Name: polyethyleneimine-coated iron oxide nanoparticles as a vehicle for the delivery of small interfering rna to macrophages in vitro and in vivo
Uploaded: 2019-02-05T13:00:00
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Questo lavoro è stato supportato dal National Natural Science Foundation of China (81772308) e nazionali chiave di ricerca e sviluppo programma della Cina (n. 2017YFA0205502).

Tutti i metodi che coinvolgono animali vivi sono stati eseguiti in conformità con l'animale con cautela e linee guida di Southeast University, Cina.
1. preparazione del PEI-SPIONs
<ol><li>
Preparazione dell'acido oleico-modificato SPIONs
	<ol>
<li>Sciogliere FeCl3•6H2O e FeSO4•7H2, O nell'acqua sotto la protezione di N2.<ol>
<li>Aggiungere 28 g di FeCl3•6H2O e 20 g di FeSO4•7H<su...

<ol>
	<li>Murray, P. J., Wynn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+and+pathogenic+functions+of+macrophage+subsets.">Protective and pathogenic functions of macrophage subsets.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (11), 723 (2011).</li><li>Mae&#223;, M. B., Wittig, B., Lorkowski, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Highly+efficient+transfection+of+human+THP-1+macrophages+by+nucleofection.">Highly efficient transfection of human THP-1 macrophages by nucleofection.</a> Journal of Visualized Experiments. (91), e51960 (2014).</li><li>Zhang, X., Edwards, J. P., Mosser, D. 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Y., Hogg, M. G., Dordick, J. S., Sharfstein, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+delivery+in+three-dimensional+cell+cultures+by+superparamagnetic+nanoparticles.">Gene delivery in three-dimensional cell cultures by superparamagnetic nanoparticles.</a> ACS Nano. 4 (8), 4733-4743 (2010).</li><li>Moghimi, S. M., Hunter, A. C., Murray, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-circulating+and+target-specific+nanoparticles:+theory+to+practice.">Long-circulating and target-specific nanoparticles: theory to practice.</a> Pharmacological Reviews. 53 (2), 283-318 (2001).</li><li>Harvey, A. E., Smart, J. 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S., Gonzalez-Fernandez, A., Sadrieh, N., Dobrovolskaia, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minireview:+nanoparticles+and+the+immune+system.">Minireview: nanoparticles and the immune system.</a> Endocrinology. 151 (2), 458-465 (2010).</li><li>Mulens-Arias, V., Rojas, J. M., P&#233;rez-Yag&#252;e, S., Morales, M. P., Barber, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyethylenimine-coated+SPIONs+trigger+macrophage+activation+through+TLR-4+signaling+and+ROS+production+and+modulate+podosome+dynamics.">Polyethylenimine-coated SPIONs trigger macrophage activation through TLR-4 signaling and ROS production and modulate podosome dynamics.</a> Biomaterials. 52, 494-506 (2015).</li></ol>

I macrofagi sono refrattari a transfect da approcci nonviral comunemente utilizzati, quali l'elettroporazione, liposomi cationici e specie del lipido. Qui abbiamo descritto un metodo affidabile ed efficiente per transfect macrofagi con siRNA. Utilizzando il presente protocollo, oltre 90% di macrofago-come 264.7 celle grezze (Figura 2B) e macrofagi peritoneali di ratto18 può essere trasfettate con siRNA senza significativa compromissione dell'attuabilità delle cellul...

