Name: fabrication of decellularized cartilage-derived matrix scaffolds
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds at JoVE.com

Yazarlar W. önyükleme için iskele imalatı yardım kabul etmek istiyorum. K.E.M. su bükücüler Alexandre Suerman Stipendium Üniversitesi Tıp Merkezi tarafından desteklenmektedir. R. Levato ve J. Malda Hollandalı Artrit Vakfı tarafından desteklenmektedir (CO-14-1-001 ve LLP-12, sırasıyla vermek).

Bu iletişim kuralı için at bastırmak kıkırdak diğer nedenlerle daha osteoartrit ölmüştü atlar üzerinden elde edildi. Doku kurumsal etik kuralları doğrultusunda sahiplerinin izni ile elde edildi.
Not: Bu iletişim kuralı içinde vitro doku kültürü platformlar gibi uygulamalar için veya rejeneratif tıp stratejileri içinde vivo implantasyonu için kullanılabilir decellularized at kıkırdak üzerinden iskele imalatı açıklar. Enzimatik te...

<ol>
	<li>Dunlop, D. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Risk+factors+for+functional+decline+in+older+adults+with+arthritis.">Risk factors for functional decline in older adults with arthritis.</a> Arthritis and rheumatism. 52 (4), 1274-1282 (2005).</li><li>Fitzpatrick, K., Tokish, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+military+perspective+to+articular+cartilage+defects.">A military perspective to articular cartilage defects.</a> The journal of knee surgery. 24 (3), 159-166 (2011).</li><li>Flanigan, D. C., Harris, J. D., Trinh, T. Q., Siston, R. A., Brophy, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevalence+of+chondral+defects+in+athletes'+knees:+a+systematic+review.">Prevalence of chondral defects in athletes' knees: a systematic review.</a> Medicine and science in sports and exercise. 42 (10), 1795-1801 (2010).</li><li>Martel-Pelletier, J., Boileau, C., Pelletier, J. P., Roughley, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cartilage+in+normal+and+osteoarthritis+conditions.">Cartilage in normal and osteoarthritis conditions.</a> Best practice &amp; research. Clinical rheumatology. 22 (2), 351-384 (2008).</li><li>Vinatier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cartilage+tissue+engineering:+towards+a+biomaterial-assisted+mesenchymal+stem+cell+therapy.">Cartilage tissue engineering: towards a biomaterial-assisted mesenchymal stem cell therapy.</a> Current stem cell research &amp; therapy. 4 (4), 318-329 (2009).</li><li>Taylor, D. A., Sampaio, L. C., Ferdous, Z., Gobin, A. S., Taite, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+matrices+in+regenerative+medicine.">Decellularized matrices in regenerative medicine.</a> Acta biomaterialia. 74, 74-89 (2018).</li><li>Vashi, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Outcomes+for+Breast+Cancer+Patients+Undergoing+Mastectomy+and+Reconstruction+with+Use+of+DermACELL,+a+Sterile,+Room+Temperature+Acellular+Dermal+Matrix.">Clinical Outcomes for Breast Cancer Patients Undergoing Mastectomy and Reconstruction with Use of DermACELL, a Sterile, Room Temperature Acellular Dermal Matrix.</a> Plastic Surgery International. 2014 (704323), 1-7 (2014).</li><li>Satterwhite, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abdominal+wall+reconstruction+with+dual+layer+cross-linked+porcine+dermal+xenograft:+the+&amp;#34;Pork+Sandwich&amp;#34;+herniorraphy.">Abdominal wall reconstruction with dual layer cross-linked porcine dermal xenograft: the &amp;#34;Pork Sandwich&amp;#34; herniorraphy.</a> Journal of plastic, reconstructive &amp; aesthetic surgery : JPRAS. 65 (3), 333-341 (2012).</li><li>Martinello, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+recellularization+of+human+tendon+scaffolds+using+adipose-derived+mesenchymal+stem+cells+and+collagen+gel.">Successful recellularization of human tendon scaffolds using adipose-derived mesenchymal stem cells and collagen gel.</a> Journal of tissue engineering and regenerative medicine. 8 (8), 612-619 (2014).</li><li>Benders, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+matrix+scaffolds+for+cartilage+and+bone+regeneration.">Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration.</a> Trends in biotechnology. 