granules.</a> Metallomics : integrated biometal science. 8, 1012-1022 (2016).</li><li>Nietzold, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantifying+X-Ray+Fluorescence+Data+Using+MAPS.">Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. , (2018).</li><li>Vogt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MAPS:+A+set+of+software+tools+for+analysis+and+visualization+of+3D+X-ray+fluorescence+data+sets.">MAPS: A set of software tools for analysis and visualization of 3D X-ray fluorescence data sets.</a> J. Phys. IV France. 104, 635-638 (2003).</li><li>Davies, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper+pathology+in+vulnerable+brain+regions+in+Parkinson's+disease.">Copper pathology in vulnerable brain regions in Parkinson's disease.</a> Neurobiology of aging. 35, 858-866 (2014).</li><li>Davies, K. M., Mercer, J. F., Chen, N., Double, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copper+dyshomoeostasis+in+Parkinson's+disease:+implications+for+pathogenesis+and+indications+for+novel+therapeutics.">Copper dyshomoeostasis in Parkinson's disease: implications for pathogenesis and indications for novel therapeutics.</a> Clinical science. 130, 565-574 (2016).</li><li>James, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+comparison+of+preparation+methodologies+for+X-ray+fluorescence+microscopy+of+brain+tissue.">Quantitative comparison of preparation methodologies for X-ray fluorescence microscopy of brain tissue.</a> Analytical and bioanalytical chemistry. , 853-864 (2011).</li></ol>

توجيه بشكل صحيح العينة خطوة حاسمة في هذا البروتوكول. لأن نقوم باستخدام الميزات التشريحية السطحية الظهرية للدماغ لتحديد موقع LC (الحدود بين المخيخ وأدنى والاكيميه)، من المهم أن تكون محاذاة المقاطع بشكل صحيح. وهذا يتطلب الرعاية في وضع الدماغ بشكل صحيح في مصفوفة تقطيع المخ الماوس. ونحن نوصي ق?...

