Name: fabrication of decellularized cartilage-derived matrix scaffolds
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds at JoVE.com

الكتاب تود أن تقر التمهيد الأميركي للمساعدة في إنتاج السقالات. ويدعم الشواذ K.E.M. ستيبينديوم سويرمان ألكسندر من المركز الطبي في جامعة. لفتة R. وياء مالدا معتمدة من قبل "مؤسسة التهاب المفاصل الهولندية" (منح اتفاقات أول أكسيد الكربون-14-1-001 و LLP-12، على التوالي).

لهذا البروتوكول، تم الحصول على خنق الخيلي الغضروف من الخيول التي قد توفي نتيجة لأسباب أخرى من هشاشة العظام. تم الحصول على الأنسجة بإذن أصحابها، وتمشيا مع القواعد الأخلاقية المؤسسية.
ملاحظة: ويصف هذا البروتوكول تصنيع السقالات من الغضروف الخيلي ديسيلولاريزيد، التي...

<ol>
	<li>Dunlop, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+functional+decline+in+older+adults+with+arthritis.">Risk factors for functional decline in older adults with arthritis.</a> Arthritis and rheumatism. 52 (4), 1274-1282 (2005).</li><li>Fitzpatrick, K., Tokish, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+military+perspective+to+articular+cartilage+defects.">A military perspective to articular cartilage defects.</a> The journal of knee surgery. 24 (3), 159-166 (2011).</li><li>Flanigan, D. C., Harris, J. D., Trinh, T. Q., Siston, R. A., Brophy, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+chondral+defects+in+athletes'+knees:+a+systematic+review.">Prevalence of chondral defects in athletes' knees: a systematic review.</a> Medicine and science in sports and exercise. 42 (10), 1795-1801 (2010).</li><li>Martel-Pelletier, J., Boileau, C., Pelletier, J. P., Roughley, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cartilage+in+normal+and+osteoarthritis+conditions.">Cartilage in normal and osteoarthritis conditions.</a> Best practice &amp; research. Clinical rheumatology. 22 (2), 351-384 (2008).</li><li>Vinatier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cartilage+tissue+engineering:+towards+a+biomaterial-assisted+mesenchymal+stem+cell+therapy.">Cartilage tissue engineering: towards a biomaterial-assisted mesenchymal stem cell therapy.</a> Current stem cell research &amp; therapy. 4 (4), 318-329 (2009).</li><li>Taylor, D. A., Sampaio, L. C., Ferdous, Z., Gobin, A. S., Taite, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+matrices+in+regenerative+medicine.">Decellularized matrices in regenerative medicine.</a> Acta biomaterialia. 74, 74-89 (2018).</li><li>Vashi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Outcomes+for+Breast+Cancer+Patients+Undergoing+Mastectomy+and+Reconstruction+with+Use+of+DermACELL,+a+Sterile,+Room+Temperature+Acellular+Dermal+Matrix.">Clinical Outcomes for Breast Cancer Patients Undergoing Mastectomy and Reconstruction with Use of DermACELL, a Sterile, Room Temperature Acellular Dermal Matrix.</a> Plastic Surgery International. 2014 (704323), 1-7 (2014).</li><li>Satterwhite, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+wall+reconstruction+with+dual+layer+cross-linked+porcine+dermal+xenograft:+the+&amp;#34;Pork+Sandwich&amp;#34;+herniorraphy.">Abdominal wall reconstruction with dual layer cross-linked porcine dermal xenograft: the &amp;#34;Pork Sandwich&amp;#34; herniorraphy.</a> Journal of plastic, reconstructive &amp; aesthetic surgery : JPRAS. 65 (3), 333-341 (2012).</li><li>Martinello, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+recellularization+of+human+tendon+scaffolds+using+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+and+collagen+gel.">Successful recellularization of human tendon scaffolds using adipose-derived mesenchymal stem cells and collagen gel.</a> Journal of tissue engineering and regenerative medicine. 8 (8), 612-619 (2014).</li><li>Benders, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+scaffolds+for+cartilage+and+bone+regeneration.">Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration.</a> Trends in biotechnology. 31 (3), 169-176 (2013).</li><li>Benders, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+Stromal+Cells+Outperform+Chondrocytes+on+Cartilage-Derived+Matrix+Scaffolds.">Multipotent Stromal Cells Outperform Chondrocytes on Cartilage-Derived Matrix Scaffolds.</a> Cartilage. 5 (4), 221-230 (2014).</li><li>Gawlitta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+cartilage-derived+matrix+as+substrate+for+endochondral+bone+regeneration.">Decellularized cartilage-derived matrix as substrate for endochondral bone regeneration.</a> Tissue engineering. Part A. 21 (3-4), 694-703 (2015).</li><li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+and+repair+of+cartilage+defects+with+a+novel+acellular+cartilage+matrix+scaffold.">Fabrication and repair of cartilage defects with a novel acellular cartilage matrix scaffold.</a> Tissue engineering. Part C, Methods. 16 (5), 865-876 (2010).</li><li>Pittenger, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilineage+potential+of+adult+human+mesenchymal+stem+cells.">Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.</a> Science. 284 (5411), 143-147 (1999).</li><li>Meyer, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+reduces+the+immune+response+to+aortic+valve+allografts+in+the+rat.">Decellularization reduces the immune response to aortic valve allografts in the rat.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 130 (2), 469-476 (2005).</li><li>Brown, B. N., Valentin, J. E., Stewart-Akers, A. M., McCabe, G. P., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+phenotype+and+remodeling+outcomes+in+response+to+biologic+scaffolds+with+and+without+a+cellular+component.">Macrophage phenotype and remodeling outcomes in response to biologic scaffolds with and without a cellular component.</a> Biomaterials. 30 (8), 1482-1491 (2009).</li><li>Keane, T. J., Londono, R., Turner, N. J., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consequences+of+ineffective+decellularization+of+biologic+scaffolds+on+the+host+response.">Consequences of ineffective decellularization of biologic scaffolds on the host response.</a> Biomaterials. 33 (6), 1771-1781 (2012).</li><li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization.">An overview of tissue and whole organ decellularization.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li><li>Malda, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice,+men+and+elephants:+the+relation+between+articular+cartilage+thickness+and+body+mass.">Of mice, men and elephants: the relation between articular cartilage thickness and body mass.</a> PloS One. 8 (2), e57683 (2013).</li><li>Malda, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+depth-dependent+characteristics+of+equine+and+human+osteochondral+tissue+from+the+medial+and+lateral+femoral+condyles.">Comparative study of depth-dependent characteristics of equine and human osteochondral tissue from the medial and lateral femoral condyles.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (10), 1147-1151 (2012).</li><li>Londono, R., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biologic+scaffolds+for+regenerative+medicine:+mechanisms+of+in+vivo+remodeling.">Biologic scaffolds for regenerative medicine: mechanisms of in vivo remodeling.</a> Annals of biomedical engineering. 43 (3), 577-592 (2015).</li><li>Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+tissue+and+organ+decellularization.">Strategies for tissue and organ decellularization.</a> Journal of cellular biochemistry. 113 (7), 2217-2222 (2012).</li></ol>