I macrofagi sono un tipo di cellule immuni innate distribuiti in tutti i tessuti del corpo, anche se in quantità diverse. Producendo una varietà di citochine e altri mediatori, giocano ruoli critici nella difesa ospite contro l'invasione di microrganismi patogeni, nella riparazione del tessuto dopo la lesione e nel mantenimento di omeostasi del tessuto1. A causa della loro importanza, i macrofagi sono stati continuamente oggetto di intensa ricerca. Tuttavia, nonostante la sua prevalenza negli studi di funzione e regolazione genica, silenziamento genico siRNA-mediata è meno probabilità di riuscire a macrofagi perché queste cellule — in particolare, macrofagi primari — spesso sono difficili a transfect. Ciò può essere ascritto ad un grado relativamente elevato di tossicità associata con approcci di transfezione più consolidati in cui la membrana cellulare è chimicamente (ad es., con polimeri e lipidi) o fisicamente (ad es., mediante elettroporazione e pistole di gene) interrotto per consentire siRNA molecole attraversano la membrana, riducendone drasticamente vitalità2,3 dei macrofagi. Inoltre, i macrofagi sono dedicati fagociti ricchi di enzimi degradativi. Questi enzimi possono danneggiare l'integrità del siRNA, indebolendo la sua efficienza silenziamento anche se siRNA gene-specifico è stato consegnato in cella3,4. Di conseguenza, un sistema di consegna efficace del macrofago-mirati siRNA ha bisogno proteggere l'integrità e la stabilità di siRNA durante la consegna4.
È sempre più evidente che i macrofagi disfunzionali siano implicati nell'iniziazione e progressione di alcuni comuni disturbi clinici come cancro, aterosclerosi e malattie autoimmuni. Per questo motivo, modulando la funzione del macrofago con, per esempio, siRNA, sta emergendo come una metodologia attraente per il trattamento di questi disturbi5,6,7. Nonostante i progressi realizzati, una sfida importante della strategia di trattamento basati su siRNA è la specificità di povera cella di siRNA sistematicamente amministrato e l'assorbimento di siRNA insufficiente da parte dei macrofagi, che di conseguenza portare a effetti collaterali indesiderati. Confrontato con acido nucleico libero terapeutica che in genere mancano della selettività cellulare ottimale e spesso portare a effetti avversi, caricati nanoparticelle (NPs), a causa della loro tendenza spontanea di essere catturato dal sistema reticoloendoteliale, fuori bersaglio possono essere progettati per il targeting passivo a macrofagi in vivo, permettendo una migliore efficacia terapeutica con effetti collaterali minimi8. NPs corrente esplorato per il rilascio di molecole di RNA includono nanovettori inorganici e liposomi vari polimeri9. Tra loro, polyethyleneimine (PEI), un tipo di polimeri cationici in grado di legare e di condensazione di acidi nucleici in NPs stabilizzato, Mostra il RNA più alto offrendo capacità9,10. PEI protegge gli acidi nucleici da degradazione enzimatici e non enzimatici, media il loro trasferimento attraverso la membrana cellulare e promuove il loro rilascio intracellulare. Anche se inizialmente introdotto come un reagente di consegna di DNA, PEI successivamente è stata dimostrata per essere una piattaforma attraente per in vivo siRNA consegna, o in locale o sistemica9,10.
Nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetico (SPIONs) hanno mostrato grande promessa nel campo della biomedicina, a causa delle loro proprietà magnetiche, biocompatibilità, dimensioni paragonabili agli oggetti biologicamente importanti, alto rapporto superficie-zona--volume e facilmente adattabile superficie per agente allegato11. Per esempio, a causa della loro utilità potenziale come un agente di contrasto e di rapido assorbimento da parte dei macrofagi, SPIONs sono emersi come uno strumento clinico a immagine del tessuto macrofagi12. Mentre SPIONs inoltre sono stati studiati estesamente come acido nucleico consegna veicoli11,13,14,15, a nostra conoscenza, la letteratura contiene pochi rapporti di SPIONs come vettore per consegna del macrofago-mirati siRNA. Per la consegna del gene di SPIONs, la loro superficie è solitamente rivestita con uno strato di polimeri cationici idrofilici su cui caricati negativa degli acidi nucleici può essere elettrostaticamente attratto e legati. Qui, presentiamo un metodo per la sintesi di SPIONs cui superficie viene modificata con basso peso molecolare (10 kDa), ramificata PEI (PEI-SPIONs). Questi nanoplatforms magnetico sono quindi impiegati per condensare siRNA, formando dei complessi PEI-SPION/siRNA che permettono il trasporto di siRNA nella cellula. Abbiamo ragione quella spontanea fagocitosi di SPIONs dalle cellule del sistema reticoloendoteliale16, accoppiato con la forte capacità di associazione e condensazione di acidi nucleici da PEI, rende PEI-SPIONs adatto per il trasporto efficiente di siRNA in macrofagi. I dati presentati qui sostengono la fattibilità del silenziamento genico PEI-SPION/siRNA-mediata nei macrofagi in cultura come pure in vivo.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>C11995500BT</td>
			<td>Warm in 37&#176;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>A31608-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin (1.5 ml)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetrazolium-based MTS assay kit</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G3582</td>
			<td>For cytotoxicity analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RAW 264.7 cell line</td>
			<td>Cell Bank of Chinese Academy of Sciences, Shanghai, China</td>
			<td>TCM13</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plates (6-well)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture dishes (10 cm)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase-free tubes (1.5 ml)</td>
			<td>AXYGEN</td>
			<td>MCT-150-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Centrifuge tubes (15 ml)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>430791</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>25200-056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wistar rats</td>
			<td>Shanghai Experimental Animal Center of Chinese 
			Academy of Sciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacillus Calmette&#8211;Gu&#233;rin freeze-dried powder</td>
			<td>National 
			Institutes for Food and Drug Control, China</td>
			<td></td>
			<td>for inducing adjuvant arthritis in rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>siRNA</td>
			<td>GenePharma (Shanghai, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cy3-siRNA</td>
			<td>RiboBio (Guangzhou, China)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyethyleneimine (10 kDa)</td>
			<td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>E107079</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonia water</td>
			<td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>A112077</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oleic acid</td>
			<td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>O108484</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethylsulfoxide</td>
			<td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>D103272</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeSO4&#8226;7H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10012118</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FeCl3&#8226;6H2O</td>
			<td>Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10011918</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimercaptosuccinic acid</td>
			<td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>D107254</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ultrafiltration tube</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>UFC910096</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tetramethylammonium hydroxide solution</td>
			<td>Aladdin Chemical Reagent Co., Ltd.</td>
			<td>T100882</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Particle size and zeta potential analyzer</td>
			<td>Malvern, England</td>
			<td>Nano ZS90</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polyethyleneimine-coated iron oxide nanoparticles as a vehicle for the delivery of small interfering rna to macrophages in vitro and in vivo