كويروليوس موضع (LC) منطقة هامة في الدماغ وموقع رئيسي ل إنتاج إفراز (شمال شرق)1. قانون العمل يرسل الإسقاطات في جميع أنحاء الدماغ2 للقشرة وفي قرن آمون و المخيخ3 وينظم العمليات الفسيولوجية الرئيسية، بما في ذلك إيقاع سيركاديان4،5، الانتباه والذاكرة6، نشدد على7،8من العمليات الإدراكية والعاطفة9،10. اختلال وظيفي LC متورط في الاضطرابات العصبية والنفسية العصبية11، بما في ذلك باركنسون مرض12،،من1314، مرض الزهايمر14، الاكتئاب15 ،،من1617والهوس الاكتئابي18،19، والقلق20،21،،من2223، 24-ونظرا لهذه الأدوار، تحليل LC أمر حاسم لدراسة وظيفتها والخلل الوظيفي.
الفئران تستخدم على نطاق واسع لدراسات العمليات الفسيولوجية وباثوفيسيولوجيك. نظراً لصغر حجمها، قد الماوس LC متوسط قطرها ~ 300 ميكرومتر، مما يؤدي إلى صعوبة في تحديد موقع الهيكل. خلال تقطيع المخ، يمكن بسهولة تضيع قانون العمل في أقسام الاكليلية أو السهمي. الدراسات المتاحة التي تصف تحديد LC في الحيوانات لا توفر بروتوكول خطوة بخطوة أن اتباع غير خبير1،25. وهكذا يصف لنا لتقديم الإرشاد لتوطين LC، بروتوكول التي طورناها لتحديد موقع هذه المنطقة في الدماغ الماوس للعديد من التطبيقات (الشكل 1، الشكل 2، الشكل 3). ويسري البروتوكول بكشف الدماغ التي تسيطر عليها بعناية تمزيقها والمناعي هذا26،27، أو بدلاً من ذلك ال24، كلا الإنزيمات عالي التخصيب في ش28. حالما يقع LC إيمونوهيستوتشيميستري، يمكن استخدام شرائح المخ المجاورة لإجراء مزيد من الدراسات، بما في ذلك التحليلات المورفولوجية والايض، فضلا عن دراسات التصوير المعادن عن طريق الأشعة الفلورية مجهرية (إكسفم)29. يصف لنا إكسفم كمثال في هذا البروتوكول (الشكل 3).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Adult mouse brain slicer matrix</td>
			<td>Zivic Instruments</td>
			<td>BSMAS001-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit secondary antibody, Alexa Fluor 488 (source - donkey)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A-21206</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Charged glass slides</td>
			<td>Genesee</td>
			<td>29-107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Microm GmbH</td>
			<td>HM 505E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat cutting blades</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>MX35</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scissors Mini, 9.5cm</td>
			<td>Antech Diagnostcs</td>
			<td>503241</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI (4&#39;,6-diamidino-2-phenylindole)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9542-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dopamine &#946;-hydroxylase (DBH) antibody - inhouse production (source - rabbit)</td>
			<td>B. Eipper</td>
			<td>-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dopamine &#946;-hydroxylase (DBH) antibody - commercially availabe (source - rabbit)</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>8586</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tubes, 50ml</td>
			<td>USA Scientific</td>
			<td>339652</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forane (isofluorane)</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>NDC 1019-360-60</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Micro Adson</td>
			<td>Antech Diagnostcs</td>
			<td>501245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hardset mounting media</td>
			<td>EM sciences</td>
			<td>17984-24</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Pascal</td>
			<td>LSM 5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multi-well plates, 24 wells</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>930186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optimal cutting temperature compound (OCT)</td>
			<td>VWR/ tissue tech</td>
			<td>102094-106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde (PFA)/ formalin 10%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SF98-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peel-A-Way disposable embedding molds</td>
			<td>Polysciences Inc.</td>
			<td>18646A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pencil brush</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline (PBS)</td>
			<td>Life Tech</td>
			<td>14190250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor blades</td>
			<td>Amazon</td>
			<td colspan="2">ASIN: B000CMFJZ2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatulas</td>
			<td>Antech Diagnostcs</td>
			<td>14374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T pins</td>
			<td>Office Depot</td>
			<td>344615</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates, Paxinos and Franklin, 3rd Edition</td>
			<td>Amazon</td>
			<td>ISBN: 978-0123694607</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton-X 100 (to prepare PBSD)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T8787</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7949-500ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tyrosine hydroxylase (TH) antibody (source - rabbit)</td>
			<td>EMD Millipore</td>
			<td>AB152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultralene thin film for XRF</td>
			<td>SPEX Sample Prep</td>
			<td>3525</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-field fluorescent microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>Axio Zoom.V16</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

localization of the locus coeruleus in the mouse brain

كوروليس موضع (LC) هو محور رئيسي لإفراز إنتاج الخلايا العصبية التي تعدل عددا من الوظائف الفسيولوجية. تشوهات هيكلية أو وظيفية من LC تؤثر على عدة مناطق المخ بما في ذلك اللحاء، والحصين، والمخيخ، وقد تسهم في الاكتئاب والاضطراب الثنائي القطب، والقلق، وكذلك مرض باركنسون ومرض الزهايمر. غالباً ما تكون هذه الاضطرابات المرتبطة بانتهاك معدنية، بل يفهم دور المعادن في LC جزئيا فقط. الدراسات الفنية والسمات من LC ضرورية لفهم أفضل للأمراض البشرية ومساهمة من المعادن. الفئران نموذج تجريبي مستخدمة على نطاق واسع، ولكن الماوس LC الصغيرة (~0.3 مم) ومن الصعب تحديد لغير خبراء. هنا، يمكننا وصف بروتوكول المستندة إلى إيمونوهيستوتشيميستري خطوة بخطوة لتعريب LC في الدماغ الماوس. وتستخدم الدوبامين-β-hydroxylase (هذا)، وبدلاً من ذلك، تيروزين hydroxylase (TH)، كلا الإنزيمات عالية المعرب عنها في قانون العمل، كعلامات المناعي في شرائح المخ. يمكن استخدام الأقسام المتاخمة للمقاطع التي تحتوي على LC لمزيد من التحليل، بما في ذلك علم الأنسجة للدراسات المورفولوجية واختبار التمثيل الغذائي، فضلا عن تصوير المعادن بالأشعة السينية fluorescence مجهرية (إكسفم).