31 (3), 169-176 (2013).</li><li>Benders, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multipotent+Stromal+Cells+Outperform+Chondrocytes+on+Cartilage-Derived+Matrix+Scaffolds.">Multipotent Stromal Cells Outperform Chondrocytes on Cartilage-Derived Matrix Scaffolds.</a> Cartilage. 5 (4), 221-230 (2014).</li><li>Gawlitta, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularized+cartilage-derived+matrix+as+substrate+for+endochondral+bone+regeneration.">Decellularized cartilage-derived matrix as substrate for endochondral bone regeneration.</a> Tissue engineering. Part A. 21 (3-4), 694-703 (2015).</li><li>Yang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+and+repair+of+cartilage+defects+with+a+novel+acellular+cartilage+matrix+scaffold.">Fabrication and repair of cartilage defects with a novel acellular cartilage matrix scaffold.</a> Tissue engineering. Part C, Methods. 16 (5), 865-876 (2010).</li><li>Pittenger, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilineage+potential+of+adult+human+mesenchymal+stem+cells.">Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells.</a> Science. 284 (5411), 143-147 (1999).</li><li>Meyer, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decellularization+reduces+the+immune+response+to+aortic+valve+allografts+in+the+rat.">Decellularization reduces the immune response to aortic valve allografts in the rat.</a> The Journal of thoracic and cardiovascular surgery. 130 (2), 469-476 (2005).</li><li>Brown, B. N., Valentin, J. E., Stewart-Akers, A. M., McCabe, G. P., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+phenotype+and+remodeling+outcomes+in+response+to+biologic+scaffolds+with+and+without+a+cellular+component.">Macrophage phenotype and remodeling outcomes in response to biologic scaffolds with and without a cellular component.</a> Biomaterials. 30 (8), 1482-1491 (2009).</li><li>Keane, T. J., Londono, R., Turner, N. J., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Consequences+of+ineffective+decellularization+of+biologic+scaffolds+on+the+host+response.">Consequences of ineffective decellularization of biologic scaffolds on the host response.</a> Biomaterials. 33 (6), 1771-1781 (2012).</li><li>Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+overview+of+tissue+and+whole+organ+decellularization.">An overview of tissue and whole organ decellularization.</a> Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).</li><li>Malda, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice,+men+and+elephants:+the+relation+between+articular+cartilage+thickness+and+body+mass.">Of mice, men and elephants: the relation between articular cartilage thickness and body mass.</a> PloS One. 8 (2), e57683 (2013).</li><li>Malda, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+depth-dependent+characteristics+of+equine+and+human+osteochondral+tissue+from+the+medial+and+lateral+femoral+condyles.">Comparative study of depth-dependent characteristics of equine and human osteochondral tissue from the medial and lateral femoral condyles.</a> Osteoarthritis and Cartilage. 20 (10), 1147-1151 (2012).</li><li>Londono, R., Badylak, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biologic+scaffolds+for+regenerative+medicine:+mechanisms+of+in+vivo+remodeling.">Biologic scaffolds for regenerative medicine: mechanisms of in vivo remodeling.</a> Annals of biomedical engineering. 43 (3), 577-592 (2015).</li><li>Gilbert, T. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+tissue+and+organ+decellularization.">Strategies for tissue and organ decellularization.</a> Journal of cellular biochemistry. 113 (7), 2217-2222 (2012).</li></ol>

Eklem kıkırdak ECM çok yoğun ve farklı enzimatik tedavi için oldukça esnek. Bu makalede açıklanan multi-step decellularization iletişim kuralı böyle direnç giderir ve başarılı bir şekilde decellularized matrisler oluşturur. Bunu başarmak için birkaç gün içinde işlem yayılmıştır. Birçok decellularization süreçleri doku18farklı türleri için önerilen ve kıkırdak decellularization için uygun bir protokol bu makalede. Bu protokol için bu, ancak, tüm hücreleri ka...