إدارة المحتوى المؤسسي غضروف مفصلي كثيفة جداً ومرنة جداً للعلاجات الانزيمية المختلفة. بروتوكول ديسيلولاريزيشن متعددة الخطوات الموضحة في هذه المقالة يعالج هذه المقاومة وينشئ مصفوفات ديسيلولاريزيد بنجاح. ولتحقيق ذلك، العملية تمتد على مدى عدة أيام. تم اقتراح العديد من العمليات ديسيلولاري?...

عيوب غضروف مفصلي في الركبة بسبب الأحداث المؤلمة التي يمكن أن تؤدي إلى عدم الراحة، وقبل كل شيء يمكن أن يكون لها تأثير كبير على حياة السكان الشباب والنشطة1،2،3. وعلاوة على ذلك، قد يؤدي تلف الغضروف في سن مبكرة إلى ظهور أكثر سرعة من هشاشة العظام في وقت لاحق في الحياة4. حاليا، يتم العلاج الإنقاذ الوحيد لهشاشة العظام المعمم في الركبة جراحة استبدال المفاصل. كما غضروف هيبوسيلولار، أنيورال، والأنسجة أفاسكولار، محدودة جداً قدرتها على التجدد. ولذلك، يتم التماس نهج الطب التجديدي بعد المعونة وحفز التجدد قدرة الأنسجة الأصلية. ولهذا الغرض، تصمم السقالات ويستخدمها الجسم للخلايا الأصلية5أما خلية ناقل أو مادة استقرائية التي تحرض على التفرقة وتجديد الأنسجة.
وقد درست السقالات ديسيلولاريزيد على نطاق واسع في الطب التجديدي6. قد حققت بعض النجاح، على سبيل المثال، في المساعدة على تجديد الجلد7وهياكل البطن8الأوتار9. وميزة استخدام السقالات ديسيلولاريزيد هو أصلهم الطبيعية وقدرتها على الاحتفاظ بالرموز النشطة بيولوجيا أن كلا من جذب والحث على تمايز الخلايا إلى النسب الملائمة اللازمة لإصلاح الأنسجة6،10. وعلاوة على ذلك، نظراً للمصفوفة خارج الخلية (ECM) مادة بيولوجية طبيعية، ويمنع ديسيلولاريزيشن استجابة المناعية محتملة عن طريق إزالة المحتوى الخلوية أو الوراثية، هي التغلب على المسائل المتعلقة بتوافق مع الحياة وتحلل الأحيائي.
السقالات مصفوفة المستمدة من الغضروف (إليه التنمية النظيفة) أظهرت تشوندروجينيك كبيرة محتملة في تجارب في المختبر عندما تبذر مع الخلايا اللحمية الوسيطة11. وبالإضافة إلى ذلك، أظهرت هذه السقالات إمكانات لنسيج العظام النموذج عن طريق التحجر endochondral في مواقع خارج الرحم في إعدادات المجراة في12. كما توجه إليه التنمية النظيفة السقالات التشكيل كل العظام وأنسجة الغضاريف، ويجوز عقد هذه السقالات المحتملة لإصلاح العيب أوستيوتشوندرال بالإضافة إلى إصلاح الغضاريف.
توضح هذه المقالة بروتوكول مقتبس من يانغ et al. (2010)13 لإنتاج ديسيلولاريزيد السقالات إليه التنمية النظيفة من الخيول خنق الغضروف. هذه السقالات غنية بالكولاجين من النوع الثاني، ويخلو من الخلايا، ولا تحتوي على أي الجليكوزامينوجليكان (الكمامات) بعد ديسيلولاريزيشن. يمكن إجراء تجارب في المختبر والمجراه في على حد سواء على إصلاح الخلل تشوندرال (osteo) باستخدام هذه السقالات.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cadaveric joint</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>This can be obtained as rest material from the local butcher or veterinary center.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>15290026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl pH 7.5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DN25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ribonuclease A from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R6513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 (octoxynol-1)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trisodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S4641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>180947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene oxide sterilization</td>
			<td>Synergy Health, Venlo, the Netherlands</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipotent Stromal cells/chondrocytes from equine donors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>MSCs and chondrocytes can be isolated from donor joints that are rest material, coming from the local butcher or veterinary center.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM alpha</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>22561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-ascorbic acid 2-phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>41965</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat inactivated bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10735086001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast growth factor-2 (FGF-2)</td>
			<td>R &#38; D Systems</td>
			<td>233-FB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA quantification kit (Quant-iT PicoGreen dsDNA Reagent)</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>P7581</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,9-Dimethyl-Methylene Blue zinc chloride double salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>341088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freeze-dryer</td>
			<td>SALMENKIPP</td>
			<td>ALPHA 1-2 LD plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical mill</td>
			<td>IKA</td>
			<td>A 11 basic</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mortar/pestle</td>
			<td>Haldenwanger 55/0A</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller plate</td>
			<td>CAT</td>
			<td>RM5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge (for 50 mL tubes)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capsule (cylindric mold)</td>
			<td>TAAB</td>
			<td>8 mm flat</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superlight S UV</td>
			<td>Lumatec</td>
			<td>2001AV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve (mesh size 0.71 mm)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>34111229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small laddle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of decellularized cartilage-derived matrix scaffolds