تغييرات في التوازن المعادن (مثل النحاس والحديد والزنك و Mn) غالباً ما يلاحظ في اضطرابات عصبية، بما في ذلك التغييرات في34،LC35. وبالتالي، تحديد مستويات المعادن في الدماغ ضروري لفهم آليات المرض. أقسام الدماغ التي تم إنشاؤها باستخدام بروتوكول وص...

Watch this Scientific Journal Video about Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain at JoVE.com

Localization of the Locus Coeruleus in the Mouse Brain

كوروليس موقعا من مجموعة صغيرة من الخلايا العصبية المعنية في مجموعة متنوعة من العمليات الفسيولوجية. هنا، يمكننا وصف بروتوكول لإعداد الماوس الدماغ أقسام لدراسات للبروتينات والمعادن في هذه النواة.

تعريب كوروليس موقعا في الدماغ الماوس

The locus coeruleus (LC) is a major hub of norepinephrine producing neurons that modulate a number of physiological functions. Structural or functional ...

وقد تورط الخلل الوظيفي للوcus coeruleus في الاضطرابات العصبية والنفسية العصبية, بما في ذلك مرض باركنسون, مرض الزهايمر, الاكتئاب, اضطراب ثنائي القطب, والقلق. وبالنظر إلى هذه الأدوار، فإن تحليل مركز الوُسَرَل أمر بالغ الأهمية لدراسة وظيفته واختلاله الوظيفي. أثناء اقسام دماغ الماوس، يمكن أن يغيب بسهولة coeruleus المُلَكَن في الأقسام التاجية أو القوسية بسبب صغر حجمها.وهكذا، لتقديم التوجيه لتوطين coeruleus locus، ونحن وصف بروتوكول التي وضعناها لتحديد موقع هذه المنطقة في الدماغ الماوس لعدة تطبيقات. ابدأ بوضع دماغ معزول حديثًا من فأر مُغَمَّر ثم مُنشر في 4٪ PFA في أنبوب 50 ملليلتر. احتضن الدماغ لمدة 24 ساعة عند أربع درجات مئوية.استخدام ملقط لنقل الدماغ إلى أنبوب مخروطي 50 ملليلتر مليئة 25 ملليلتر من محلول السكروز 30٪. احتضانه عند أربع درجات مئوية لمدة 48 إلى 72 ساعة حتى يغرق الدماغ إلى أسفل الأنبوب. لتضمين قسم جذع الدماغ، ضع سطحه المقطوع على الجزء السفلي من قالب التضمين، وإضافة مركب درجة حرارة القطع الأمثل ليحيط بـ جذع الدماغ.تجمّد الدماغ المضمّن في ثلاجّة ناقص 80 درجة مئوية لمدة 12 ساعة على الأقل حتى الاستخدام الإضافي. ضع القالب مع الدماغ في التبريد واحتضانه لعدة ساعات لضبط درجة حرارته إلى درجة حرارة المبرد. لفضح كتلة أكتوبر التي تحتوي على الدماغ، واستخدام شفرة حلاقة لقطع حواف أربعة من العفن على طول الطريق إلى أسفل، ومن ثم قشر بعيدا العفن تضمين منه.استخدم شفرات الحلاقة لإزالة فائض أوكت من سطح الكتلة، مع التأكد من عدم لمس الدماغ. ثم جبل كتلة أكتوبر على تشاك من cryostat، وفضح سطح قطع من الدماغ نحو الجبهة. لضبط الدماغ، قم بتوجيه السطح المقطوع بالتوازي مع شفرات الحلاقة في التبريد.توجيه العينة بشكل صحيح هو خطوة حاسمة في هذا البروتوكول. لأننا نستخدم السمات التشريحية للسطح الظهري للدماغ لتحديد موقع LC، مثل الحدود بين المخيخ وcolliculus أدنى، من المهم أن تكون محاذاة المقاطع بشكل صحيح. وهذا يتطلب الرعاية في وضع صحيح في الدماغ في مصفوفة تقطيع الدماغ الماوس.تقليم الدماغ ابتداء من النخاع، وقطع 100 ميكرومتر أقسام rostrally. بمجرد أن يبدأ المخيخ و الدماغ في القطع كشريحة واحدة مستمرة على مستوى البطين الرابع ، ابدأ في جمع الشرائح بسمك 50 ميكرومتر. استخدام ملقط لجمع كل شريحة الدماغ ووضعها في بئر من لوحة 24-well مليئة برنامج تلفزيوني.