Travmatik olaylardan kaynaklanan diz eklem kıkırdak kusur rahatsızlık için yol açabilir ve her şeyden önce genç ve aktif nüfus1,2,3hayatlarını üzerinde büyük bir etkisi olabilir. Ayrıca, Genç yaşta kıkırdak hasarı daha hızlı başlangıçlı osteoartrit hayatı4sonraki bölümlerinde yer alan neden olabilir. Şu anda, sadece Hurda tedavi Genelleştirilmiş osteoartrit diz eklem replasmanı cerrahidir. Kıkırdak hypocellular, aneural ve avasküler doku olduğu için yeniden üretim kapasitesini ciddi sınırlıdır. Bu nedenle, rejeneratif tıp yaklaşımları sonra yardımcı olmak ve yerel doku Yenileyici kapasiteli uyarmak için aranır. Bu amaçla, iskele tasarlanmış ve farklılaşma ve doku rejenerasyonu kışkırtırız endüktif bir malzeme olarak ya da ya da bir hücre taşıyıcı olarak vücudun doğal hücreleri5tarafından kullanılabilir.
Decellularized iskele rejeneratif tıp6içinde yaygın olarak inceledik. Bu bir başarı, örneğin, cilt7, karın yapıları8ve tendon9rejenerasyon yardım elde etti. Decellularized iskele kullanmanın avantajı doğal kökenlerine ve hem çekmek ve hücre farklılaşması doku onarım6,10için gerekli uygun lineage içine neden biyoaktif ipuçlarını korumak için kendi kapasitesi var. Ayrıca, hücre dışı matriks (ECM) doğal bir biomaterial ve decellularization hücresel veya genetik içeriği kaldırarak potansiyel bir bağışıklık yanıtı engeller olduğundan, biyouyumluluk ve biodegradability ile ilgili konular üstesinden vardır.
Kıkırdak kaynaklı matris (CDM) iskele büyük chondrogenic ile mezenkimal stromal hücre11numaralı seribaşı zaman tüp bebek deneylerde potansiyel göstermiştir. Buna ek olarak, bu iskele ektopik konumlardaki içinde vivo ayarları12formu kemik doku ile endochondral ossifikasyon potansiyeline göstermiştir. CDM iskele oluşumu rehber olarak her ikisi de kemik ve kıkırdak doku, bu iskele osteokondral defekt tamir yanı sıra kıkırdak onarım için potansiyel tutabilir.
Bu makalede, Yang sayfasından uyarlanmış bir protokol et al. (2010)13 üzerinden atlar decellularized CDM iskele imalatı için diz kıkırdak. Bu iskele kollajen tip II ve hücreleri yoksun zengindir ve herhangi bir glikozaminoglikan (GAG) decellularization sonra içermez. Tüp bebek ve içinde vivo deneyler (osteo) kıkırdak defekt tamir bu iskele kullanarak yapılabilir.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Cadaveric joint</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>This can be obtained as rest material from the local butcher or veterinary center.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile phosphate-buffered saline (PBS)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Amphotericin B</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>15290026</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA (0.25%), phenol red</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>25200072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris-HCl pH 7.5</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Deoxyribonuclease I from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DN25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ribonuclease A from bovine pancreas</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R6513</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100 (octoxynol-1)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Papain</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P3125</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trisodium citrate dihydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>S4641</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>180947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formalin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene oxide sterilization</td>
			<td>Synergy Health, Venlo, the Netherlands</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Multipotent Stromal cells/chondrocytes from equine donors</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>MSCs and chondrocytes can be isolated from donor joints that are rest material, coming from the local butcher or veterinary center.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MEM alpha</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>22561</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-ascorbic acid 2-phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8960</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>41965</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heat inactivated bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>10735086001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fibroblast growth factor-2 (FGF-2)</td>
			<td>R &#38; D Systems</td>
			<td>233-FB</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNA quantification kit (Quant-iT PicoGreen dsDNA Reagent)</td>
			<td>Thermo Fischer Scientific</td>
			<td>P7581</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,9-Dimethyl-Methylene Blue zinc chloride double salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>341088</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freeze-dryer</td>
			<td>SALMENKIPP</td>
			<td>ALPHA 1-2 LD plus</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Analytical mill</td>
			<td>IKA</td>
			<td>A 11 basic</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mortar/pestle</td>
			<td>Haldenwanger 55/0A</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roller plate</td>
			<td>CAT</td>
			<td>RM5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge (for 50 mL tubes)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5810R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Capsule (cylindric mold)</td>
			<td>TAAB</td>
			<td>8 mm flat</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superlight S UV</td>
			<td>Lumatec</td>
			<td>2001AV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incubator</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sieve (mesh size 0.71 mm)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>34111229</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel holder</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small laddle</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fabrication of decellularized cartilage-derived matrix scaffolds