عيوب Osteochondral تفتقر إلى القدرة الكافية على إصلاح جوهري لتجديد أنسجة العظام والغضاريف السليمة وظيفيا. وإلى هذا الحد، قد ركزت البحوث الغضروف على تطوير السقالات التجدد. توضح هذه المقالة تطوير السقالات تماما المستمدة من المصفوفة خارج الخلية الغضروف الطبيعي، قادمة من جهة مانحة الخيول. وتشمل التطبيقات المحتملة للسقالات إنتاج اللوجرافتس لإصلاح الغضاريف، وصفه سقالة للأنسجة أوستيوتشوندرال الهندسية، وتوفير نماذج في المختبر لدراسة تشكيل النسيج. قبل ديسيلولاريزينج الأنسجة، تتم إزالة الخلايا المانحين، ولكن العديد من الرموز النشطة بيولوجيا الطبيعية ويعتقد أن الإبقاء على. والميزة الرئيسية لاستخدام هذه سقالة طبيعية بالمقارنة مع سقالة منتجة صناعيا أن لا الروغان المزيد من البوليمرات المطلوبة لتجديد الأنسجة أوستيوتشوندرال بالسيارة. يمكن استخدام السقالات المستمدة من الغضروف مصفوفة لتجديد أنسجة العظام والغضاريف في إعدادات المجراة في سواء في المختبر.

يجب دائماً تأكيد ديسيلولاريزيشن سقالات إليه التنمية النظيفة باستخدام ستينينجس النسيجي، فضلا عن استخدام الحمض النووي التحديد الكمي لقياس كمية مخلفات الحمض النووي. ديسيلولاريزيشن غير كافية تؤدي إلى الاستجابات المناعية غير المرغوب فيها التي تؤثر على النتائج في إعدادات ?...

Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds at JoVE.com

Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds

يمكن استخدام ديسيلولاريزيد السقالات المستمدة من الغضروف سقالة لإصلاح الغضروف دليل وكوسيلة لتجديد الأنسجة أوستيوتشوندرال. هذا الكتاب يصف عملية ديسيلولاريزيشن بالتفصيل ويوفر اقتراحات لاستخدام هذه السقالات في الإعدادات في المختبر.

تصنيع السقالات مصفوفة ديسيلولاريزيد المستمدة من الغضروف

Osteochondral defects lack sufficient intrinsic repair capacity to regenerate functionally sound bone and cartilage tissue. To this extent, cartilage ...