وسوف coeruleus locus يكون أكثر وضوحا في شريحة حيث المخيخ وcolliculus أدنى تلبية بعضها البعض في حوالي 5.52 ملليمتر الخلفي من bregma. في اليوم الأول، غسل شرائح الدماغ في لوحة 24 جيدا ثلاث مرات لمدة خمس دقائق كل في برنامج تلفزيوني. ثم إضافة 0.5٪ برنامج تلفزيوني مع المنظفات و permeabilizeize لهم في أربع درجات مئوية لمدة 24 ساعة.في اليوم التالي، اغسل الشرائح ثلاث مرات لمدة خمس دقائق لكل منها مع 0.5٪ PBSD. ثم إضافة الأجسام المضادة الأولية في تخفيف من واحد إلى 500 في 0.5٪ PBSD واحتضان في أربع درجات مئوية لمدة 18 ساعة. في اليوم الثالث، وغسل شرائح ثلاث مرات لمدة 10 دقائق لكل مع 0.5٪ PBSD، ثم إضافة الأجسام المضادة الثانوية في تخفيف من واحد إلى 1000 في 0.5٪ PBSD.التفاف لوحة مع رقائق الألومنيوم واحتضان في أربع درجات مئوية لمدة 16 ساعة. بعد الحضانة، وغسل شرائح ثلاث مرات لمدة خمس دقائق مع كل 0.5٪ PBSD، ثم لمدة خمس دقائق في برنامج تلفزيوني. قم بتغطية المقاطع باستخدام وسائط التركيب الثابتة بدون DAPI.يُغطّى الغطاء مع غطاء زجاجي ويُجفف لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة. ثم استخدم مجهرًا مشتركًا مع إعدادات للكشف عن الإشارة من الطول الموجي الملائم للفلورس إلى شرائح الدماغ الصورة. بعد ضبط المجهر إلى الطائرة البؤرية لشريحة الدماغ، استخدم التكبير 10 مرات لالتقاط صورة واحدة.استخدم البطين الرابع الموجود أسفل المخيخ وفوق الوطن و الدماغ لتحديد موقع منطقة LC محتملة في شريحة الدماغ. التركيز على الحواف الجانبي للبطين الرابع وسوف يكون موجودا LC بدءا من حواف البطين الرابع والإشارة نحو منطقة الدماغ البونز. تم تقييم التوزيع داخل الخلايا من الدوبامين بيتا هيدروكسيلاس, بروتين أعرب عنه في LC, باستخدام هذا البروتوكول من أجل دراسة LC مورفولوجيا وكثافة الخلايا العصبية.بروتين آخر أعرب عنه في LC، التيروزين هيدروكسيلاس، كما أظهرت إشارة فلورية خضراء قوية في شرائح الدماغ التي تحتوي على LC.Changes في التوازن المعادن وغالبا ما لوحظ في اضطرابات عصبية، بما في ذلك التغيرات في LC.In هذا المثال، عندما تم قياس شريحة الدماغ قطع من خلال LC للفوسفات والبوتاسيوم والزنك والنحاس، وأظهرت النحاس فقط زيادة محددة في الإشارة. نوصي بقطع حوالي 500 ميكرون أكثر من الأنسجة الأمامية والخفية لتجنب فقدان النواة، وقطع أقسام أكثر من اللازم، خاصة إذا كان أول مرة تنفيذ هذا البروتوكول. دراسة متأنية لصور أطلس الدماغ قبل تلطيخ مفيد جدا.مرة واحدة يقع LC عن طريق الكيمياء المناعية، يمكن استخدام شرائح الدماغ المجاورة لمزيد من الدراسات، بما في ذلك التحليل المورفولوجي والتمثيلي، فضلا عن دراسات التصوير المعدني عن طريق المجهر الفلورسيسين بالأشعة السينية. ويمكن استخدام أقسام الدماغ التي تم إنشاؤها باستخدام البروتوكول الموصوف لتحديد مستويات النحاس والمعادن الأخرى في LC ومقارنتها بالمستويات في المناطق خارج LC، وهو أمر ضروري لفهم آلية المرض. وتشمل التطبيقات المحتملة الأخرى لهذا البروتوكول الكشف عن وفرة وتوزيع داخل الخلايا من الدوبامين بيتا هيدروكسيلاس, التيروزين هيدروكسيلاس, وغيرها من البروتينات التي أعرب عنها في LC بشكل فردي, أو في اختبار التلطخ المشترك, دراسات من مورفولوجيا LC وكثافة الخلايا العصبية.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