A causa del loro ruolo critico nella regolazione della risposta immunitaria, i macrofagi sono stati continuamente oggetto di intensa ricerca e rappresentano un promettente bersaglio terapeutico in molti disturbi, quali malattie autoimmuni, aterosclerosi e cancro. Silenziamento genico RNAi-mediata è un valido approccio di scelta per sonda e modificare la funzione del macrofago; Tuttavia, la transfezione di macrofagi con siRNA è spesso considerata di essere tecnicamente impegnativo e, attualmente, sono disponibili alcune metodologie dedicati al trasferimento siRNA ai macrofagi. Qui, presentiamo un protocollo di utilizzo di nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetico rivestite con polyethyleneimine (PEI-SPIONs) come veicolo per la somministrazione mirata di siRNA di macrofagi. PEI-SPIONs sono capaci di legare e di condensazione completamente siRNA quando il rapporto di peso di Fe: siRNA raggiunge 4 e sopra. In vitro, queste nanoparticelle possono fornire in modo efficiente siRNA in macrofagi primari, così come nella linea cellulare del 264,7 macrofago-come, senza compromettere la vitalità cellulare presso la dose ottimale per la transfezione, e, in definitiva, essi inducono destinazione di siRNA-mediata del silenziamento genico. Oltre ad essere usato per trasfezione con siRNA in vitro , PEI-SPIONs sono anche uno strumento promettente per la consegna di siRNA a macrofagi in vivo. In considerazione di sue caratteristiche unite di proprietà magnetiche e capacità di silenziamento genico, sistematicamente amministrati PEI-SPION/siRNA particelle dovrebbero non solo di modulare la funzione dei macrofagi, ma anche per attivare i macrofagi a essere imaged e tracciati. In sostanza, PEI-SPIONs rappresentano una piattaforma nonviral semplice, sicura ed efficace per la consegna di siRNA ai macrofagi sia in vitro che in vivo.

La dimensione e la zeta potenziale di PEI-SPIONs preparato con questo protocollo sono stati nella gamma di 29-48 nm (indice di polidispersione: 0.12 - 0.23) e 30-48 mV, rispettivamente. Erano stabili in acqua a 4 ° C per oltre 12 mesi senza aggregazione ovvio. Per valutare la loro capacità di associazione di siRNA, PEI-SPIONs sono stati mescolati con siRNA a vari rapporti di peso Fe: siRNA. La figura 1 Mostra che quando il rapporto di peso di Fe: siRNA ragg...

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Polyethyleneimine-coated Iron Oxide Nanoparticles as a Vehicle for the Delivery of Small Interfering RNA to Macrophages In Vitro and In Vivo

Descriviamo un metodo di utilizzo polyethyleneimine (PEI)-rivestito di nanoparticelle di ossido di ferro superparamagnetico per macrofagi trasfezione con siRNA. Queste nanoparticelle è in grado di fornire in modo efficiente siRNA di espressione del gene bersaglio macrofagi in vitro e in vivo e silenzio.