هذه الطريقة تقدم طريقة لإنشاء السقالات المستمدة من الأنسجة الأصلية التي يمكن استخدامها لتجديد الغضاريف. الميزة الرئيسية لهذه التقنية هي أن يتم الحفاظ على مكونات الغضروف الأصلي في السقالات التي يمكن أن تعزز تشكيل الغضروف والتجدد في المختبر وفي الجسم الحي. على الرغم من أن هذه الطريقة تستخدم الغضروف من اكوين خنق المفاصل, الغضاريف من أي مفاصل أخرى يمكن استخدامها كذلك.للبدء، والحصول على مفصل كادافيك سليمة لعزل الغضاريف وإزالة الجلد الدهون الزائدة والأنسجة العضلية كما هو موضح في بروتوكول النص المرافق. المقبل، وتحديد الموقع حيث يوضح المفصل من خلال تنفيذ تصريف التمديد للمفصل. إجراء شق أفقي للوصول إلى تجويف المفاصل.بعد ذلك، قم بعمل شق عمودي لفتح منطقة المفصل. يتم تعبئة تجويف المفصل مع السائل الزليلي الذي من المرجح أن يقطر من تجويف عند إجراء شق الصحيح. الاستمرار في فتح المفصل تماما عن طريق إزالة الدهون المفرطة والعضلات والأوتار، وقطع من خلال الأوتار التي تحافظ على المفصل معا.فحص بعناية الغضروف عن أي ضرر العيان. إذا لم يكن للغضروف المفصلي مظهر أكثر سلاسة أو إذا كانت الأدلة أو تقرحات أو شقوق أو عيوب موجودة ، فتخلص من الغضروف وتبدأ من جديد. استخدام مشرط معقمة لإزالة الغضروف من العظام.قطع كل وسيلة وصولا الى عظم تحت الchondral لإزالة الغضروف المنطقة العميقة. جمع شرائح الغضروف إزالتها في أنابيب 50 ملليلتر تحتوي على محلول غسل الغضاريف المعدة مسبقًا. أثناء معالجتها، بالتنقيط بانتظام محلول غسل الغضروف على الغضروف لمنع الغضروف من الجفاف.بعد جمع الغضاريف من جميع المناطق ذات الاهتمام، قم بتجميد شرائح الغضاريف في النيتروجين السائل لمدة خمس دقائق. ثم نقل شرائح الغضاريف إلى أنابيب 50 ملليلتر ووضع على الفور شرائح المجمدة في مجفف تجميد. lyophilize شرائح الغضروف لمدة 24 ساعة مع مجفف تجميد.عند الانتهاء، قم بتخزين شرائح الغضروف المجففة المجمدة في مكان جاف في درجة حرارة الغرفة. للمعالجة اليدوية، قبل البرد هاون وحشرات مع النيتروجين السائل، ثم وضع شرائح الغضروف الlyophilized في هاون وغمرها والنيتروجين السائل. طحن العينات مباشرة باليد لمدة 45 دقيقة تقريبا حتى يتم سحقها بما فيه الكفاية.بدلا من ذلك، لطحن العينات تلقائيا باستخدام آلة الطحن، تبدأ قبل التبريد حجرة طحن آلة الطحن عن طريق إضافة النيتروجين السائل. ثم إضافة شرائح الغضروف الlyophilized وطحن العينة في سرعتها مسبقا لبضع ثوان تصل إلى دقيقة. تأكد من أن جميع الجسيمات هي الأرض وأنه لا توجد جزيئات البقاء في الجزء السفلي من حجرة طحن.وأخيراً، اتبع مع تقنية إزالة الخلايا الموصوفة في بروتوكول النص المصاحب قبل تشكيل السقالات. نقل جزيئات الغضاريف مع تسمية صغيرة إلى قالب بلاستيكي أسطواني. اضغط على كل من فقاعات الهواء لتجنب تجاويف في سقالة وملء القالب تماما.