Osteokondral kusurları işlevsel olarak ses kemik ve kıkırdak doku yeniden oluşturmak için yeterli iç onarım kapasitesi değildir. Bu ölçüde, kıkırdak araştırma rejeneratif iskele geliştirilmesi üzerinde odaklanmıştır. Bu makale tamamen doğal kıkırdak hücre dışı matriks, at bir donörün geliyor türetilir iskele gelişimi anlatılmaktadır. İskele potansiyel uygulamalar allogrefler kıkırdak onarım, mühendislik ve doku oluşumu çalışmaya tüp bebek modelleri sağlayarak osteokondral doku için bir iskele olarak hizmet için üreten içerir. Doku decellularizing tarafından donör hücreleri kaldırılır, ancak birçok doğal biyoaktif sopasıyla korunabilmesi için düşünce. Sentetik üretilen bir iskele ile karşılaştırıldığında doğal bir iskele kullanmanın ana avantajı yok daha fazla functionalization polimerlerin sürücü osteokondral doku rejenerasyonu için gerekli olmasıdır. Kıkırdak kaynaklı matris iskele içinde vivo ve tüp bebek ayarlarında kemik ve kıkırdak doku rejenerasyonu için kullanılabilir.

CDM iskele decellularization her zaman histolojik stainings kullanarak hem de DNA'sı kalıntıları miktarını ölçmek için DNA miktar kullanarak onaylanması gerekmektedir. Yetersiz decellularization içinde vivo ayarları15,16,17sonuçlarında etkileyen istenmeyen immünolojik yanıt-e doğru yol açabilir. Bu belirli decellularization Yöntem için 13,6 ± 2.3 ng/mg DNA/Kuru ağırlık ba?...

Watch this Scientific Journal Video about Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds at JoVE.com

Fabrication of Decellularized Cartilage-derived Matrix Scaffolds

Decellularized kıkırdak elde edilen iskele osteokondral doku yeniden oluşturmak için kılavuz kıkırdak onarım için bir iskele ve bir araç olarak kullanılabilir. Bu yazıda ayrıntılı decellularization işlemini açıklar ve bu iskele tüp bebek ayarları'nda kullanmak için öneriler sunar.

Decellularized matris kıkırdak elde edilen iskele imalatı

Osteochondral defects lack sufficient intrinsic repair capacity to regenerate functionally sound bone and cartilage tissue. To this extent, cartilage ...