Nanoparticelle di ossido di ferro rivestite con Polyethyleneimine come un veicolo per la consegna di piccolo RNA interferente ai macrofagi In Vitro e In Vivo

Because of their critical role in regulating immune responses, macrophages have continuously been the subject of intensive research and represent a ...

Questa misura può aiutare a rispondere alle domande chiave. Nel campo dell'umanologia. Quella risposta in funzione dei macrofagi in condizioni fisiologiche di fine patologica.Il principale vantaggio di questa tecnica è che il rivestimento in polietileneimina può essere efficacemente in vitro senza compromettere la cellula. Sotto dosi ottimali. Le implicazioni di questa tecnica si estendono verso la terapia e la diagnosi di molti disturbi infiammatori cronici e tumori.Dove i macrofagi svolgono un ruolo essenziale nella patogenesi. A dimostrare la procedura sarà Na Jia. Uno studente laureato del mio laboratorio.E Kaixuan Wang, uno studente laureato del laboratorio del dottor Xiaohua. Per preparare l'acido alleato modificato super paramagnetico ossido di ferro nanoparticelle o il primo di SPION aggiungere 28 grammi di faraone cloruro esaidrato. E 20 grammi di faraoni autoaidrato a un becher contenente 80 millilitri di acqua deionizzata.E usa un condotto di vetro per introdurre azoto nella soluzione. Mescolando fino a quando la materia solida non si è sciolta. Riscaldare la miscela di reazione a 72 gradi Celsius mescolando a 800 rotazioni al minuto.E aggiungere 40 millilitri di acqua al 28% di ammoniaca al becher. Dopo cinque minuti aggiungere nove millilitri di acido alleato goccia saggio. E mantenere la miscela a 72 gradi Celsius per tre ore con agitazione continua.Alla fine dell'incubazione raffreddare la soluzione risultante a temperatura ambiente. E far precipitare la miscela tramite separazione magnetica secondo protocolli standard. Quindi lavare lo SPION contenente precipitato tre volte con alcol etilico assoluto.E asperse il precipitato in 100 millilitri di n-esano. Per preparare l'acido acrilico dimercapto modificato spion aggiungere 800 milligrammi di acido alleato modificato SPION. Disperso in 200 millilitri di n-esano e 400 milligrammi di acido acrilico dimercapto dispersi in 200 millilitri di acetone in un pallone a tre colli in un bagno d'acqua a 60 gradi Celsius.Aggiungere quindi 200 microlitri di trietilammina cadere saggiamente al pallone mescolando a 1000 rotazioni al minuto e reflusso. Un precipitato nero può essere ottenuto mediante separazione magnetica dopo cinque ore. Quindi utilizzare idrossido di tetrametilammonio per regolare il pH della soluzione per la dispersione omogenea degli SPION idrofili in acqua deionizzata.Degenerato polietileneimina rivestito spion aggiungere l'acido acrilico dimercapto modificato la soluzione colloidale di SPION cadere saggio in una soluzione di polietileneimina da 10 kilodalton. In un pallone a tre colli da 500 millilitri sotto agitazione meccanica a 1000 rotazioni al minuto per due ore. Al termine dell'incubazione aggiungere la soluzione risultante a un tubo di ultra filtrazione con un peso molecolare tagliato di 100 kilodalton e un contenuto di 15 millilitri.Centrafutilizzare il campione fino a quando la soluzione rimanente raggiunge un volume di millilitro. Aggiungere acqua deionizzata alla soluzione per riportare il volume a 15 millilitri. E centrafuse e reidratare la soluzione altre dieci volte come appena dimostrato.Quindi filtrare la soluzione attraverso un filtro da 22 micron per la conservazione a quattro gradi Celsius. Per preparare le nanoparticelle di siRNA aggiungere prima tre microlitri di soluzioni di siRNA 20 micromolare preparate al momento a cinque tubi microcentroafusi liberi di RNA etichettati. E aggiungere 0, 8, 1,6, 3,2 e 6,4 microgrammi di POlietileneimina SPION ai tubi etichettati rispettivamente zero, uno, due, quattro e otto.Dopo la miscelazione con pipettazione delicata, incubare i campioni per 30 minuti a temperatura ambiente per consentire la forma dei complessi siRNA SPION in polietileneimina. E preparare un gel di agarosio al tre per cento con I purity agarose. Al termine dell'incubazione aggiungere un microlitro di tampone di carico di DNA 6X per cinque microlitri di campione a ciascun