لتجنب تجاويف في السقالات، تأكد من أن يتم الضغط على فقاعات الهواء في حين ملء القالب مع جزيئات الغضاريف. بعد تشكيل، وتجميد القالب لمدة 10 دقائق في ناقص 20 درجة مئوية. ثم lyophilize السقالات الغضروف داخل القالب لمدة 24 ساعة في مجفف تجميد.بعد التجميل، وإزالة بعناية سقالة من القالب. ضع السقالة تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية الطول الموجي 365 نانومتر وعبر وصلة بين عشية وضحاها. شكل أقراص سقالة عن طريق قطع السقالات المعقمة إلى شرائح سميكة ثلاثة ملليمتر.ثم نقل السقالات إلى آبار منفصلة من لوحة ستة بئر. إضافة ملليلتر واحد من التوسع Chondrocyte المتوسطة على رأس السقالات والسماح لهم لإعادة الترطيب لمدة 30 دقيقة. في حين أن السقالات تُعاد هيدرات، أعد الخلايا والماصات 50 ميكرولتر من تعليق الخلية المعدة فوق سقالة منقوعة قبل.ثم احتضان سقالة لمدة ساعة واحدة في 37 درجة مئوية. عند استخدام chondrocytes، تأكد من أنها لم يتم توسيع الماضي مرور الأول من أجل تقليل عدد الخلايا المتمايزة. بعد ساعة واحدة، والعودة لوحة إلى غطاء محرك السيارة الثقافة وتحويل بعناية على سقالة.الماصات المتبقية 50 ميكرولترات من تعليق الخلية على سقالة واحتضان لمدة ساعة أخرى في 37 درجة مئوية. بعد الحضانة، إضافة ثلاثة ملليلتر من المتوسط إلى الآبار مع السقالات. تجنب الأنابيب المتوسطة مباشرة على السقالات والتعامل مع لوحة الثقافة بلطف لتجنب انفصال الخلايا.إعادة لوحة إلى الحاضنة وخلية الثقافة تنازلت السقالات في 37 درجة مئوية. وقد استخدمت مزيج من التلطيخ historlogical والحمض النووي الكم لإظهار أن الأساليب المقدمة في هذه المقالة يؤدي إلى إزالة الخلية كافية سقالة الغضاريف. تم العثور على السقالات الناتجة لا تحتوي على خلايا جنبا إلى جنب مع مستويات غير قابلة للكشف من الحمض النووي.كما أنها تفتقر إلى الجليكوسامينوغلوليكانس وغنية بالكولاجين II.Here ، ويلاحظ تشكيل المصفوفة الجديدة على سقالة تنازلت مع الخلايا الجذعية ميسينيمال التي كانت مزرع لمدة أربعة أسابيع. تشكيل الجليكوسامينوغلويكان وفيرة بعد أربعة أسابيع. بعد محاولة هذا الإجراء، من المهم فحص ما إذا كان تم إزالة الخلية بنجاح، قبل استخدامه في أي تطبيق.بعد هذا الإجراء، يمكن إجراء تحليل كيميائي حيوي إضافي مثل محلل البقعة الغربية من أجل الإجابة على أسئلة محددة حول وجود مكونات أخرى مثل عوامل النمو. مهدت هذه التقنية الطريق للباحثين في مجال هندسة الأنسجة لاستكشاف استراتيجيات لتجديد الغضاريف باستخدام الأنسجة غير الخلوية من المصادر الالية والسينيجينية. الاحتياطات مثل ارتداء معطف المختبر والقفازات ينبغي دائما أن تتخذ.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Epithelial Cell Repopulation and Preparation of Rodent Extracellular Matrix Scaffolds for Renal Tissue Development