Bu yöntem, kıkırdak rejenerasyonu için kullanılabilecek yerli dokudan elde edilen iskeleler oluşturmak için bir yol sunar. Bu tekniğin en büyük avantajı, doğal kıkırdak bileşenlerinin, kıkırdak oluşumunu ve in vitro ve in vivo rejenerasyonu teşvik eden iskelelerde korunmasıdır. Bu yöntem at besmeleden kıkırdak kullanılmasına rağmen, diğer eklemlerden gelen kıkırdak da kullanılabilir.Başlamak için, kıkırdak izolasyonu için sağlam bir kadavra eklem elde etmek ve eşlik eden metin protokolü açıklandığı gibi deri aşırı yağ ve kas dokusu kaldırın. Daha sonra, eklem uzantısı çekim gerçekleştirerek eklem ifade yerini tanımlayın. Eklem boşluğuna ulaşmak için yatay bir kesi yapın.Sonra, ortak alanı açmak için dikey bir kesi yapın. Eklem boşluğu muhtemelen doğru kesi yaparken boşluktan damla olacak sinovyal sıvı ile doldurulur. Aşırı yağ, kas ve tendonları kaldırarak ve eklemi bir arada tutan tendonları keserek eklemi tamamen açmaya devam edin.Herhangi bir makroskopik hasar için kıkırdağı dikkatlice inceleyin. Eklem kıkırdağı parlak pürüzsüz bir görünüme sahip değilse veya kanıt, kabarcık, yarık veya kusurları varsa, kıkırdak atın ve yeniden başlayın. Kemik kıkırdak kaldırmak için steril bir neşter kullanın.Derin bölge kıkırdağını çıkarmak için subkondral kemiğe kadar kesin. Daha önce hazırlanmış kıkırdak yıkama çözeltisi içeren 50 mililitretüpler de kaldırılan kıkırdak dilimleri toplayın. İşlenirken, kıkırdak kurumasını önlemek için kıkırdak üzerine düzenli olarak kıkırdak yıkama çözeltisi damlatın.Tüm ilgi alanlarından kıkırdak topladıktan sonra, kıkırdak dilimlerini sıvı nitrojende beş dakika dondurun. Sonra 50 mililitretüpler içine kıkırdak dilimleri aktarın ve hemen bir dondurucu kurutucu dondurulmuş dilimleri yerleştirilir. Kıkırdak dilimlerini dondurularak 24 saat boyunca kurutucu ile lyophilize.Bittiğinde, oda sıcaklığında kuru bir yerde dondurulmuş kurutulmuş kıkırdak dilimleri saklayın. Manuel işleme için, sıvı nitrojen ile bir harç ve havaneli önceden soğutun, sonra harç içinde lyophilized kıkırdak dilimleri yerleştirin ve onları ve sıvı nitrojen batırın. Numuneleri yeterince toz haline gelene kadar yaklaşık 45 dakika elle doğrudan öğütün.Alternatif olarak, numuneleri bir frezeleme makinesi kullanarak otomatik olarak öğütmek için, frezeleme makinesinin öğütme bölmesini sıvı nitrojen ekleyerek önceden soğutmadan başlayın. Daha sonra lyophilized kıkırdak dilimleri ekleyin ve bir dakika kadar birkaç saniye için önceden ayarlanmış hızda örnek değirmen. Tüm parçacıkların toprak olduğundan ve taşlama bölmesinin altında hiçbir parçacığın kalmadığından emin olun.Son olarak, iskele oluşturmadan önce eşlik eden metin protokolünde açıklanan hücredışılaştırma tekniğini uygulayın. Küçük etiketli kıkırdak partiküllerini silindirik plastik kalıba aktarın. İskeledeki boşlukları önlemek ve kalıbı tamamen doldurmak için tüm hava kabarcıklarını dışarı bastırın.İskelelerde boşlukları önlemek için, hava kabarcıkları kıkırdak parçacıkları ile kalıp doldururken dışarı preslenmiş olduğundan emin olun. Oluşumundan sonra, eksi 20 santigrat derece 10 dakika kalıp dondurun. Daha sonra bir dondurucu kurutucu içinde 24 saat boyunca kalıp içinde kıkırdak iskeleler lyophilize.Lyophilization sonra, dikkatle kalıp iskele kaldırın. 365 nanometre dalga boyu UV ışık altında iskele yerleştirin ve bir gecede çapraz bağlantı. Sterilize edilmiş iskeleleri üç milimetre kalınlığında dilimler halinde keserek iskele diskleri oluştur.Sonra altı kuyu plaka ayrı kuyular içine iskeleler aktarın. İskelelerin üstüne bir mililitre Chondrocyte Genleşme Ortamı ekleyin ve 30 dakika boyunca yeniden su döşeymelerini bekleyin. İskeleler rehydrate iken, önceden ıslatılmış iskele üstüne hazırlanan hücre süspansiyon hücreleri ve pipet 50 mikrolitre hazırlamak.Sonra 37 santigrat derecede bir saat iskele kuluçka. Kondrosit kullanırken, farklılaşmış hücrelerin sayısını en aza indirmek için ilk geçit geçmiş genişletilmiş olmadığından emin olun. Bir saat sonra, plakayı kültür başlığına geri getirin ve iskeleyi dikkatlice ters çevirin.Pipet, kalan 50 mikrolitre hücre süspansiyonu iskelede ve 37 santigrat derecede bir saat daha kuluçkaya yatırın. Kuluçkadan sonra, iskeleler ile kuyulara üç mililitre orta ekleyin. Ortamı doğrudan iskelelerin üzerine borulamaktan kaçının ve hücrelerin ayrılmasını önlemek için kültür plakasını nazikçe işleyebilirsiniz.Plakayı 37 santigrat derecedeki kuvöz ve kültür hücresi iskelelerine geri ver. Bu makalede sunulan yöntemlerin yeterli kıkırdak iskele decellularization neden olduğunu göstermek için histolojik boyama ve DNA niceliği bir arada kullanılmıştır. Ortaya çıkan iskelelerde tespit edilemeyen DNA seviyeleriile birlikte hiçbir hücre bulunmadığı tespit edildi.Onlar da glikozaminoglikaneksikliği ve kollajen II.Here açısından zengin, neo matriks oluşumu iskele dört hafta boyunca kültürlü olan mezenkimal kök hücreleri ile ceded gözlenir. Glikozaminoglikan oluşumu dört hafta sonra boldur. Bu yordamı denedikten sonra, herhangi bir uygulamada kullanmadan önce, hücre dışılaştırmanın başarılı olup olmadığını incelemek önemlidir.Bu prosedürü takiben, büyüme faktörleri gibi diğer bileşenlerin varlığı ile ilgili belirli soruları cevaplamak için Batı leke analizörü gibi ek biyokimyasal analizler yapılabilir. Bu teknik, doku mühendisliği alanında araştırmacıların allojeneik ve singenik kaynaklardan hücreli doku kullanarak kıkırdak rejenerasyonu için stratejiler keşfetmelerinin yolunu açmıştır. Laboratuvar önlüğü ve eldiven giymek gibi önlemler her zaman alınmalıdır.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Epithelial Cell Repopulation and Preparation of Rodent Extracellular Matrix Scaffolds for Renal Tissue Development