التصوير حية من الانقسام في تطوير الجنينية الماوس اللحاء

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

حقن الفيروسي Intracerebroventricular من حديثي الولادة ماوس الدماغ للاستمرار وانتشار تنبيغ العصبية

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol (TRAP) Assay

Telomerase Activity in the Various Regions of Mouse Brain: Non-Radioactive Telomerase Repeat Amplification Protocol TRAP Assay

نشاط التيلوميراز في مناطق مختلفة من الدماغ ماوس: التيلوميراز غير المشعة كرر بروتوكول التضخيم (TRAP) الفحص

Telomerase, a ribonucleoprotein, is responsible for maintaining the telomere length and therefore promoting genomic integrity, proliferation, and ...

Conditional Genetic Transsynaptic Tracing in the Embryonic Mouse Brain

شرطي عبر التشابك الوراثية للبحث عن المفقودين في المخ الجنينية الماوس

Anatomical path tracing is of pivotal importance to decipher the relationship between brain and behavior. Unraveling the formation of neural circuits ...

Stereotaxic Infusion of Oligomeric Amyloid-beta into the Mouse Hippocampus

تسريب التجسيمي من بلازميدة قليلة القسيمات اميلويد بيتا في الحصين ماوس

Alzheimer&#8217;s disease is a neurodegenerative disease affecting the aging population. A key neuropathological feature of the disease is the ...

Live Imaging of the Ependymal Cilia in the Lateral Ventricles of the Mouse Brain

التصوير المباشر لالبطانة العصبية سيليا في البطينات الجانبية للدماغ الفأر

Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Imaging Serotonergic Fibers in the Mouse Spinal Cord Using the CLARITY/CUBIC Technique

التصوير ألياف هرمون السيروتونين في الحبل الشوكي الماوس عن طريق وضوح / تقنية مكعب

Long descending fibers to the spinal cord are essential for locomotion, pain perception, and other behaviors. The fiber termination pattern in the spinal ...

Recording Synaptic Plasticity in Acute Hippocampal Slices Maintained in a Small-volume Recycling-, Perfusion-, and Submersion-type Chamber System

تسجيل اللدونة متشابك في شرائح هيبوكامبال الحاد تحتفظ في صغيرة الحجم-إعادة التدوير، ونضح-، وغمر من نوع نظام الدائرة

Even though experiments on brain slices have been in use since 1951, problems remain that reduce the probability of achieving a stable and successful ...

Large-scale Three-dimensional Imaging of Cellular Organization in the Mouse Neocortex

تصوير ثلاثي الأبعاد على نطاق واسع من المنظمة الخلوية في اللحاء الجديد الماوس

The mammalian neocortex is composed of many types of excitatory and inhibitory neurons, each with specific electrophysiological and biochemical ...

Quantifying the Heterogeneous Distribution of a Synaptic Protein in the Mouse Brain Using Immunofluorescence

التحديد الكمي للتوزيع غير متجانسة من البروتين متشابك في الدماغ الماوس استخدام الفلورة

The presence, absence, or levels of specific synaptic proteins can severely influence synaptic transmission. In addition to elucidating the function of a ...