الظهارية إعادة تعمير خلية وإعداد القوارض خارج الخلية مصفوفة السقالات للتنمية نسيج الكلى

This protocol details the generation of acellular, yet biofunctional, renal extracellular matrix (ECM) scaffolds that are useful as small-scale model ...

Fabrication of Mechanically Tunable and Bioactive Metal Scaffolds for Biomedical Applications

تصنيع ميكانيكيا الانضباطي والحيويه المعادن سقالات للتطبيقات الطبية الحيوية

Biometal systems have been widely used for biomedical applications, in particular, as load-bearing materials. However, major challenges are high stiffness ...

Generation of ESC-derived Mouse Airway Epithelial Cells Using Decellularized Lung Scaffolds

جيل من خلايا الفأر مجرى الهواء طلائي المشتقة ESC عن طريق Decellularized الرئة السقالات

Lung lineage differentiation requires integration of complex environmental cues that include growth factor signaling, cell-cell interactions and ...

Fabrication and Characterization of Griffithsin-modified Fiber Scaffolds for Prevention of Sexually Transmitted Infections

تصنيع وتوصيف السقالات جريفيثسين تعديل الألياف للوقاية من الأمراض المنقولة

Electrospun fibers (EFs) have been widely used in a variety of therapeutic applications; however, they have only recently been applied as a technology to ...

Fabrication and Use of Dry Macroporous Alginate Scaffolds for Viral Transduction of T Cells

تصنيع واستخدام سقالات الجينات الجافة الكبيرة المسامية للنقل الفيروسي للخلايا التائية

Genetic engineering of T cells for CAR-T cell therapy has come to the forefront of cancer treatment over the last few years. CAR-T cells are produced by ...

Gelatin Methacryloyl Granular Hydrogel Scaffolds: High-throughput Microgel Fabrication, Lyophilization, Chemical Assembly, and 3D Bioprinting

سقالات هيدروجيل الحبيبية الجيلاتين ميثاكريلويل: تصنيع ميكروجيل عالي الإنتاجية ، التجفيد ، التجميع الكيميائي ، والطباعة الحيوية 3D

The emergence of granular hydrogel scaffolds (GHS), fabricated via assembling hydrogel microparticles (HMPs), has enabled microporous scaffold formation ...

Synthesis of Decellularized Cartilage Extracellular Matrix Hydrogels

تخليق الهلاميات المائية مصفوفة الغضروف خارج الخلية

Decellularized cartilage extracellular matrix (DC-ECM) hydrogels are promising biomaterials for tissue engineering and regenerative medicine due to their ...

Comparative Study of Decellularization Techniques for Bovine Lung ECM Hydrogels

Development and Characterization of Decellularized Lung Extracellular Matrix Hydrogels

Author Spotlight: Optimizing Bovine Lung Decellularization for Organotypic Hydrogels

The use of extracellular matrix (ECM)-derived hydrogels in tissue engineering has become increasingly popular, as they can mimic cells&#39; natural ...