tubo e mescolare con attenzione.Quindi caricare tutti i campioni sul gel. Ed eseguire l'elettroforesi a cinque volt per centimetro. Fino a quando il colorante blu bromofenolo migra due terzi della lunghezza sul gel.Un giorno prima della trasfezione lavare un microfago di topo come raw264.7 coltura cellulare con PBS. E trattare le cellule con un millilitro del 25% di tripside per cinque-dieci minuti a 37 gradi Celsius in un incubatore di anidride carbonica al cinque%. Quando la maggior parte delle cellule si è staccata.Disattivare la tripina con cinque millilitri di DMEN completo. Quindi convogliare la soluzione più volte per disperdere eventuali cluster di celle. Trasferire la sospensione cellulare in un tubo sterile conackel da 15 millilitri per la centrifugazione.Quindi sospendere di nuovo le cellule in cinque millilitri di DMEN fresco completo per il conteggio. Diluire le cellule a 4,5 per dieci fino alla quarta cellule per millilitro di concentrazione completa di DMEN. E aggiungere due millilitri di mezzo ad ogni pozzo di un piatto di sei pozza per un'incubazione 24 ore su 24 nell'incubatrice di coltura cellulare.Il giorno successivo preparare il rapporto appropriato delle nanoparticelle di siRNA SPION in un tubo di microcentrifugo a flusso di RNA da 1,5 millilitri con miscelazione delicata come appena dimostrato. E aggiungere il volume appropriato di polietileneimina SPION siRNA nanoparticella complesso ad ogni pozzo che è stato sostituito con un millilitro di mezzo fresco. Preparare complessi di POlietileneimina SPION si.in questo caso possono essere utilizzati molti altri mesi di polietileneimina SPION riducendo così al minimo la loro potenziale tossicità. Quindi ruotare attentamente la piastra per ottenere una distribuzione uniforme delle nanoparticelle attraverso i fondi del pozzo. Riportare la piastra all'incubatore di coltura cellulare fino al successivo aggiornamento cellulare o all'analisi della carenza di knockdown genico.I POlietilenimina SPION con un potenziale zeta di 30,5 e 37 millivolt non presentano un'apparente tossicità citografica a concentrazioni fino a 30 microgrammi di ferro per millilitro. Che è circa due volte il noleggio rispetto alla concentrazione normalmente utilizzata per la trasfezione cellulare. Il potenziale zeta di POlietileneimina SPION di 48 millivolt tuttavia è tossico.Anche alla dose più bassa esaminata. Come analizzato dalla citometria a flusso, oltre il 90% delle cellule può essere transetto con complessi di siRNA SPION in polietileneimina etichettati fluorescentmente a 15 microgrammi di ferro per millilitro. La valutazione degli effetti delle concentrazioni di siRNA SPION in polietileneimina sull'internalizzazione cellulare mediante frantumazione della colorazione blu rivela una colorazione minimamente rilevabile a 7,5 microgrammi di ferro per millilitro.Ma punti chiaramente visibili a 15 microgrammi di ferro per millilitro che non aumentano a concentrazioni più elevate di ferro probabilmente a causa della saturazione dell'assorbimento del siRNA di POlietileneimina SPION. I macrofagi peritoneali trasfettato con siRNA specifico che ospita polietileneimina SPION presentano una significativa diminuzione dei livelli di mRNA di catrame rispetto al siRNA non specifico. Suggerendo che il siRNA può fuggire dalle vescicole endocitiche nel citoplasma per raggiungere il meccanismo di interferenza dell'RNA.Inoltre, dopo l'iniezione endovenosa di una singola dose di complessi di nanoparticelle di polietileneimina SPION siRNA, l'analisi flocentimetrica delle cellule positive CD11b e CD3 rivela un assorbimento più efficiente delle nanoparticelle da parte di CD11b che esprime macrofagi rispetto alle cellule positive cd3 in qualsiasi momento in tutti gli organi esaminati. Durante il tentativo di questa procedura è importante ricordare di preparare i polietilenimina SPION con un potenziale dati medio non superiore a 37 millivolt e di preparare i complessi di siRNA SPION in polietileneimina sui bassi rapporti ferro/siRNA. Questa tecnica confronta la necessità per i ricercatori di esplorare il potenziale terapeutico di targeting del macrofago nei motori animali di malattie umane come e cancro.

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