Epitel Hücre Repopulation ve Böbrek Doku Kalkınma Kemirgen Ekstrasellüler Matriks iskelelerinin hazırlanması

This protocol details the generation of acellular, yet biofunctional, renal extracellular matrix (ECM) scaffolds that are useful as small-scale model ...

Fabrication of Mechanically Tunable and Bioactive Metal Scaffolds for Biomedical Applications

Biyomedikal Uygulamalar için Mekanik ayarlanabilir ve Biyoaktif Metal iskelelerinin Fabrikasyon

Biometal systems have been widely used for biomedical applications, in particular, as load-bearing materials. However, major challenges are high stiffness ...

Generation of ESC-derived Mouse Airway Epithelial Cells Using Decellularized Lung Scaffolds

Decellularized Akciğer Yapı iskeleleri kullanarak ESC türetilmiş Fare Havayolu Epitel Hücreleri Üretimi

Lung lineage differentiation requires integration of complex environmental cues that include growth factor signaling, cell-cell interactions and ...

Fabrication and Characterization of Griffithsin-modified Fiber Scaffolds for Prevention of Sexually Transmitted Infections

İmalat ve Fiber Griffithsin-modified iskele karakterizasyonu önlenmesi için cinsel enfeksiyonlar iletilen

Electrospun fibers (EFs) have been widely used in a variety of therapeutic applications; however, they have only recently been applied as a technology to ...

Fabrication and Use of Dry Macroporous Alginate Scaffolds for Viral Transduction of T Cells

T Hücrelerinin Viral Transdüksiyonu için Kuru Makrogözenekli Aljinat İskelelerinin İmalatı ve Kullanımı

Genetic engineering of T cells for CAR-T cell therapy has come to the forefront of cancer treatment over the last few years. CAR-T cells are produced by ...

Gelatin Methacryloyl Granular Hydrogel Scaffolds: High-throughput Microgel Fabrication, Lyophilization, Chemical Assembly, and 3D Bioprinting

Jelatin Metakriloil Granül Hidrojel İskeleleri: Yüksek Verimli Mikrojel İmalatı, Liyofilizasyon, Kimyasal Montaj ve 3D Biyobaskı

The emergence of granular hydrogel scaffolds (GHS), fabricated via assembling hydrogel microparticles (HMPs), has enabled microporous scaffold formation ...

Synthesis of Decellularized Cartilage Extracellular Matrix Hydrogels

Decellularize Kıkırdak Hücre Dışı Matriks Hidrojellerinin Sentezi

Decellularized cartilage extracellular matrix (DC-ECM) hydrogels are promising biomaterials for tissue engineering and regenerative medicine due to their ...

Comparative Study of Decellularization Techniques for Bovine Lung ECM Hydrogels

Development and Characterization of Decellularized Lung Extracellular Matrix Hydrogels

Author Spotlight: Optimizing Bovine Lung Decellularization for Organotypic Hydrogels

The use of extracellular matrix (ECM)-derived hydrogels in tissue engineering has become increasingly popular, as they can mimic cells&#39; natural ...